第一篇：定量分析方法的方法學(xué)驗證

定量分析方法的方法學(xué)驗證 定量分析方法的方法學(xué)驗證

定量分析方法驗證的目的是證明采用的含量測定方法適合于相應(yīng)分析要求，在進行定量分析方法學(xué)研究或起草藥品質(zhì)量標準時，分析方法需經(jīng)驗證。

驗證內(nèi)容有：線性、范圍、準確度、精密度（包括重復(fù)性和重現(xiàn)性）、檢測限、定量限和耐用性等。

一，線性

線性是指在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物質(zhì)濃度直接呈正比關(guān)系的程度。

應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系?？捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋，制備一系列供試品的方法進行測定，至少制備五份供試樣品；以測得的響應(yīng)信號對被測物濃度作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進行線性回歸。必要時，響應(yīng)信號可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進行線性回歸計算?；貧w方程的相關(guān)系數(shù)(r)越接近于 1，表明線性關(guān)系越好。

用 UV 法測定時，以對照品配制一定濃度范圍的對照品系列溶液，吸光度 A 一般在 0.3 ～ 0.7，濃度點 n ＝ 5，用濃度 C 對 A 作線性回歸，得一直線方程，方程的截距應(yīng)接近于零，相關(guān)系數(shù) r 應(yīng)大于 0.9999。

用 HPLC 法測定時，以對照品配制一定濃度范圍的對照品系列溶液，濃度點 n ＝ 5 ～ 7，用濃度 C 對峰高 h 或峰面積 A 或被測物與內(nèi)標物的響應(yīng)值之比進行線性回歸或非線性擬合（如 HPLC-ELSD），建立方程，方程的截距應(yīng)趨于零，相關(guān)系數(shù) r 應(yīng)大于 0.999。

線性關(guān)系的數(shù)據(jù)包括相關(guān)系數(shù)、回歸方程和線性圖。

二，范圍

范圍系指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。

范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準確度、精密度結(jié)果及要求確定。對于有毒的、具特殊功效或藥理作用的成分，其范圍應(yīng)大于被限定含量的區(qū)間。

三，精確度

準確度系指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，一般用回收率(％)表示。準確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測試。用于定量測定的分析方法均需做準確度驗證。

1.測定方法的準確度

可用已知純度的對照品做加樣回收率測定，即于已知被測成分含量的供試品中再精密加入一定量的已知純度的被測成分對照品，依法測定。用實測值與供試品中含有量之差，除以加入對照品量計算回收率。

在加樣回率收試驗中須注意對照品的加入量與供試品中被測成分含有量之和必須在標準曲線線性范圍之內(nèi)；加入的對照品的量要適當，過小則引起較大的相對誤差，過大則干擾成分相對減少，真實性差。

回收率 % = [(C-A)/B]*100%

式中，A 為供試品所含被測成分量； B 為加入對照品量； C 為實測值。

2.數(shù)據(jù)要求

在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用 6 個測定結(jié)果進行評價；或設(shè)計 3 個不同濃度，每個濃度各分別制備 3 份供試品溶液進行測定，用 9 個測定結(jié)果進行評價，一般中間濃度加入量與所取供試品含量之比控制在 l ∶ 1 左右，其他兩個濃度分別約為供試品含量的 80% 和 120%。應(yīng)報告供試品取樣量、供試品中含有量、對照品加入量、測定結(jié)果和回收率(％)計算值，以及回收率(％)的相對標準偏差(RSD)或可信限。

四，精密度

精密度是指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間接近的程度。

1.精密度的表示方法

氣相色譜法和高效液相色譜法是對同一供試液進行至少五次以上的測定；精密度一般用相對標準偏差(relative standard deviation, RSD)表示： RSD= 標準偏差 /平均值 ′ 100 ％

精密度報告的數(shù)據(jù)應(yīng)包括平均值、可信限及相對標準偏差。

一般在一天之內(nèi)進行的精密度考察稱為日內(nèi)精密度(inter-day variability)；在三天之內(nèi)進行的精密度考察稱為日間精密度(intra-day variability)。

有時為了考察隨機變動因素對精密度的影響，還需設(shè)計進行中間精密度試驗，變動因素包括不同日期、不同分析人員和不同設(shè)備。

2.重復(fù)性（repeatability）

是指在同一條件下對同一批樣品，從樣品供試品液制備開始，制備至少六份以上供試品溶液(即 n>6), 或設(shè)計 3 個不同濃度，每個濃度各分別制備 3 份供試溶液，進行測定，計算其含量的平均值和相對標準偏差(RSD)。RSD 一般應(yīng)根據(jù)樣品含量高低、含量測定方法和繁簡進行制訂，如含量很低一般不大于 5 ％；如含量較高，則應(yīng)從嚴要求。

3.重現(xiàn)性（reproducibility）

是指在不同的實驗室由不同分析人員測定結(jié)果的精密度。當分析方法將被法定標準采用時，應(yīng)進行重現(xiàn)性試驗。如建立藥典分析方法時，通過協(xié)同檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗及重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗樣品本身的質(zhì)量均勻性和儲存運輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果。

五，檢測限

檢測限是指試樣中被測物質(zhì)能被檢測出的最低濃度或量。檢測限是一種限度檢驗效能指標，即反映方法與儀器的靈敏度和噪音的大小，也表明樣品經(jīng)處理后空白(本底)值的高低。它無需定量測定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。根據(jù)所采用的分析方法來確定檢測限。

當用 GC 和 HPLC 法時，可用已知低濃度樣品測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，計算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以 S / N ＝ 2 或 S / N ＝ 3 時的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。檢測限的報告數(shù)據(jù)應(yīng)附圖譜，說明測試過程和檢測限結(jié)果。

六，定量限

定量限是指樣品中被測物質(zhì)能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)具有一定準確度和精密度。常用信噪比法測定定量限。一般以 S / N ＝ 10 時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進行確定。

七，耐用性

耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法用于常規(guī)檢驗提供依據(jù)。開始研究分析方法時，就應(yīng)考慮其耐用性。如果測試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫明。典型的變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時間等。液相色譜法中典型的變動因素有：流動相的組成比例或 pH 值，不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱，柱溫，流速及檢測波長等。氣相色譜法變動因素有：不同廠牌或批號的色譜柱、固定相，不同類型的擔體，柱溫，進樣口和檢測器溫度等。薄層色譜的變動因素有：不同廠牌的薄層板，點樣方式及薄層展開時溫度及相對濕度的變化等。

經(jīng)試驗，應(yīng)說明小的變動能否通過設(shè)計的系統(tǒng)適用性試驗，以確保方法有效。

第二篇：方法學(xué)驗證（精選）

主要驗證分析方法的可行性 含量方法學(xué) 首先肯定要有系統(tǒng)適用性、溶液穩(wěn)定性、專屬性、精密度（重復(fù)性或中間精密度）、線性、耐用性、準確度、檢測限、定量限

一般一個項目從小試開始、中試、放大 放大最少是三批作為驗證批 驗證批一般內(nèi)容一般有工藝驗證、清潔驗證、成品檢驗、然后開始穩(wěn)定性的考察、到穩(wěn)定性第六個月就可以申報到省局 這個時候就要寫申報資料 質(zhì)量這塊主要負責10、11、14號資料（以前版本）現(xiàn)在一般是CTD資料 主要負責3.2.s部分。省局受理后一般一個月后來現(xiàn)考，主要檢查所有的檢驗記錄、儀器使用臺賬、對照品使用臺賬。通過后有動態(tài)批送檢，合格就送到國家局 等批件，這就要很久了 穩(wěn)定性考察還要繼續(xù)進行一般長期到36個月 上面是一個項目的主要流程、制劑還要進行處方篩選，一般在小試、中試是進行、方法學(xué)也在這個時候進行（主要含量、有關(guān)物質(zhì)）固體還有釋放度，原料有殘留溶劑、其他已知雜質(zhì)都要有方法學(xué)的支持 針劑也要有處方的篩選、臨床稀釋液相容性、管道相容性固體分速釋、緩釋、口崩、混懸等這些都不同、從工藝到方法學(xué)都不同

實驗室的所有儀器都必須通過驗證、校準才能用、外教一般是華南計量所的每隔一年一次

（液相兩年一次）這中間、每半年應(yīng)該有一次內(nèi)部校準、每一年又一次驗證（做了驗證可不做內(nèi)角）

紫外、紅外也一樣

第三篇：色譜方法學(xué)驗證

色譜方法學(xué)驗證

所謂方法驗證(validation，又叫認證)就是要證明所開發(fā)方法的實用性和可靠性。實用性一般指所用儀器配置是否全部可作為商品購得(實驗室自己制造的儀器部件就欠實用)，樣品處理方法是否簡單易操作，分析時間是否合理，分析成本是否可被同行接受等?？煽啃詣t包括定量的線性范圍、檢測限、方法回收率、重復(fù)性、重現(xiàn)性和準確度等。下面就簡單討論這幾個可靠性參數(shù)。

1．方法的線性范圍

即檢測器響應(yīng)值與樣品量(濃度)成正比的線性范圍，它主要由檢測器的特性所決定。原則上。這一線性范圍應(yīng)覆蓋樣品組分濃度整個變化范圍。線性范圍的確定通常是采用一系列(多于3個)不同濃度的樣品進行分析，以峰面積(或峰高)對濃度進行線性回歸。當相關(guān)系數(shù)大于0．99時，就可認為足線性的，小于0．99時，就超出了線性范圍。一個好的GC定量方法，其線性范圍(以FID檢測器為例)可達10；，線性相關(guān)系數(shù)等于或大于0．9999。

2．方法的檢測限

檢測限(DL)是指方法可檢測到的最小樣品量(濃度)。一般的原則是按照3倍信噪比計算，即氣樣品組分的響應(yīng)值等于基線噪聲的3倍時，該樣品的濃度就被作為最小檢測限，與此對應(yīng)的該組分的進樣量就叫做最小檢測量-此外。憶驗證定量方法時，還將10倍信噪比所對應(yīng)的樣品濃度叫做最小定量限，當用于法規(guī)分析時，這一數(shù)據(jù)應(yīng)等于或低于法規(guī)方法所要求的實際樣品中待測組分的最低允許濃度。

檢測限的測定可用一個接近檢測限濃度的樣品進行分析，據(jù)所得色譜峰的峰高來計算。設(shè)此時濃度為c、相應(yīng)的峰高為h(信號強度單位)、基線噪聲為N(與h的單位相同)，則檢測限可按下面公式計算：

c／h＝DL/3N；即DL＝3Nc／h 噪聲的大小與儀器的性能，特別是檢測器及其電子電路的穩(wěn)定性直接相關(guān)，也與載氣的純度、色譜柱的性能及操作條件有關(guān)。噪聲的測定是在正常操作條件下，儀器穩(wěn)定時，將信號放大(降低衰減或放大縱坐標)來測量，一般是測定樣品出峰前后1min的基線噪聲。

作為分析方法，檢測限無疑是越低越好。為此，應(yīng)選擇靈敏度高的檢測器，使用高純度的載氣和輔助氣，同時要定期維護儀器，保持進樣口和檢測器的清潔，保持色譜柱的性能。此外，仔細優(yōu)化分離條件、適當加大進樣量(如采用大體積進樣技術(shù))也是降低檢測限的常用方法。

3．方法回收率

即方法測得的樣品組分濃度與原來樣品中實有濃度的比率。如果樣品未經(jīng)任何預(yù)處理，則回收率一般可不考慮。只有當某些樣品組分被儀器系統(tǒng)不可逆吸附時，回收率才是需要考慮的問題。如果樣品經(jīng)過了預(yù)處理，如萃取工藝，那就必須考慮整個方法的回收率。一般要求回收串大于60％，越接近100％越好。

回收率可用下述簡單方法測定：配置一定濃度的標準樣品，將其兩等分，其中一份按方法步驟進行預(yù)處理，然后用GC分析。另一份則不經(jīng)頸處理而直接用GC分析。兩份樣品所得待測組分峰面積的比率乘以100即是該組分的回收率。有時實際樣品很復(fù)雜，特別是樣品基質(zhì)對預(yù)處理的回收率影響較大時，就必須用空白樣品基質(zhì)(確信不含待測物)制備標準樣品，比如測定廢水中有機農(nóng)藥殘留量時，就要采用不含農(nóng)藥的水作空白基質(zhì)，在其中加入已知量的農(nóng)藥標準品，然后進行處理和分析。處理后測得的組分含量與處理前加入量的比率乘以100就得到了回收率。

很顯然，回收率太低時會影響方法的檢測限。當樣品處理過程較復(fù)雜時，應(yīng)分步測定回收率，最后針對回收率最低的步驟進行方法改進，以期提高整個方法的回收率。

4．方法重復(fù)性和重現(xiàn)性

重現(xiàn)性(reproducibility)足指同一方法在不同時間、地點、不同型號儀器、不同操作人員使用寸所得結(jié)果的一致性。與此近似的另一個術(shù)語是重復(fù)性(repeatability)，常指同一個人在同一臺儀器上重復(fù)進樣所得結(jié)果的一致性。事實上，文獻中二者常?；煊茫鄶?shù)人不做嚴格區(qū)分。但大多數(shù)歐洲學(xué)者會嚴格區(qū)分二者的不同。我們認為對現(xiàn)代儀器來說，分析重復(fù)性是容易實現(xiàn)的，而重現(xiàn)性則是更重要的，也是方法驗證所必須考察的。重現(xiàn)性和重復(fù)性都用多次分析所得結(jié)果的相對標準偏差(RSD)來表示。

方法的重現(xiàn)性應(yīng)包括多次連續(xù)進樣分析的重復(fù)性、不同時間(天與天之間)分析的重復(fù)性、不同型號儀器之間的重現(xiàn)性和不同實驗室之間的重現(xiàn)性。作為方法開發(fā)人員，首先應(yīng)測定重復(fù)性，即在相同條件下連續(xù)進樣5—10次，統(tǒng)汁待測組分的保留時間和峰面積(或峰高)的RSD，一般要求保留時間的RSD不大于1％，峰面積的RSD不大于5%。文獻報道的最佳重復(fù)性數(shù)據(jù)為保留時間的RSD小于0.1%，峰面積的RSD小于1%。

如果樣品要經(jīng)過預(yù)處理，還應(yīng)測定同一樣品多次處理的重復(fù)性。即同一樣品取3—5份做平行處理，看最后測定結(jié)果的重復(fù)性。這一RSD值應(yīng)不大于5％。當然，有些工業(yè)分析要求不大于10％即可。至于天與天之間的重現(xiàn)性也不應(yīng)大于10%、當上述重復(fù)性滿足要求后，說明該方法在你的實驗室是可靠的。要將此方法作為標準方法推廣使用，還必須測定不同儀器、不同實驗室之間的重現(xiàn)性。當這些重現(xiàn)性(RSD)都能滿足要求時。這一方法的可靠性就得到了較為滿意的驗證。

方法的線性關(guān)系及檢測限

準確稱取 7種目標物的標準品, 用甲醇稀釋配制成 7種目標物的標準溶液, 根據(jù)需要用甲醇分別稀釋配制成 5級標準工作溶液, 濃度范圍如表 3所示,在選定的色譜條件下,分別進樣分析。以峰面積為縱坐標,濃度為橫坐標作回歸方程,結(jié)果見表 3 , 回歸方程的相關(guān)系數(shù) R2均大于 0.9999,線性關(guān)系良好。以最低濃度標樣重復(fù)進樣 5次, 取其 3倍標準偏差為檢測限, 10倍標準偏差為定量限, 根據(jù)樣品處理過程將結(jié)果換算為ug /g , 得到該方法的檢測限和定量限

方法的回收率和重復(fù)性

采用標準加入法測定方法的回收率。取一種已知目標物含量的樣品(7 #),加入與其含量相當?shù)幕旌蠘?/p>

準溶液,重復(fù) 5次,測定其加標回收率和重復(fù)性, 結(jié)果如表 5所示。5次重復(fù)實驗的 RSD范圍為 1.3 % ~3.1 %, 回收率范圍為 97.0 % ~ 99.6 %, 可以滿足定量需要。

——引自《RP-HPLC法測定煙用香精香料中的7種防腐劑》

內(nèi)標法方法學(xué)注意事項（引自網(wǎng)頁論壇）

選一與欲測組分相近但能完全分離的組分做內(nèi)標物（當然是樣品中沒有的組分），然后配制欲測組分和內(nèi)標物的混合標準溶液，進樣得相對校正因子。再將內(nèi)標物加入欲測組分的樣品中，進樣后測得欲測組分和內(nèi)標物的定量參數(shù)。用內(nèi)標法公式計算即可。

內(nèi)標法是將一定量的純物質(zhì)作內(nèi)標物，加入到準確稱量的試樣中，根據(jù)被測試樣和內(nèi)標物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比，來計算被測組分的含量。選擇內(nèi)標物有4個要求：1.內(nèi)標物應(yīng)是該試樣中不存在的純物質(zhì)；2.它必須完全溶于試樣中，并與試樣中各組分的色譜峰能完全分離；3.加入內(nèi)標物的量應(yīng)接近于被測組分；4.色譜峰的位置應(yīng)與被測組分的色譜峰的位置相近，或在幾個被測組分色譜峰中間。內(nèi)標法的優(yōu)點是測定的結(jié)果較為準確，由于通過測量內(nèi)標物及被測組分的峰面積的相對值來進行計算的，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差。內(nèi)標法的缺點是操作程序較為麻煩，每次分析時內(nèi)標物和試樣都要準確稱量，有時尋找合適的內(nèi)標物也有困難。外標法簡便，但進樣量要求十分準確，要嚴格控制在與標準物相同的操作條件下進行，否則造成分析誤差，得不到準確的測量結(jié)果。

那么內(nèi)標法的方法學(xué)研究就是將過測量內(nèi)標物及被測組分的峰面積的相對值，也就是一個比值，來進行一些精密度、準確度、線性之類的研究。

具體就是配制不同濃度的標準溶液，記錄樣品和內(nèi)標峰面積，計算樣品/內(nèi)標峰面積比值R樣品/內(nèi)標，利用樣品濃度C對比值R樣品/內(nèi)標作直線回歸，得回歸方程，作為標準曲線。精密度、準確度也如此。

首先你要了解何為內(nèi)標法

內(nèi)標法是一種間接或相對的校準方法。在分析測定樣品中某組分含量時，加入一種內(nèi)標物質(zhì)以校誰和消除出于操作條件的波動而對分析結(jié)果產(chǎn)生的影響，以提高分析結(jié)果的準確度。影響內(nèi)標和被測組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學(xué)方面的、色譜方面的和儀器方面的三類。

由化學(xué)方面的原因產(chǎn)生的面積比的變化常常在分析重復(fù)樣品時出現(xiàn)?；瘜W(xué)方面的因素包括：

1、內(nèi)標物在樣品里混合不好；

2、內(nèi)標物和樣品組分之間發(fā)生反應(yīng)，3、內(nèi)標物純度可變等。

對于一個比較成熟的方法來說，色譜方面的問題發(fā)生的可能性更大一些，色譜上常見的一些問題(如滲漏)對絕對面積的影響比較大，對面積比的影響則要小一些，但如果絕對面積的變化已大到足以使面積比發(fā)生顯著變化的程度，那么一定有某個重要的色譜問題存在，比如進樣量改變太大，樣品組分濃度和內(nèi)標濃度之間有很大的差別，檢測器非線性等。進樣量應(yīng)足夠小并保持不變，這樣才不致于造成檢測器和積分裝置飽和。如果認為方法比較可靠，而色譜固看來也是正常的話，應(yīng)著重檢查積分裝置和設(shè)置、斜率和峰寬定位。對積分裝置發(fā)生懷疑的最有力的證據(jù)是：面積比可變，而峰高比保持相對恒定，在用內(nèi)標法做色譜定量分析時，先配制一定重量比的被測組分和內(nèi)標樣品的混合物做色譜分析，測量峰面積，做重量比和面積比的關(guān)系曲線，此曲線即為標準曲線。在實際樣品分析時所采用的色譜條件應(yīng)盡可能與制作標準曲線時所用的條件一致，因此，在制作標準曲線時，不僅要注明色譜條件(如固定相、柱溫、載氣流速等)，還應(yīng)注明進樣體積和內(nèi)標物濃度。在制作內(nèi)標標準曲線時，各點并不完全落在直線上，此時應(yīng)求出面積比和重量比的比值與其平均位的標準偏差，在使用過程中應(yīng)定期進行單點校正，若所得值與平均值的偏差小于2，曲線仍可使用，若大于2，則應(yīng)重作曲線，如果曲線在鉸短時期內(nèi)即產(chǎn)生變動，則不宜使用內(nèi)標法定量。

所以，當你確定應(yīng)用內(nèi)標法之后，就不需要進行這些實驗的。因為你在加內(nèi)標時它就是一個已知濃度了。做方法學(xué)的時候，內(nèi)標和待測物標準品(比如你的白三烯待測物）要分別單獨進樣，然后再做標液的色譜圖（含有內(nèi)標和樣品），然后再是提取或者回收后的樣品（如血漿或者一些細胞，組織提取物等等），最后比較兩者的封面積。

如果內(nèi)標選擇用來做方法回收率的，在樣品前處理前進行添加。如果你在做標準曲線時候則上機前添加，添加量不管外標是否為梯度內(nèi)標量是固定的。你看到有人做實際樣品時候只是在上機前添加內(nèi)標，他這時候的內(nèi)標不能指示回收率，只能用于校正儀器信號偏差，通俗的說這種內(nèi)標叫上機內(nèi)標。而前處理時候加入的內(nèi)標叫替代內(nèi)標。（我這是個人稱呼，不是官方稱呼哈）。添加內(nèi)標的量，一般要是樣品含量的兩倍，這個，其實很難把握吧，樣品含量我們也不知道，所以就大膽的去加就行了。嘿嘿，純個人觀點哈！

第四篇：分析方法的方法學(xué)驗證

一、方法驗證

1．準確度 該指標主要是通過回收率來反映。驗證時一般要求分別配制濃度為80％、100％和120％的供試品溶液各三份，分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率?？山邮艿臉藴蕿椋焊鳚舛认碌钠骄厥章示鶓?yīng)在98.0%-102.0%之間，9個回收率數(shù)據(jù)的相對標準差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。

2．線性 線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗證方法為： 在80％至120％的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，分別測定其主峰的面積，計算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸分析?？山邮艿臉藴蕿椋夯貧w線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.998，Y軸截距應(yīng)在100％響應(yīng)值的2％以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對標準差應(yīng)不大于2.0%。

3．精密度 1）重復(fù)性 配制6份相同濃度的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進行測試，所得6份供試液含量的相對標準差應(yīng)不大于2.0%。2）中間精密度 配制6份相同濃度的供試品溶液，分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進行測試，所得12個含量數(shù)據(jù)的相對標準差應(yīng)不大于2.0%。

4．專屬性 可接受的標準為：空白對照應(yīng)無干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0。以二極管陣列檢測器進行純度分析時，主峰的純度因子應(yīng)大于980。

5．檢測限 主峰與噪音峰信號的強度比應(yīng)不得小于3。

6．定量限 主峰與噪音峰信號的強度比應(yīng)不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液主峰的保留時間的相對標準差應(yīng)不大于2.0%。

7．耐用性 分別考察流動相比例變化±5％、流動相pH值變化±0.2、柱溫變化±5℃、流速相對值變化±20％時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次。可接受的標準為：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達到基線分離；各條件下的含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對標準差應(yīng)不大于2.0%。

8、系統(tǒng)適應(yīng)性 配制6份相同濃度的供試品溶液進行分析，主峰峰面積的相對標準差應(yīng)不大于2.0%，主峰保留時間的相對標準差應(yīng)不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達到基線分離，主峰的理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標準的規(guī)定。

二、分 析 方 法 驗 證（Validation）

進行驗證，以證明分析方法符合檢測的目的和要求，這就是分析方法驗證。從本質(zhì)上講，方法驗證就是根據(jù)檢測項目的要求，預(yù)先設(shè)置一定的驗證內(nèi)容，并通過設(shè)計合理的試驗來驗證所采用的分析方法符合檢測項目的要求。方法驗證在質(zhì)量控制上有重要的作用和意義，只有經(jīng)過驗證的分析方法才能用于藥品生產(chǎn)的分析檢測，方法驗證是制訂質(zhì)量標準的基礎(chǔ)。方 法 驗 證 內(nèi) 容 包括方法的專屬性、線性、范圍、準確度、精密度、檢出限、定量限、耐用性和系統(tǒng)適用性等，檢測目的不同驗證要求也不盡相同。1.專 屬 性（Speciality / Specificity）

專屬性是指分析方法能夠?qū)a(chǎn)品和雜質(zhì)分開的特性，也稱為“選擇性”。對于純度檢測，可在標準品中加入產(chǎn)品中的已知雜質(zhì)，或者直接用粗品，考察產(chǎn)品峰是否受到雜質(zhì)的干擾，對于過程跟蹤，可用反應(yīng)體系樣品來考察有沒有其它的雜質(zhì)干擾。必要時使用二極管陣列檢測器或者質(zhì)譜檢測器進行色譜峰純度檢查。一般要求產(chǎn)品和雜質(zhì)之間的分離度大于2.0。2.線 性（Linearity）

線性是在設(shè)定的范圍內(nèi)，檢測結(jié)果與樣品中原料或產(chǎn)品的濃度呈線性關(guān)系的程度。線性是定量檢測的基礎(chǔ)，需要定量檢測的項目都需要驗證線性。一般用貯備液經(jīng)過精密稀釋，或分別精密稱樣，制備得到一系列被測物質(zhì)的濃度（5個以上），按濃度從小到大運行序列，以峰面積和濃度的函數(shù)作圖，用最小二乘法進行線性回歸計算，考察分析方法的線性。3.范 圍（Range）

范圍指在能夠達到一定的準確度、精密度和線性時，樣品中被分析物的濃度區(qū)間。簡單的說，范圍就是分析方法適用的樣品中待測物的濃度最大值和最小值。需要定量檢測的分析方法都需要對范圍進行驗證，純度檢測時，范圍應(yīng)為測試濃度的80％～120％。4.準 確 度（Accuracy）

準確度是指測定的結(jié)果與真實值之間接近的程度，所以也叫做“真實度”，需要定量得分析方法均需要驗證準確度。準確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立，對于原料藥可用已知純度的標準品或符合要求的原料藥進行測定，必要時可與另一個已建立準確度的方法比較結(jié)果。5.精 密 度（Precision）

精密度是指在規(guī)定條件下，同一均勻樣品經(jīng)多次取樣進行一系列檢測所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用相對標準偏差（RSD）表示，取樣檢測次數(shù)應(yīng)至少6次。精密度可以從三個層次考察：重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。

a、重復(fù)性（Repeatability）：是在相同的操作條件下、較短時間間隔內(nèi)，由同一分析人員測定所得結(jié)果的精密度。一般是用100％濃度水平的樣品測定6次的結(jié)果進行評價。

b、中間精密度（Intermediate precision）：同一實驗室，在日期、分析人員、儀器等內(nèi)部條件改變時，測定結(jié)果的精密度。c、重現(xiàn)性（Reproducibility）：指不同實驗室之間不同分析人員測定結(jié)果的精密度。

6.檢 出 限（Limits of Detection；LOD）

檢出限是指樣品中的被分析物能夠被檢測到的最低量，不需要準確定量。檢出限體現(xiàn)了分析方法的靈敏度。檢出限的測定可以通過對一系列已知濃度被測物的試樣進行檢測，以能準確、可靠檢出被測物的最小濃度來確定，也可把已知濃度樣品的信號與噪聲信號進行比較，以信噪比為3：1時的濃度確定檢出限，一般要求能夠達到進樣濃度的0.05%。

7.定 量 限（Limits of Quantitation / Quantification；LOQ）定量限是指樣品中的被分析物能夠被定量檢測的最低量，其測定結(jié)果需要一定的準確度和精密度，定量限體現(xiàn)了分析方法靈敏定量檢測的能力。檢測需要嚴格控制含量的雜質(zhì)，必須考察方法的定量限，以保證雜質(zhì)能夠被準確定量。一般以信噪比為10：1時相應(yīng)的濃度或進樣量來確定定量限。

8.耐 用 性（Durability / Robustness）

耐用性是指測定條件發(fā)生小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，耐用性主要表明方法的抗干擾能力，主要的變動因素包括：流動相的組成、流速和pH值、色譜柱、柱溫等。經(jīng)試驗，應(yīng)說明小的變動能否符合系統(tǒng)適用性試驗要求，以確保方法有效。9.系 統(tǒng) 適 用 性 試 驗（System Suitability）液相色譜分析方法主要依賴高效液相色譜儀和色譜柱，在做方法驗證時，有必要將高效液相色譜儀、色譜柱、流動相與實驗操作、待測樣品等一起當作完整的系統(tǒng)進行評估，并將系統(tǒng)適用性作為分析方法的組成部分，系統(tǒng)適用性便是對整個系統(tǒng)進行評估的指標。一般系統(tǒng)適應(yīng)性的要求為：分析方法能夠達到0.05%的檢出限；主峰的拖尾因子（T）0.95

分析方法開發(fā)與驗證是一個整體，在實際工作中，一般是先開發(fā)分析方法，經(jīng)過適當?shù)膬?yōu)化以后再做方法驗證，驗證的部分內(nèi)容在分析方法開發(fā)時就要做，比如說分析方法的專屬性驗證。分析方法驗證并非必須驗證所有的內(nèi)容，只要注意驗證內(nèi)容充分，足以證明分析方法的合理性就可以了，如雜質(zhì)限度檢測一般只需要驗證專屬性和檢出限，而精密度、線性、定量限等涉及定量測定的項目，則不需要驗證。有時需要對分析方法進行全面或部分的再驗證。當原料藥合成工藝發(fā)生改變時，可能引入新的雜質(zhì)，雜質(zhì)檢查方法和含量測定方法的專屬性就需要再進行驗證，以證明有關(guān)物質(zhì)檢查方法能夠檢測新引入的雜質(zhì)，且新引入的雜質(zhì)對主成份的含量測定應(yīng)無干擾。當分析方法發(fā)生部分改變時，如檢測波長發(fā)生改變，則需要重新進行檢測限、專屬性、準確度、精密度、線性等內(nèi)容的驗證，以證明改變后的 分析方法的合理性、可行性

第五篇：信用評級的定量分析方法

信用評級的定量分析方法

信用評級的定量分析方法主要是根據(jù)歷史數(shù)據(jù)，通過經(jīng)濟分析指標，利用數(shù)量計算或建立數(shù)學(xué)模型，以分析資信狀況好壞的方法，主要有以下五種方法：

1、比率分析法。是財務(wù)分析的主要方法，也是信用評級的主要方法。因為信用評級很多方面要采用財務(wù)分析中的比率指標。例如，總資產(chǎn)報酬率是利潤總額對資產(chǎn)總額的比率，表示總資產(chǎn)的盈利能力；又如，流動比率是流動資產(chǎn)對流動負債的比率，反映了企業(yè)的短期償債能力等等。通過這些比率計算，反映出企業(yè)財務(wù)指標相互之間的關(guān)系，可以判斷企業(yè)對于資金的配置是否合理，可以使原來不可比的財務(wù)狀況變成可比。例如企業(yè)利潤總額，各廠之間無法比較，有的企業(yè)多，有的企業(yè)少，但是通過總資產(chǎn)報酬率這一比率指標，就可能衡量出企業(yè)總資產(chǎn)盈利能力的大小。評價資信狀況同樣如此，對單獨一項數(shù)量指標，很難判斷是好是壞，如果把它計算成為比率指標，就可能相互比較，作出正確的判斷。

2、趨勢分析法。是將同一單位連續(xù)幾年的相同財務(wù)指標進行對比以觀察其成長性的一種分析方法。通過趨勢分析，可以了解企業(yè)在這一方面的發(fā)展趨勢。例如銷售收入增長率可以通過幾年銷售收入的對比求得，利潤增長率可以通過幾年利潤總額的對比求得。通過銷售收入增長率和利潤增長率就可以判斷企業(yè)資信狀況的發(fā)展趨勢是向好的方向發(fā)展，還是向壞的方向發(fā)展，發(fā)展的趨勢有多大o3、結(jié)構(gòu)分析法。是衡量企業(yè)對財務(wù)指標各分項目在總體項目中的比重或組成的一種分析方法，可以說明各分項目在總體項目中的地位。一般來說，分項目的比重越大，對總體項目的影響也越大。同時，通過連續(xù)幾年各項目比重的對比，可以判斷各項目的比重是上升還是下降。例如不良貸款率是商業(yè)銀行不良貸款數(shù)占全部貸款數(shù)的比重，不良貸款比例越高，商業(yè)銀行的貸款安全性越差。它是衡量商業(yè)銀行資信狀況的一項重要指標。通過這一指標連續(xù)幾年的比較，可以看出商業(yè)銀行的資產(chǎn)質(zhì)量是下降還是提高。

4、相互對比法。是通過經(jīng)濟指標的相互比較來揭示經(jīng)濟指標的數(shù)量差異的一種方法。它是信用評級中極其重要的一種方法。經(jīng)濟指標的實際數(shù)可以同上期比較，可以在相同企業(yè)之間比較，也可以和指標的標準值比較。通過比較，可以找出差距．以便進一步分析形成差距的原因。在信用評級中：要分析企業(yè)資信狀況的好壞，就要對經(jīng)濟指標根據(jù)有關(guān)的要求，設(shè)置一定的標準值，通過同標準值比較，就能找出差距，用以判斷企業(yè)資信狀況的好壞。但是要注意在采用相互對比法時經(jīng)濟指標在計算方法、計算口徑和計算內(nèi)容上要保持一致性，否則的話，就難以比較，甚至?xí)贸鲥e誤的結(jié)論。

5、建立數(shù)學(xué)模型法。在現(xiàn)代管理科學(xué)中，廣泛應(yīng)用著數(shù)學(xué)模型，特別是經(jīng)濟預(yù)測和管理工作，不能進行實驗，更有必要通過數(shù)學(xué)模型來分析經(jīng)濟決策所產(chǎn)生的結(jié)果。但是數(shù)學(xué)模型是由變量、參數(shù)和一定函數(shù)關(guān)系組成的，而參數(shù)是數(shù)學(xué)模型中的一些常數(shù)，除特殊情況外，一般保持穩(wěn)定不變。它是在長期實踐中歸納出來的，不易求得。因此，信用評級中較少應(yīng)用數(shù)學(xué)模型。從國外經(jīng)驗來看，保險企業(yè)信用評級中曾經(jīng)用過風(fēng)險測試模型