第一篇：dna粗提取和鑒定

dna粗提取和鑒定

實(shí)驗(yàn)用具

洋蔥或其他植物、洗潔精、食鹽、攪拌機(jī)或研缽(我們采用的是家用豆?jié){機(jī))、紗布、漏斗、燒杯、玻璃棒、量筒(10mL一支)、滴管、試管(20mL兩支)、天平，dna粗提取和鑒定。95%酒精、蒸餾水、0.015mol/L的NaCl溶液、二苯胺試劑。

實(shí)驗(yàn)材料的選取

凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但是使用DNA含量相對較高的生物組織，成功的可能性更大。

原理

①加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂

蒸餾水對于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，再加上攪拌的機(jī)械作用，就加速了雞血細(xì)胞的破裂(細(xì)胞膜和核膜的破裂)，從而釋放出DNA。

②加入洗滌劑和食鹽的作用

洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，有利于DNA的釋放;食鹽的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。

③研磨不充分，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的影響

研磨不充分會使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。

④此步驟獲得的濾液中可能含有的細(xì)胞成分?

可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液

動物細(xì)胞的破碎比較容易，以雞血細(xì)胞為例，在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可。如果實(shí)驗(yàn)材料是植物細(xì)胞，需要先用洗滌劑溶解細(xì)胞膜。例如，提取洋

.蔥的DNA時(shí)，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液。

2.去除濾液中的雜質(zhì)

方案一的原理是DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質(zhì)，不分解DNA;方案三的原理是蛋白質(zhì)和DNA的變性溫度不同。

注意事項(xiàng)

①用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì);用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。

②方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開;方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離。

DNA的析出與鑒定

將處理后的溶液過濾，加入與濾液體積相等、冷卻的酒精溶液，靜置2～3min，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取的DNA，鑒定材料《dna粗提取和鑒定》。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水分。

取兩支20ml的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液5ml，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4ml的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于沸水中加熱5min，待試管冷卻后，比較兩支試管溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否變藍(lán)。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.稱取30克已切碎的洋蔥，放入研缽中，加入少量石英砂助研，倒入10mL 2mol/L的氯化鈉溶液，充分研磨。

洋蔥含有揮發(fā)性刺激物，有效減少刺激，才能使實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。上課前，教師可先將洋蔥放入冰箱冷凍一會兒，使其涼透但又不能結(jié)冰;或?qū)⒀笫[切成幾大塊，放入清水泡一會兒，讓其揮發(fā)性刺激物溶于水，可以減輕刺激。然后將洋蔥切碎備用。研磨的目的主要是使洋蔥細(xì)胞破裂，使DNA溶于2mol/L的氯化鈉溶液，沒必要將洋蔥研成粥糊狀，后者既浪費(fèi)時(shí)間又影響實(shí)驗(yàn)效果。研磨時(shí)，切忌使用攪拌器(榨汁機(jī))。使用攪拌器雖可以提高研磨效率，但攪拌器將洋蔥切成極細(xì)小的顆粒，無法通過過濾將洋蔥顆粒剔除。只能將酒精直接倒入濾液中，許多洋蔥小顆粒因?yàn)檩p會漂浮起來，DNA藏在其中，無法分辨。學(xué)生看不到白色纖維狀粘稠物的DNA。

2.研磨后，用漏斗和紗布將汁液過濾到小燒杯中，得到濾液。

3.向?yàn)V液中加入95%的酒精溶液20mL，沿?zé)诰従彽谷耄灰饎踊驍嚢琛?/p>

此時(shí)，燒杯中的液體分為上、下兩層，下層較渾濁，上層澄清，很快上層溶液中就會有白色纖維狀粘稠物析出，用玻璃棒可將其輕輕卷起。這就是記錄生命遺傳信息的重要物質(zhì)——DNA。DNA析出的過程中，切忌震動和攪拌(不震動易于分層，我們就能很容易觀察到上清液中的絲狀物;攪拌會使非常柔軟的DNA斷裂成小段，不易取出)。如果用玻璃棒DNA不易卷起，可改用表面打毛的牙簽，DNA提取物就纏繞在牙簽上了。

4.鑒定：取兩支試管，編為1、2號，各加入2mol/L的氯化鈉溶液2mL，向1號試管中加入一些白色纖維狀物，振蕩使其溶解，然后向兩支試管中各加入2mL二苯胺試劑，沸水浴加熱5分鐘。

注意事項(xiàng)

1.以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每100ml血液中需要加入3g檸檬酸鈉防止血液凝固。

2.加入洗滌劑后，動作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟地操作。加入酒精和用玻璃棒攪拌時(shí)，動作要輕緩，以免DNA分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。

3.二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會影響鑒定的效果。

4.DNA的溶解度與NaCl溶液濃度的關(guān)系：

當(dāng)NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時(shí)，隨濃度的升高，DNA的溶解度降低;當(dāng)NaCl溶液濃度高于0.14mol/L時(shí)，隨濃度升高，DNA的溶解度升高。

5.盛放雞血細(xì)胞液的容器，最好是塑料容器。

雞血細(xì)胞破碎以后釋放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于細(xì)胞內(nèi)DNA的含量本來就比較少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就會更少。因此，實(shí)驗(yàn)過程中最好使用塑料的燒杯和試管，這樣可以減少提取過程的DNA的損失。

第二篇：dna的粗提取和鑒定

dna的粗提取和鑒定

在溶液中,DNA鏈略帶負(fù)電荷,而鹽離子可被吸引到DNA的負(fù)電荷上,中和這些負(fù)電荷,只要控制鹽的濃度,就能夠使DNA片段或者散開,或者聚合在一起,因此,食鹽能保持溶液中的濃度與細(xì)胞液相當(dāng)，dna的粗提取和鑒定。DNA不溶于酒精,但細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精。利用這一原理,就可以用酒精萃取DNA。DNA與二苯胺作用生成藍(lán)色沉淀,即可觀察到。

提取生物大分子的基本思路是選用一定的物理或化學(xué)方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子。對于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。

DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，利用這一特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反，以達(dá)到分離目的。

此外，DNA不溶

.于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。利用這一原理，可以將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步的分離。

DNA對酶 高溫和洗滌劑的耐受性

蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對DNA沒有影響。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60—80oC的高溫，而DNA在80oC以上才會變性。洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對DNA沒有影響。

DNA的鑒定

在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍(lán)色，因此二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。

實(shí)驗(yàn)用具

洋蔥或其他植物、洗潔精、食鹽、攪拌機(jī)或研缽(我們采用的是家用豆?jié){機(jī))、紗布、漏斗、燒杯、玻璃棒、量筒(10mL一支)、滴管、試管(20mL兩支)、天平。95%酒精、蒸餾水、0.015mol/L的NaCl溶液、二苯胺試劑。

實(shí)驗(yàn)材料的選取

凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但是使用DNA含量相對較高的生物組織，成功的可能性更大，鑒定材料《dna的粗提取和鑒定》。

原理

①加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂

蒸餾水對于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，再加上攪拌的機(jī)械作用，就加速了雞血細(xì)胞的破裂(細(xì)胞膜和核膜的破裂)，從而釋放出DNA。

②加入洗滌劑和食鹽的作用

洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，有利于DNA的釋放;食鹽的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。

③研磨不充分，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的影響

研磨不充分會使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。

④此步驟獲得的濾液中可能含有的細(xì)胞成分?

可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液

動物細(xì)胞的破碎比較容易，以雞血細(xì)胞為例，在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可。如果實(shí)驗(yàn)材料是植物細(xì)胞，需要先用洗滌劑溶解細(xì)胞膜。例如，提取洋

.蔥的DNA時(shí)，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液。

2.去除濾液中的雜質(zhì)

方案一的原理是DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質(zhì)，不分解DNA;方案三的原理是蛋白質(zhì)和DNA的變性溫度不同。

注意事項(xiàng)

①用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì);用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。

②方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開;方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離。

DNA的析出與鑒定

將處理后的溶液過濾，加入與濾液體積相等、冷卻的酒精溶液，靜置2～3min，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水分。

取兩支20ml的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液5ml，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4ml的二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min，待試管冷卻后，比較兩支試管溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否變藍(lán)。

第三篇：DNA粗提取及鑒定教案

《DNA粗提取及鑒定》

一、學(xué)習(xí)目標(biāo)：

學(xué)生通過對本節(jié)內(nèi)容的探究學(xué)習(xí)：能

⑴了解DNA的物理化學(xué)性質(zhì)。⑵理解DNA粗提取與鑒定的原理。⑶掌握DNA粗提取及鑒定方法，⑷利用DNA的性質(zhì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

二、本節(jié)內(nèi)容學(xué)習(xí)的重點(diǎn)：DNA的粗提取和鑒定原理、方法。

難點(diǎn)：DNA的粗提取和鑒定原理、方法。

三、自主探究

（一）（閱讀教材、學(xué)案；探究下列問題）

1、提取生物大分子的基本思路？

2、提取DNA的基本思路？

3、用文字和坐標(biāo)曲線描述DNA的溶解性；并思考該問題在DNA粗提取中將有何應(yīng)用？

4、DNA在酒精溶液中的溶解性

5、DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性

6、如何來進(jìn)行DNA鑒定

自主探究

（二）（閱讀教材、學(xué)案；探究下列問題）

1、進(jìn)行DNA粗提取應(yīng)選擇什么樣的材料；你的選擇的理由？

2、為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？

3、如何破碎植物細(xì)胞，并獲取含DNA的濾液；請舉例說明，并告訴自己應(yīng)注意什么？

自主探究

（三）（閱讀教材、學(xué)案；探究下列問題）

去除濾液中的雜質(zhì)

1、此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？

2、方案一中為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？

3、方案二與方案三的原理有什么不同？

自主探究

（四）（閱讀教材、學(xué)案；探究下列問題）

1、DNA析出的原理，DNA析出物是什么顏色？

2、DNA鑒定需要設(shè)置對照嗎？要注意什么問題？ 四：

討論

（一）你幫助、我改正；我質(zhì)疑，共提升

小組內(nèi)討論自主探究內(nèi)容并自行改正

討論

（二）你我同思考，細(xì)總結(jié)，共同突破難點(diǎn)

小組內(nèi)討論：總結(jié)

1、本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)原理

2、DNA粗提取與鑒定過程

3、此實(shí)驗(yàn)過程中有幾次使用蒸餾水？幾次過濾，幾次析出？分別在哪一步？

五：

小組間質(zhì)疑，完善 六：課堂小結(jié)

七：達(dá)標(biāo)檢測；當(dāng)堂掌握 知識拓展：課下思考總結(jié)：

1、在我們的高中生物學(xué)習(xí)中有顏色反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)有那些？

2、DNA在不同濃度氯化鈉溶液中溶解度的變化曲線還能表示那些量的關(guān)系？

3、還有那些實(shí)驗(yàn)中用到了酒精，他們的作用是？

第四篇：dna粗提取與鑒定

dna粗提取與鑒定

實(shí)驗(yàn)原理

DNA在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氧化鈉的濃度的變化而改變的，dna粗提取與鑒定。當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol/L時(shí)，DNA的溶解度最大，濃度為 0.14 mol/L時(shí)，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出。

DNA不溶于95%的酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。

DNA中含有脫氧核糖，能與二苯胺(沸水浴)反應(yīng)生成藍(lán)色物質(zhì)，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。

目的要求

1.學(xué)會DNA的粗提取和鑒定的方法。

2.觀察提取出來的DNA物質(zhì)的顏色和形狀。

材料用具

材料：活雞或鮮血雞血。

儀器：離心機(jī)、恒溫水裕鍋、載玻片，玻璃棒，濾紙，滴管，量簡(100 mL，l個(gè))，燒杯(100 mL，l個(gè)，50 mL、500 mL各 2個(gè))，試管(20 mL，2個(gè))，漏斗，試管夾，紗布。

試劑：酒精的體積分?jǐn)?shù)為95%的溶液(實(shí)驗(yàn)前置于冰箱內(nèi)冷卻24 h)，蒸餾水，檸檬酸鈉的質(zhì)量濃度為 0.1g/mL的溶液，氯化鈉的物質(zhì)的量濃度分別為 2 mol/L和0.015 mol/L的溶液，二苯胺試劑。

方法步驟

實(shí)驗(yàn)前需要制備雞血細(xì)胞液(由教師完成)，制備的方法是：取檸檬酸鈉的質(zhì)量濃度為 0.1 g/mL的溶液(抗凝劑)100 mL，置于500 mL燒杯中。將宰殺活雞流出的雞血(約180 mL)注入燒杯中，同時(shí)用玻璃棒攪拌，使血液與檸檬酸鈉溶液充分混合，以免凝血。然后，將血液倒入離心管內(nèi)，用 1000 r/min的離心機(jī)離，鑒定材料《dna粗提取與鑒定》。2min，此時(shí)血細(xì)胞沉淀于離心管底部。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用吸管除去離。心管上部的澄清液，就可以得到雞血細(xì)胞液。

1.提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)

將制備好的雞血細(xì)胞液5 mL～10mL，注入到50 mL燒杯中。向燒杯中加入蒸餾水20 mL，同時(shí)用玻璃棒充分?jǐn)嚢? min，使血細(xì)胞加速破裂。然后，用放有紗布的漏斗將血細(xì)胞液過濾至500mL。取其濾液。

2.溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA

將氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol的溶液40mL加入到濾液中，并搖動燒杯，使其混合均勻，這時(shí)DNA在溶液中呈溶解狀態(tài)。

3.析出含DNA的粘稠物

沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒不停地輕輕攪拌，這時(shí)燒杯中有絲狀物出現(xiàn)，注意觀察絲狀物呈什么顏色。繼續(xù)加入蒸餾水，溶液中出現(xiàn)的粘稠物會越來越多。當(dāng)粘稠物不再增加時(shí)停止加入蒸餾水(這時(shí)溶液中氯化鈉的物質(zhì)的量濃度相當(dāng)于0.14 mol/L)。

4.濾取含DNA的粘稠物

用放有多層紗布的漏斗，過濾步驟3中的溶液至 500mL的燒杯中，含 DNA的粘稠物被留在紗布上。

5.將DNA的粘稠物再溶解

取 1個(gè) 50 mL燒杯，向燒杯內(nèi)注入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol/L的溶液 20mL。用鈍頭鑷子將紗布上的粘稠物夾至氯化鈉溶液中，用玻璃擇不停地?cái)嚢?，使粘稠物盡可能多地溶解于溶液中。

6.過濾含有DNA的氯化鈉溶液

取1個(gè)100 mL燒杯，用放有兩層紗布的漏斗過濾步驟5中的溶液。取其濾液，DNA溶于濾液中。

7.提取含雜質(zhì)較少的DNA

在上述濾過的溶液中，加入冷卻的、酒精的體積分?jǐn)?shù)為 95%的溶液 50mL(使用冷卻的酒精，對DNA的凝集效果較佳)，并用玻璃棒攪拌，溶液中會出現(xiàn)含雜質(zhì)較少的絲狀物。用玻璃棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。這種絲狀物的主要成分就是DNA。注意觀察絲狀物是什么顏色的。

8.DNA的鑒定

取兩支20 mL的試管，各加入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為0.015 mol/L的溶液5 mL，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4mlL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于沸水中加熱 5 min，待試管冷卻后，觀察并且比較兩支試管中溶液顏色的變化。將觀察的結(jié)果填寫在《實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊》上。

結(jié)論

步驟8的2支試管中溶液顏色的變化說明了什么?將得出的結(jié)論填寫在《實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊》上。

討論

1.提取雞血中的DNA時(shí)，為什么要除去血液中的上清液?

2.步驟回和步驟3中都需要加入蒸餾水，兩次加入的作用相同嗎?為什么?

3.DNA的直徑約為20×10-10 m，實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的絲狀物的粗細(xì)是否表示1個(gè)DNA分子直徑的大小?

第五篇：dna的粗提取與鑒定

dna的粗提取與鑒定

實(shí)驗(yàn)十一 DNA的粗提取與鑒定

教學(xué)目的1、初步掌握DNA的粗提取和鑒定的方法

2、觀察提取出來的DNA物質(zhì)

實(shí)驗(yàn)原理

1、DNA在NaCl溶液中的溶解度，是隨著NaCl的濃度的變化而改變的，dna的粗提取與鑒定。當(dāng)NaCl的物質(zhì)的量濃度為0.14mOl/L時(shí),DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。

2、DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。

3、DNA遇二苯胺(沸水浴)會染成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。

注意事項(xiàng)

1、步驟3析出含DNA的黏稠物中，蒸餾水要沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入，不能一次快速倒入。

2、實(shí)驗(yàn)中有多個(gè)步驟都要用玻璃棒進(jìn)行攪拌，但是在不同的步驟中玻璃棒的用法不同。

實(shí)驗(yàn)用具

雞血細(xì)胞液(5～10mL);體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精，蒸餾水，質(zhì)量濃度為0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液，物質(zhì)的量濃度分別為2mol/L和0.015mol/L的NaCl溶液，二苯胺試劑;燒杯(100mL，1個(gè)，50mL，500mL，各2個(gè))，漏斗，試管(20mL，2個(gè))，玻璃棒，滴管，量筒(100mL，1個(gè))，紗布，鑷子，濾紙，鐵架臺，鐵環(huán)，三角架，酒精燈，石棉網(wǎng)，載玻片，試管夾。

課時(shí)安排

一課時(shí)

課前準(zhǔn)備

制備雞血細(xì)胞液，方法是：將質(zhì)量濃度為0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液100mL，置于500mL燒懷中，注入新鮮的雞血(約180mL)，用玻璃棒攪拌，使其充分混合，以免凝血。靜置于冰箱內(nèi)一天，使血細(xì)胞自行沉淀。也可以用離心機(jī)離心2 min(轉(zhuǎn)速1000轉(zhuǎn)/分)。用吸管吸去上清液。

板書

實(shí)驗(yàn)十一 DNA的粗提取與鑒定

實(shí)驗(yàn)原理

1、析出溶解在NaC1溶液中的DNA。

2、用冷酒精提取出含雜質(zhì)較少的DNA。

3、DNA在沸水浴時(shí)被二苯胺染成藍(lán)色。

方法步驟：

1、提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)：順時(shí)針方向攪拌，稍快，稍重。5 min2、溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA3、析出含DNA的黏稠物：蒸餾水300mL，逆時(shí)針方向攪拌，緩慢

4、過濾：取黏稠物

5、再溶解：順時(shí)針方向攪拌，較慢。3 min6、過濾：取濾液。

7、提取出含雜質(zhì)較少的DNA，逆時(shí)針方向攪拌，稍慢。5 min8、DNA的鑒定：沸水浴5min((1)無變化(2)藍(lán)色)

上節(jié)課我們通過幾個(gè)驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，證明了DNA是主要的遺傳物質(zhì)，自我鑒定《dna的粗提取與鑒定》。那么DNA是什么樣的物質(zhì)呢?今天我們就通過實(shí)驗(yàn)將它提取出來，進(jìn)行觀察和鑒定。

通過預(yù)習(xí)，我們知道選用雞血細(xì)胞液作為實(shí)驗(yàn)材料。在制備雞血細(xì)胞液時(shí)，所用的檸檬酸鈉有防止血液凝固的作用。

制備過程中，一定要用剛宰殺的雞的新鮮血，并且要與抗凝劑充分混合，防止凝血。我們采用靜置一天的方法，獲得雞血細(xì)胞液。

大家在動手做實(shí)驗(yàn)之前先要明確幾個(gè)需要注意的問題。

1、要嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)的方法步驟去操作。

2、實(shí)驗(yàn)中有多個(gè)步驟都要用玻璃棒進(jìn)行攪拌，使用時(shí)玻璃棒不要碰到燒杯底，在不同的步驟中玻璃棒的用法不同，每一步的用法參照黑板上的指導(dǎo)去操作。

3、在DNA的鑒定中，所用的二苯胺是一種有毒性的試劑，大家在使用時(shí)注意不要讓藥液接觸到皮膚或身體的其他部位，也不要近距離觀察。

下面在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過程中，要思考每一操作步驟要達(dá)到什么目的。

在進(jìn)行步驟1時(shí)，利用攪拌的5分鐘，做如下提問：

為什么要加蒸餾水?加入蒸餾水后細(xì)胞將會怎樣?

(讓細(xì)胞內(nèi)溶液的濃度大于周圍溶液的濃度，細(xì)胞會吸水以至脹破)

為什么要用力攪拌?

(可以加速血細(xì)胞和細(xì)胞核的破裂)

所以下一步驟過濾將濾去的是細(xì)胞膜和核膜等物質(zhì)。

在進(jìn)行步驟3時(shí)，要向全班明確：這一步驟是這個(gè)實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵，注意加蒸餾水的方法和使用玻璃棒的方法，千萬不能太快太猛，防止打碎DNA。

觀察濾取出來的黏稠物的顏色。

有的同學(xué)提取的黏稠物較少，原因可能是在溶解DNA時(shí)不充分，也可能是析出黏稠物時(shí)攪拌的快了。

將黏稠物再溶解時(shí)一定要充分，多攪拌。以免有DNA損失。

加入冷酒精時(shí)動作要慢。

當(dāng)玻璃棒上出現(xiàn)絲狀物纏繞時(shí)，繼續(xù)慢慢攪拌。至不再增加時(shí)，取出吸干上面的水分。仔細(xì)觀察絲狀物呈什么顏色?(黃色)

這些絲狀物要用二苯胺鑒定。使用二苯胺時(shí)要注意不要接觸到藥液。進(jìn)行沸水浴時(shí)，在實(shí)驗(yàn)室較為通風(fēng)的地方集體進(jìn)行。

利用沸水浴的5 min。

步驟3中加入蒸餾水的目的?與步驟1有什么區(qū)別?

(步驟3中加蒸餾水是使NaCl溶液的濃度逐漸降至0.14mol/L，使DNA的黏稠物析出。而步驟1加蒸餾水是為了讓細(xì)胞吸水脹破)

步驟7為什么要加50mL的冷酒精?

(因?yàn)镈NA不溶于冷酒精，而其他物質(zhì)可以溶解在酒精中，使含雜質(zhì)較少的DNA絲狀物可以析出。懸浮于溶液中)

現(xiàn)在大家從水浴鍋中拿出試管，比較兩個(gè)試管中溶液的顏色有什么不同?

(有絲狀物的試管變成藍(lán)色，另一試管還是原來顏色)

這一鑒定結(jié)果說明什么問題?

(提取出的絲狀物是DNA)

那么你看到的絲狀物的粗細(xì)是不是DNA分子的直徑呢?

(不是。DNA分子直徑只有2nm。絲狀物是多個(gè)DNA分子聚在一起形成的)

下面請同學(xué)們將實(shí)驗(yàn)用具，按原樣擺放整齊，實(shí)驗(yàn)桌要保持清潔。

今天我們通過實(shí)驗(yàn)將DNA提取出來進(jìn)行了觀察和鑒定，那么DNA的化學(xué)組成，分子結(jié)構(gòu)和復(fù)制是怎樣的?我們下節(jié)課再繼續(xù)研究。