第一篇：微生物實驗室培養(yǎng)

平陸中學(xué)高二生物

課題一：微生物的實驗室培養(yǎng)第二課時

車柳順2.24學(xué)習(xí)目標(biāo)：

1、明確配制培養(yǎng)基的步驟

2、說出純化微生物的方法和步驟

目標(biāo)一：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基

1、步驟：計算→稱量→溶化→→滅菌→倒平板。

2、演示倒平板操作

導(dǎo)思：（完成倒平板操作的討論題1——4）

目標(biāo)二：純化大腸桿菌

1、微生物接種最常用的方法是劃線法和涂布平板法。

2、平板劃線法通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)分散到培養(yǎng)基的表面。稀釋涂布平板法則是將菌液進(jìn)行一系列的梯度，然后將不同稀釋度的菌液分別到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。

3、總結(jié)平板劃線法和稀釋涂布平板法的操作步驟并演示

（1）平板劃線操作：

導(dǎo)思：（完成平板劃線法的討論題）

（2）稀釋涂布平板法：

導(dǎo)思：（完成稀釋涂布平板法操作的討論題）

4、平板劃線法和稀釋涂布平板法的異同點是

目標(biāo)三：菌種的保存

（1）對于頻繁使用的菌種，可以采用的方法

（2）對于需要長期保存的菌種，可以采用的方法。

自我反思

1、以下關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述錯誤的是（）

A.操作順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌

B.將稱量好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯

C.將培養(yǎng)皿冷卻至50C左右時進(jìn)行倒平板

D.待平板冷卻凝固約5—10min后將平板倒過來放置

2、有關(guān)倒平板的操作錯誤的是（）

A.將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上

B.將打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰

C.將培養(yǎng)皿打開，培養(yǎng)皿蓋倒放在桌面上

D.等待平板冷卻凝固后需要倒過來放置

3、有關(guān)稀釋涂布平板法，敘述錯誤的是（）

A.先將菌液進(jìn)行一系列的稀釋

B.然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面

C.適宜條件下培養(yǎng)

D.結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落

4、產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目和培養(yǎng)基分別是（）

A.一個細(xì)菌、液體培養(yǎng)基B.許多細(xì)菌、液體培養(yǎng)基

C.一個細(xì)菌、固體培養(yǎng)基D.許多細(xì)菌、固體培養(yǎng)基

第二篇：微生物的實驗室培養(yǎng)

微生物的實驗室培養(yǎng)

課題目標(biāo)：了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，進(jìn)行無菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物培養(yǎng)。課題重點與難點：

1、無菌技術(shù)的操作

教學(xué)過程：

一、對培養(yǎng)基的認(rèn)識：

1、培養(yǎng)基可分為和，2、盡管培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都般都含有，還需滿足不同微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的 要求。

二、無菌技術(shù)：

（1）含義：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法

（2）關(guān)鍵：

（3）方法：消毒和滅菌的區(qū)別，概念（學(xué)生自己學(xué)習(xí)、敘述）

消毒：煮沸消毒法，化學(xué)藥劑消毒法，紫外線消毒法

了解各種方法的操作過程。如干熱滅菌用干熱滅菌箱，溫度，時間1—2h；高壓蒸汽滅菌，溫度，壓力，15—30min.。

各種滅菌方法各自適用那些物品或器具？

三、純化大腸桿菌以及菌種的保藏

（1）制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基

方法步驟：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。（了解大體的操作過程）

問題：平板冷卻后，為什么要將平板倒置？

（2）純化大腸桿菌

①原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個細(xì)胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個細(xì)胞繁殖而來的子細(xì)胞群體。

②方法：、。

第三篇：微生物實驗室守則

微生物實驗室守則

1.須著長及膝蓋之實驗衣，並穿著長褲，若有長髮應(yīng)予以適當(dāng)束結(jié)，嚴(yán)禁穿著拖鞋或涼鞋。實驗室內(nèi)嚴(yán)禁喧嘩嬉鬧、追逐、抽煙及吃食等行為。

2.非必要物品勿置於實驗室之桌面，實驗結(jié)束後，需加以清理，物品並應(yīng)歸於原位。

3.實驗前後消毒桌面及手部，實驗時操作桌面應(yīng)隨時保持乾淨(jìng)。

4.應(yīng)熟悉實驗室內(nèi)所有設(shè)備，配置及正確操作方法。

5.顯微鏡使用後應(yīng)清理乾淨(jìng)，並清點附件是否齊備，關(guān)閉電源後再拔掉插頭，並歸定位，發(fā)現(xiàn)有任何異狀，即報告指導(dǎo)老師處理，任何配件或裝置避免任意交換或拆卸。

6.不可於點燃酒精燈時噴酒精，並隨時注意自己及他人之安全，酒精燈不用時應(yīng)即熄滅。

7.實驗所用之菌體有些為致病菌，故須以無菌操作且避免用手及口的動作，如咬手指或用舌頭舔濕標(biāo)籤。

8.實驗用之所有菌體或器具未經(jīng)許可嚴(yán)禁攜出室外。9.接種針（環(huán)）於接菌前後務(wù)必以酒精燈滅菌。

10.含菌體之容器，應(yīng)妥予加蓋，非必要時切勿任意打開。

11.實驗後待丟棄物品應(yīng)妥善包裹或予殺菌處理再丟棄；固體培養(yǎng)基則不得倒入水槽中。

12.實驗結(jié)束後，應(yīng)確實關(guān)閉所有不用之電源。

13.任何意外事件，應(yīng)即報告助教及指導(dǎo)老師，亦應(yīng)熟知其應(yīng)變措施。

14.實驗操作過程中必須隨時注意自身及他人之安全，若有危及自身及他人安全之事件或違反實驗守則者，本實驗課成績一律以零分計。

微生物實驗室守則

1.須著長及膝蓋之實驗衣，並穿著長褲，若有長髮應(yīng)予以適當(dāng)束結(jié)，嚴(yán)禁穿著拖鞋或涼鞋。實驗室內(nèi)嚴(yán)禁喧嘩嬉鬧、追逐、抽煙及吃食等行為。

2.非必要物品勿置於實驗室之桌面，實驗結(jié)束後，需加以清理，物品並應(yīng)歸於原位。3.實驗前後消毒桌面及手部，實驗時操作桌面應(yīng)隨時保持乾淨(jìng)。

4.應(yīng)熟悉實驗室內(nèi)所有設(shè)備，配置及正確操作方法。

5.顯微鏡使用後應(yīng)清理乾淨(jìng)，並清點附件是否齊備，關(guān)閉電源後再拔掉插頭，並歸定位，發(fā)現(xiàn)有任何異狀，即報告指導(dǎo)老師處理，任何配件或裝置避免任意交換或拆卸。

6.於點燃酒精燈時噴酒精，並隨時注意自己及他人之安全，酒精燈不用時應(yīng)即熄滅。

7.實驗所用之菌體有些為致病菌，故須以無菌操作且避免用手及口的動作，如咬手指或用舌頭舔濕標(biāo)籤。

8.實驗用之所有菌體或器具未經(jīng)許可嚴(yán)禁攜出室外。

9.接種針（環(huán)）於接菌前後務(wù)必以酒精燈滅菌。

10.含菌體之容器，應(yīng)妥予加蓋，非必要時切勿任意打開。

11.實驗後待丟棄物品應(yīng)妥善包裹或予殺菌處理再丟棄；固體培養(yǎng)基則不得倒入水槽中。

12.實驗結(jié)束後，應(yīng)確實關(guān)閉所有不用之電源。13.任何意外事件，應(yīng)即報告助教及指導(dǎo)老師，亦應(yīng)熟知其應(yīng)變措施。

14.實驗操作過程中必須隨時注意自身及他人之安全，若有危及自身及他人安全之事件或違反實驗守則者，本實驗課成績一律以零分計。

第四篇：微生物實驗室規(guī)則

微生物實驗室規(guī)則

1、進(jìn)實驗室應(yīng)穿工作服，離室時脫去放在指定處所，工作服應(yīng)定期消毒洗滌。

2、非必要物品勿帶入實驗室。

3、實驗室內(nèi)應(yīng)保持肅靜；不得高聲談笑；不準(zhǔn)吸煙和進(jìn)食；無菌室在工作前、工作后均須全面清掃、消毒。

4、如帶有細(xì)菌的增菌液污染桌面或地面，應(yīng)立即用消毒溶液傾覆其上，半小時后方可抹去；如有污染物污染工作服，應(yīng)立即將工作服脫去以高壓蒸汽法滅菌。

5、如有污染物污染手部，應(yīng)立即將手浸泡消毒液內(nèi)，經(jīng)5分鐘后，再用肥皂和水刷洗干凈。如有污染物吸入口內(nèi)，應(yīng)立即吐出，并以大量清水漱口，根據(jù)需要亦可服用有關(guān)藥物以防發(fā)生感染染。

6、接種環(huán)用后應(yīng)立即在酒精燈火焰上燒灼滅菌；沾菌的吸管、玻片等用后應(yīng)分別浸泡在盛有消毒液的玻璃缸內(nèi)，其他已污染的試管、平皿等亦必須置于專用容器內(nèi)，經(jīng)滅菌后再進(jìn)行洗滌。

7、用于消毒的酒精應(yīng)放在加蓋搪瓷缸內(nèi)，如不慎著火，應(yīng)立即用搪瓷蓋蓋上與空氣隔絕即可滅掉火焰。

8、工作完畢時工作臺用沾有消毒液的抹布擦拭干凈，地面應(yīng)用墩布擦拭干凈。

9、檢驗人員應(yīng)具備高度責(zé)任感，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度從事檢驗工作。

第五篇：微生物實驗室管理制度

目 的：規(guī)范微生物室管理規(guī)范，以保證微生物實驗的順利進(jìn)行。范 圍：適用于微生物實驗室

依 據(jù)：GB/T 19489-2008《實驗室 生物安全通用要求》； 執(zhí)行部門：化驗室微生物檢驗室

職 責(zé)：1.微生物檢驗員負(fù)責(zé)微生物實驗室的管理。2.實驗室主管負(fù)責(zé)對微生物實驗室管理情況進(jìn)行檢查。內(nèi) 容：

本中心微生物實驗室管理制度包括微生物實驗室人員管理制度、微生物室出入管理 制度、微生物室環(huán)境管理制度、微生物室的使用管理制度。微生物實驗室藥品管理制度。

1.微生物實驗室的人員管理

1.1 微生物實驗室由微生物檢驗員管理及使用,其他人員須經(jīng)主管人員批準(zhǔn)后方可進(jìn)入和使 用。

1.2 微生物實驗室的人員需經(jīng)過相關(guān)的培訓(xùn)。2.微生物實驗室出入管理 2.1 人員出入管理：

2.1.1 人員進(jìn)入微生物實驗室潔凈區(qū)前，需要洗手消毒；在一級緩沖室換實驗服、戴帽子、換鞋后，進(jìn)入風(fēng)淋室，風(fēng)淋后，進(jìn)入二級緩沖室準(zhǔn)備實驗。2.1.2 實驗操作前須帶上無菌手套和口罩。2.2 物料出入管理：

2.2.1 物料進(jìn)入微生物實驗室以前，脫去外包裝或者用酒精棉球擦拭后，放置于傳遞窗中。2.2.2 物料放置于傳遞窗后，開啟紫外0.5小時，同時將微生物實驗室內(nèi)的凈化系統(tǒng)、紫外 燈打開。

2.2.3 紫外開啟0.5小時以后，關(guān)閉紫外，并將物品轉(zhuǎn)移于實驗操作臺上。

2.2.4 實驗完畢后，微生物實驗室物品經(jīng)傳遞窗傳出后，經(jīng)高溫滅菌后廢液、廢物倒入廢液桶處理。

3.微生物實驗室的環(huán)境管理 3.1 微生物實驗室的清潔管理

微生物實驗室的清潔分為一般清潔及徹底清潔，其具體的清潔部位、方式方法、頻率見下表所示：

3.2 微生物實驗室常用消毒劑及其配制

4.微生物實驗室的使用管理

4.1 微生物實驗室使用之前，應(yīng)先開啟微生物實驗室自凈系統(tǒng)30分鐘。每次使用前應(yīng)用消毒 液擦拭超凈工作臺及其他一切可能引起污染的死角，然后開紫外燈滅菌30分鐘，同時開啟超凈工作臺。操作完畢后，用消毒液擦拭臺面，做好衛(wèi)生，開紫外燈30分鐘，并記錄紫外燈照射時間。注：當(dāng)紫外燈使用1000小時應(yīng)更換。

4.2 微生物實驗室使用時，應(yīng)同時進(jìn)行沉降菌監(jiān)測，將含有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)皿在各監(jiān)測點正向放置，打開蓋子，暴露30分鐘，然后蓋上，將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基放入30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，觀察結(jié)果，每皿菌落數(shù)應(yīng)≤1個，否則應(yīng)加強(qiáng)清潔消毒工作，必要時驗證生物安全柜的性能。5.微生物實驗室藥品及培養(yǎng)基管理制度

藥品及培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。5.1 藥品及培養(yǎng)基的采購及接收

微生物實驗室所用的藥品及培養(yǎng)基必須是符合國家相關(guān)資質(zhì)的公司所出產(chǎn)的。實驗室根據(jù)檢驗需要申購所需的培養(yǎng)基并做好相應(yīng)的接收記錄。5.1培養(yǎng)基的接收

微生物檢驗室應(yīng)指定專人負(fù)責(zé)培養(yǎng)基的管理，在接收培養(yǎng)基時，應(yīng)核對培養(yǎng)基的品名、來源、批號、生產(chǎn)日期、有效期、數(shù)量，脫水培養(yǎng)基應(yīng)附有處方和使用說明，并做好接收記錄。5.2培養(yǎng)基的制備

培養(yǎng)基可按處方配制，也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。在制備培養(yǎng)基時，應(yīng)選擇質(zhì)量符合要求的脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分進(jìn)行配制。脫水 培養(yǎng)基應(yīng)附有處方和使用說明，配制時應(yīng)按使用說明上的要求操作以確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求，不得使用結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基。脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下貯藏，如低溫、干燥和避光，所有的容器應(yīng)密封，尤其是盛放脫水培養(yǎng)基的容器。商品化的成品培養(yǎng)基除了應(yīng)附有處方和使用說明外，還應(yīng)注明有效期、貯藏條件、適用性檢查試驗的質(zhì)控菌和用途。

為保證培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定可靠，各脫水培養(yǎng)基或各配方組分應(yīng)準(zhǔn)確稱量，并要求有一定的精確度。配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水，特殊情況下，可能需要用去離子水和蒸餾水。應(yīng)記錄各稱量物的重量和水的使用量。配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具應(yīng)潔凈，可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質(zhì)的殘留，對熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應(yīng)預(yù)先進(jìn)行滅菌，以保證培養(yǎng)基的無菌性。

脫水培養(yǎng)基應(yīng)完全溶解于水中，再行分裝與滅菌。配制時若需要加熱助溶，應(yīng)注意不要過度加熱，以避免培養(yǎng)基顏色變深。如需要添加其他組分時，加入后應(yīng)充分混勻。應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗證的參數(shù)進(jìn)行培養(yǎng)基的滅菌。商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù)，特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌。

培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件，有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或pH 的改變。因此，培養(yǎng)基應(yīng)采用驗證的滅菌程序滅菌，培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應(yīng)通過無菌性試驗和促生長試驗進(jìn)行驗證。此外，對高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗證，以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過熱，過度滅菌可能會破壞絕大多數(shù)的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質(zhì)量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此，應(yīng)根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性，進(jìn)行全面的滅菌程序驗證。應(yīng)確定每批培養(yǎng)基滅菌后的pH值（冷卻至室溫25 ℃ 測定）。若培養(yǎng)基處方中未列出pH 值的范圍，除非經(jīng)驗證表明培養(yǎng)基的pH 值允許的變化范圍很寬，否則，pH值的范圍不能超過規(guī)定值士0.2。

制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行下列檢查：容器和蓋子不得破裂，裝量應(yīng)相同，盡量避免形成氣泡，固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪，在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶，不得污染微生物等。應(yīng)檢查和記錄批數(shù)量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查。5.3 培養(yǎng)基的貯藏

自配的培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱、批號、配制日期等信息，并在已驗證的條件下貯藏。商品化的成品培養(yǎng)基標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有名稱、批號、生產(chǎn)日期、失效期及培養(yǎng)基的有關(guān)特性，生產(chǎn)商和使用者應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書上的要求進(jìn)行貯藏，所采用的貯藏和運(yùn)輸條件應(yīng)使成品培養(yǎng)基最低限度的失去水分并提供機(jī)械保護(hù)。

培養(yǎng)基滅菌后若貯藏在高壓滅菌器中，質(zhì)量可能會受影響，一般不提倡這種存放法。瓊脂培養(yǎng)基不得在O ℃ 或O ℃ 以下存放，因為冷凍可能破壞凝膠特性。

培養(yǎng)基應(yīng)避光保存，若要長期保存，應(yīng)置于密閉容器中以防止水分流失。瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，一般不超過1周，且應(yīng)密閉包裝，若延長保存期限，保存期需經(jīng)驗證確定。固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許1 次，以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用水浴或流通蒸汽加熱。若使用微波爐，應(yīng)避免培養(yǎng)基過度受熱及水分的蒸發(fā)，更要注意安全。融化的培養(yǎng)基應(yīng)置于45 ～50 ℃ 的水浴中，不得超過8 小時。傾注培養(yǎng)基時，應(yīng)擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分，避免容器外壁的水滴進(jìn)人培養(yǎng)基中造成污染。使用過的培養(yǎng)基（包括失效的培養(yǎng)基）應(yīng)按照國家污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。5.4 質(zhì)量控制試驗

實驗室應(yīng)對試驗用培養(yǎng)基建立質(zhì)量控制程序，以確保所用培養(yǎng)基質(zhì)量符合相關(guān)檢測的需要。實驗室配制或商品化的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量依賴于其制備過程，采用不適宜方法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長或復(fù)蘇，從而影響試驗結(jié)果的可靠性。所有配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制試驗。實驗室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目是pH、適用性檢查試驗，定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期。

培養(yǎng)基在有效期內(nèi)應(yīng)依據(jù)適用性檢查試驗確定培養(yǎng)基質(zhì)量是否符合要求。有效期的長短將取決于在一定存放條件下（包括容器特性及密封性）的培養(yǎng)基其組成成分的穩(wěn)定性。

除藥典附錄另有規(guī)定外，在實驗室中，若采用已驗證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗可只進(jìn)行1 次。

如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗證，那么每一批培養(yǎng)基均要進(jìn)行適用性檢查試驗，試驗的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關(guān)附錄中進(jìn)行選擇，也可增加從生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株。培養(yǎng)基的質(zhì)屋控制試驗若不符合規(guī)定，應(yīng)尋找不合格的原因，以防止問題重復(fù)出現(xiàn)。任何不符合要求的培養(yǎng)基均不能使用。

用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100 ％的預(yù)培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。