第一篇:油料作物中粗脂肪的提取及油脂的性質(zhì)鑒定
油料作物中粗脂肪的提取及油脂的性質(zhì)鑒定
09級(jí)制藥工程一班 李楠
摘要:該文研究了用浸出法從油料作物花生中提取粗脂肪。浸出法是一種較先進(jìn)的制油方法,它是應(yīng)用固液萃取的原理,選用某種能夠溶解油脂的有機(jī)溶劑,經(jīng)過對(duì)油料的接觸(浸泡或噴淋),使油料中油脂被萃取出來(lái)的一種方法[1]。其儀器主要為索氏提取器。然后通過皂化反應(yīng),酸堿反應(yīng)等鑒定出油脂的性質(zhì)。關(guān)鍵詞:粗脂肪 提取 油脂 鑒定
Extraction of crude fat in oil crops and the identification of the nature of oil
09 Class1 pharmaceutical Engineering Abstract: This paper studies the leaching method used to extract fat from the peanut oil crops.Leaching method is a more advanced-oil method, which is the application of the principle of solid-liquid extraction, the choice of some organic solvent to dissolve oil, after the contact of oil(soak or spray), so that fuel oil is extracted in the A method [1].The mainly instrument is the Sechelt extractor.Then we can identify the nature of oil by specification, acid-base reaction.Key words: Crude fat
Extraction
Grease Identification 正文:花生是我國(guó)主要的油料作物和經(jīng)濟(jì)作物,我國(guó)各地均有栽培。主要品種有普通型、蜂腰型、多粒型、珍珠型等四類;花生種子有長(zhǎng)圓、長(zhǎng)卵、短圓等形,淡紅色。[2] 花生滋養(yǎng)補(bǔ)益,有助于延年益壽,所以民間又稱“長(zhǎng)生果”,并且和黃豆一樣被譽(yù)為“植物肉”、“素中之葷”?;ㄉ臓I(yíng)養(yǎng)價(jià)值比糧食類高,可與雞蛋、牛奶、肉類等一些動(dòng)物性食品媲美,它含有大量的蛋白質(zhì)和脂肪,其脂肪含量為45 %~55 %。特別是不飽和脂肪酸的含量很高,很適宜制造各種營(yíng)養(yǎng)食品。[3]本文對(duì)花生中粗脂肪的提取和油脂鑒定進(jìn)行分析,討論。
1:實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)從油料作物中提取粗脂肪的基本原理和實(shí)驗(yàn)方法
熟練掌握索氏提取器的操作方法 了解油脂的一般性質(zhì)
2:實(shí)驗(yàn)意義:通過本次實(shí)驗(yàn),學(xué)生能更加熟練的操作索氏提取器,并了解其工作原理,由學(xué)生動(dòng)手實(shí)踐對(duì)本實(shí)驗(yàn)的操作方法及步驟都會(huì)牢牢掌握。同時(shí)對(duì)固液萃取的原理由更生層次的理解。同時(shí)也會(huì)定性學(xué)習(xí)油脂的性質(zhì)。3:國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀
3.1:國(guó)內(nèi):傳統(tǒng)提取工藝主要有壓榨法和浸出法兩種。[4]壓榨或浸出之前需要對(duì)油料進(jìn)行破碎、粉碎、榨胚或烘烤等處理,以機(jī)械和熱力等方法破壞油料細(xì)胞結(jié)構(gòu),達(dá)到有利的出油條件。這兩種傳統(tǒng)工藝都是著重于對(duì)油脂的提取,雖然出油率高,但設(shè)備復(fù)雜,更主要的是造成蛋白質(zhì)變性,使提油后餅粕不能有效利用,蛋白質(zhì)資源嚴(yán)重浪費(fèi),且熔劑浸出后需要脫溶過程,設(shè)備多、投資大、污染重[5]。為克服傳統(tǒng)制油工藝的弊端,考慮到經(jīng)濟(jì)、環(huán)境和安全等多方面的因素,一些可以同時(shí)分離蛋白質(zhì)和油脂的各種新型方法提取植物油技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。例如水劑法——以水為溶劑,利用油和蛋白質(zhì)的溶解性質(zhì),將處理后的原料中的油脂和蛋白質(zhì)浸提出來(lái),并在適宜條件下離心分離成乳油相、固相、液相,再經(jīng)過加工處理,分別從乳油相和液相中得到油和蛋白質(zhì)[6]。水劑法提油的優(yōu)點(diǎn)因采用水作為溶劑,沒有燃爆的危險(xiǎn),不會(huì)污染環(huán)境,提取的油脂品質(zhì)好,并且同時(shí)分離油和蛋白質(zhì) [7]。再有超臨界CO2 萃取法——利用超臨界流體具有的優(yōu)良溶解性及這種溶解性隨溫度和壓力變化而變化的原理,通過調(diào)整流體密度來(lái)提取不同物質(zhì)[8]。3..2:國(guó)外:目前超臨界CO2 萃取法是國(guó)內(nèi)外競(jìng)相研究開發(fā)的新一代高效分離及分析技術(shù)。水酶法提油是一種新興的油脂與蛋白質(zhì)分離的方法,也是國(guó)內(nèi)外研究的熱門[9] 4:實(shí)驗(yàn)方法
4.1:實(shí)驗(yàn)儀器:電烘箱,植物粉碎機(jī),索氏提取器,電熱套,圓底燒瓶(150ml,50ml)直形冷凝管,尾接管,溫度計(jì),量筒,球形冷凝管,燒杯,(100ml)抽濾裝置,攪拌棒
4.2:實(shí)驗(yàn)原理:油脂的種類很多,他們都是高級(jí)脂肪酸甘油酯的混合物,難溶于水,易溶于苯,乙醚,石油醚,汽油,二硫化碳等脂溶性有機(jī)溶劑。因此工業(yè)上人們?cè)趶闹T如花生,黃豆等油料作物中提取油脂時(shí)常以汽油作為溶劑。本實(shí)驗(yàn)我們以石油醚作為溶劑,用索氏提取器提取油料作物中的油脂,提取過程中,一些脂溶性色素。游離脂肪酸等液和油脂儀器被浸提出來(lái),所以提取物為粗脂肪。油脂在酸堿或脂酶的存在下易被水解生成高級(jí)脂肪酸和甘油,在堿作用下的水解即為皂化反應(yīng),由于肥皂不溶于飽和食鹽水中,可以被鹽析,由此分離肥皂盒甘油。甘油可用CuSO4的NaOH溶液鑒別,結(jié)果為藍(lán)色溶液。不飽和脂肪酸可用溴或碘的加成反應(yīng)滴定。[10] 4.3:實(shí)驗(yàn)步驟:
4.3.1油脂的提?。簩⒒ㄉ糜陔姾嫦渲?,烘干3-4h,冷卻至室溫,用植物粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎,后稱取5g樣品裝入烘干的濾紙筒中包好。放入抽提筒中。準(zhǔn)確稱量處理好的燒瓶和沸石的質(zhì)量,然后再其中加入120ml的石油醚和沸石,安裝好索氏提取器,通冷凝水后加熱提取1h,加熱速度控制在每秒2-3滴,待抽提筒中的液體剛剛虹吸下去時(shí),停止加熱,冷卻后改成蒸餾裝置,加熱回收石油醚,當(dāng)無(wú)餾分出時(shí),燒瓶中的剩余濃縮物就是粗脂肪。稱重。4.3.2油脂的化學(xué)性質(zhì) 4.3.2.1油脂皂化:將粗脂肪,6ml95%的乙醇,10ml30%的氫氧化鈉和沸石與50ml燒瓶中回流30min,檢驗(yàn)皂化。將皂化完全的溶液于30ml飽和食鹽水中鹽析。冷卻后抽濾,得到肥皂,濾液。
4.3.2.2肥皂性質(zhì):溶解肥皂。第一組取一支試管加3ml肥皂水,10滴10%HCl,觀察現(xiàn)象。第二組取兩支試管都加入3ml肥皂水,分別加入10滴CaCl2和MgSO4溶液,觀察現(xiàn)象。
4.3.2.3油脂中甘油的檢查:取兩只試管,一支內(nèi)加入濾液1ml另一支加1ml水。分別加5滴5%NaOH和3滴CuSO4觀察現(xiàn)象。4.3.2.4實(shí)驗(yàn)裝置: 提取裝置:
皂化裝置
5:結(jié)果與討論:
5.1 結(jié)果:石油醚所提取得到油脂為1.59克,油脂含量為31.55%.而乙醇提取得到油脂為1.06克,油脂含量為21.03%.5.2肥皂的性質(zhì):第一組中的現(xiàn)象是溶液分層,適宜濃度的鹽酸可使肥皂析出,以致溶液分層。第二組中兩支試管的溶液均分層,是因?yàn)楦呒?jí)脂肪酸根離子與鈣離子、鎂離子反應(yīng)生成沉淀,故而溶液分層。在甘油的檢查中加蒸餾水的那支試管中溶液分層,上層為油,而另一支試管也分層上層為油,下層為乳白色肥皂液??瞻自囼?yàn)的試管顯淺藍(lán)色,而加硫酸銅溶液的試管顯深藍(lán)色。
5.3討論:在本次實(shí)驗(yàn)中,我們通過實(shí)驗(yàn)證明用石油醚提取油脂優(yōu)于用乙醇。在本次實(shí)驗(yàn)中,我們通過實(shí)踐學(xué)習(xí)本次的操作,同時(shí)也了解到花生中油脂提取的量與提取器的虹吸時(shí)間有關(guān)。也與花生的品質(zhì)有關(guān),同時(shí)和溶劑的回收率有關(guān)。6:參考文獻(xiàn)
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第二篇:花生中粗脂肪的提取 論文
: 花生中粗脂肪的提取
1.引言:
學(xué)習(xí)索氏抽提法的原理與方法,掌握索氏抽提法基本操作要點(diǎn)及影響因素。
2.摘要:通過對(duì)粗脂肪的提取方法的比較來(lái)對(duì)比各種提取方法的優(yōu)劣點(diǎn),以不同的方法的提取實(shí)驗(yàn)來(lái)研究并選出最佳的提取方法,從而獲得最好的提取效果,獲得高產(chǎn)量的脂肪。試驗(yàn)中采用了堿提取的方法,分別采用95%乙醇和石油醚作為提取劑來(lái)提取粉碎后的花生粒,并對(duì)提取出的粗脂肪進(jìn)行稱量,來(lái)對(duì)比出采用何種提取劑可以得到更高產(chǎn)量的粗脂肪。結(jié)果表明,采用石油醚作為提取劑可以得到比用乙醇做提取劑提取得到的粗脂肪多出約5%的量,對(duì)花生中的粗脂肪提取的最佳條件為;樣品與提取劑的質(zhì)量體積比1:24(g/ml),提取時(shí)間約為1h,提取溫度105℃。另外還做了油脂的化學(xué)性質(zhì)檢測(cè)的實(shí)驗(yàn),分別做了油脂的皂化以及肥皂性質(zhì)的實(shí)驗(yàn)和甘油的檢查的實(shí)驗(yàn)。
關(guān)鍵詞:花生;粗脂肪;提取方法;油脂
3.實(shí)驗(yàn)原理
油脂是高級(jí)脂肪酸甘油脂的混合物,種類很多。均可溶于乙醚、苯、石油醚等脂溶性溶劑中。本實(shí)驗(yàn)利用脂肪能溶于脂溶性溶劑這一特性,用脂溶性溶劑將脂肪提取出來(lái),借蒸發(fā)除去溶劑,得到產(chǎn)物-脂肪。
花生中含有大約50%的脂肪,25%的蛋白質(zhì),25%的維生素B1,維生素B2及維生素E等多種維生素;用此法提取的脂溶性物質(zhì)除脂肪外,還有游離脂肪酸、磷酸、固醇、芳香油及某些色素等,故稱為“粗脂肪”。同時(shí),樣品中結(jié)合狀態(tài)的脂類(主要是脂蛋白)不能直接提取出來(lái),所以該法又稱為游離脂類定量測(cè)定法。
索氏提取器,又稱脂肪抽取器或脂肪抽出器。就是利用溶劑回流及虹吸原理,使固體物質(zhì)連續(xù)不斷地被純?nèi)軇┹腿?,既?jié)約溶劑,萃取效率又高。索氏提取器是由提取瓶、提取管、冷凝器三部分組成的,提取管兩側(cè)分別有虹吸管和連接管,各部分連接處要嚴(yán)密不能漏氣。提取時(shí),將待測(cè)樣品包在脫脂濾紙包內(nèi),放入提取管內(nèi)。提取瓶?jī)?nèi)加入石油醚,加熱提取瓶,石油醚氣化,由連接管上升進(jìn)入冷凝器,凝成液體滴入提取管內(nèi),浸提樣品中的脂類物質(zhì)。待提取管內(nèi)石油醚液面達(dá)到一定高度,溶有粗脂肪的石油醚經(jīng)虹吸管流入提取瓶。流入提取瓶?jī)?nèi)的石油醚繼續(xù)被加熱氣化、上升、冷凝,滴入提取管內(nèi),如此循環(huán)往復(fù),直到抽提完全為止。
二、實(shí)驗(yàn)
1.儀器與試劑
儀器:索氏抽提器、濾紙、研缽、漏斗,取花生仁去皮,研碎,備用。10mL量筒、電熱調(diào)溫磁力攪拌器 試劑:石油醚(沸點(diǎn)為30℃~60℃)
2.安裝實(shí)驗(yàn)裝置
? 準(zhǔn)備工作:務(wù)必保證提取管和燒瓶?jī)?nèi)干燥、潔凈;將水浴鍋的水溫事先加熱。? 折濾紙斗:取一張?12.5cm的濾紙,折成筒狀,再將其一端折起來(lái)封死,便做成了濾紙斗。
3.提取
(1)稱取8克花生粉,用藥勺裝入濾紙斗中,把濾紙斗的開口處折起來(lái)封死;防止樣品泄出濾紙斗。調(diào)整濾紙斗的高度,使其放在抽提管中時(shí)略低于虹吸管的上彎頭處。向干燥潔凈的燒瓶?jī)?nèi)加入60mL石油醚和幾粒沸石,用水浴加熱1小時(shí)(約12提)。當(dāng)最后一次提取器中的石油醚虹吸到燒瓶中時(shí),停止加熱。
(2)冷卻后,將提取裝置改成蒸餾裝置,用水浴蒸餾法小心加熱回收石油醚,待燒瓶?jī)?nèi)僅剩下1—2mL時(shí),停止加熱,在水浴上趕盡殘留的溶劑。燒瓶中的殘留物為粗脂肪,待燒瓶中的油脂冷卻后,將其倒入一量筒內(nèi)量取體積,計(jì)算油脂的提取率(粗油脂密度為0.9g/mL)。
1.提取劑的選擇以及比較
脂類的結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜,到現(xiàn)在沒有一種溶劑能將純脂肪萃取出來(lái),也就是說提取出來(lái)的都是粗脂肪。(大部分是脂肪,還有一些其他成分)常用的溶劑有乙醚、石油醚、氯仿—甲醇混合溶劑。其中乙醚溶解脂肪的能力強(qiáng),應(yīng)用最廣泛。下面介紹其中兩種:(1)石油醚石油醚溶解脂肪的能力比乙醚弱些,但吸收水分比乙醚少。沒有乙醚易燃。使用時(shí)允許樣品含有微量水分,它沒有膠溶現(xiàn)象,不會(huì)夾帶膠溶淀粉、蛋白質(zhì)等物質(zhì)。采用石油醚提取劑,測(cè)定值比較接近真實(shí)值。
(2)95%乙醇:95%乙醇是實(shí)驗(yàn)中常用的提取劑,價(jià)格較為便宜,而且提取效果也較好,大多數(shù)被提取的物質(zhì)都能較好的溶解在其中。
5.注意事項(xiàng):
1、花生仁碾得越細(xì)提取速率越快,但太細(xì)的花生粉會(huì)從濾紙縫漏出,堵塞虹吸管或隨石油醚流入燒瓶中。
2、濾紙桶的直徑要略小于提取器的內(nèi)徑,其高度要超過虹吸管,但樣品的高度不能超過虹吸管。
3、回流速度不能過快,否則冷凝管中冷凝的石油醚會(huì)被上升的石油醚蒸氣頂出而造成事故。
4、蒸餾時(shí)加熱溫度不能太高,否則油脂容易焦化。
5、實(shí)驗(yàn)中使用的石油醚都是易燃試劑,務(wù)必注意安全。無(wú)論是操作還是回收溶劑,都要注意不得隨意灑出。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)嚴(yán)禁明火!
6.結(jié)果:
提取劑
樣品質(zhì)量
提取質(zhì)量
提取效率
石油醚
5.00g
2.00g
40% 7.討論
1)提取實(shí)驗(yàn)要求能夠得到較高質(zhì)量和較高產(chǎn)量的被提取物,然后才能對(duì)被提取物的性質(zhì)以及其他操作進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。因此如何選擇好的提取劑是提取實(shí)驗(yàn)前必須考慮的問題,提取劑要求有較高的提取效率和較高的安全性,符合環(huán)境友好型化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)。
2)通過實(shí)驗(yàn)可以得出花生中的油脂含量高達(dá)40%,是較好的油料作物,但是要作為生產(chǎn)花生油的原料還達(dá)不到要求,需要采用更高含油率的花生以及更高提取效率的方法。參考文獻(xiàn)
楊潞芳,郝利,植物蛋白和植物油脂分離技術(shù)進(jìn)展[J]食品研究與開發(fā),2003,(6:5-8 有機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn),高巖,洪波
主編
第三篇:油脂品質(zhì)之鑒定
油脂質(zhì)量之鑒定
(1)酸價(jià)(acid value)AV-
1.定義:中和1克油脂中所含游離脂肪酸所需氫化鉀的毫克數(shù)。
2.測(cè)定原理:油脂經(jīng)加熱后,游離脂肪酸增多,酸價(jià)也愈高,故可以酸價(jià)來(lái)作為劣變油脂之指標(biāo)。酸價(jià)會(huì)隨加熱時(shí)間增加。
3.酸價(jià)愈高,油脂的發(fā)煙點(diǎn)會(huì)降低,油炸時(shí)容易冒煙,且會(huì)有刺鼻味。一般大型食品廠均將油炸油換油時(shí)機(jī)定在酸價(jià)0.5以下。
(2)過氧化價(jià)(peroxide value)POV-
1.定義:油脂1000克中所含過氧化物的毫克當(dāng)量數(shù)。
2.測(cè)定原理:油脂氧化后會(huì)產(chǎn)生過氧化物,過氧化價(jià)是測(cè)定油脂中的過氧化物含量。過氧化物含量增加至某一程度后,會(huì)自行分解,過氧化價(jià)又會(huì)降低,因此過氧化價(jià)僅可作為油脂酸敗初期的酸敗度指標(biāo)。
3.過氧化價(jià)愈高,油脂酸敗油耗味會(huì)愈明顯。一般出廠之精制油新油,過氧化價(jià)均控制在1以下。
(3)色澤(color)-
1.方法:油脂廠大都依照諾威朋比色計(jì)(Lovibond Tintometer)之方法,將試樣裝于長(zhǎng)度5又1/4"液槽中,以諾威朋比色計(jì)測(cè)定其顏色。通常檢測(cè)紅色R值及黃色Y值,數(shù)值愈高,顏色即愈深。
2.油脂在加熱后,會(huì)引起許多化學(xué)反應(yīng),導(dǎo)致油脂顏色加深。此外也可由油炸食品的顏色來(lái)判定油質(zhì)量的好壞,通常新鮮的油,所炸出來(lái)的食品,顏色是漂亮的金黃色。
3.油炸油易變黑的原因:
(Ⅰ)油炸溫度過高
(Ⅱ)被炸物渣質(zhì)高溫碳化(應(yīng)時(shí)常將油炸油充份過濾)
(Ⅲ)油炸油安定性不佳(應(yīng)選擇適合之油炸油)
(4)油脂穩(wěn)定性試驗(yàn)(活性氧法)AOM-
1.定義:將空氣以每秒2.33ml的速度流經(jīng)97.8℃,20克油脂使過氧化價(jià)POV值到達(dá)100所需的時(shí)間。此法是用來(lái)測(cè)定油脂的安定性。AOM值愈高,油脂安定性愈佳。
2.通常精制黃豆油AOM值約10小時(shí);精制棕梠油約50~60小時(shí);氫化植物油之AOM值可達(dá)100小時(shí)以上。添加抗氧化劑(BHA、BHT、TBHQ)亦可提升AOM值。
(5)油脂安定性指標(biāo)OSI-
1.定義:將空氣以 5.5psi 的壓力通入5克、120℃的油脂中,使油脂氧化產(chǎn)生可溶
性揮發(fā)性物質(zhì),再利用電極測(cè)定水中導(dǎo)
電度大小,由此可計(jì)算油脂氧化誘導(dǎo)期的時(shí)間。
2.油脂安定性愈高,OSI值亦愈大。OSI值可由公
式換算成AOM值。
第四篇:dna粗提取和鑒定
dna粗提取和鑒定
實(shí)驗(yàn)用具
洋蔥或其他植物、洗潔精、食鹽、攪拌機(jī)或研缽(我們采用的是家用豆?jié){機(jī))、紗布、漏斗、燒杯、玻璃棒、量筒(10mL一支)、滴管、試管(20mL兩支)、天平,dna粗提取和鑒定。95%酒精、蒸餾水、0.015mol/L的NaCl溶液、二苯胺試劑。
實(shí)驗(yàn)材料的選取
凡是含有DNA的生物材料都可以考慮,但是使用DNA含量相對(duì)較高的生物組織,成功的可能性更大。
原理
①加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂
蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來(lái)說是一種低滲液體,水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi),使血細(xì)胞脹裂,再加上攪拌的機(jī)械作用,就加速了雞血細(xì)胞的破裂(細(xì)胞膜和核膜的破裂),從而釋放出DNA。
②加入洗滌劑和食鹽的作用
洗滌劑是一些離子去污劑,能溶解細(xì)胞膜,有利于DNA的釋放;食鹽的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。
③研磨不充分,對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的影響
研磨不充分會(huì)使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全,提取的DNA量變少,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。
④此步驟獲得的濾液中可能含有的細(xì)胞成分?
可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟
1.破碎細(xì)胞,獲取含DNA的濾液
動(dòng)物細(xì)胞的破碎比較容易,以雞血細(xì)胞為例,在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水,同時(shí)用玻璃棒攪拌,過濾后收集濾液即可。如果實(shí)驗(yàn)材料是植物細(xì)胞,需要先用洗滌劑溶解細(xì)胞膜。例如,提取洋
.蔥的DNA時(shí),在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽,進(jìn)行充分的攪拌和研磨,過濾后收集研磨液。
2.去除濾液中的雜質(zhì)
方案一的原理是DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質(zhì),不分解DNA;方案三的原理是蛋白質(zhì)和DNA的變性溫度不同。
注意事項(xiàng)
①用高鹽濃度的溶液溶解DNA,能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì);用低鹽濃度使DNA析出,能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此,通過反復(fù)溶解與析出DNA,就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。
②方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白,從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開;方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同,從而使蛋白質(zhì)變性,與DNA分離。
DNA的析出與鑒定
將處理后的溶液過濾,加入與濾液體積相等、冷卻的酒精溶液,靜置2~3min,溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物,這就是粗提取的DNA,鑒定材料《dna粗提取和鑒定》。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌,卷起絲狀物,并用濾紙吸取上面的水分。
取兩支20ml的試管,各加入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液5ml,將絲狀物放入其中一支試管中,用玻璃棒攪拌,使絲狀物溶解。然后,向兩支試管中各加入4ml的二苯胺試劑?;旌暇鶆蚝?,將試管置于沸水中加熱5min,待試管冷卻后,比較兩支試管溶液顏色的變化,看看溶解有DNA的溶液是否變藍(lán)。
實(shí)驗(yàn)步驟
1.稱取30克已切碎的洋蔥,放入研缽中,加入少量石英砂助研,倒入10mL 2mol/L的氯化鈉溶液,充分研磨。
洋蔥含有揮發(fā)性刺激物,有效減少刺激,才能使實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。上課前,教師可先將洋蔥放入冰箱冷凍一會(huì)兒,使其涼透但又不能結(jié)冰;或?qū)⒀笫[切成幾大塊,放入清水泡一會(huì)兒,讓其揮發(fā)性刺激物溶于水,可以減輕刺激。然后將洋蔥切碎備用。研磨的目的主要是使洋蔥細(xì)胞破裂,使DNA溶于2mol/L的氯化鈉溶液,沒必要將洋蔥研成粥糊狀,后者既浪費(fèi)時(shí)間又影響實(shí)驗(yàn)效果。研磨時(shí),切忌使用攪拌器(榨汁機(jī))。使用攪拌器雖可以提高研磨效率,但攪拌器將洋蔥切成極細(xì)小的顆粒,無(wú)法通過過濾將洋蔥顆粒剔除。只能將酒精直接倒入濾液中,許多洋蔥小顆粒因?yàn)檩p會(huì)漂浮起來(lái),DNA藏在其中,無(wú)法分辨。學(xué)生看不到白色纖維狀粘稠物的DNA。
2.研磨后,用漏斗和紗布將汁液過濾到小燒杯中,得到濾液。
3.向?yàn)V液中加入95%的酒精溶液20mL,沿?zé)诰従彽谷耄灰饎?dòng)或攪拌。
此時(shí),燒杯中的液體分為上、下兩層,下層較渾濁,上層澄清,很快上層溶液中就會(huì)有白色纖維狀粘稠物析出,用玻璃棒可將其輕輕卷起。這就是記錄生命遺傳信息的重要物質(zhì)——DNA。DNA析出的過程中,切忌震動(dòng)和攪拌(不震動(dòng)易于分層,我們就能很容易觀察到上清液中的絲狀物;攪拌會(huì)使非常柔軟的DNA斷裂成小段,不易取出)。如果用玻璃棒DNA不易卷起,可改用表面打毛的牙簽,DNA提取物就纏繞在牙簽上了。
4.鑒定:取兩支試管,編為1、2號(hào),各加入2mol/L的氯化鈉溶液2mL,向1號(hào)試管中加入一些白色纖維狀物,振蕩使其溶解,然后向兩支試管中各加入2mL二苯胺試劑,沸水浴加熱5分鐘。
注意事項(xiàng)
1.以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí),每100ml血液中需要加入3g檸檬酸鈉防止血液凝固。
2.加入洗滌劑后,動(dòng)作要輕緩、柔和,否則容易產(chǎn)生大量的泡沫,不利于后續(xù)步驟地操作。加入酒精和用玻璃棒攪拌時(shí),動(dòng)作要輕緩,以免DNA分子的斷裂,導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。
3.二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用,否則會(huì)影響鑒定的效果。
4.DNA的溶解度與NaCl溶液濃度的關(guān)系:
當(dāng)NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時(shí),隨濃度的升高,DNA的溶解度降低;當(dāng)NaCl溶液濃度高于0.14mol/L時(shí),隨濃度升高,DNA的溶解度升高。
5.盛放雞血細(xì)胞液的容器,最好是塑料容器。
雞血細(xì)胞破碎以后釋放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于細(xì)胞內(nèi)DNA的含量本來(lái)就比較少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就會(huì)更少。因此,實(shí)驗(yàn)過程中最好使用塑料的燒杯和試管,這樣可以減少提取過程的DNA的損失。
第五篇:可溶性還原糖脂肪蛋白質(zhì)的鑒定
學(xué)案六實(shí)驗(yàn)一可溶性還原糖脂肪蛋白質(zhì)的鑒定
一、解讀兩綱
1.識(shí)記鑒定實(shí)驗(yàn)所用的材料,懂得選材的要求。
2.掌握實(shí)驗(yàn)原理、步驟,理解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、方法?/p>
3.學(xué)會(huì)制備生物組織樣液,正確選用鑒定試劑,并能按規(guī)范的要求操作,獨(dú)立完成鑒定工作。
4.明確觀察對(duì)象,正確說出鑒定過程中樣液的顏色變化,并能用準(zhǔn)確的語(yǔ)言解釋實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象,作出實(shí)驗(yàn)結(jié)論。
5.能熟練制作徒手切片,臨時(shí)裝片和使用低倍顯微鏡,了解高倍顯微鏡的使用方法。
6.具備驗(yàn)證相關(guān)生物學(xué)事實(shí)的能力,并能對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象和結(jié)果進(jìn)行解釋、分析和處理;能對(duì)一些生物學(xué)問題進(jìn)行初步的探究性研究。
二、高考熱線
1.題型以選擇題為主,也可能以簡(jiǎn)答題出現(xiàn),重點(diǎn)是以對(duì)比的方式考查相關(guān)實(shí)驗(yàn)的異同點(diǎn)。
2.以教材實(shí)驗(yàn)為依據(jù),設(shè)置實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)題是今后考查的重點(diǎn),如“設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)證明淀粉酶是蛋白質(zhì)”,就是依據(jù)教材中的實(shí)驗(yàn)3的原理和步驟。
三、學(xué)法指點(diǎn)
1.運(yùn)用對(duì)比的方法認(rèn)識(shí)三種物質(zhì)的鑒定原理、過程及注意事項(xiàng)。
2.對(duì)比三種物質(zhì)鑒定過程中的相同點(diǎn)和不同點(diǎn),重點(diǎn)掌握試劑使用上的區(qū)別。
3.根據(jù)所學(xué)的原理鑒定類似物質(zhì),設(shè)計(jì)相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)程序。
四、教材梳理
(一)實(shí)驗(yàn)原理
生物組織中含有可溶性還原糖(如_______、_______、________)、脂肪、蛋白質(zhì)等化學(xué)成分,可分別與某些化學(xué)試劑作用產(chǎn)生特定的_____________。
(1)可溶性還原糖+__________試劑—→磚紅色沉淀
可溶性還原糖+班氏糖定性試劑—→__________
(2)脂肪+__________________染液—→染成橘黃色
脂肪+蘇丹Ⅳ染液———————→染成______
(3)蛋白質(zhì)+________________試劑—→溶液呈紫色
(二)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.初步掌握鑒定可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的基本方法。
(三)實(shí)驗(yàn)材料
(四)方法步驟
1.可溶性還原糖的鑒定
(1)制備組織樣液:蘋果切塊、研磨、________。
(2)鑒定組織樣液:1 支試管+2mL_____________+2mL________________,振蕩試管,(溶液_______色?),________2min左右,觀察溶液顏色變化。(________色→棕色→_________色)。
2.脂肪的鑒定
(1)切片制作:用花生子葉作徒手切片。
(2)染色:1塊載玻片+切片+ 3滴________染液,3min后吸去染液+ 2滴50%________溶液去浮色,吸去后+ 2滴__________,蓋蓋玻片。
(3)鏡檢鑒定:先用低倍鏡觀察,找到子葉最薄處,再用高倍鏡觀察。(圓形的脂肪顆粒為_____色)。
3.蛋白質(zhì)的鑒定
(1)制備樣液:大豆切片、________、_______。
(2)鑒定:1 支試管+2mL黃豆組織樣液+2mL________________,振蕩試管(溶液_____色),+4滴______________,________試管,觀察溶液顏色變化。(______色→______色→_______色)。
(五)結(jié)論與討論
1.結(jié)論:從斐林試劑與蘋果樣液作用、蘇丹III染液與花生種子作用、雙縮脲試劑與大豆樣液作用
1的顏色變化可以得出:___________________________________________________________。
2.討論鑒定依據(jù)。因?yàn)槟承┗瘜W(xué)試劑與生物組織中的有關(guān)_________發(fā)生一定的化學(xué)反應(yīng),產(chǎn)生有固定顏色的新化合物。故可根據(jù)待檢物與某些化學(xué)試劑反應(yīng)的____________,如橘黃色、_________色、______色等,鑒定生物組織中含有_______、可溶還原糖和___________。
五、疑難精析
1.生物組織中的還原糖是指分子結(jié)構(gòu)中含有還原性基團(tuán)(如游離醛基或酮基)的糖,如葡萄糖、麥芽糖、果糖,淀粉、蔗糖不具有還原性,斐林試劑只能檢驗(yàn)可溶性還原糖的存在,而不能鑒定可溶性非還原糖或不溶性糖。
2.可溶性還原糖鑒定實(shí)驗(yàn)的選材原則。選用可溶性還原糖含量較高的生物組織,而且組織的顏色較淺,或近于白色。常用的植物組織是:蘋果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜。雙子葉植物光合作用的主要產(chǎn)物為淀粉,其葉不理想。有些單子葉植物,如韭菜、鳶尾等,其葉內(nèi)含有大量的可溶性單糖,但由于葉片中葉綠素顏色較深,影響鑒定時(shí)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的觀察,也不宜作實(shí)驗(yàn)材料。
3.可溶性還原糖鑒定實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵性的步驟在于斐林試劑現(xiàn)用現(xiàn)配及用量。很不穩(wěn)定,故應(yīng)將組成斐林試劑的甲液(0.1g/mL的NaOH溶液)和乙液(0.05g/mL的CuS04溶液)分別配制、儲(chǔ)存;使用時(shí),再臨時(shí)配制,將4~5滴乙液滴入2mL甲液中,配完混合均勻后[得到淡藍(lán)色的Cu(OH)2沉淀的懸濁液]立即使用。如果過早混合會(huì)產(chǎn)生Cu(OH)2沉淀,加入到組織樣液中并加熱時(shí)會(huì)產(chǎn)生黑色CuO沉淀。而臨時(shí)混合所得斐林試劑立即用于實(shí)驗(yàn),即可使新制的Cu(OH)2作氧化劑與可溶性還原糖發(fā)生氧化-還原反應(yīng),生成磚紅色的Cu2O沉淀。溶液的變化過程:淡藍(lán)色→棕色→磚紅色沉淀。
4.在可溶性還原糖的鑒定中,在對(duì)盛有組織樣液與斐林試劑混合物的試管直接用酒精燈加熱易破,因?yàn)樵嚬苁軣岵痪鶆?,若要避免此現(xiàn)象產(chǎn)生應(yīng)改用水浴加熱。此時(shí)試管底部不要觸及燒杯底部,試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者,以免溶液沸騰時(shí)沖出試管造成燙傷。
5.雙縮脲試劑并不是雙縮脲分子。所謂雙縮脲是由兩分子尿素經(jīng)脫氨縮合而成的化合物。該化合物在堿性溶液中能與CuSO4反應(yīng)產(chǎn)生紫色絡(luò)合物,此反應(yīng)稱雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中含有許多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵,因此也能起雙縮脲反應(yīng)。特別要提醒學(xué)生的是實(shí)驗(yàn)桌上兩瓶不同濃度的CuS04溶液,避免拿錯(cuò)。
6.蛋白質(zhì)鑒定實(shí)驗(yàn)中,最好選用富含蛋白質(zhì)的生物組織,植物材料常用的是大豆,動(dòng)物材料常用的是雞蛋。其關(guān)鍵性步驟在于先加雙縮脲試劑A(0.1g/mLNaOH溶液)再加雙縮脲試劑B(0.01g/mLCuSO4溶液)。如果用雞蛋白稀釋液,則濃度不宜過大,以免實(shí)驗(yàn)后粘住試管壁,不易洗凈。
7.脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)材料最好選用富含脂肪的種子,其關(guān)鍵性步驟在于子葉要削成理想薄片。為了作好徒手切片,種子浸泡的時(shí)間不宜過長(zhǎng)。也可改成刮取種子子葉泥制作臨時(shí)裝片,易做,效果又好。
8.填表比較實(shí)驗(yàn)1和3:
9.本實(shí)驗(yàn)為驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn),也用注意對(duì)照。如在鑒定可溶性還原糖和蛋白質(zhì)時(shí),鑒定之前需留一部分樣液,以便與鑒定后樣液顏色變化作對(duì)比。
例1 用下列實(shí)驗(yàn)材料做特定實(shí)驗(yàn),從理論上講能否成功?說明依據(jù)的道理。
(1)用韭菜葉片做可溶性還原糖的鑒定實(shí)驗(yàn);
(2)用蓖麻種子做脂肪鑒定實(shí)驗(yàn);
(3)用卵白做蛋白質(zhì)鑒定實(shí)驗(yàn)。
[解析] 此題是要求根據(jù)課本實(shí)驗(yàn)原理進(jìn)行拓展和應(yīng)用,這也是近幾年高考的一個(gè)趨勢(shì)。韭菜在進(jìn)行光合作用時(shí)并不能將光合作用的產(chǎn)物葡萄糖轉(zhuǎn)變成淀粉,因此葉內(nèi)含有大量的可溶性還原糖,但是,由于葉片中葉綠素含量較多,綠色較深,對(duì)于鑒定時(shí)的顏色反應(yīng)起著掩蓋作用,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象不明顯,因此不宜用這些單子葉植物作此實(shí)驗(yàn)材料;后兩個(gè)實(shí)驗(yàn)材料從理論上說是可行的。
答案:(1)用韭菜葉片做還原糖實(shí)驗(yàn)不能成功,因?yàn)槿~片內(nèi)雖然含有大量可溶性還原糖,但葉片中葉綠素含量較多,顏色較深,對(duì)鑒定時(shí)的顏色反應(yīng)起著遮蓋作用;(2)若用蓖麻種子做脂肪鑒定實(shí)驗(yàn),從理論上說可以成功,因?yàn)樵摲N子含較多的脂肪,種子也比較大,便于進(jìn)行徒手切片;(3)由于卵白中含有大量的蛋白質(zhì),從理論上講做蛋白質(zhì)鑒定實(shí)驗(yàn)是會(huì)成功的。
六、趁熱打鐵
(一)選擇題
1.將面團(tuán)包在紗布中在清水中搓洗,鑒定黏留在紗布上的黏稠物質(zhì)和洗出的白漿用的試劑分別是
()
A.碘液、蘇丹Ⅲ溶液B.雙縮脲試劑、碘液
C.亞甲基藍(lán)溶液、蘇丹ⅢD.碘液、斐林試劑
2.蛋白質(zhì)的鑒定時(shí),事先留出一些黃豆組織樣液的目的是()
A.與反應(yīng)后混合液的顏色做對(duì)比B.失敗后重做一遍
C.鑒定可溶性還原糖用D.留下次實(shí)驗(yàn)用
3.用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時(shí),溶液的顏色變化過程為()
A.淺藍(lán)色→棕色→磚紅色B.無(wú)色→淺藍(lán)色→棕色
C.磚紅色→淺藍(lán)色→棕色D.棕色→綠色→無(wú)色
4.在鑒定可溶性糖的實(shí)驗(yàn)中,對(duì)試管中的溶液進(jìn)行加熱時(shí),操作不正確的是()
A.將這支試管放進(jìn)盛開水的大燒杯中B.試管底部不要觸及燒杯底部
C.試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者D.試管底部緊貼燒杯底部
5.現(xiàn)有如下實(shí)驗(yàn)材料:①西瓜汁②菜籽③豆?jié){④草莓果實(shí)⑤花生仁 ⑥雞蛋清,它們與斐林試劑作用呈磚紅色、與蘇丹Ⅲ試劑作用呈橘黃色、與雙縮脲試劑作用呈紫色的實(shí)驗(yàn)材料分別為()
A.①④、②⑤、⑤⑥B.①④、②⑤、③⑥
C.①④、②③、⑤⑥D(zhuǎn).②④、③⑤、③⑥
6.青蘋果汁遇碘液顯蘭色,熟蘋果汁能與斐林試劑作用產(chǎn)生磚紅色沉淀,這說明()
A.青蘋果汁含有淀粉,不含有糖類B.熟蘋果汁含有糖類,不含有淀粉
C.蘋果成熟時(shí),淀粉水解成單糖D.蘋果成熟時(shí),單糖合成淀粉
7.下列關(guān)于生物組織中三大有機(jī)物的鑒定操作步驟,正確的是()
A.用于鑒定可溶性還原糖的斐林試劑,可直接用于蛋白質(zhì)的鑒定
B.脂肪的鑒定需要用顯微鏡才能看到被染成橘黃色脂肪滴
C.鑒定可溶性還原糖時(shí),要加入斐林試劑甲液搖均后再加入乙液
D.用于鑒定蛋白質(zhì)的雙縮脲試劑A液與B液要混合均勻后,再加入含樣品的試管中,且必須現(xiàn)配現(xiàn)用
8.某同學(xué)在顯微鏡下觀察被蘇丹Ⅲ染液染色后的花生種子子葉切片,當(dāng)轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)焦距時(shí),有一部分細(xì)胞看得很清楚,另一部分細(xì)胞較模糊,這是由于()
A.反光鏡沒調(diào)好B.標(biāo)本切得厚薄不均勻
C.顯微鏡物鏡損壞D.細(xì)準(zhǔn)焦螺旋未調(diào)好
9.可溶性還原糖的鑒定中,制備生物組織樣液時(shí)加入少許石英砂,其目的是()
A.研磨充分B.防止糖被破壞C.防止反應(yīng)D.無(wú)作用
10.在過氧化氫酶溶液中加入雙縮脲試劑,其結(jié)果應(yīng)是()
A.產(chǎn)生氣泡B.溶液呈紫色C.溶液呈藍(lán)色D.產(chǎn)生磚紅色沉淀
11.雙縮脲試劑可以鑒定蛋白質(zhì)是因?yàn)椋ǎ?/p>
A.蛋白質(zhì)都有肽鍵B.蛋白質(zhì)都有氨基酸
C.蛋白質(zhì)都有羧基D.蛋白質(zhì)都有氨基
12.(多選)下列物質(zhì)用斐林試劑檢測(cè)時(shí)可能出現(xiàn)磚紅色沉淀的是()
A.葡萄糖B.果糖C.麥芽糖D.淀粉
13.(多選)下列各組中前項(xiàng)為所鑒定的物質(zhì),中項(xiàng)為所使用試劑,后項(xiàng)為所產(chǎn)生的顏色。正確的是
()
A.葡萄糖、斐林試劑、橘黃色B.脂肪、蘇丹Ⅲ染液、磚紅色
C.蛋白質(zhì)、雙縮脲試劑、紫色D.淀粉、碘液、藍(lán)色
二、非選擇題
14.做“生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定”實(shí)驗(yàn)時(shí),需根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇不同的實(shí)驗(yàn)材料。請(qǐng)根據(jù)下表所列各種材料回答問題:
(1)其中適合于鑒定糖的是_______,理由是_____________________________________________。
(2)小麥種子不如花生種子更適合用來(lái)鑒定脂肪,這是因?yàn)開_______________________________。但小麥種子中糖類化合物___________含量很高,卻不適合用來(lái)鑒定________,這是因?yàn)開_________ __________________________________。
15.在做“可溶性還原糖的鑒定”實(shí)驗(yàn)時(shí):
(1)所用斐林試劑甲液的質(zhì)量濃度為____g/mL,乙液的質(zhì)量濃度為____g/mL,如何用這兩種溶液配制斐林試劑(簡(jiǎn)要步驟)__________________________________________________。
(2)斐林試劑甲液與乙液混合后產(chǎn)生_________色沉淀,它與葡萄糖在加熱條件下發(fā)生化學(xué)反應(yīng),產(chǎn)生_________色沉淀。
(3)請(qǐng)解釋為什么斐林試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用,不能放置太久____________________________________。
(4)做此實(shí)驗(yàn)時(shí),試管直接用酒精燈加熱易破,其原因是____________,若要避免此現(xiàn)象產(chǎn)生應(yīng)改用_________________。
16.用蘋果和黃豆做實(shí)驗(yàn)材料時(shí),都需將其研磨碎,在研磨時(shí)加入少量石英砂的作用是___________;在研磨后二者都需要對(duì)研磨液進(jìn)行過濾,過濾的目的是除去_________________,在過濾中為什么只用一層紗布,不用濾紙?______________________________________________________________________。
17.(設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),論證結(jié)論)請(qǐng)根據(jù)下列材料和實(shí)驗(yàn)原理,設(shè)計(jì)一個(gè)證明淀粉酶是蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)。
(1)實(shí)驗(yàn)器材:雞蛋、人的唾液、清水、0.1g/mLNaOH溶液、0.01g/mLCuSO4溶液、小燒杯、玻璃棒、試管和滴瓶。
(2)實(shí)驗(yàn)原理:雞蛋的蛋清主要成分是蛋白質(zhì),在堿性條件下,蛋白質(zhì)與CuSO4反應(yīng)產(chǎn)生紫色物質(zhì),即雙縮脲反應(yīng)。如通過實(shí)驗(yàn)再證明淀粉酶能發(fā)生雙縮脲反應(yīng),即可證明淀粉酶是蛋白質(zhì)。
(3)實(shí)驗(yàn)步驟:
第一步:制備蛋清液。取雞蛋一個(gè),打破蛋殼(不破壞蛋黃),取少許蛋清注入小燒杯中,加入30mL清水,用玻璃棒攪拌均勻備用。
第二步:_____________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________________。
第三步:_____________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________________。
(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:_______________________________________________________________________。
(5)結(jié)果分析:_______________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________________。