第一篇：實(shí)驗(yàn)四 PCR擴(kuò)增基因特異片段

實(shí)驗(yàn)四

PCR擴(kuò)增基因特異片段

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、學(xué)會(huì)PCR儀的使用方法。

2、掌握PCR反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。

二、實(shí)驗(yàn)原理

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction）簡(jiǎn)稱PCR。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，由高溫變性、低溫退火（復(fù)性）及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期，循環(huán)進(jìn)行，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)等特點(diǎn)。它不僅可用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎(chǔ)研究，還可用于疾病的診斷或任何有DNA,RNA的地方．聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)又稱無(wú)細(xì)胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增技術(shù)。

GLBI蛋白是玉米胚中含量最豐富的蛋白質(zhì)之一，其編碼基因glb1位于第一染色體長(zhǎng)臂，基因表達(dá)僅限于種子組織。該蛋白對(duì)于幼苗生長(zhǎng)與存活并非必需。本實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增glb1基因部分序列，全長(zhǎng)1200bp左右。

真核生物基因組中編碼核糖體的基因包括28S rDNA、5S rDNA、18S rDNA和5.8S rDNA 4 種,它們?cè)谌旧w上頭尾相連、串聯(lián)排列,相互之間由間隔區(qū)分隔。其中18S、5.8S和28S rDNA基因組成一個(gè)轉(zhuǎn)錄單元，三者高度保守,適合于較高等級(jí)水平的生物群體間的系統(tǒng)分析, 其間的間隔區(qū)為內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(Internal Transcribed Spacer, ITS)，本實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增榨菜黑斑病ITS序列，序列全長(zhǎng)500kb左右。

三、實(shí)驗(yàn)儀器及藥品耗材

1、主要儀器：移液器、振蕩器、PCR儀、電子天平、量筒、微波爐、電泳儀、水平電泳槽和凝膠成像系統(tǒng)等。

2、主要藥品及耗材：一次性手套、PCR板、移液器吸頭、無(wú)菌水、2×PCR 混合酶（Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs及PCR穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑組成的混合液）、液體石蠟、瓊脂糖、0.5×TBE緩沖液、Goldview染料、DNA Marker 2000和溴酚藍(lán)等。

四、實(shí)驗(yàn)步驟

（一）PCR擴(kuò)增玉米目的基因glb1

1、在PCR管中配制25ul反應(yīng)體系 雙蒸水 8.5ul 2×PCR 混合酶

12.5ul 正向引物ul 反向引物 1 ul DNA 2 ul 液體石蠟 20 ul

2、按一下程序進(jìn)行擴(kuò)增 94℃預(yù)變性5 min，1個(gè)循環(huán)；

94℃變性1 min，64℃退火1 min，72℃延伸2 min，共設(shè)35個(gè)循環(huán)； 72℃延伸10 min； 4℃保存

(二)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR結(jié)果

配制1%瓊脂糖凝膠，在25ul PCR擴(kuò)增產(chǎn)物加1ul溴酚藍(lán)，200伏，200毫安，電泳并觀察結(jié)果。

五、作業(yè)

繪畫出PCR擴(kuò)增電泳圖，標(biāo)明DNA Marker 位置及檢測(cè)PCR產(chǎn)物位置，并根據(jù)DNA Marker位置及亮度估算PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小及濃度。

第二篇：臨床基因擴(kuò)增(PCR)診斷實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范(試行)

附件

2臨床基因擴(kuò)增（PCR）診斷實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范（試行）

為使基因擴(kuò)增診斷技術(shù)規(guī)范有效的用于臨床，保證檢測(cè)質(zhì)量，更好地為臨床疾病的診療服務(wù)，特制定本規(guī)范。

1．臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置：和儀器設(shè)備

臨床PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)分為四個(gè)隔開的工作區(qū)域，每一區(qū)域都應(yīng)有專用的儀器設(shè)備。即1）試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)；2）標(biāo)本制備區(qū)；3）擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)和的擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。如使用擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)同時(shí)完成的熒光定量PCR方法或全自動(dòng)分析儀如Cobas－T（Anplicor）等，則3）和4）兩個(gè)區(qū)可合并。

與上述特定實(shí)驗(yàn)區(qū)有關(guān)的各個(gè)房間必須有明確的標(biāo)記，以避免不同工作區(qū)內(nèi)的設(shè)備物品如加樣器、試劑等的移出或不同的工作區(qū)間發(fā)生混淆。進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)必須遵循一嚴(yán)格的）順序，只能按單一方向進(jìn)行，即從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)～標(biāo)本制備區(qū)～擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)～擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。不同的工作區(qū)必須使用不同的工作服，可以不同的顏色來(lái)區(qū)別。此外，當(dāng)工作人員離開各工作區(qū)時(shí)，不得將各區(qū)特定的工作服帶出。

1．l．試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)

本區(qū)用于貯存溶液的制條、溶液的分裝和主反應(yīng)混合液的制各。本區(qū)儀器設(shè)備配置：（l）4 冰箱和一20 冰柜；（2）混勻器；（3）微量加樣器若干支（覆蓋1～1000pl）；（5）專用工作服和工作鞋；（6）專用辦公用品；（7）消耗品： 一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離。心管和加樣器吸頭（帶濾心）；（8）可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）。

1．2．標(biāo)本制備區(qū)

標(biāo)本貯存、核酸提取及貯存均在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。RNA測(cè)定時(shí)的單鍵。cDNA合成也在本區(qū)進(jìn)行。本區(qū)儀器設(shè)備自己置：（l）4冰箱、－20 或-70 冰柜三（2）高達(dá)臺(tái)式冷凍離心機(jī)；（3）混勻器；（4）水浴箱或加熱模塊；（5）微量如排器若干支（覆蓋l～1000μl）；（6）專用工作服和工作鞋；（7）專用辦公用品；（8）消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的部心管和加樣器吸頭（帶濾心）；（9）可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）；（10）超凈工作臺(tái)；（11）超聲波水?。ㄌ幚泶蠓肿覦NA適用）。

1．3．?dāng)U增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)

模板材料（來(lái)自標(biāo)本制備區(qū)）和主反應(yīng)混合液（來(lái)自試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)）的加入以及擴(kuò)增反應(yīng)等專門在本二．作區(qū)內(nèi)近行。本區(qū)儀器設(shè)備自己置：（l）核酸擴(kuò)增僅三（2）微量加樣器（覆蓋1～1000 μl）；（3）專用工作服和工作鞋；（4）專用辦公用品；（5）消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、高壓處理的部心管和加樣器吸頭（帶濾心）；（6）可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）。

1．4.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

本區(qū)面積應(yīng)為6～8m。擴(kuò)增嚴(yán)物的分析在本區(qū)進(jìn)行。本區(qū)儀器設(shè)備配置：視檢測(cè)方法不同而定，如為PCR�ELISA，則需（l）微量加樣器若干支（覆蓋l～2s（2）酶標(biāo)權(quán)、洗報(bào)機(jī)和恒溫箱;（3）專用工作服和工作鞋；（4）專用辦么，用品；（5）消耗品：～次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）；（6）可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）。

2．臨床基因擴(kuò)增診斷實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證

臨床基因擴(kuò)增診斷實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證涉及到整個(gè)基因擴(kuò)增檢測(cè)的所有階段，即測(cè)定分析前的標(biāo)本來(lái)集處理、測(cè)定中的核酸提取、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析以及測(cè)定后的結(jié)果報(bào)告等。

2．1．標(biāo)本的采集

常用于基因擴(kuò)增檢測(cè)的臨床標(biāo)本包括EDTA或拘檬酸鈉抗凝全血或骨髓、血清或血漿．痰、腦普液、尿及分泌物等。采樣容器最好是密閉的一次性的，如真空系血管。一次性塑料容器使用時(shí)無(wú)需進(jìn)一步預(yù)處理。當(dāng)使用非密鬧采樣系統(tǒng)時(shí)，如尿、分泌物和骨髓的采禪，必須注意防止來(lái)自來(lái)樣者的皮屑或分泌物的污染。采樣者采樣時(shí)起碼要談．一次性手套?？芍貜?fù)使用的玻璃器〔應(yīng)高壓處理，因?yàn)椴Ａ鳎ǔ：胁灰资Щ畹腁NA酶。RNA酶的主要來(lái)源是實(shí)驗(yàn)人員的手。最好是熱滅菌，250 烘烤 4小時(shí)以上可使RNA酶永久性失活。全血和骨髓標(biāo)本必須進(jìn)行抗凝處理。通常EDTA和拘檬酸鹽是首選的抗凝劑。不能使用肝素抗凝，因?yàn)楦嗡厥荰aq酶的強(qiáng)抑制劑，而且在其后的核酸提取步驟中很難去除肝素。臨床用于RNA（如HCV RNA）測(cè)定的血標(biāo)本最好進(jìn)行抗凝處理，并盡快（3小時(shí)以內(nèi)）分離血漿，以避免RNA的降解。如未作抗凝處理，則物血后，必須在1小時(shí)內(nèi)分離血清。

2．2．標(biāo)本的穩(wěn)定化處

DNA分析，標(biāo)本采集后一般不需要特殊的穩(wěn)定化處理，但標(biāo)本應(yīng)及時(shí)送到實(shí)驗(yàn)室。由于RNA易于降解，因此用于RNA測(cè)定的標(biāo)本的穩(wěn)定化處理有時(shí)是必不可少的，Chaotropic物質(zhì)[特別是異硫氨酸抓鹽（Guanidine thiocyanate，GITC）]可使DNAse和RNAse立即失活。在采集標(biāo)本時(shí)，可將標(biāo)本材料如血清或血漿加入含有GITC的試劑管中進(jìn)行穩(wěn)定化處理。GITC可使RNAse不可逆失活的適合濃度為5mol/L。如果GITC濃度小于 4mol／L；RNA會(huì)很快降解。在適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定化處理后，標(biāo)本一般不需要冷藏即可郵寄。如果溫度低于室溫，GITC即會(huì)結(jié)晶，所以在加入標(biāo)本前應(yīng)使之完全溶解。如標(biāo)本不能及時(shí)送到實(shí)驗(yàn)室，最好選用 GITC處理方法以穩(wěn)定標(biāo)本。

2．3標(biāo)本的運(yùn)送

標(biāo)本來(lái)集后應(yīng)盡快送至實(shí)驗(yàn)室，經(jīng)過(guò)適當(dāng)穩(wěn)定化處理的標(biāo)本可在常溫下通過(guò)郵寄運(yùn)送。如用于 DNA提取的含 EDTA的全血標(biāo)本及用于 RNA提取的經(jīng) GITC 穩(wěn)定化處理的標(biāo)本。是否冷藏取決于標(biāo)本的用途，較長(zhǎng)時(shí)間在室溫貯存會(huì)導(dǎo)致靈敏度大大降低。通常應(yīng)采用不易破碎的容器裝載標(biāo)本。用于RNA檢測(cè)的標(biāo)本，如果在未經(jīng)穩(wěn)定化處理，則必須速凍后，放在干冰中運(yùn)送。

2．4．標(biāo)本的貯存

臨床體液標(biāo)本如血清／血漿等可于-70 下長(zhǎng)時(shí)間貯存。用于DNA測(cè)定的核酸樣本應(yīng)在 10mmol／L Tris，lmmol／L EDTA緩沖液（pH 7．5－8．0）中 4 保存。用于RNA測(cè)定的核酸樣本應(yīng)在緩沖液中一80 C或液氮中貯存。用乙醇沉淀的核酸樣本貯存在一20OC即可。用 GIT（：穩(wěn)定化處理的 RNA標(biāo)本在室溫可保存 7天，如貯存時(shí)間較長(zhǎng)，則RNA測(cè)定敏感性略有下降。

2．5．標(biāo)本的處理（核酸提?。?/p>

核酸提取是決定擴(kuò)增檢測(cè)成敗的關(guān)鍵性步驟。通常，核酸制備質(zhì)量不高是由于抑制物去除不完全所致。抑制物可能來(lái)源于標(biāo)本本身（如血紅素及其前體或降解產(chǎn)物）或核酸提取過(guò)程中確．留的有機(jī)溶劑（如酚、氯份等），這些物質(zhì)對(duì)其后的酶反應(yīng)步驟具有強(qiáng)烈的抑制作用，從而影響靶核酸的擴(kuò)增測(cè)定。如在 HBVDNA PCR測(cè)定中。采用對(duì)血清杯水煮沸裂解以釋放DNA的方法時(shí)，肉眼觀察不明顯的溶血也會(huì)對(duì)擴(kuò)增測(cè)定有很強(qiáng)的抑制作用，應(yīng)使用正規(guī)的核酸提取方法（如經(jīng)典的酚一氯份提取方法、硅吸附法等）。當(dāng)標(biāo)本為疾時(shí)，則必須先進(jìn)行液化處理。再提取核酸。需注意的是；液化時(shí)不能加熱，液化時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)。此外，當(dāng)靶核酸為 RNA時(shí)，降解是一個(gè)主要問(wèn)題。RT－PCR測(cè)定失敗的常見原因是標(biāo)本在運(yùn)送前來(lái)經(jīng)充分的穩(wěn)定化處理．及核酸提取試劑的RNase的污染。對(duì)于前者，要核查測(cè)定分析前的步驟，如果沒．現(xiàn)RNA降解的證據(jù)。實(shí)驗(yàn)室則應(yīng)拒絕接受標(biāo)本，要求重新采取標(biāo)本，并對(duì)運(yùn)送者給以詳細(xì)的指導(dǎo)。對(duì)于后者，建議常規(guī)使用高質(zhì)量的商品核酸提取試劑。

2．6靶核酸的逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增

2．6.l靶RNA的逆轉(zhuǎn)錄

cDNA合成為RT-PCR中的第一個(gè)酶反應(yīng)步驟，所產(chǎn)生的 cDNA為靶RNA的反向互補(bǔ)鏈。為后面擴(kuò)增的模板。下述因素通常影響cDNA合成的效率：

l）RT活性的降低或完全缺乏。必須排除由于酶質(zhì)量不高、試劑降解或加樣錯(cuò)誤而引起的 cDNA合成不充分。

2）RT或熱穩(wěn)定聚合酶的抑制物（如酚、血紅素）。當(dāng)RNA明顯為完整而沒有擴(kuò)增時(shí)，應(yīng)懷疑有此類抑制物。

3）RNA的降解。

2．6．2影響擴(kuò)增的因素

有多種因素可引起PCR的假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，如抑制劑或酶活性喪失（見上）、遲大溫度不對(duì)、晚十十濃度不佳、患者標(biāo)本或試劑受污染等。反應(yīng)孔中熱傳導(dǎo)的均一性極為重要，循環(huán)儀的溫度控制和加熱塊中熱傳導(dǎo)的一致性必須有常規(guī)的檢查以避免假陰性結(jié)果。

2．7污染

在實(shí)際工作中，常見有以下幾種污染類型：PCR片段的污染（產(chǎn)物污染）三天然基因組DNA的污染；試劑污染（貯存液或工作液）：以及交及污染（如氣溶膠從一個(gè)陽(yáng)性標(biāo)本擴(kuò)散到原本陰性的標(biāo)本）。對(duì)于所有的擴(kuò)增技術(shù)，由于圍繞實(shí)驗(yàn)室來(lái)尋找污染源不僅耗時(shí)而且還很繁瑣，所以防止污染重在預(yù)防。一旦發(fā)生了污染，實(shí)驗(yàn)就必須停止，直到發(fā)現(xiàn)了污染源為止。如果沒有例外，實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須作廢，即使平行的污染質(zhì)控中僅有一管顯示出有PCR片段污染。

2．7．l．測(cè)定分析前的污染源。

測(cè)定分析前實(shí)驗(yàn)材料的污染主要來(lái)自非病人標(biāo)本來(lái)源的核酸。

2．7．2．測(cè)定分析階段的污染源。

通常，測(cè)定分析階段的每一步都可能發(fā)生對(duì)樣本的污染。反應(yīng)混合液的任何成分及核酸的制備和反應(yīng)建立階段所涉及到的實(shí)驗(yàn)設(shè)備的任何部位都是可能的污染源。如受污染的試劑（例如今血清白蛋白，明腋成礦物油）；商品酶制劑；消耗品（如反應(yīng)管，吸頭）和實(shí)驗(yàn)設(shè)備（如加樣器、離心機(jī)）。污染的來(lái)源之一是許多樣本在同時(shí)制備時(shí)的交及污染，但最主要的污染來(lái)源為以前擴(kuò)增產(chǎn)生的特異產(chǎn)物DNA片段。在前面三個(gè)工作區(qū)中，不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作

會(huì)引起所使用的試劑、消耗品或?qū)嶒?yàn)設(shè)備的污染。而在產(chǎn)物分析區(qū)，當(dāng)吸取PCR產(chǎn)物用于檢測(cè)時(shí)，非常容易引起污染，因此必須制定并嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作程序。

2．7．3．污染的避免。

要避免污染，首先應(yīng)是預(yù)防而不是排除污染，前面所述工作區(qū)的嚴(yán)格劃分的目的正是為了預(yù)防污染。為避免以前測(cè)定中所產(chǎn)生的擴(kuò)增產(chǎn)物的污染，可設(shè)法將其破壞掉。如在擴(kuò)增反應(yīng)中用dUTP取代部分dTTP：從而產(chǎn)生的特異擴(kuò)增片段含有尿嘧啶，這樣擴(kuò)增前在反應(yīng)混合液中加入尿嘧啶糖激酶（UNG），可破壞來(lái)自以前測(cè)定的擴(kuò)增產(chǎn)物，從而避免其對(duì)將要進(jìn)行的擴(kuò)增測(cè)定的污染。另外一種方法是持續(xù)的長(zhǎng)波紫外燈照射，通過(guò)異補(bǔ)骨脂素光化；單產(chǎn)生DNA加合物，由于DNA加合物對(duì)擴(kuò)增沒有反應(yīng)但又不妨礙PCR后雜交過(guò)程，所以這些方法也能防止污染。由于上面提到的方法會(huì)給人一種假的安全感，所以不能以其來(lái)替代嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室設(shè)置和管理，尤其是這些方法不能防止外來(lái)非擴(kuò)增的天然 DNA的污染。

2．7．4．去除污染的措施。

工作完后必須定期采取有效的去污染措施，結(jié)合各種不同的方法可達(dá)到最佳效果。去污染措施包括但不僅限下面幾種：用100ml／L次氨酸鈉清潔表面；試驗(yàn)了后長(zhǎng)時(shí)間的紫外照射實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)和其他表面；實(shí)驗(yàn)設(shè)備如加樣器的高壓消毒。

2．8．?dāng)U增產(chǎn)物的分析

擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定有各種方法。如電泳、限制性酶切、斑點(diǎn)印跡、雜交、測(cè)序、分光光度法定量等。但臨床PCR測(cè)定項(xiàng)目基本上都使用探針雜交方法。

2．8．l．與雜交檢測(cè)有關(guān)的干擾。

雜交結(jié)果不充分的原因可能是基因探針不合適、標(biāo)記方法不對(duì)、對(duì)探針的標(biāo)記不夠、雜交或洗滌方法不合適。最常使用的基因探針有：DNA片段、合成的尊核普酸和體外的轉(zhuǎn)錄本（反義 RNA探針）。探針的標(biāo)記物常用的有生物素、地高辛、熒光景和同位素等。在擴(kuò)增后的雜交檢測(cè)中，應(yīng)該嚴(yán)格遵守商品試劑盒確定的雜交程序和雜交條件。溫度太低或離子強(qiáng)度太高都會(huì)降低雜交的嚴(yán)格性。還會(huì)給檢測(cè)信號(hào)的特異性帶來(lái)負(fù)面影響。相反，提高潤(rùn)度和／或降低離子強(qiáng)度會(huì)增加雜交的嚴(yán)格性。因此，嚴(yán)密控制溫度和試劑是避免假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果的先決條件，要注意的是，溫度和離子強(qiáng)度不能同時(shí)改變。

2．9．質(zhì)量控制

如上所述，應(yīng)該開展各種質(zhì)控來(lái)評(píng)價(jià)測(cè)定分析當(dāng)中各步驟的質(zhì)量，如RNA的完整性、對(duì)擴(kuò)增是否合適和敏感。

2．9．1．室內(nèi)質(zhì)量控制

必須對(duì)DNA和RNA分析的各步進(jìn)行質(zhì)量控制，以避免假陽(yáng)性和假陰性，保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。由于PCR測(cè)定的高敏感性，所以試劑的生產(chǎn)、實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備、PCR本身和實(shí)驗(yàn)中的每一步都要求有質(zhì)控。擴(kuò)增反應(yīng)前后的酶反應(yīng)各步也應(yīng)有質(zhì)控，只不過(guò)在質(zhì)控細(xì)節(jié)上稍有不同。

2．9．1．1．與實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備有關(guān)的質(zhì)控。

對(duì)DNA提取試劑的效果最常用球脂糖凝膠電冰來(lái)檢測(cè)?？芍崛〉腄NA是否發(fā)生降解。用常規(guī)的手工提取方法制備的DNA的平均長(zhǎng)度一般為～100kb，用適合PCR的DNA

提取試劑盒制備的DNA的長(zhǎng)度平均范圍為30�40kb。然而；明顯出現(xiàn)降解的DNA（在1和10kb的低分子量范圍內(nèi)）在經(jīng)瓊脂糖凝膠電冰分離和用溴化乙錠染色后也可見有強(qiáng)的熒光信號(hào)。用對(duì)甲基化不敏感的限制性內(nèi)切酶（如EcoRI）消化DNA，然后電泳分離，能夠?qū)γ富钚缘囊种苿┻M(jìn)行質(zhì)控（在抑制劑存在的情況下，高分子量的片段不被酶切）。潛在的抑制劑的存在通常用260nm和280nm的分光光度測(cè)定來(lái)估計(jì)，好的 DNA提取物，A260/A280 比值應(yīng)該在 1． 75--2．0之間；否則，污染（殘留的蛋白或酚）可能會(huì)很高。僅用光度計(jì)比色方法不能對(duì)DNA的完整性下結(jié)論。

最快的對(duì)總RNA提取質(zhì)量控制的方法是在非變性條件下作瓊脂糖凝膠電冰，這一點(diǎn)跟DNA分離相同，然而，如果對(duì)結(jié)果產(chǎn)生懷疑，就應(yīng)該在變性的條件下作瓊脂糖凝膠電泳以檢測(cè)RNA的完整性。在理想情況下，三種主要的核糖體RNA(28S、18s和 5S）在凝膠上出現(xiàn)的帶相對(duì)較窄。如發(fā)生RNA的降解。則帶被拖向低分子量或出現(xiàn)帶的缺失。測(cè)定核糖體RNA帶的密度指數(shù)可作為對(duì)RNA制備的質(zhì)量評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)；對(duì)向低分子量拖尾的、不對(duì)稱性的峰的評(píng)估也是RNA完整性的合適的指標(biāo)。另外，瓊脂糖凝膠電泳能顯示出在RNA的制備中被DNA污染的程度。由于這些原因，單獨(dú)的光電比色不能對(duì)RNA的完整性下結(jié)論。

2．9．1．2．對(duì)cDNA合成和擴(kuò)增的質(zhì)控。

本部分包括陽(yáng)性質(zhì)控和陰性質(zhì)控。

2．．9．l．2．l．cDNA的合成。

對(duì)CDNA合成的效率進(jìn)行監(jiān)控的關(guān)鍵性的質(zhì)控是使用一個(gè)內(nèi)反應(yīng)質(zhì)控。cDNA的合成可以從存在子每一個(gè)RNA提取物中的cRNA 轉(zhuǎn)錄本開始(即普遍表達(dá)的mRNA，如核糖體蛋白轉(zhuǎn)錄本這一類的所謂的管家基因），也可從在制備時(shí)加入樣本中的作為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)的 RNA開始。cDNA合成的內(nèi)質(zhì)控是能夠產(chǎn)生確定產(chǎn)物的陽(yáng)性質(zhì)控；如果擴(kuò)增不成功，質(zhì)控就顯示出有RNA的降解、cDNA合成的過(guò)程中錯(cuò)誤啟動(dòng)或酶活性喪失。

加入確定量的擴(kuò)增質(zhì)控物可以檢測(cè)RT�PCR的靈敏度。對(duì)于RT－PCR方法 所必須的污染質(zhì)控為無(wú)逆轉(zhuǎn)錄靶RNA的陰性質(zhì)控。

2．9．1．2．2．PCR反應(yīng)。

內(nèi)反應(yīng)質(zhì)控是陽(yáng)性質(zhì)控?？墒褂脤?duì)有機(jī)體存活所必須的靶基因作質(zhì)按，這些基因至少以豐臺(tái)子狀態(tài)存在，因?yàn)槿绻蚪M缺失這些基因，將使有機(jī)體致死（所謂的致死因子），一個(gè)比較好的例子就是維生素D血漿結(jié)合蛋白的基因；在世界范圍內(nèi)的許多種族已發(fā)現(xiàn)其廣泛的多態(tài)性，并且還沒有發(fā)現(xiàn)基因活性的同源性丟失，因此，通過(guò)PCR共同擴(kuò)增這種基因的一個(gè)片段，在所有患者中均可獲得成功，并且也會(huì)證明擴(kuò)增反應(yīng)是成功的。

在測(cè)定血清／血漿病原體核酸如HBV DNA、HCV RNA等時(shí)，應(yīng)使用已知的弱陽(yáng)性血清／血漿作為質(zhì)控樣本，與持測(cè)臨床標(biāo)本等同處理提取核酸及擴(kuò)增，以判斷擴(kuò)增檢測(cè)的有效性。

使用這些外加弱陽(yáng)性質(zhì)控不但可檢測(cè)擴(kuò)增反應(yīng)液的質(zhì)量，還可獲得有關(guān)PCR檢測(cè)下限和特異性的信息。這些質(zhì)控必須使用與診斷實(shí)驗(yàn)（即患者的標(biāo)本）所使用的相同的主反應(yīng)混合液。如果懷疑方法的檢測(cè)下限不足以檢測(cè)出產(chǎn)物時(shí)，則每一個(gè)反應(yīng)管都必須加擴(kuò)增質(zhì)控。

外加陰性質(zhì)控（污染質(zhì)控）在每一個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)中都必須設(shè)有，應(yīng)該包括幾種陰性質(zhì)控。通常，這些質(zhì)控是民來(lái)指明PCR過(guò)程中污染出現(xiàn)的階段。包括在樣品制備的整個(gè)過(guò)程中所帶的空白反應(yīng)管、含有樣品制備時(shí)所用的所有反應(yīng)液但不含可擴(kuò)增的模板（所謂的模擬制備）的反應(yīng)管等。模擬質(zhì)援可以評(píng)估PCR實(shí)驗(yàn)的綜合質(zhì)量。

此外，為對(duì)吸樣過(guò)程進(jìn)行質(zhì)控，可以水質(zhì)控樣本來(lái)代替核酸樣本加入至反應(yīng)管，反應(yīng)管中含所有的反應(yīng)成分。實(shí)際工作中僅通過(guò)水樣本來(lái)檢測(cè)污染是否存在的方法是不可取的，因?yàn)樗荒馨l(fā)現(xiàn)樣本處理過(guò)程中的污染源，水僅可作為擴(kuò)增試劑的質(zhì)控。

在擴(kuò)增靶RNA的PCR實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)做省略逆轉(zhuǎn)錄的污染質(zhì)控，通過(guò)這種方法，可發(fā)現(xiàn)以前擴(kuò)增的DNA片段所引起的污染。

2．9．l．3．對(duì)測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)的質(zhì)控．

2．9．1．3．1．板上來(lái)交和膜上斑點(diǎn)印跡雜交的質(zhì)控。

在板上雜交和斑點(diǎn)雜交時(shí)，陽(yáng)性和陰性質(zhì)控應(yīng)該在同一板或膜上與病人標(biāo)本平行進(jìn)行分析，這可排除不同反應(yīng)中使用了不同雜交條件而造成的對(duì)結(jié)果的錯(cuò)誤解釋。

2． 9． 2．室間質(zhì)量評(píng)價(jià)能力驗(yàn)證，proficiency testing）

所有開展臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)參加由衛(wèi)生部臨床控驗(yàn)中心組織的全國(guó)臨床基因擴(kuò)增項(xiàng)目的空間質(zhì)量評(píng)價(jià)，并作為開展臨床基因擴(kuò)增診斷的依據(jù)之一。

本工作規(guī)范自公布之日起實(shí)施。

衛(wèi)生部醫(yī)政司

第三篇：臨床基因擴(kuò)增PCR實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊(cè)的書寫

臨床基因擴(kuò)增PCR實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊(cè)的書寫

許

斌

（江蘇省臨床檢驗(yàn)中心）質(zhì)量管理的歷史

1950年代臨床實(shí)驗(yàn)室開始質(zhì)量控制（Quality Control,QC）;1980年代參照工業(yè)的GMP管理思路建立良好實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐準(zhǔn)則（Good Laboratory Practice,GLP）；進(jìn)入質(zhì)量保證（Quality assurance,QA）；1990年代實(shí)驗(yàn)室引入質(zhì)量體系認(rèn)證及實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可制度，實(shí)現(xiàn)全面質(zhì)量管理（TQM，Total Quality Management）。質(zhì)量體系認(rèn)證——ISO9000（2000版）；實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可——ISO/IEC標(biāo)準(zhǔn)17025-2000《校準(zhǔn)和檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室資格的通用要求》；ISO/DIS標(biāo)準(zhǔn)15189-1999“醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理。” 美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證

?發(fā)證機(jī)構(gòu)：HCFA（Health Gare Financing Administrations）,衛(wèi)生保健署 ?認(rèn)證依據(jù)，CLOA38，行業(yè)認(rèn)可，強(qiáng)制，體系+能力 ?認(rèn)證中介機(jī)構(gòu)：

*JCAHO（Joint Commission on Accreditation of Healthcare Organizations）衛(wèi)生機(jī)構(gòu)認(rèn)可聯(lián)合委員會(huì)

*CAP(College of American Pathologist)美國(guó)病理家學(xué)會(huì)

*COLA（Commission on Office Laboratory Accred-itation）

醫(yī)生實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可委員會(huì) 我國(guó)實(shí)驗(yàn)室合格評(píng)定

?認(rèn)可

*依據(jù)：ISO/IEC 17025，15189 *國(guó)家評(píng)審，自愿，體系+能力 ?認(rèn)證

*依據(jù)：ISO 9000：2000版 *中介機(jī)構(gòu)，自愿，體系 ?行業(yè)技術(shù)驗(yàn)收

*《臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》，《江蘇省醫(yī)院檢驗(yàn)科建設(shè)與管理規(guī)范》 *省、市臨床檢驗(yàn)中心，強(qiáng)制，體系+能力 4 PCR驗(yàn)收意義及驗(yàn)收依據(jù)

2002年開始的PCR實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收工作開創(chuàng)臨床檢驗(yàn)技術(shù)準(zhǔn)入的先河、推動(dòng)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)、規(guī)范檢測(cè)市場(chǎng)、建立醫(yī)療事故預(yù)防機(jī)制。其依據(jù)為： 《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號(hào) 《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》衛(wèi)檢字[2002]8號(hào) 《關(guān)于成立臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)專家組的通知》蘇衛(wèi)醫(yī)[2002]42號(hào) 規(guī)定應(yīng)具有的SOP（13個(gè)）

儀器設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)程序、儀器設(shè)備的校準(zhǔn)程序、儀器設(shè)備的操作程序、臨床標(biāo)本收集程序、臨床標(biāo)本的處理（核酸純化）程序、臨床標(biāo)本的保存程序、試劑的質(zhì)檢操作程序、消耗品購(gòu)置驗(yàn)收和儲(chǔ)存程序、廢棄物的處理程序、內(nèi)務(wù)管理程序、室內(nèi)質(zhì)量控制程序、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析檢測(cè)的操作程序、抱怨處理程序。質(zhì)量管理體系

6.1 定義 在質(zhì)量方面指揮和控制組織的管理體系。（Quality Management System）管理體系是指建立方針和目標(biāo)并實(shí)現(xiàn)這些目標(biāo)的體系。實(shí)驗(yàn)室通過(guò)把組織機(jī)構(gòu)、職責(zé)、工作程序、質(zhì)量活動(dòng)過(guò)程和各類資源、信息等協(xié)調(diào)統(tǒng)一起來(lái)所形成的有機(jī)整體即為實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量體系。

6.2 質(zhì)量體系的文件構(gòu)成 第一層：質(zhì)量手冊(cè)（綱領(lǐng)性文件）；第二層：程序性文件（體系要素的規(guī)定）；第三層：作業(yè)指導(dǎo)書（具體項(xiàng)目的操作指導(dǎo)）；第四層：記錄包括表格、簽名、原始記錄、報(bào)告等質(zhì)量記錄和技術(shù)記錄。

6.3 質(zhì)量手冊(cè)定義

GB/T6583定義：質(zhì)量手冊(cè)是闡明一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量方針，并描述質(zhì)量體系的文件。它既是質(zhì)量體系的表征形式，又是質(zhì)量體系建立和運(yùn)行的綱領(lǐng)。它對(duì)實(shí)驗(yàn)室的組織結(jié)構(gòu)（含職責(zé)）、程序、活動(dòng)能力（過(guò)程）和資源作出規(guī)定，是實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期遵循的文件。

6.4 質(zhì)量手冊(cè)的分類

根據(jù)手冊(cè)的內(nèi)容和用途分為二類：質(zhì)量保證手冊(cè)——用于證明，供客戶使用，質(zhì)量管理手冊(cè)——用于運(yùn)行，供實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部使用。

6.5 質(zhì)量手冊(cè)的作用

編寫質(zhì)量手冊(cè)的健全和完善質(zhì)量體系的首要環(huán)節(jié)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的內(nèi)外因素合理調(diào)整、選擇體系要素，分配和落實(shí)質(zhì)量職責(zé)，理順管理關(guān)系，明確管理責(zé)任，合理安排各類文件的層次，把實(shí)驗(yàn)室積累的經(jīng)驗(yàn)變成法規(guī)性文件。協(xié)調(diào)各工作環(huán)節(jié)的準(zhǔn)則。

內(nèi)部質(zhì)量審核的依據(jù)；對(duì)外證實(shí)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量保證能力，提高客戶的信任度。

6.6 質(zhì)量手冊(cè)的特征

?以客戶為關(guān)注焦點(diǎn)：以病人為中心，為臨床服務(wù) ?領(lǐng)導(dǎo)作用：創(chuàng)造使員工能夠充分參與實(shí)現(xiàn)目標(biāo)的環(huán)境 ?全員參與：各負(fù)其責(zé)

?過(guò)程方法：將資源和活動(dòng)作為過(guò)程進(jìn)行有效管理 ?管理的系統(tǒng)方法：各個(gè)過(guò)程的有效連接 ?持續(xù)改進(jìn)：根據(jù)實(shí)際不斷完善

?基于事實(shí)的決策方法：遵循科學(xué)，實(shí)事求是出報(bào)告 ?與供方互利的關(guān)系：相互協(xié)作，共同獲利

6.7 質(zhì)量手冊(cè)的結(jié)構(gòu) ?封面

?批準(zhǔn)頁(yè)：包括實(shí)驗(yàn)室名稱、標(biāo)志，發(fā)行版次，生效日期，批準(zhǔn)人簽名，手冊(cè)編號(hào)，受控狀態(tài)。

?實(shí)驗(yàn)室公正性聲明

?修訂頁(yè)：以表格描述修訂序號(hào)、修訂的章節(jié)條款和簡(jiǎn)要內(nèi)容、批準(zhǔn)人及日期。?目錄：各章節(jié)條款的名稱及頁(yè)碼

?前言：介紹實(shí)驗(yàn)室的一般情況和手冊(cè)的適用范圍以及手冊(cè)中術(shù)語(yǔ)或縮略語(yǔ)的定義 ?手冊(cè)的管理：對(duì)手冊(cè)的保存、分發(fā)、評(píng)審、修訂以及保密作出規(guī)定 ?質(zhì)量方針及目標(biāo)

?組織結(jié)構(gòu)及人員責(zé)權(quán)利關(guān)系

?要素描述：由系列SOP文件對(duì)溯源、人、機(jī)、料、樣、法、測(cè)等質(zhì)量諸要素的陳述 ?支持性文件：包括實(shí)驗(yàn)室平面圖、人員一覽表、儀器設(shè)備一覽表、引用標(biāo)準(zhǔn)及參考文獻(xiàn)等

6.8 標(biāo)準(zhǔn)操作程序

Standard Operational Procedure,簡(jiǎn)稱SOP。程序的定義為：為進(jìn)行某項(xiàng)活動(dòng)所規(guī)定的途徑。SOP是臨床實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部以文件的形式對(duì)質(zhì)量活動(dòng)用規(guī)定的方法進(jìn)行連續(xù)而恰當(dāng)?shù)目刂?。?shí)驗(yàn)室的SOP應(yīng)涵蓋所有的質(zhì)量活動(dòng)，包括檢測(cè)或校準(zhǔn)計(jì)劃、管理性程序、技術(shù)性程序、項(xiàng)目操作程序和記錄表格等。由于影響每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量活動(dòng)的條件和因素不一樣，一個(gè)SOP只在某個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)有效，而不一定適用于其他實(shí)驗(yàn)室。

6.9 標(biāo)準(zhǔn)操作程序的一般要求

?對(duì)完成各項(xiàng)質(zhì)量活動(dòng)的方法作出規(guī)定，每個(gè)SOP都應(yīng)對(duì)一個(gè)或一組相互關(guān)系的活動(dòng)進(jìn)行描述；

?每個(gè)SOP應(yīng)說(shuō)明該項(xiàng)質(zhì)量各環(huán)節(jié)的輸入、轉(zhuǎn)換和輸出所需的文件、物資、人員、記錄以及它們與有關(guān)活動(dòng)的接口關(guān)系；

?規(guī)定開展質(zhì)量活動(dòng)的各個(gè)環(huán)節(jié)的物資、人員、信息和環(huán)境等方面應(yīng)具備的條件； ?明確每個(gè)環(huán)節(jié)轉(zhuǎn)換過(guò)程中各項(xiàng)因素的要求，即由誰(shuí)做、做什么、做到什么程序、達(dá)到什么要求，如何控制、形成什么記錄和報(bào)告，以及相應(yīng)的審批手續(xù)； ?規(guī)定在質(zhì)量活動(dòng)中需要注意的例外或特殊情況的糾正措施； ?SOP應(yīng)簡(jiǎn)練、明確和易懂并且工作人員熟練掌握和嚴(yán)格遵守。

6.10 推薦PCR實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊(cè)目錄 1.質(zhì)量方針和宗旨 2.工作制度

2.1 實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置、布局及組織結(jié)構(gòu) 2.2 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度 2.3 實(shí)驗(yàn)室的人員配置及管理制度 2.4 生物防護(hù)與安全制度 2.5 實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理制度 2.6 實(shí)驗(yàn)室清潔消毒制度 2.7 儀器設(shè)備的管理制度

2.8 儀器、試劑、耗材購(gòu)置程序及管理制度 2.9 臨床標(biāo)本的管理制度 2.10 實(shí)驗(yàn)室記錄的管理制度 2.11 質(zhì)量控制工作管理制度 2.12 結(jié)果報(bào)告管理制度 2.13 崗位責(zé)任制 2.14 抱怨制度 3.操作指導(dǎo)書（SOP）3.1 消毒標(biāo)準(zhǔn)操作程序

3.2 超凈工作臺(tái)使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序 3.3 超凈工作臺(tái)維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序 3.4 PCR儀使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序 3.5 PCR儀維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序 3.6 臺(tái)式離心機(jī)使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序 3.7 高速冷凍離心操作標(biāo)準(zhǔn)操作程序 3.8 移液器使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序 3.9 加樣器校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序 3.10 冰箱維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序 3.11 電熱恒溫水浴箱操作程序 3.12 電子天平使用和校正操作程序 3.13 可移動(dòng)紫外消毒車使用操作程序 3.14 溫度計(jì)校準(zhǔn)程序 3.15 試劑的質(zhì)檢操作程序 3.16 標(biāo)本唯一標(biāo)識(shí)編號(hào)編制規(guī)則 3.17 臨床標(biāo)本的采集及處理操作程序 3.18 臨床標(biāo)本的保存程序

3.19 乙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序 3.20 室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序 3.21 室間質(zhì)評(píng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序 4.引用圖表

4.1 實(shí)驗(yàn)室組織結(jié)構(gòu)圖 4.2 實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表 4.3 人員培訓(xùn)計(jì)劃及培訓(xùn)記錄表 4.4 主要儀器設(shè)備一覽表 4.5 臨床送檢標(biāo)本流程圖 4.6 PCR擴(kuò)增可接受標(biāo)本記錄表 4.7 PCR擴(kuò)增拒收標(biāo)本記錄表 4.8 室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果記錄表 4.9 室間質(zhì)控記錄表 4.10 消耗性材料驗(yàn)收記錄表 4.11 試劑驗(yàn)收記錄表 4.12 故障處理表 4.13 儀器設(shè)備使用記錄表 4.14 儀器設(shè)備維護(hù)保養(yǎng)記錄表 4.15 實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表 4.16 工作區(qū)溫度、濕度記錄表 4.17 抱怨記錄表

4.18 標(biāo)本超低溫保存記錄表 4.19 應(yīng)急處理記錄表 4.20 垃圾處理記錄表 4.21 冰箱溫度記錄表 4.22 水浴箱溫度記錄表 4.23 移動(dòng)紫外消毒車記錄表 4.24 設(shè)備校正記錄表 4.25 檢測(cè)結(jié)果報(bào)告流程 4.26 報(bào)告單樣張 6.11 文件格式 一 目的 二 范圍 三 職責(zé) 四 工作流程 五 引用文件及表格

6.12 寫作技巧

?目的：WHY，為什么要開展這項(xiàng)活動(dòng) ?范圍：WHAT，活動(dòng)涉及的方面 ?職責(zé)：WHO+WHAT，誰(shuí)做，誰(shuí)負(fù)責(zé)

?工作流程：列出活動(dòng)順序和細(xì)節(jié)，明確各環(huán)節(jié)“輸入——轉(zhuǎn)換——輸出”，即做何事（WHAT）、何人做（WHO）、何時(shí)做（WHEN）、何地做（WHERE）、如何做（HOW）?引用文件和表格：

開展此項(xiàng)活動(dòng)涉及的文件、標(biāo)準(zhǔn)以及使用的表格、證明文件和記錄保存期 評(píng)審中常見問(wèn)題

7.1 手冊(cè)

文件不全，無(wú)系統(tǒng)性；質(zhì)量要素描述不全；格式不對(duì)；與實(shí)際工作脫節(jié)；無(wú)現(xiàn)行有效性（無(wú)手簽，各區(qū)無(wú)相應(yīng)手冊(cè)）；記錄不全、不規(guī)范

7.2 人員

人員檔案：每人一個(gè)檔案袋，有關(guān)資格證書（如上崗證）、培訓(xùn)、技能和經(jīng)歷等。培訓(xùn)計(jì)劃及實(shí)施記錄：每人有、季度、月的培訓(xùn)內(nèi)容及實(shí)施記錄；內(nèi)容包括外出學(xué)習(xí)、進(jìn)修，內(nèi)部質(zhì)量手冊(cè)學(xué)習(xí)、業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)、新項(xiàng)目引進(jìn)等。

7.3 設(shè)施與環(huán)境

通風(fēng)、紫外、清潔、消毒的程序及記錄、生物安全防護(hù)的程序及記錄、生物垃圾的處理。

7.4 儀器設(shè)備

采購(gòu)程序及驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)；校準(zhǔn)程序及狀態(tài)標(biāo)識(shí)，使用、維護(hù)、保養(yǎng)的程序及記錄；檔案：每個(gè)與檢測(cè)質(zhì)量相關(guān)的設(shè)備均應(yīng)建檔，內(nèi)容包括：設(shè)備的名稱；制造商名稱、型號(hào)、序號(hào)或其它唯一性標(biāo)識(shí)；接收日期和啟用日期；）目前放置地點(diǎn)；接收時(shí)的狀態(tài)（例如全新的、經(jīng)改裝的）；儀器使用說(shuō)明書或其復(fù)印件；校準(zhǔn)和/或檢測(cè)的日期和結(jié)果以及下次校準(zhǔn)和/或檢測(cè)的日期；迄今所進(jìn)行的維護(hù)和今后維護(hù)計(jì)劃的細(xì)節(jié)；損壞、故障、改裝或修理的歷史。

7.4 料（試劑、耗品）

采購(gòu)程序及領(lǐng)用記錄，質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)、程序及記錄，應(yīng)急程序；缺貨、試劑變質(zhì)；室內(nèi)質(zhì)控品。

7.5 樣（品）

標(biāo)本唯一編號(hào)，年月日項(xiàng)目順序號(hào)；標(biāo)本采集標(biāo)準(zhǔn)操作程序；標(biāo)本接受（拒收）標(biāo)準(zhǔn)、交接記錄；標(biāo)本保存、銷毀的程序及記錄；標(biāo)本處理標(biāo)準(zhǔn)操作程序

7.6（方）法

方法學(xué)的有效性——依據(jù)；SOP的合理性——生搬硬套；分區(qū)操作的協(xié)作——流程合理；質(zhì)控點(diǎn)的安排——提取效率、擴(kuò)增效率；基線的調(diào)整——CT值、本底熒光值。

7.7（檢）測(cè)

?室內(nèi)質(zhì)控的SOP：耗品質(zhì)檢，試劑質(zhì)檢，質(zhì)控方法（糾錯(cuò)措施），質(zhì)控圖。?室間質(zhì)評(píng)的SOP：糾偏措施

7.8 報(bào)告

?發(fā)放范圍：門診、病區(qū)、外單位 ?發(fā)放方式：保密、電子、郵件

?報(bào)告單的格式：唯一編號(hào)、檢測(cè)下限、實(shí)驗(yàn)室申明 ?審核、標(biāo)準(zhǔn)、不合格報(bào)告的處理

7.9 抱怨

?實(shí)驗(yàn)室服務(wù)、質(zhì)量改進(jìn)的依據(jù)

?對(duì)象：病人、醫(yī)生、工作人員。SOP應(yīng)明確方式、職責(zé)、反饋、記錄。

摘自《2003年華東區(qū)臨床檢驗(yàn)中心協(xié)作線臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理

及新技術(shù)應(yīng)用高級(jí)研討會(huì)資料匯編》

第四篇：16sRNA PCR 擴(kuò)增及凝膠電泳分析實(shí)驗(yàn)報(bào)告

16sRNA PCR 擴(kuò)增及凝膠電泳分析

微生物學(xué)20092474王紫楓

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．熟悉細(xì)菌活化及培養(yǎng)過(guò)程

2．掌握PCR擴(kuò)增技術(shù)及方法

3．掌握凝膠電泳分析技術(shù)

二、實(shí)驗(yàn)原理

rRNA進(jìn)化緩慢，具有高度保守性。不同微生物的rRNA的基因序列在某些位點(diǎn)以不同的幾率發(fā)生突變。同時(shí)，小核糖體亞基16sRNA分子量大，攜帶信息量大，可作為屬種鑒定的基礎(chǔ)。

通過(guò)篩選的細(xì)菌，做活化培養(yǎng)后，細(xì)菌在緩沖液酶解，通過(guò)細(xì)胞破壁、裂解、離心得到RNA相關(guān)序列，在經(jīng)過(guò)設(shè)定PCR相關(guān)條件。溫度、循環(huán)次數(shù)，將裂解液加入到體系中進(jìn)行擴(kuò)增。在完成循環(huán)后進(jìn)行凝膠電泳、拍照、序列分析。

三、實(shí)驗(yàn)用品

供試菌種53種、編號(hào)試管每株兩個(gè)LB固體和液體培養(yǎng)基、Mg2+、無(wú)菌水、EB Buffer、TE離心管、移液槍

四、實(shí)驗(yàn)步驟

1．將供試菌株編號(hào)，沒人分得3個(gè)菌株。

2．將菌株接入固體培養(yǎng)基進(jìn)行活化，培養(yǎng)24小時(shí)。

3．將活化后的菌株挑一環(huán)，接入5ml液體培養(yǎng)基內(nèi)振蕩培養(yǎng)16小時(shí)得到菌懸液。

4．取1.5ml菌懸液于離心管，10000轉(zhuǎn)5分鐘棄上清。

5．用無(wú)菌水洗滌一次，沉淀懸浮于150ul TE Bufler。

6．將上述懸液在沸水上煮10分鐘，水浴10分鐘，10000轉(zhuǎn)5分鐘離心后，上清液于-20℃保存。

7．取上述上清液1ul于PCR中。

8．3小時(shí)PCR擴(kuò)增。

9．將擴(kuò)增后的序列取1ul于EB，并注入電泳槽中。

10． 經(jīng)過(guò)電泳后的凝膠，取出于紫外熒光燈中顯色，拍照并分析。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)過(guò)拍照，僅有2、3、6、9、22、38、39、40號(hào)擴(kuò)增出了新的序列顯色明顯。其他沒有擴(kuò)增出來(lái)的原因可能是提取過(guò)程中丟失。另外第三塊膠板沒有明顯變化的主要原因可能是電泳時(shí)入緩沖液使用了舊的緩沖液，并未出現(xiàn)預(yù)期的結(jié)果。

六、注意事項(xiàng)

1．預(yù)制固體培養(yǎng)基瓊脂要加夠量，否則很難凝固。

2．在轉(zhuǎn)接時(shí)，挑取的一環(huán)盡量多一些，肉眼可看見的狀態(tài)為宜，生長(zhǎng)期長(zhǎng)一些。

3．緩沖液先用現(xiàn)配。

第五篇：檢驗(yàn)科基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理制度

檢驗(yàn)科基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理制度

2021年11月

綿陽(yáng)經(jīng)開區(qū)松埡人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

目錄

文件編號(hào)	文件名	頁(yè)碼
	實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與布局
	實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度
	實(shí)驗(yàn)室人員配置及管理制度
	實(shí)驗(yàn)室工作人員崗位職責(zé)
	實(shí)驗(yàn)室工作程序
	生物防護(hù)與安全制度
	基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢規(guī)則
	儀器設(shè)備管理制度
	儀器設(shè)備維護(hù)及保養(yǎng)制度
	儀器設(shè)備校準(zhǔn)程序
	檢測(cè)結(jié)果報(bào)告程序
	實(shí)驗(yàn)室清潔程序
	廢棄物處理程序
	室內(nèi)質(zhì)量控制程序
	室間質(zhì)評(píng)管理程序
	試劑與耗材購(gòu)買驗(yàn)收及管理程序
	實(shí)驗(yàn)記錄管理制度
	投訴處理程序
	應(yīng)急處理程序
	實(shí)驗(yàn)室保密制度
	實(shí)驗(yàn)室生物安全管理制度
	個(gè)人三級(jí)防護(hù)用品穿脫流程
	壓力蒸汽滅菌器滅菌操作流程
	紫外消毒操作及維護(hù)程序

實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與布局 目的：

建立科學(xué)、合理的實(shí)驗(yàn)室設(shè)置及管理，防止實(shí)驗(yàn)室交叉污染，保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。適用范圍：

適用于臨床分子生物實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置、工作流程和日常管理等。內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)室分為試劑制備區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、產(chǎn)物擴(kuò)增分析區(qū)，共三個(gè)區(qū)，各工作區(qū)有專用的儀器設(shè)備、辦公用品、工作服、實(shí)驗(yàn)耗材和清潔用具等，并貼上標(biāo)簽加以區(qū)別，不得混用。

3.1實(shí)驗(yàn)室各區(qū)室溫宜為20-25℃，空氣濕度宜≤80%。

3.2實(shí)驗(yàn)室各區(qū)設(shè)有獨(dú)立進(jìn)風(fēng)排風(fēng)系統(tǒng)，保持實(shí)驗(yàn)室處于負(fù)壓狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與分區(qū)

4.1 試劑制備區(qū)

4.1.1儀器及配套設(shè)置 試劑貯存冰箱（－20℃）、各種規(guī)格的加樣器（0.5ul～10ul、5～50ul、20～200ul）各種規(guī)格的吸頭、移動(dòng)式紫外線消毒車、溫濕度監(jiān)測(cè)計(jì)、臺(tái)式高速離心機(jī)、各種消毒用具及用品、各種辦公用品、專用工作服、一次性鞋套和一次性手套。

4.1.2 文檔設(shè)置 臨床分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室試劑制備區(qū)溫濕度記錄表、冰箱溫度記錄表、實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表、各儀器的使用維護(hù)記錄表。

4.2 標(biāo)本處理區(qū)

4.2.1儀器及配套設(shè)施 核酸提取儀、標(biāo)本保存冰箱（2℃～8℃、－20℃）、臺(tái)式高速離心機(jī)、高速冷凍離心機(jī)、生物安全柜、混勻器、各種規(guī)格的加樣器（0.5ul～10ul 5～50ul、20～200ul、100～1000ul）、各種規(guī)格的吸頭、移動(dòng)式紫外線消毒車、醫(yī)用空氣消毒機(jī)、溫濕度監(jiān)測(cè)計(jì)、干式恒溫器；各種消毒用具及用品、各種辦公用品、專用工作服、一次性鞋套和一次性手套。

4.2.2文檔設(shè)置 臨床分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本處理區(qū)溫濕度記錄表、冰箱溫度記錄表、實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表、各儀器的使用維護(hù)記錄表。

4.3 產(chǎn)物擴(kuò)增分析區(qū)

4.3.1儀器及配套設(shè)施 實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀、工作分析電腦、移動(dòng)式紫外線消毒車、溫濕度監(jiān)測(cè)計(jì)、各種消毒用具及用品、各種辦公用品、專用工作服、一次性鞋套和一次性手套。

4.3.2文檔設(shè)置 臨床分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增區(qū)溫濕度記錄表、冰箱溫度記錄表、實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表、各儀器的使用維護(hù)記錄表。

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度 目的：

使實(shí)驗(yàn)室工作開展有序可依、有序必依，保證實(shí)驗(yàn)正常進(jìn)行。適用范圍：

適用于分子生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理。內(nèi)容：

3.1 本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)及相關(guān)實(shí)驗(yàn)工作，不得進(jìn)行其它實(shí)驗(yàn)操作。

3.2 臨床分子生物實(shí)驗(yàn)室的工作人員須經(jīng)基因擴(kuò)增技術(shù)培訓(xùn)合格方可上崗。

3.3 進(jìn)入工作區(qū)須戴上口罩，帽子，更換各室專用的工作服，各室之間物品不可混用。

3.4 非本實(shí)驗(yàn)室工作人員，未經(jīng)許可不得入內(nèi)；進(jìn)修、實(shí)習(xí)或其他科人員需在本室進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)，須在本實(shí)驗(yàn)室人員指導(dǎo)下進(jìn)行。

3.5每天實(shí)驗(yàn)開始前，對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和器材進(jìn)行滅菌消毒。

3.6 本室工作人員必須嚴(yán)格遵守各項(xiàng)規(guī)章制度和操作規(guī)程，及時(shí)做好各項(xiàng)記錄。實(shí)驗(yàn)完畢后，做好實(shí)驗(yàn)室清潔、整理及分析統(tǒng)計(jì)等工作。

3.7 室內(nèi)儀器由專人負(fù)責(zé)，定期進(jìn)行維護(hù)和保養(yǎng)，并完成相關(guān)記錄。

3.8 每日實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，做好室內(nèi)的清潔衛(wèi)生和消毒工作。

3.9工作人員下班前須關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室的門窗、切斷電器電源。

3.10 非實(shí)驗(yàn)室相關(guān)物品不得放置在工作區(qū)內(nèi)。

3.11 實(shí)驗(yàn)室為工作場(chǎng)所，不得吸煙、吃東西，應(yīng)保持整潔、安靜、良好的工作環(huán)境。

實(shí)驗(yàn)室人員配置及管理制度 目的：

配置足夠的實(shí)驗(yàn)室工作人員，進(jìn)行統(tǒng)一的管理，保證本室工作順利開展。適用范圍：

適用于分子生物實(shí)驗(yàn)室的人員配置、培訓(xùn)考核及管理等。程序：

3.1 人員要求

3.1.1具備較好的分子生物學(xué)知識(shí)和實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)。

3.1.2具有PCR上崗證, 已完成臨床分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室所有培訓(xùn)計(jì)劃。

3.2 人員配置

3.2.1 實(shí)驗(yàn)室根據(jù)工作需要配備足夠的工作人員?，F(xiàn)有獲PCR上崗培訓(xùn)合格證者2名。

3.2.2 各級(jí)技術(shù)人員履行相應(yīng)的工作職責(zé)，見《實(shí)驗(yàn)室工作人員崗位職責(zé)》

3.3 人員培訓(xùn)及考核

3.3.1負(fù)責(zé)人參加每年衛(wèi)生部PCR室間質(zhì)評(píng)總結(jié)會(huì)。

3.3.2工作人員每年應(yīng)接受PCR技術(shù)相關(guān)繼續(xù)教育課程，參加相關(guān)學(xué)術(shù)交流會(huì)議。

3.3.3尚未取得上崗證的人員在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間內(nèi)參加技術(shù)培訓(xùn)。

3.3.4人員管理：建立工作人員的技術(shù)檔案，包括相關(guān)材料的復(fù)印件。

實(shí)驗(yàn)室工作人員崗位職責(zé) 目的：

對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員進(jìn)行合理分工，明確個(gè)人職責(zé)。適用范圍：

適用于臨床分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)各個(gè)崗位工作。崗位資格

3.1 具備較好的分子生物學(xué)知識(shí)和實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)。

3.2 具有PCR上崗證, 已完成臨床分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室所有培訓(xùn)計(jì)劃。職責(zé)范圍

4.1 各級(jí)技術(shù)人員按崗位工作責(zé)任與任務(wù)完成工作。

4.2 主任具體負(fù)責(zé)崗位內(nèi)各業(yè)務(wù)適用范圍內(nèi)技術(shù)、質(zhì)控、結(jié)果核對(duì)及簽發(fā)工作。

4.3 組長(zhǎng)負(fù)責(zé)室內(nèi)日常管理工作、試劑預(yù)算和領(lǐng)用；質(zhì)量監(jiān)督員協(xié)助組長(zhǎng)對(duì)室內(nèi)質(zhì)量工作的完成。各崗位職責(zé)細(xì)則

5.1 標(biāo)本收集、處理、編號(hào)

5.1.1 負(fù)責(zé)分子生物室檢驗(yàn)項(xiàng)目送檢標(biāo)本的處理、歸類、查對(duì)、編號(hào)工作，檢查標(biāo)本狀態(tài)。

5.1.2 負(fù)責(zé)對(duì)不合格（條碼無(wú)效、標(biāo)本量過(guò)少、容器用錯(cuò)、運(yùn)送時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等）的標(biāo)本處理。與相應(yīng)臨床科室聯(lián)系，根據(jù)病房的意見處理標(biāo)本。登記在《實(shí)驗(yàn)室不合格標(biāo)本記錄單》上。

5.1.3 接受、協(xié)助電話查詢、咨詢，將不能解答的問(wèn)題轉(zhuǎn)達(dá)給高一級(jí)技術(shù)人員。

5.1.4 負(fù)責(zé)指導(dǎo)實(shí)習(xí)、進(jìn)修人員學(xué)習(xí)標(biāo)本接收、編號(hào)、審核工作。

5.1.4 科室分配的其它工作職責(zé)。

5.2新型冠狀病毒核酸檢測(cè)崗位

5.2.1 負(fù)責(zé)檢測(cè)前準(zhǔn)備，負(fù)責(zé)離心管及吸頭的滅菌，檢查當(dāng)天相關(guān)的試劑、實(shí)驗(yàn)儀器配備及儀器的工作狀態(tài)情況，確認(rèn)儀器的正常運(yùn)作。

5.2.2 如果儀器異常，要及時(shí)處理，對(duì)于無(wú)法解決的問(wèn)題負(fù)責(zé)與相關(guān)工程師聯(lián)系，盡快排除儀器故障，以保證檢測(cè)工作順利進(jìn)行。

5.2.3 負(fù)責(zé)標(biāo)本的處理、歸類、查對(duì)、編號(hào)工作。

5.2.4 負(fù)責(zé)對(duì)不合格標(biāo)本的處理。

與相應(yīng)臨床科室聯(lián)系，根據(jù)病房的意見處理標(biāo)本。登記并填寫《不合格標(biāo)本記錄表》。

5.2.5 接受、協(xié)助電話查詢、咨詢，將不能解答的問(wèn)題轉(zhuǎn)達(dá)給高一級(jí)技術(shù)人員。

5.2.6 負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)操作，具體操作見《新型冠狀病毒核酸檢測(cè)操作程序》；負(fù)責(zé)結(jié)果的錄入和核對(duì)。

5.2.7 工作完畢，負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室清潔消毒工作以及儀器的維護(hù)保養(yǎng)，完善當(dāng)天實(shí)驗(yàn)相關(guān)記錄。

5.2.8 認(rèn)真學(xué)習(xí)國(guó)內(nèi)外的先進(jìn)醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)，參與臨床科研工作。

5.2.9 按照醫(yī)院制訂的具體的實(shí)施細(xì)則和科室規(guī)范化培訓(xùn)的要求，完成相關(guān)培訓(xùn)計(jì)劃。

5.3 報(bào)告核發(fā)崗位

5.3.1 綜合分析標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果，注意所要求檢測(cè)項(xiàng)目的完成情況，結(jié)果的可靠性，與歷史對(duì)照差別的合理性等，按相關(guān)復(fù)查標(biāo)準(zhǔn)對(duì)可疑結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。

5.3.2 監(jiān)察儀器運(yùn)行狀況，及時(shí)處理異常情況。

5.3.3 負(fù)責(zé)標(biāo)本復(fù)查、補(bǔ)漏，確認(rèn)、打印、整理報(bào)告，及時(shí)發(fā)急診報(bào)告。

5.3.4 負(fù)責(zé)指導(dǎo)實(shí)習(xí)、進(jìn)修人員學(xué)習(xí)PCR技術(shù)。

5.3.5 接受并處理初級(jí)崗人員轉(zhuǎn)達(dá)的問(wèn)題，接受臨床咨詢、投訴，調(diào)查事件原因，及時(shí)向上級(jí)匯報(bào)。

實(shí)驗(yàn)室工作程序

1目的保證臨床分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)工作按質(zhì)量手冊(cè)協(xié)調(diào)運(yùn)行，確?？剖屹|(zhì)量體系的方針和目標(biāo)得以實(shí)現(xiàn)。適用范圍

臨床分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室日常工作。職責(zé)

3.1 組長(zhǎng)：

全面負(fù)責(zé)臨床分子生物室管理工作。管理工作包括臨床分子生物室工作人員及進(jìn)修學(xué)員和實(shí)習(xí)學(xué)生的政治學(xué)習(xí)、業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)、工作安排，臨床分子生物室質(zhì)量體系、人員管理、教學(xué)管理、儀器、試劑管理等。

3.2 質(zhì)量管理員：

主要負(fù)責(zé)分子生物實(shí)驗(yàn)室目前已開展項(xiàng)目的室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)的管理工作，包括每月的室內(nèi)質(zhì)控匯總、小結(jié)。質(zhì)量管理員要在衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心和四川省檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評(píng)辦公室通知的時(shí)間適用范圍內(nèi)，督促完成室間質(zhì)評(píng)工作，包括室間質(zhì)評(píng)項(xiàng)目的檢測(cè)、報(bào)告、總結(jié)等，并管理室內(nèi)質(zhì)控工作，包括參與和檢查室內(nèi)質(zhì)控工作、測(cè)定質(zhì)控品靶值、儀器間比對(duì)實(shí)驗(yàn)等。

3.3 主管及以上技師

3.3.1 負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制，審核室內(nèi)質(zhì)控，并作相應(yīng)處理，發(fā)現(xiàn)失控時(shí)報(bào)告上級(jí)。3.3.2 負(fù)責(zé)儀器檢測(cè)前準(zhǔn)備工作，檢查當(dāng)天相關(guān)的試劑配備及儀器的工作狀態(tài)情況，確認(rèn)儀器的正常運(yùn)作，負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)、復(fù)查、補(bǔ)漏、確認(rèn)、打印、整理報(bào)告，及時(shí)分發(fā)急診報(bào)告。

3.3.3 負(fù)責(zé)處理初級(jí)崗人員轉(zhuǎn)達(dá)的問(wèn)題，接受臨床咨詢、投訴，調(diào)查事件原因，及時(shí)向上一級(jí)匯報(bào)。

3.3.4 負(fù)責(zé)儀器維護(hù)保養(yǎng)，包括每日、周、月儀器保養(yǎng)。監(jiān)察儀器運(yùn)行狀況，及時(shí)處理異常情況。儀器故障時(shí)及時(shí)向上一級(jí)匯報(bào)，與相關(guān)工程師聯(lián)系。

3.3.5負(fù)責(zé)檢查并確保當(dāng)日?qǐng)?bào)告正常發(fā)出，整理當(dāng)日工作日志。

3.3.6 負(fù)責(zé)領(lǐng)取本組試劑，確保有足夠試劑完成所有項(xiàng)目的檢測(cè)。

3.3.7 負(fù)責(zé)指導(dǎo)、協(xié)助初級(jí)技術(shù)人員的工作；實(shí)習(xí)生、進(jìn)修生的帶教。

3.3.8 負(fù)責(zé)完成室間質(zhì)評(píng)工作。

3.4技士/師

3.4.1 負(fù)責(zé)分子生物室標(biāo)本的處理、歸類、查對(duì)、編號(hào)工作。

3.4.2 負(fù)責(zé)對(duì)不合格標(biāo)本處理，與相應(yīng)臨床科室聯(lián)系，根據(jù)病房的意見處理標(biāo)本。登記在《不合格標(biāo)本記錄表》上。

3.4.3 負(fù)責(zé)核對(duì)病人資料（核對(duì)內(nèi)容包括：患者姓名、性別、年齡、申請(qǐng)科室、病區(qū)、床號(hào)、住院號(hào)或門診號(hào)、申請(qǐng)檢測(cè)項(xiàng)目、標(biāo)本種類以及輸入申請(qǐng)單上的備注以及標(biāo)本狀態(tài)）。

3.4.4 負(fù)責(zé)接受、協(xié)助電話查詢、咨詢，將不能解答的問(wèn)題轉(zhuǎn)達(dá)給高一級(jí)技術(shù)人員。

3.4.5 輔助完成實(shí)驗(yàn)、樣本復(fù)查、補(bǔ)漏以及未檢驗(yàn)樣本的保存，處理。

3.4.6 當(dāng)日工作結(jié)束后，負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室的清潔工作。工作程序

4.1 各技術(shù)人員按《實(shí)驗(yàn)室崗位職責(zé)》要求完成工作。

4.2 實(shí)驗(yàn)前工作

4.2.1 工作開始前穿戴好工作服、口罩、帽子、手套。

4.2.2 記錄并調(diào)整實(shí)驗(yàn)室溫濕度（室溫控制在18-30OC、濕度控制在20-80%），并作好冰箱溫度記錄，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置恒溫器溫度，并校正顯示溫度，作好相應(yīng)記錄

4.2.3 開啟生物安全柜紫外線消毒1小時(shí)，操作前開啟風(fēng)機(jī)運(yùn)行30分鐘。

4.2.4 實(shí)驗(yàn)器具、耗材的準(zhǔn)備：如離心管及吸頭的高溫滅菌，檢查當(dāng)天相關(guān)的試劑，實(shí)驗(yàn)儀器配備及儀器的工作狀態(tài)情況，確認(rèn)儀器的正常運(yùn)作。

4.2.5 提前30分鐘從冰箱取出當(dāng)天所用核酸提取試劑和凍存標(biāo)本。

4.2.6 標(biāo)本的收集、離心、編號(hào) ：合格標(biāo)本按照各項(xiàng)目編號(hào)規(guī)則編號(hào)，并錄入LIS相應(yīng)工作站；不合格標(biāo)本（條碼無(wú)效、標(biāo)本量少、肝素抗凝管、嚴(yán)重溶血等）與相應(yīng)臨床科室聯(lián)系，根據(jù)病房的意見處理標(biāo)本。登記并填寫《實(shí)驗(yàn)室不合格標(biāo)本記錄單》。

適用于PCR檢測(cè)全過(guò)程，包括試劑制備，標(biāo)本處理，核酸提取，擴(kuò)增產(chǎn)物分析。

4.3 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

4.3.1 試劑的準(zhǔn)備（試劑制備區(qū)）

4.3.1.1 記錄并調(diào)整實(shí)驗(yàn)室溫度、濕度（室溫控制在18-30OC、濕度控制在20-80%），并作好冰箱溫度記錄

4.3.1.2 清點(diǎn)庫(kù)存試劑，檢查是否有過(guò)期或?qū)⒔狡诘脑噭?，作?bào)廢處理或排列優(yōu)先使用，避免浪費(fèi)。

4.3.1.3 取出當(dāng)天實(shí)驗(yàn)需使用的試劑復(fù)溶至室溫，配制當(dāng)天所需試劑，并按《試劑使用登記表》規(guī)定記錄配制的人份數(shù)；若是當(dāng)天新開使用的試劑，按《試劑使用登記表》規(guī)定記錄試劑盒數(shù)。

4.3.1.4 試劑準(zhǔn)備或配制好后，傳送到下一工作區(qū)。

4.3.2 標(biāo)本處理（標(biāo)本在標(biāo)本處理區(qū)進(jìn)行）

4.3.2.1記錄并調(diào)整實(shí)驗(yàn)室溫濕度（室溫控制在18-30OC、濕度控制在20-80%），冰箱溫度，并作好記錄；根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置恒溫器溫度，并校正顯示溫度，作好相應(yīng)記錄。

4.3.2.2 配制1000mg/L的含氯消毒劑

4.3.2.3 待測(cè)標(biāo)本檢測(cè)前30分鐘復(fù)融，完全復(fù)融后振蕩30秒。抽提DNA或RNA前，取出經(jīng)高壓滅菌處理的離心管，編寫相應(yīng)的標(biāo)本號(hào)并做好核對(duì)。樣品的核酸提取應(yīng)按相應(yīng)的SOP進(jìn)行，整個(gè)過(guò)程應(yīng)使用本區(qū)專用的經(jīng)滅菌處理的吸頭、離心管等。

4.3.2.4 使用過(guò)的離心管、吸頭及其他廢棄物浸泡于1000mg/L的含氯消毒劑中，至少浸泡2小時(shí)。

4.3.2.5 未檢測(cè)標(biāo)本按各自存儲(chǔ)要求，分別保存（見各項(xiàng)目SOP具體規(guī)定）；每次實(shí)驗(yàn)完畢后，將樣本暫存4℃，待結(jié)果審核后，陰性樣本用三層黃色垃圾袋密封后送至高壓滅菌室高壓滅菌，陽(yáng)性樣本復(fù)核后高壓滅菌處理。

4.3.2.6 實(shí)驗(yàn)中必須設(shè)立陰、陽(yáng)性質(zhì)控，并與被測(cè)臨床標(biāo)本同步檢測(cè)。

4.3.2.7 不同檢測(cè)項(xiàng)目的核酸提取和保存按相應(yīng)的檢測(cè)項(xiàng)目SOP進(jìn)行。

4.3.3 基因擴(kuò)增（基因擴(kuò)增在擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行）

4.3.3.1 記錄并調(diào)整實(shí)驗(yàn)室溫度、濕度（室溫控制在18-30OC、濕度控制在20-80%）。

4.3.3.2 按照實(shí)驗(yàn)要求啟動(dòng)相應(yīng)的PCR儀,按相關(guān)PCR儀操作程序進(jìn)行樣品擴(kuò)增。

4.3.3.3 擴(kuò)增完成后，按相應(yīng)項(xiàng)目要求將檢測(cè)結(jié)果調(diào)至最佳，傳送結(jié)果進(jìn)LIS系統(tǒng)；關(guān)閉PCR儀及相關(guān)電腦，記錄PCR儀使用時(shí)間和運(yùn)行狀態(tài)。

4.3.3.4 實(shí)驗(yàn)完畢后及時(shí)并小心清除擴(kuò)增儀內(nèi)的樣品管或反應(yīng)板，放入有生物污染標(biāo)記的垃圾桶中，交科室工人統(tǒng)一處理。

4.3.3.5 PCR檢測(cè)結(jié)果的確認(rèn)：綜合分析標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果，注意所要求檢測(cè)項(xiàng)目的完成情況，結(jié)果的可靠性，與歷史對(duì)照差別的合理性等，按相關(guān)復(fù)查標(biāo)準(zhǔn)對(duì)可疑結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。結(jié)果報(bào)告

5.1 初級(jí)檢驗(yàn)人員責(zé)任標(biāo)本的編號(hào)、上機(jī)檢測(cè)、結(jié)果的錄入等。初級(jí)職稱人員、待聘中級(jí)職稱人員可以作為報(bào)告名單的錄入者和檢驗(yàn)者，不能作為核對(duì)及核發(fā)報(bào)告。

5.2 中級(jí)及其以上職稱人員參與標(biāo)本的檢測(cè)，并負(fù)責(zé)對(duì)檢驗(yàn)報(bào)告進(jìn)行審核、簽發(fā)，負(fù)責(zé)結(jié)果的解釋和說(shuō)明。

5.3 綜合分析標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果，注意所要求檢測(cè)項(xiàng)目的完成情況，結(jié)果的可靠性，與歷史對(duì)照差別的合理性等，按相關(guān)復(fù)查標(biāo)準(zhǔn)對(duì)可疑結(jié)果進(jìn)行復(fù)查實(shí)驗(yàn)結(jié)束后

6.1 完善實(shí)驗(yàn)室各工作區(qū)的記表表。

6.2 清潔實(shí)驗(yàn)室各工作區(qū)的臺(tái)面，儀器設(shè)備、加樣器，開啟紫外線消毒。

生物防護(hù)與安全制度 目的：

規(guī)范實(shí)驗(yàn)室生物安全管理，保證實(shí)驗(yàn)室安全運(yùn)作，將事故控制在最低限度。適用范圍：

適用于臨床分子生物實(shí)驗(yàn)室。程序：

3.1 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置遵循《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)》，嚴(yán)格分區(qū)，各區(qū)物品不得混用。

3.2 臨床實(shí)驗(yàn)室可能接觸的微生物：病毒、細(xì)菌及其它具有高毒力的病原體。

3.3 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)提供個(gè)人防護(hù)裝備，如一次性手套、口罩、帽子、工作服、實(shí)驗(yàn)服、面罩、護(hù)目鏡、鞋套等。

3.4 可能的感染途徑：

3.4.1 空氣傳播：具有傳染性的溶液可能形成氣煙霧散布空氣中。

3.4.2 經(jīng)口傳播：用口吸移液可能導(dǎo)致微生物進(jìn)入人體傳染。也可通過(guò)間接途徑引起“手——口”傳染。

3.4.3 直接接種：偶然的針刺、碎玻璃劃傷或其它方式造成的感染原通過(guò)損傷的表皮進(jìn)入人體可引起傳染。

3.4.4 粘膜接觸：HBV、HIV等病原體可通過(guò)與粘膜（如眼結(jié)膜）的直接接觸進(jìn)入人體。

3.5 常規(guī)預(yù)防措施：

3.5.1 來(lái)自所有病人的血液和體液都被認(rèn)為是具有傳染性的。所有血液和體液標(biāo)本應(yīng)放置于具有安全蓋的結(jié)構(gòu)優(yōu)良的容器里，以防在運(yùn)輸過(guò)程中發(fā)生泄漏。采集標(biāo)本時(shí)應(yīng)防止污染容器的外表或隨標(biāo)本的檢驗(yàn)單。如果存在潛在的或?qū)嶋H的污染，則應(yīng)再加一層包裝。

3.5.2 所有處理血液和體液（例如：取下真空試管的塞子）的工作人員都應(yīng)戴上手套。如果有可能發(fā)生血液或體液的噴濺，則應(yīng)使用面部防護(hù)裝備。

3.5.3 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用機(jī)械移液裝置。絕對(duì)禁止用口吸移液。

3.5.4 使用銳器時(shí)應(yīng)防止受傷。如被銳器刺傷，應(yīng)脫下手套盡量擠壓傷口周圍使血流出，然后用絡(luò)合碘、酒精消毒。如樣本進(jìn)入眼睛，應(yīng)立即用清水沖洗后到眼科進(jìn)行相應(yīng)處理。

3.5.5 血液或其他體液發(fā)生泄漏或工作結(jié)束后，均應(yīng)使用合適的化學(xué)殺菌劑對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)進(jìn)行表面消毒。消毒液通常采用新鮮配制的1000mg/L的含氯消毒劑和75%酒精。具體操作參閱《實(shí)驗(yàn)室清潔程序》。

3.5.6 實(shí)驗(yàn)中用過(guò)的污染品在重復(fù)使用前或裝入容器中按傳染性廢棄物進(jìn)行處理前，應(yīng)先進(jìn)行去污處理。參閱《廢棄物處理程序》。

3.5.7 被血液或其他體液污染的設(shè)備在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)或外送商家進(jìn)行維修之前，應(yīng)先進(jìn)行清潔和消毒。無(wú)法徹底消毒的設(shè)備必須貼上生物危害的標(biāo)簽。

3.5.8 手或其他部位的皮膚在接觸血液或其他體液后必須立即徹底清洗。在實(shí)驗(yàn)工作結(jié)束后或取下手套后應(yīng)立即洗手。在離開實(shí)驗(yàn)室之前應(yīng)脫下所有的個(gè)人防護(hù)裝備。

3.5.9 如果實(shí)驗(yàn)人員工作時(shí)有可能接觸到血液、其它可能具傳染性的物質(zhì)、病人的粘膜或要損傷的皮膚、或在處理污染的物品或表面時(shí)，都應(yīng)戴上手套。在進(jìn)行血管穿刺時(shí)，包括靜脈采血、手指或腳背穿刺，也應(yīng)戴上手套。如果手套破損、刺破、或失去其屏障功能，則應(yīng)盡快更換。

基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢規(guī)則 目的：

規(guī)范操作，保證向?qū)嶒?yàn)室服務(wù)對(duì)象提供準(zhǔn)確、及時(shí)、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果 適用范圍：

臨床分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室樣本分析及復(fù)檢。職責(zé)：

3.1 首先檢查儀器是否處于正常狀態(tài)，室內(nèi)質(zhì)控是否在允許范圍內(nèi)，結(jié)合臨床，根拒本室制定的標(biāo)準(zhǔn)，確定是否需要復(fù)檢。

3.2 根據(jù)基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室制定的標(biāo)準(zhǔn)，不需要復(fù)查的標(biāo)本，3.3對(duì)需要復(fù)查的標(biāo)本，首先檢查標(biāo)本是否合格，復(fù)檢內(nèi)容

標(biāo)本狀態(tài)、儀器狀態(tài)、反應(yīng)線性、偶然誤差、其它異常

實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目	復(fù)檢條件	措施
新型冠狀病毒	可疑陽(yáng)性擴(kuò)增曲線	重新提取或重新擴(kuò)增
實(shí)驗(yàn)完畢八聯(lián)管扭曲變形	重新擴(kuò)增
內(nèi)標(biāo)未擴(kuò)增	重新提取核酸
醫(yī)生要求復(fù)檢	重新提取核酸

儀器設(shè)備管理制度 目的：

保證實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備得到妥善的管理和正確使用。適用范圍：

臨床分子生物實(shí)驗(yàn)室所有的儀器設(shè)備。程序：

3.1 臨床分子生物實(shí)驗(yàn)室的主要儀器均建檔，儀器有：熒光實(shí)時(shí)定量PCR儀、移液器、離心機(jī)、干式恒溫箱、生物安全柜、超凈工作臺(tái)、移動(dòng)式紫外燈。

3.2 儀器檔案包括：序號(hào)、產(chǎn)地、名稱、型號(hào)、制造商、購(gòu)入日期、啟用日期、使用記錄、維護(hù)記錄、故障記錄等。同時(shí)儀器備有相關(guān)的說(shuō)明書、操作手冊(cè)、保修卡、負(fù)責(zé)人，并由本室工作人員對(duì)儀器設(shè)備進(jìn)行管理。

3.3 如儀器出現(xiàn)故障不能正常使用，應(yīng)在儀器上作好故障標(biāo)識(shí)，并記錄故障情況和處理意見，通知醫(yī)院維修人員或儀器經(jīng)銷商進(jìn)行維修。

3.4 儀器應(yīng)明確標(biāo)識(shí)工作狀態(tài)及校正時(shí)間。

3.5 臨床分子生物實(shí)驗(yàn)室的儀器實(shí)行嚴(yán)格分區(qū)使用，不能混用。

儀器設(shè)備維護(hù)和保養(yǎng)制度 目的：

保護(hù)儀器設(shè)備穩(wěn)定、正常功能狀態(tài) 適用范圍：

臨床分子生物實(shí)驗(yàn)室所有設(shè)備 程序：

3.1 儀器設(shè)備的日常維護(hù)、清潔保養(yǎng)由本室人員負(fù)責(zé)，內(nèi)容主要為儀器設(shè)備的清潔消毒。

3.2 大型儀器由廠家工程師每年對(duì)儀器進(jìn)行一次全面保養(yǎng)。小型儀器如移液器的長(zhǎng)期保養(yǎng)可由廠家或?qū)嶒?yàn)室工作人員每年至少保養(yǎng)兩次。

3.3 建立儀器設(shè)備維護(hù)保養(yǎng)登記本。

儀器設(shè)備校準(zhǔn)程序 目的：

保證儀器設(shè)備檢測(cè)的有效性和準(zhǔn)確性。適用范圍：

適用于有可能對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成誤差的儀器設(shè)備。主要有：PCR擴(kuò)增儀、核酸提取儀、干式恒溫箱，溫度計(jì)、可調(diào)移液器等。程序：

3.1 新購(gòu)入儀器出廠時(shí)由廠家校準(zhǔn)，可直接投入使用。

3.2常規(guī)校準(zhǔn)頻率：

3.2.1擴(kuò)增儀為每年校準(zhǔn)一次.3.2.2移液器：每年校準(zhǔn)至少兩次校準(zhǔn)。

3.2.3干式恒溫箱：每次使用時(shí)用溫度計(jì)校準(zhǔn)設(shè)定溫度，并作好校準(zhǔn)記錄。如在使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)漂移、偏差或可疑情況須進(jìn)行重新校準(zhǔn)，必要時(shí)通知醫(yī)院維修人員或工程師進(jìn)行維修，并記錄在案。

3.3 儀器設(shè)備維修后須經(jīng)校準(zhǔn)方可重新使用。

3.4 各區(qū)儀器的校準(zhǔn)順序必須按照分區(qū)順序進(jìn)行。

檢測(cè)結(jié)果報(bào)告程序 目的規(guī)范實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)報(bào)告程序。對(duì)檢驗(yàn)報(bào)告的基本信息、審核、結(jié)果解釋與說(shuō)明，保證向?qū)嶒?yàn)室服務(wù)對(duì)象提供準(zhǔn)確、及時(shí)、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果。適用范圍

適用于檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告的全過(guò)程。職責(zé)

3.1 初級(jí)檢驗(yàn)人員責(zé)任標(biāo)本的編號(hào)、上機(jī)檢測(cè)、結(jié)果的錄入等。初級(jí)職稱人員、可以作為報(bào)告名單的錄入者和檢驗(yàn)者，不能作為核對(duì)及核發(fā)報(bào)告。

3.2 中級(jí)及其以上職稱人員參與標(biāo)本的檢測(cè)，并負(fù)責(zé)對(duì)檢驗(yàn)報(bào)告進(jìn)行審核、簽發(fā)，負(fù)責(zé)結(jié)果的解釋和說(shuō)明。

3.3 實(shí)習(xí)生、進(jìn)修人員、見習(xí)期的工作人員無(wú)發(fā)報(bào)告權(quán)，需由帶教老師簽發(fā)。結(jié)果報(bào)告程序

4.1 檢驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包括以下信息：

4.1.1 檢驗(yàn)報(bào)告單的抬頭統(tǒng)一為“綿陽(yáng)經(jīng)開區(qū)松埡人民醫(yī)院檢驗(yàn)報(bào)告單”。

4.1.2 患者的惟一性標(biāo)識(shí)（診療卡號(hào)、流水號(hào)或住院號(hào)）

4.1.3 患者的姓名、年齡、性別、科別，當(dāng)患者的地點(diǎn)和報(bào)告的送達(dá)地不同時(shí)應(yīng)注明報(bào)告的送達(dá)地；

4.1.4 檢驗(yàn)申請(qǐng)者、錄入者、檢驗(yàn)者、核對(duì)者姓名或其他惟一性標(biāo)識(shí)；

4.1.5 樣品的類別，當(dāng)原始樣品的質(zhì)和量對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果有影響時(shí)，應(yīng)注明樣品的狀態(tài)，如溶血、脂血等，并在報(bào)告中說(shuō)明可能對(duì)結(jié)果造成的影響；

4.1.6 注明原始樣品送檢的日期和時(shí)間，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)樣品的日期和時(shí)間，報(bào)告發(fā)布日期和時(shí)間；

4.1.7 檢測(cè)項(xiàng)目的名稱、結(jié)果、單位及參考范圍，相關(guān)時(shí)應(yīng)提供原始結(jié)果和修正后的結(jié)果；

4.1.8 適用時(shí)，應(yīng)按要求提供檢出限和測(cè)量不確定度的信息；當(dāng)臨床或病人有要求時(shí)應(yīng)注明結(jié)果的檢測(cè)方法，若要求檢驗(yàn)科為其檢驗(yàn)報(bào)告提供解釋和說(shuō)明時(shí)，檢驗(yàn)技術(shù)人員應(yīng)提供此服務(wù)；定性檢驗(yàn)結(jié)果必須以中文形式報(bào)告，不得以符號(hào)報(bào)告。

4.1.9 危急值是指檢驗(yàn)結(jié)果的極度異常，如不及時(shí)處理會(huì)危及病人生命的檢驗(yàn)值。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)與臨床緊密聯(lián)系。

4.2 檢驗(yàn)報(bào)告單核發(fā)標(biāo)準(zhǔn)：

4.2.1 當(dāng)天儀器運(yùn)行正常，相關(guān)項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控在控；

4.2.2 檢驗(yàn)申請(qǐng)單或電子標(biāo)簽上的信息完整，標(biāo)本質(zhì)量符合要求；

4.2.3 檢驗(yàn)項(xiàng)目結(jié)果完整、無(wú)漏項(xiàng)，可疑結(jié)果已經(jīng)復(fù)查；

4.2.4 特殊狀態(tài)標(biāo)本的信息已經(jīng)在狀態(tài)欄注明；

4.2.5 已經(jīng)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)審：包括結(jié)合臨床資料分析、同一標(biāo)本不同項(xiàng)目結(jié)果的相關(guān)性分析。

4.2.6 當(dāng)發(fā)現(xiàn)檢驗(yàn)報(bào)告中有缺陷而對(duì)其準(zhǔn)確性及有效性產(chǎn)生懷疑時(shí)，應(yīng)由相關(guān)人員處理追回已發(fā)出有缺陷的報(bào)告單，并報(bào)告實(shí)驗(yàn)室和科室負(fù)責(zé)人。對(duì)其做必要的修改后再發(fā)出，并及時(shí)做好記錄。

4.2.7 檢驗(yàn)工作人員不得向無(wú)關(guān)人員透露檢驗(yàn)結(jié)果及相關(guān)信息。

4.2.8 檢驗(yàn)報(bào)告使用者因特殊原因造成報(bào)告損壞或遺失的。只有檢驗(yàn)系統(tǒng)歷史記錄中能夠調(diào)出者或者登記存根上有記錄者，才可補(bǔ)發(fā)。并要求做好記錄。

4.2.9 申訴及處理：檢驗(yàn)報(bào)告申請(qǐng)人或委托人對(duì)檢驗(yàn)報(bào)告的內(nèi)容有異議時(shí)，可向本科室負(fù)責(zé)或科室質(zhì)量負(fù)責(zé)人提出申訴，按照投訴處理程序執(zhí)行。

實(shí)驗(yàn)室清潔程序目的：

保證實(shí)驗(yàn)室工作環(huán)境衛(wèi)生，防止污染。適用范圍：

適應(yīng)于實(shí)驗(yàn)室工作環(huán)境、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、離心機(jī)、移液器等的清潔消毒工作。程序：

3.1 每個(gè)實(shí)驗(yàn)室均有各自的清潔用具，不可混用，由本室人員負(fù)責(zé)清潔。

3.2 實(shí)驗(yàn)室清潔按“試劑制備區(qū)→標(biāo)本處理區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)”的方向進(jìn)行。

3.3 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如發(fā)生標(biāo)本或試劑外濺，應(yīng)用浸有1000mg/L的含氯消毒劑衛(wèi)生紙或紗布覆蓋60分鐘，再用紫外線燈照射過(guò)夜并記錄。

3.4 每日工作結(jié)束后，用1000mg/L的含氯消毒劑擦拭工作臺(tái)面、拖地面，用75%酒精擦洗加樣槍。

3.5離心機(jī)的清潔：實(shí)驗(yàn)完畢后，用75%酒精擦洗離心機(jī)的外殼，用1000mg/L的含氯消毒劑浸過(guò)的軟布擦洗離心機(jī)的轉(zhuǎn)頭及內(nèi)壁，再用潔凈的濕布擦洗，待干后蓋上機(jī)蓋。

3.6 實(shí)驗(yàn)完成后，按各區(qū)要求紫外燈照射消毒。

3.7 各區(qū)工作服每周統(tǒng)一送洗衣房高壓滅菌洗滌。

廢棄物處理程序 目的：

保證實(shí)驗(yàn)室工作的正常開展，防止廢棄物對(duì)實(shí)驗(yàn)室和社會(huì)環(huán)境造成污染。適用范圍：

實(shí)驗(yàn)室所有廢棄標(biāo)本、使用過(guò)的耗材等。程序：

3.1 實(shí)驗(yàn)室放置有蓋污物桶，并貼有明確的分類標(biāo)識(shí)。

3.2醫(yī)源性廢棄物處理：

3.2.1廢棄血液標(biāo)本：由實(shí)驗(yàn)室工作人員高壓滅菌消毒處理后，交醫(yī)院專門廢棄物處理護(hù)工定時(shí)收集統(tǒng)一處理。

3.2.2廢棄的吸頭、離心管、各種分泌物標(biāo)本丟入黃色垃圾袋中，由實(shí)驗(yàn)室人員高壓滅菌消毒處理后，再交醫(yī)院專門廢棄物處理護(hù)工定時(shí)收集統(tǒng)一處理。

3.2.3新冠檢測(cè)標(biāo)本、廢棄耗材、實(shí)驗(yàn)室一次性防護(hù)用品一同高壓滅菌后，按醫(yī)療廢物處理流程處理。

3.2.4所有用過(guò)的非一次性實(shí)驗(yàn)用品，均先在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用1000mg/L的含氯消毒劑消毒液浸泡6小時(shí)后煮沸，清洗后再交醫(yī)院供應(yīng)室高壓消毒。

室內(nèi)質(zhì)量控制程序 目的對(duì)臨床分子生物檢驗(yàn)程序進(jìn)行質(zhì)量控制，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。適用范圍

適用于分子生物室所有開展的檢測(cè)項(xiàng)目。職責(zé)

3.1 實(shí)驗(yàn)室主任和組長(zhǎng)負(fù)責(zé)制定本室、本組內(nèi)室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則和檢驗(yàn)過(guò)程的質(zhì)量控制程序。

3.2 檢測(cè)人員負(fù)責(zé)執(zhí)行檢驗(yàn)過(guò)程的質(zhì)量控制程序及對(duì)本崗位室內(nèi)質(zhì)控進(jìn)行分析和處理。

3.3 質(zhì)量監(jiān)督員負(fù)責(zé)監(jiān)督本組內(nèi)是否按照程序文件和操作文件的質(zhì)量要求進(jìn)行。工作程序

4.1 標(biāo)本接收的質(zhì)量控制

檢驗(yàn)人員嚴(yán)格按規(guī)定對(duì)標(biāo)本進(jìn)行審核，并對(duì)不合格標(biāo)本進(jìn)行正確處理。

4.2 標(biāo)本前處理的質(zhì)量控制

各專業(yè)組收到標(biāo)本后要及時(shí)處理標(biāo)本，不能立即處理的標(biāo)本要按照正確的方式進(jìn)行標(biāo)本保存。檢測(cè)人員或指定的編號(hào)人員對(duì)所有標(biāo)本按各項(xiàng)目規(guī)范標(biāo)號(hào)，嚴(yán)格防止錯(cuò)號(hào)。需要離心分離的標(biāo)本在分離過(guò)程中要正確選擇離心速度和時(shí)間，盡可能避免標(biāo)本溶血。標(biāo)本采集后要在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè)。

4.3 檢驗(yàn)過(guò)程的質(zhì)量控制

4.3.1 校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、試劑

校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、試劑的評(píng)價(jià)按照《合格供應(yīng)商評(píng)審程序》執(zhí)行。

4.3.2 儀器設(shè)備

儀器要定期檢查并定期維護(hù)保養(yǎng)（包括日保養(yǎng)、周保養(yǎng)、月保養(yǎng)、供應(yīng)商的定期保養(yǎng)），使儀器設(shè)備處于最佳狀態(tài)。

4.3.3 操作文件

檢驗(yàn)人員必須嚴(yán)格按照操作文件進(jìn)行操作。

4.3.4 檢驗(yàn)人員

檢驗(yàn)人員的資格和經(jīng)歷必須能夠符合相應(yīng)崗位的要求。

4.4 室內(nèi)質(zhì)量控制

4.4.1 室內(nèi)質(zhì)控的通用要求

檢驗(yàn)人員按照檢驗(yàn)項(xiàng)目對(duì)質(zhì)控的具體要求準(zhǔn)備質(zhì)控物，并按照與常規(guī)標(biāo)本相同條件測(cè)定質(zhì)控物，分析判斷質(zhì)控結(jié)果。若發(fā)現(xiàn)失控，應(yīng)按照失控處理程序處理。

4.4.2 質(zhì)控品的選擇

質(zhì)控品的選擇要點(diǎn)：

4.4.2.1商品化質(zhì)控品

4.4.2.1.1 應(yīng)該盡量選擇與待測(cè)病人標(biāo)本具有相同基本的質(zhì)控品；

4.4.2.1.2 在實(shí)驗(yàn)室保存的有效期應(yīng)在半年以上；

4.4.2.1.3 瓶間差應(yīng)該應(yīng)盡量小；

4.4.2.1.4 分析物的水平；

4.4.2.1.5 定值與不定值。

4.4.3 質(zhì)控品的使用和保存

嚴(yán)格按照質(zhì)控品說(shuō)明書進(jìn)行操作，嚴(yán)格按照使用說(shuō)明書規(guī)定的方法保存質(zhì)控品，不使用過(guò)期質(zhì)控品。

4.4.4 室內(nèi)質(zhì)量控制程序

4.4.4.1 設(shè)定靶值和控制限

4.4.4.1.1 靶值：對(duì)于穩(wěn)定性較長(zhǎng)的質(zhì)控品，要求對(duì)新批號(hào)的質(zhì)控品與當(dāng)前使用的質(zhì)控品一起進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)20批測(cè)定獲得的質(zhì)控測(cè)定結(jié)果，進(jìn)行離群值檢驗(yàn)，計(jì)算出均值和標(biāo)準(zhǔn)差，作為靶值和標(biāo)準(zhǔn)差。

4.4.4.1.2 控制限：通常以標(biāo)準(zhǔn)差的倍數(shù)表示。

4.4.4.2 質(zhì)控品的更換

更換新批號(hào)的質(zhì)控品時(shí)，應(yīng)在原批號(hào)質(zhì)控品用完前與其一起測(cè)定。4.4.4.1程序確定靶值。

4.4.4.3 質(zhì)控參數(shù)的設(shè)置

在檢驗(yàn)系統(tǒng)中設(shè)置各檢驗(yàn)項(xiàng)目的質(zhì)控參數(shù)，X、s、CV。

4.4.4.4 失控的分析和處理

4.4.4.4.1 失控原因分析

失控的因素多種多樣，如操作失誤、試劑變質(zhì)、校準(zhǔn)品或質(zhì)控品失效、儀器問(wèn)題、質(zhì)控規(guī)則選擇不當(dāng)、質(zhì)控參數(shù)設(shè)置錯(cuò)誤等。

分析誤差類型：檢查質(zhì)控圖，判斷是系統(tǒng)誤差還是隨機(jī)誤差；系統(tǒng)誤差的來(lái)源：試劑問(wèn)題、校準(zhǔn)問(wèn)題、儀器問(wèn)題、人員問(wèn)題、質(zhì)控品失效等；隨機(jī)誤差的來(lái)源：試劑瓶或儀器吸樣管道中有氣泡，試劑沒有充分混勻，電壓不穩(wěn)，溫度變化，操作不熟練等。

4.4.4.4.2 失控后的糾正措施

檢查質(zhì)控品（重測(cè)同一質(zhì)控品→新開一瓶質(zhì)控品→新開一批質(zhì)控品，重測(cè)失控項(xiàng)目）→更換試劑，重測(cè)失控項(xiàng)目→進(jìn)行儀器維護(hù)，重測(cè)失控項(xiàng)目→重新校準(zhǔn)儀器，重測(cè)失控項(xiàng)目→

4.4.4.4.3 失控處理程序

a．保留原始數(shù)據(jù)，如實(shí)記錄質(zhì)控結(jié)果，在檢驗(yàn)系統(tǒng)應(yīng)該有如實(shí)反應(yīng)；

b.分析失控原因，采取糾正措施；

c.如實(shí)記錄糾正后的在控結(jié)果，并在檢驗(yàn)系統(tǒng)中體現(xiàn)出來(lái)；

d.填寫失控報(bào)告，上交專業(yè)組長(zhǎng)，由專業(yè)組長(zhǎng)決定是否可以發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告，必要時(shí)由實(shí)驗(yàn)室主任和科質(zhì)量負(fù)責(zé)人處理。

e.若患者報(bào)告不能發(fā)出，應(yīng)該及時(shí)確定失控的標(biāo)本數(shù)，對(duì)這些標(biāo)本進(jìn)行重新測(cè)定，發(fā)出合格的報(bào)告。

4.4.4.5 室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的管理

4.4.4.5.1 月質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)匯總

由實(shí)驗(yàn)室主任安排質(zhì)量監(jiān)督員負(fù)責(zé)匯總當(dāng)月原始質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

4.4.4.5.2 月質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的歸檔保存

當(dāng)月所有室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的原始記錄和質(zhì)控圖要交實(shí)驗(yàn)室存檔；由實(shí)驗(yàn)室主任負(fù)責(zé)將統(tǒng)計(jì)報(bào)表、失控報(bào)告上交科質(zhì)量負(fù)責(zé)人進(jìn)行審核，存檔。

4.4.4.5.3 室內(nèi)質(zhì)控總結(jié)

各專業(yè)組組長(zhǎng)負(fù)責(zé)對(duì)本組的檢驗(yàn)項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控情況進(jìn)行月總結(jié)，匯報(bào)實(shí)驗(yàn)室主任，由實(shí)驗(yàn)室主任匯總成當(dāng)月室內(nèi)質(zhì)控小結(jié)上報(bào)科質(zhì)量負(fù)責(zé)人。實(shí)驗(yàn)室主任應(yīng)定期主持召開室質(zhì)量分析會(huì)，提出質(zhì)量持續(xù)改進(jìn)的措施。

室間質(zhì)評(píng)管理程序目的：

保證患者檢驗(yàn)結(jié)果和其報(bào)告的準(zhǔn)確性和可靠性，評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室之間結(jié)果的可比性。適用范圍：

參加衛(wèi)生部或省臨檢中心下發(fā)的PCR室間質(zhì)控檢測(cè)。程序：

3.1 質(zhì)控標(biāo)本的接收和驗(yàn)收：收到質(zhì)控血清后接收人員登記、簽字，根據(jù)質(zhì)控標(biāo)本的有關(guān)說(shuō)明對(duì)標(biāo)本的數(shù)量、批號(hào)、包裝進(jìn)行驗(yàn)收并將質(zhì)控標(biāo)本按要求置-20℃保存于標(biāo)本制備區(qū)。

3.2 質(zhì)控標(biāo)本的檢測(cè)按常規(guī)臨床標(biāo)本對(duì)待。

3.3 室間質(zhì)評(píng)樣本必須按實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作一樣進(jìn)行，由負(fù)責(zé)常規(guī)工作的人員測(cè)試，工作人員必須使用實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢測(cè)方法和試劑，不得特殊對(duì)待。

3.4 EQA樣本的檢測(cè)在部或省臨檢中心規(guī)定的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行，檢測(cè)結(jié)果的上報(bào)也必須在截止日期前上報(bào)。

3.5 室間質(zhì)評(píng)的檢測(cè)結(jié)果和反饋結(jié)果應(yīng)作討論分析，如有失控應(yīng)查找原因，采取相應(yīng)的措施，并作好記錄。

3.6 不得于其它實(shí)驗(yàn)室交流室間質(zhì)評(píng)的檢測(cè)結(jié)果。

試劑與耗材購(gòu)買驗(yàn)收及管理程序 目的：

保證PCR檢測(cè)所使用的試劑及耗材供貨渠道和質(zhì)量的穩(wěn)定、可靠而建立本程序。適用范圍：

適應(yīng)于實(shí)驗(yàn)室所購(gòu)的診斷試劑盒、實(shí)驗(yàn)耗材。程序：

3.1 試劑的購(gòu)買和管理

3.1.1試劑的購(gòu)買原則：檢測(cè)試劑應(yīng)與擴(kuò)增儀相配套，并三證（生產(chǎn)許可證、產(chǎn)品注冊(cè)證、經(jīng)營(yíng)許可證）齊全的商品試劑。

3.1.2 試劑的驗(yàn)收：供貨商送來(lái)的試劑由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人驗(yàn)收并簽字，項(xiàng)目操作人員負(fù)責(zé)試劑質(zhì)量驗(yàn)收（內(nèi)外包裝），試劑驗(yàn)收登記。

3.1.3 試劑的貯存：試劑登記后，及時(shí)放入試劑貯存區(qū)的冰箱，保存條件按說(shuō)明書規(guī)定進(jìn)行。

3.1.4 試劑的質(zhì)檢按SOP進(jìn)行。

3.2 耗材的購(gòu)買、驗(yàn)收和管理

3.2.1 購(gòu)買：實(shí)驗(yàn)負(fù)責(zé)人向科主任提交計(jì)劃，由科主任簽字同意并購(gòu)買。

3.2.2 驗(yàn)收：核對(duì)數(shù)量、規(guī)格，檢查外包裝是否破損。

3.2.3 貯存：消耗品購(gòu)進(jìn)后，按要求存入各區(qū)指定位置。

3.2.4 根據(jù)日常工作量定期檢查庫(kù)存、定期購(gòu)置，并做好記錄。

實(shí)驗(yàn)記錄管理制度 目的：

保證資料的記錄，完整、保存狀態(tài)在控。適用范圍：

適用于病人原始資料，實(shí)驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)室各種數(shù)據(jù)資料的記錄和保存。包括標(biāo)本接收記錄、檢驗(yàn)申請(qǐng)單，檢測(cè)結(jié)果記錄、室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果記錄，室間質(zhì)評(píng)結(jié)果，儀器使用維護(hù)記錄、環(huán)境溫度、濕度記錄等。程序：

3.1 每日工作應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度和相關(guān)SOP認(rèn)真執(zhí)行，同時(shí)及時(shí)完整填寫各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室工作記錄。

3.2 每個(gè)工作區(qū)配置專門的文件框、文件夾，放置本區(qū)域有關(guān)的各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室記錄。

3.3 年終，所有的實(shí)驗(yàn)室記錄本，裝進(jìn)文件盒里，并標(biāo)明年份，放進(jìn)文件柜里，以便查閱。

3.4 所有的實(shí)驗(yàn)室記錄,結(jié)果存根由科室建檔封存，專人保管至少5年。

3.5 注意保密，涉及醫(yī)療糾紛及特殊情況除外，本室無(wú)義務(wù)提供各種記錄給他人借閱或復(fù)印。

投訴處理程序 目的：

正確處理好“抱怨”，鞏固和完善實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系.適用范圍：

來(lái)自于患者，臨床醫(yī)護(hù)人員或?qū)嶒?yàn)室工作人員針對(duì)檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量、服務(wù)質(zhì)量或?qū)嶒?yàn)室管理等問(wèn)題的投訴。程序：

3.1 所有實(shí)驗(yàn)室工作人員要認(rèn)真對(duì)待病人或者醫(yī)生及其它部門人員就實(shí)驗(yàn)室工作所提出的投訴，對(duì)提出投訴的人員要做到語(yǔ)言文明，熱情接待。

3.2 由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)對(duì)投訴申訴進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人不在時(shí)由其委托人處理，實(shí)驗(yàn)室所有工作人員均有責(zé)任接待申訴者。

3.3 對(duì)投訴應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)記錄，包括日期、申訴人、申訴內(nèi)容、處理措施、處理者、聯(lián)系方式等。

3.4 對(duì)于當(dāng)時(shí)能解決的申訴應(yīng)及時(shí)處理，當(dāng)時(shí)不能解決的，要限時(shí)處理，并明確告知申訴者。

3.5 如投訴涉及到實(shí)驗(yàn)室操作程序是否符合《臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》、《臨床臨床分子生物實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》等，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人應(yīng)召集實(shí)驗(yàn)室工作人員討論，如實(shí)驗(yàn)室的操作程序確實(shí)不符合有關(guān)規(guī)定，應(yīng)重新修訂操作規(guī)程，并報(bào)科主任批準(zhǔn)后執(zhí)行。

當(dāng)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人無(wú)法滿意解決投訴時(shí)，移交醫(yī)務(wù)科并遵循醫(yī)務(wù)科處理程序和方法。

投訴處理記錄存檔，保存五年。

應(yīng)急處理程序 目的為避免因儀器設(shè)備發(fā)生故障和試劑盒發(fā)生質(zhì)量問(wèn)題而影響到臨床檢測(cè)報(bào)告的及時(shí)性和準(zhǔn)確性，特制定本程序。適用范圍

可能影響到檢測(cè)報(bào)告發(fā)出的儀器設(shè)備和試劑等。程序

3.1 本室負(fù)責(zé)人接到儀器設(shè)備故障的報(bào)警后，立即現(xiàn)場(chǎng)確認(rèn)異常情況的性質(zhì)和故障程度并及時(shí)排除。

3.2 儀器設(shè)備故障本室不能解決的，應(yīng)及時(shí)通知有關(guān)設(shè)備修理人員或供應(yīng)商，具體程序見儀器設(shè)備管理程序。對(duì)于發(fā)生故障的儀器設(shè)備，及時(shí)維修的同時(shí)，采取以下處理方法。

3.2.1 有滿足使用要求的替用設(shè)備的，啟用替用設(shè)備。

3.2.2 需借用其他部門儀器設(shè)備時(shí)，核實(shí)該設(shè)備的使用狀態(tài)良好后可借用。

3.2.3 替用、借用或備用設(shè)備的使用在滿足質(zhì)量要求的同時(shí)，必須同時(shí)滿足實(shí)驗(yàn)室管理措施（特別是防污染）的要求。

3.3 試劑盒質(zhì)量發(fā)生問(wèn)題，經(jīng)核實(shí)后，及時(shí)通知供貨商更換另一批次試劑，使用前需先作質(zhì)量檢測(cè)，合格后方可使用。

3.4 儀器設(shè)備故障或試劑質(zhì)量問(wèn)題不能得到解決如停電或試劑污染等，預(yù)期將會(huì)影響到檢測(cè)報(bào)告的及時(shí)發(fā)出，可將標(biāo)本送至其它實(shí)驗(yàn)室檢查（該實(shí)驗(yàn)室同樣應(yīng)為獲同類認(rèn)準(zhǔn)的PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室）；如已影響到報(bào)告的及時(shí)發(fā)出，應(yīng)向病人或相關(guān)病人或相關(guān)病區(qū)公告，取得病人和醫(yī)生的諒解。

3.5 影響到檢測(cè)報(bào)告發(fā)出的情況，應(yīng)在應(yīng)急處理登記表作記錄。

實(shí)驗(yàn)室保密制度 目的保護(hù)病人的隱私權(quán)，確保實(shí)驗(yàn)室工作的有序開展。適用范圍

本實(shí)驗(yàn)室所有工作人員。職責(zé)

3.1 實(shí)驗(yàn)室所有原始資料應(yīng)各自歸檔保存于專柜中，保存時(shí)間至少5年；所有病人資料和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)記錄非經(jīng)許可，一般人員不可查詢或借閱，特殊情況時(shí)必須在科主任或本室負(fù)責(zé)人同意的情況下方可查詢。

3.2 當(dāng)臨床科室要求電話報(bào)告結(jié)果時(shí)，核對(duì)其所查詢的病人姓名、病區(qū)床號(hào)等情況后，由室負(fù)責(zé)人或其授權(quán)者報(bào)告結(jié)果并登記醫(yī)生或護(hù)士姓名，并明確告知對(duì)方，實(shí)驗(yàn)的最終結(jié)果以檢測(cè)報(bào)告單為準(zhǔn)。

3.3 患者因故不能由本人親自拿取檢測(cè)報(bào)告而需親友代取時(shí)，代取報(bào)告者須出示檢測(cè)項(xiàng)目的繳費(fèi)發(fā)票，經(jīng)核對(duì)患者姓名、性別、年齡及檢測(cè)項(xiàng)目后方可發(fā)出報(bào)告。

實(shí)驗(yàn)室生物安全管理制度1、學(xué)習(xí)和遵守國(guó)家關(guān)于醫(yī)療服務(wù)安全、消防治安安全、生物安全防護(hù)、公共衛(wèi)生突發(fā)事件處理、危險(xiǎn)物品管理等方面的相關(guān)法律法規(guī)，提高安全知識(shí)，加強(qiáng)防范意識(shí)。2、科室主任是科室的安全管理負(fù)責(zé)人，每位職工對(duì)本崗位及值班期間的管理負(fù)責(zé)。3、科室安全管理小組由科主任、各專業(yè)組組長(zhǎng)組成。4、要把安全管理工作納入科室日常管理工作當(dāng)中。每季度至少一次全科的相關(guān)學(xué)習(xí)與宣傳。管理小組每季度至少有一次專題研究科室安全工作，每月一次安全工作自查，并納入每個(gè)人的績(jī)效考核。5、菌種、毒種、劇毒試劑、易燃、易爆物專柜存放，指定專人嚴(yán)加保管、定期檢查。領(lǐng)用時(shí)須主管人員和領(lǐng)用人員都在場(chǎng)，作好領(lǐng)用登記。6、在崗位職責(zé)、操作規(guī)程、值班及交接班等制度中，要明確規(guī)定醫(yī)療安全，生物安全防護(hù)、貴重儀器使用，劇毒藥品、易然易爆物品管理，電氣安全，防火、防盜、防不安全事故等有關(guān)內(nèi)容，并經(jīng)常檢查監(jiān)督，改進(jìn)落實(shí)。7、建立和不斷完善突發(fā)事件應(yīng)急處理預(yù)案。對(duì)實(shí)驗(yàn)室所發(fā)生的涉及安全的事件和處理情況應(yīng)及時(shí)按規(guī)定上報(bào)，并作好記錄。8、若在實(shí)驗(yàn)室檢查中發(fā)現(xiàn)疑似重大傳染病陽(yáng)性標(biāo)本，應(yīng)立即通知科主任及相關(guān)專業(yè)組長(zhǎng)，作進(jìn)一步確認(rèn)，通知醫(yī)務(wù)科、院感科或院總值班。9、若在實(shí)驗(yàn)室發(fā)生微生物或毒物外溢事故，或其它意外事故，立即按相關(guān)應(yīng)急規(guī)程作處理，并報(bào)告科主任及相關(guān)主管部門。

個(gè)人三級(jí)防護(hù)用品穿脫流程

穿

1、更衣：換穿專用工作服/鞋。

2、清潔手部衛(wèi)生：七步洗手法。

3、戴一次性帽子：佩戴后整理帽子至頭發(fā)、耳朵全部被包裹。

4、戴醫(yī)用防護(hù)口罩（N95）：一手托住口罩外側(cè)面，將口罩緊貼面部，另一手拉下方系帶至于頸后雙耳下，拉上方系帶至于頭頂部，注意避免系帶壓迫耳朵。塑形。行氣密性測(cè)試。使用中口罩如遇污染或潮濕，應(yīng)及時(shí)更換。

5、穿防護(hù)服：取防護(hù)服，注意避免接觸地面，檢查效期及完好情況。拉開拉鏈，先穿下半身，再穿上半身，后戴帽子，系好拉鏈、扣子、密封條，雙人互檢。若防護(hù)服未能完全貼合面部，可用膠帶輔助固定。使用中防護(hù)服如破損，應(yīng)及時(shí)更換。

6、戴護(hù)目鏡：一手托住護(hù)目鏡，另一手拉系帶至于頭頂部，調(diào)整位置，確保皮膚黏膜完全被防護(hù)用品遮蓋。

7、戴內(nèi)層手套：內(nèi)層手套最好為深色。檢查有無(wú)破損，穿戴后確保防護(hù)服袖口完全被包裹。手套如破損，應(yīng)及時(shí)更換。

8、穿靴套、穿隔離衣：檢查，穿著后確保背部完全被包裹。使用中隔離衣如遇血液體液污染或破損，應(yīng)及時(shí)更換。

9、戴外層手套：檢查有無(wú)破損，穿戴后確保隔離衣袖口完全被包裹。戴手套不能代替手衛(wèi)生；對(duì)多名患者進(jìn)行診療操作時(shí)，不同患者間應(yīng)更換手套；手套如破損，應(yīng)及時(shí)更換。

10、相互檢查。

脫

1、手消毒。

2、噴淋：兩人間距大于1m，由頭頂至鞋底z字形噴灑消毒液，注意噴灑鞋底以及避開面部。

3、脫隔離衣連同外層手套：脫時(shí)注意雙手避免觸碰隔離衣內(nèi)側(cè)，脫下的隔離衣避免觸碰身體前側(cè)，動(dòng)作輕緩，全程避免抖動(dòng)。將外層手套一同脫下。

4、手消毒。

5、摘護(hù)目鏡：上身稍前傾，閉合雙眼，雙手提起后方系帶摘下，摘下后將護(hù)目鏡至于指定消毒容器內(nèi)。全程避免觸碰護(hù)目鏡前側(cè)面。

6、手消毒。

7、脫防護(hù)服連同內(nèi)層手套、靴套、鞋套：一手拎住同側(cè)衣領(lǐng)，另一手拉開拉鏈、摘掉帽子后拎另一側(cè)衣領(lǐng)，順勢(shì)向外后方邊脫邊卷起防護(hù)服，動(dòng)作輕緩，全程避免抖動(dòng)。將內(nèi)層手套、鞋套、靴套一同脫下。

8、手消毒。

9、摘醫(yī)用N95防護(hù)口罩：上身稍前傾，屏息閉眼，雙手先取下方系帶，隨后再摘取上方系帶。全程避免觸碰口罩外側(cè)面。

10、手消毒。

11、摘一次性帽子：上身稍前傾，屏息閉眼，提起帽頂由后向前摘下。

12、洗手，沐浴。

壓力蒸汽滅菌器滅菌操作流程

一、滅菌前準(zhǔn)備：

a)接通電源，打開電源開關(guān)，待數(shù)控面板處于待機(jī)狀態(tài)，打開上蓋檢查密封墊與滅菌室開口處是否有污漬或灰塵并清潔；

b)加水：在滅菌器內(nèi)桶內(nèi)加入蒸餾水，所加水位必須至滅菌桶底板中心凹孔，連續(xù)使用時(shí)，必須在每次滅菌后補(bǔ)足水量，以免干燒而發(fā)生重大事故；

c)在排氣箱中加入蒸餾水，所加水位處于低水位標(biāo)志處，將排氣軟管接入排氣箱并檢查排氣軟管密封墊與排氣箱插孔結(jié)合密封，以免滅菌過(guò)程中蒸汽泄露造成事故；

d)物品擺放：將待高壓滅菌的物品予以妥善包扎，每包均放入滅菌效果化學(xué)指示卡和貼好滅菌指示膠帶，有順序的放入滅菌網(wǎng)籃內(nèi)，相互之間留有間隙，這樣有利于蒸汽的穿透，提高滅菌效果，注意不要堵塞溫度傳感器和插孔，否則導(dǎo)致控制不能或滅菌效果不良。

二、滅菌：

a)根據(jù)待滅菌物品選擇程序：①液體滅菌工序、②滅菌工序、③器具滅菌工序

b)工序設(shè)定：按下“設(shè)定/確認(rèn)”，設(shè)定項(xiàng)目開始閃爍，按“▲”、“可以調(diào)節(jié)當(dāng)前項(xiàng)目，再次按“設(shè)定/確認(rèn)”使下一設(shè)定項(xiàng)目開始閃爍，所有項(xiàng)目設(shè)定完畢最后按“設(shè)定/確認(rèn)”會(huì)發(fā)出“嗶”的蜂鳴，設(shè)定的項(xiàng)目即保存在當(dāng)前程序中；

c)工序滅菌設(shè)定：液體滅菌工序：121℃/15min，滅菌工序：121℃/30min，器具滅菌工序：121℃/30min；

d)滅菌：按下“開始”，儀器開始工作，蓋子鎖指示燈亮，此時(shí)不能打開上蓋也不能更改工序程序；

e)開封：當(dāng)滅菌完成后，時(shí)間顯示欄為“---”，按下“停止”，確認(rèn)壓力表顯示為0，溫度顯示在60℃以下，可打開上蓋取出被滅菌物。

三、滅菌后清潔：

一天滅菌完成后，接上膠管打開放水閥將加熱用水排干并清潔滅菌室，蓋上上蓋關(guān)閉電源，長(zhǎng)期停止使用時(shí)關(guān)閉電源主開關(guān)并斷開電源。

紫外消毒操作及維護(hù)程序 目的對(duì)傳入潔凈區(qū)及無(wú)菌生產(chǎn)區(qū)的物品進(jìn)行紫外滅菌，規(guī)范紫外燈的使用、加強(qiáng)紫外燈的操作確認(rèn)，保其滅菌功能 適用范圍

適用于本科室所有紫外燈使用操作包括區(qū)域消毒紫外燈 職責(zé)

3.1 操作人員按本規(guī)程使用和衛(wèi)生清潔。

3.2 維修人員按本規(guī)程維修和保養(yǎng)

4主要技術(shù)參數(shù)

4.1正常工作條件;

a.環(huán)境溫度: 5-40C

b.相對(duì)濕度: 80%

c.電源: 220V+ 22V 50Hz+1Hz

4.2定時(shí)范圍: 0-120分鐘，其最大定時(shí)誤差<15min(帶遙控的有306090120150五檔選擇)

4.3消毒車采用的消毒燈管符合GB19258的規(guī)定。

4.4熔斷器規(guī)格: FUSES 2Ax205維護(hù)保養(yǎng)操作流程

5.1打開保護(hù)門，取出燈臂，并緩慢抬至所需高度即可自行鎖定;

5.2插上電源，開啟開關(guān)，順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)定時(shí)器(帶遙控器的，通過(guò)面板上按鍵或者遙控器定時(shí)啟動(dòng))，設(shè)定消毒時(shí)間，每次照射90分鐘以上

5.3人員離開現(xiàn)場(chǎng)，殺菌燈工作;

5.4消毒完畢，定時(shí)器自動(dòng)關(guān)閉燈管電源;

5.5使用完畢后，關(guān)閉啟動(dòng)開關(guān)，拔下電源插頭，用手托起燈臂，向上抬至最大角度即可解鎖，緩慢放下燈臂入門內(nèi)，關(guān)上保護(hù)門。

6注意事項(xiàng)

6.1 定時(shí)器必須按順時(shí)針方向使用，嚴(yán)禁反方向使用;

6.2使用前應(yīng)進(jìn)行通電試驗(yàn)，電源必須裝有接地線，以防觸電;

6.3消毒車在使用一段時(shí)間后，燈管表面如有灰塵，應(yīng)用酒精棉球或紗布擦凈燈管，以免影響效果;

6.4消毒燈工作時(shí)，人員必須離開現(xiàn)場(chǎng)，嚴(yán)禁在有人狀態(tài)下使用，以防燒傷眼睛和皮膚;

6.5本產(chǎn)品與電網(wǎng)電源切斷裝置為電源插頭，在維修或待用時(shí)應(yīng)拔去電源插頭;

6.6經(jīng)包裝后的消毒車應(yīng)存放在干燥、通風(fēng)良好、無(wú)腐蝕性物質(zhì)的室內(nèi);

6.7熔斷器更換時(shí)，必須拔掉電源插頭,以防觸電:

6.8熔斷器更換時(shí)，必須由專業(yè)維修人員進(jìn)行操作。