第一篇：IP實(shí)驗(yàn)步驟基本實(shí)驗(yàn)步驟

IP實(shí)驗(yàn)步驟 基本實(shí)驗(yàn)步驟

(1)收獲細(xì)胞，加入適量細(xì)胞IP裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑)，冰上或者4?裂解30min，12,000g離心30 min后取上清;(2)取少量裂解液以備Western blot分析，剩余裂解液將1μg相應(yīng)的抗體和10-50 μl protein A/G-beads加入到細(xì)胞裂解液，4?C緩慢搖晃孵育過(guò)夜;(3)免疫沉淀反應(yīng)后，在4?C 以3,000 g速度離心5 min，將protein A/G-beads離心至管底;將上清小心吸去，protein A/G-beads用1ml裂解緩沖液洗3,4次;最后加入15μl的2×SDS 加樣緩沖液，沸水煮10分鐘;(4)SDS-PAGE, Western blotting或進(jìn)行質(zhì)譜分析。

一、樣品處理: 免疫沉淀實(shí)驗(yàn)成功與否，第一步處理樣品非常關(guān)鍵。免疫沉淀實(shí)驗(yàn)本質(zhì)上是處于天然構(gòu)象狀態(tài)的抗原和抗體之間的反應(yīng)，而樣品處理的質(zhì)量決定了抗原抗體反應(yīng)中的抗原的質(zhì)量，濃度以及抗原是否處于天然構(gòu)象狀態(tài)。所以制備高質(zhì)量的樣品以用于后續(xù)的抗體-agarose beads孵育對(duì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)是否成功非常關(guān)鍵。在這個(gè)環(huán)節(jié)中，除了要控制所有操作盡量在冰上或者4?完成外，最為關(guān)鍵的是裂解液的成份。

用于免疫沉淀實(shí)驗(yàn)的樣品一般是原代培養(yǎng)細(xì)胞裂解液或者細(xì)胞系裂解液。我們以常用的RIPA裂解液為例(主要含有pH7.4左右的離子緩沖液，接近生理濃度下的NaCl，一定比例的去垢劑和甘油以及各類蛋白酶抑制劑等)來(lái)說(shuō)明其各主要成份的用途，進(jìn)而幫助我們?nèi)绾吾槍?duì)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮筒煌牡鞍踪|(zhì)特性來(lái)選擇最佳的裂解液。

a(緩沖液:離子緩沖液常采用pH7.4的Hepes或者Tris-Cl。b(NaCl濃度一般習(xí)慣用150 mM，這主要是因?yàn)?50 mM接近生理濃度，不會(huì)破壞蛋白質(zhì)之間的相互作用。然而細(xì)胞內(nèi)部的NaCl濃度并不是均一的，局部NaCl的濃度可以低到50 mM，150 mM的NaCl有可能會(huì)破壞這個(gè)區(qū)域的蛋白質(zhì)相互作用。因此裂解液配方最佳的NaCl濃度要視所分析的蛋白的亞細(xì)胞定位而定。

c(甘油由于其粘性，可以對(duì)蛋白質(zhì)之間的相互作用起到一個(gè)很好的保護(hù)作用。一般添加10%的甘油有助于穩(wěn)定蛋白質(zhì)之間的相互作用。

d(裂解液中的去垢劑可以裂解細(xì)胞質(zhì)膜，也同時(shí)破壞了許多細(xì)胞器的膜，從而釋放了其中儲(chǔ)存的許多蛋白酶。而由于用于免疫沉淀實(shí)驗(yàn)的去垢劑作用比較溫和，因此蛋白酶的活性大部分得以保存。還有一部分蛋白酶來(lái)自胞質(zhì)中，主要由于其抑制蛋白或者其活性抑制環(huán)境受到改變后從而恢復(fù)了蛋白酶活性。因此，添加蛋白酶抑制劑對(duì)于防止目的蛋白的降解從而完成免疫沉淀實(shí)驗(yàn)非常關(guān)鍵。一般主要通過(guò)添加EDTA抑制金屬蛋白酶，通過(guò)Protease Cocktail(多種蛋白酶抑制劑混合物)可以抑制蛋白酶。

e(去垢劑對(duì)于免疫沉淀實(shí)驗(yàn)尤其是免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)是一個(gè)非常關(guān)鍵的因素。不同的去垢劑種類和不同的去垢劑濃度主要通過(guò)影響以下三個(gè)因素來(lái)影響免疫沉淀效果:-細(xì)胞質(zhì)/器膜的通透性:因?yàn)樵S多目的蛋白都定位在細(xì)胞器中，所以必須先將這些蛋白釋放出來(lái)，抗體才能與之反應(yīng)。

-膜蛋白的釋放:許多膜蛋白的構(gòu)象對(duì)去垢劑種類和濃度非常敏感，因此針對(duì)這類蛋白的免疫沉淀實(shí)驗(yàn)，需要謹(jǐn)慎地嘗試多種去垢劑以及不同濃度。

-蛋白相互作用:不同去垢劑對(duì)不同性質(zhì)的蛋白質(zhì)的相互作用影響程度不一樣，需要根據(jù)具體蛋白的特性進(jìn)行分析選擇去垢劑種類和濃度。而由于何種去垢劑適應(yīng)作用于何種蛋白質(zhì)現(xiàn)在很難精準(zhǔn)預(yù)測(cè)，所以一個(gè)更為切實(shí)可行的辦法就是通過(guò)具體實(shí)驗(yàn)篩選合適的去垢劑種類和濃度。

二、抗體-agarose beads孵育

裂解細(xì)胞，離心并去除不可溶的膜組份后，上清可以儲(chǔ)存在-80?保存3個(gè)月，但最好能夠使用新鮮制備的細(xì)胞裂解液上清去進(jìn)行抗體-agarose beads孵育實(shí)驗(yàn)?？贵w可以先加入上清中與樣品孵育數(shù)小時(shí)后再加入Protein A或者G beads孵育過(guò)夜，也可以同時(shí)加入抗體和Protein A或者G beads孵育過(guò)夜。一般選擇1mg總蛋白(1mg/ml)對(duì)應(yīng)添加1 ug抗體，最高可以添加至5 ug抗體，過(guò)多的抗體會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性。這個(gè)步驟中關(guān)鍵因素在于選擇合適的陰性對(duì)照。一般選用加同樣量的IgG，但更為妥當(dāng)?shù)姆椒ㄊ沁x擇針對(duì)胞內(nèi)其它無(wú)關(guān)目的蛋白的一抗做對(duì)照。例如，做膜蛋白A的免疫沉淀，選擇膜蛋白B來(lái)做陰性對(duì)照，只要確認(rèn)二者之間沒(méi)有相互作用;而做胞質(zhì)可溶性蛋白C的免疫沉淀，則選擇另外一個(gè)可溶性蛋白D來(lái)做陰性對(duì)照。同時(shí)，為避免Protein A或者G beads有(非)特異性吸附從而造成免疫沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果的假陽(yáng)性，一般在加入目的蛋白抗體之前，預(yù)先將Protein A或者G beads與細(xì)胞裂解液孵育數(shù)小時(shí)，然后取上清用于后續(xù)的抗體-agarose beads孵育。

同時(shí)，Protein A或者G beads對(duì)不同類型的抗體親和力不同，結(jié)合一抗的種屬和Ig亞型，選擇合適的Protein A或者G beads也是決定免疫沉淀實(shí)驗(yàn)成功與否的一個(gè)重要因素。一般推薦使用Protein A和Protein G beads的混合物，這樣可以達(dá)到最佳實(shí)驗(yàn)效果，而且省去了許多選擇的煩惱。

三、抗體-agarose beads復(fù)合物洗滌: 除了選擇特異性好的抗體以及選擇合適的陰性對(duì)照外，去除免疫沉淀實(shí)驗(yàn)非特異性的一個(gè)辦法是對(duì)抗體-agarose beads復(fù)合物進(jìn)行多次洗滌。一般洗滌緩沖液使用和裂解液一樣的配方，但去除甘油，以減少由于甘油的粘性帶來(lái)的非特異性吸附。針對(duì)不同的實(shí)驗(yàn)要求，還可以通過(guò)更改NaCl的濃度以及去垢劑的比例，種類來(lái)達(dá)到去除非特異性吸附的效果。例如，針對(duì)單純的免疫沉淀而非免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)或者雖然是進(jìn)行免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，但蛋白質(zhì)之間的結(jié)合比較牢靠，可以考慮使用低濃度(0.2-0.5%)的SDS洗滌抗體-agarose beads復(fù)合物，這樣可以去除絕大部分非特異性相互作用。

四、鑒定

免疫沉淀實(shí)驗(yàn)用途非常廣泛(見(jiàn)IP: Q&A)，而且基于最基本的免疫沉淀實(shí)驗(yàn)衍生出了許多免疫沉淀相關(guān)實(shí)驗(yàn)手段(比如免疫共沉淀，染色質(zhì)免疫沉淀和RNA-蛋白免疫沉淀)，因此，免疫沉淀實(shí)驗(yàn)的鑒定方法主要視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ā?/p>

我們?cè)诒臼謨?cè)中主要簡(jiǎn)單概述常見(jiàn)的免疫沉淀之后的WB檢測(cè)需要注意的實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)。由于

免疫沉淀實(shí)驗(yàn)使用目的蛋白抗體加Protein A/G beads與樣品孵育，因此在最后離心獲得抗體-agarose beads復(fù)合物后，eppendorf管中主要含有抗體，目的蛋白，Protein A/G beads以及一些其它非特異性作用蛋白。其中，抗體和目的蛋白以及Protein A/G beads三者之間是以非共價(jià)健結(jié)合在一起，只有Protein A/G與agarose beads是共價(jià)結(jié)合在一起的。因此，最后經(jīng)過(guò)添加含巰基乙醇的加樣緩沖液以及煮沸變性并離心出去Protein A/G beads后，eppendorf管只有抗體和目的蛋白以及少量非特異性吸附蛋白。這樣SDS-PAGE中就含有目的蛋白和抗體二種蛋白，由于加樣緩沖液中含有巰基乙醇從而導(dǎo)致抗體的重鏈與輕鏈之間的二硫鍵被破壞從而使得抗體分子變成重鏈分子(55KD)和輕鏈分子(25KD)。因此，WB顯色反應(yīng)中除了能檢測(cè)到目的蛋白外，如果所使用的二抗與用于免疫沉淀實(shí)驗(yàn)的抗體分子屬于同一種屬的話，還能檢測(cè)到重鏈和輕鏈分子。通常用于免疫沉淀的抗體量非常大(1ug)，所以當(dāng)目的蛋白的大小接近重鏈或者輕鏈分子時(shí)，重鏈或者輕鏈分子的WB信號(hào)常常由于信號(hào)過(guò)強(qiáng)而導(dǎo)致影響對(duì)目的蛋白的WB結(jié)果判斷。

針對(duì)上述情況，通常有二種解決辦法: a(選擇不同種屬的抗體分別進(jìn)行免疫沉淀實(shí)驗(yàn)和WB實(shí)驗(yàn)，這樣再選擇一個(gè)種屬交叉反應(yīng)比較弱或者無(wú)種屬交叉反應(yīng)的二抗進(jìn)行WB實(shí)驗(yàn)，就可以大大減弱重鏈和輕鏈分子的WB信號(hào)。

b(使用交聯(lián)劑將抗體和Protein A/G beads交聯(lián)，然后通過(guò)添加不含巰基乙醇的加樣緩沖液處理目的蛋白-抗體-agarose beads復(fù)合物，最后離心去除抗體-agarose beads復(fù)合物，上清中只留下目的蛋白。

免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)原理

IP是利用抗原蛋白質(zhì)和抗體的特異性結(jié)合以及細(xì)菌蛋白質(zhì)的“protein A/G"特異性地結(jié)合到抗體(免疫球

蛋白)的FC片段的現(xiàn)象開(kāi)發(fā)出來(lái)的方法。目前多用protein A/G預(yù)先結(jié)合在argarose beads上，使之

與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后，beads上的prorein A/G就能達(dá)到吸附抗原的目的。通過(guò)低速離心，可以從含有目的抗原的溶液中將目的抗原與其它抗原分離。

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法，是確定兩種蛋白質(zhì)是否在生理?xiàng)l件下有相互作用的有效方法。其原理是:當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái)。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來(lái)。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用蛋白。

白與蛋白 尋找新的 經(jīng)由免疫共沉淀然后通過(guò)質(zhì)譜或者的相互 相互作用 WB鑒定新的相互作用蛋白 作用 蛋白

驗(yàn)證目的 經(jīng)由免疫共沉淀然后通過(guò)使用待測(cè) 蛋白和 蛋白 待測(cè)蛋白 的抗體進(jìn)行WB實(shí)驗(yàn)可以確定目的蛋 是否有 白

相互作用 和待測(cè)蛋白是否有相互作用 通過(guò)對(duì)經(jīng)由免疫共沉淀而得到的DNA 片段進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)可以獲得DNA片研究蛋白與DNA的動(dòng)態(tài)作用 段的序列信息以及目的蛋白與DNA 之間的動(dòng)態(tài)作用信息

通過(guò)使用針對(duì)組蛋白不同修飾位點(diǎn)的研究蛋白 抗體進(jìn)行染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)去檢測(cè)

染色質(zhì) 與DNA 研究組蛋白的各種共價(jià)修飾 組蛋白的不同修飾狀態(tài)和目的基因啟

免疫沉淀 的相互 與基因表達(dá)之間的關(guān)系 動(dòng)子之間的動(dòng)態(tài)相互作用，從而研究作用 組蛋白修飾與目的基因表達(dá)之間的關(guān)

系

基于CHIP的原理發(fā)展出來(lái)的RIP 研究蛋白與RNA的相互作用(RNA-IP)技術(shù)可以用來(lái)研究目的蛋 白與RNA之間的相互作用信息

我該選擇什么樣的抗體做免疫沉淀，免疫共沉淀和RNA免疫沉淀以及染色質(zhì)免疫沉淀, 在所有免疫沉淀相關(guān)實(shí)驗(yàn)中，抗原的起始濃度相對(duì)其它免疫相關(guān)實(shí)驗(yàn)(WB和IF等)要低得多，所以對(duì)抗體的親和力相對(duì)其它實(shí)驗(yàn)(WB和IF等)提出了很高的要求，這就需要使用高親和力的抗體去進(jìn)行免疫沉淀相關(guān)實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，由于免疫沉淀相關(guān)實(shí)驗(yàn)主要是在生理?xiàng)l件性進(jìn)行，所以需要抗體識(shí)別蛋白的天然表面構(gòu)象，因此選擇的抗體其針對(duì)的抗原決定蔟需要暴露在蛋白表面。這些因素對(duì)制備能成功應(yīng)用于IP實(shí)驗(yàn)的抗體提出了很高的要求: a(用于免疫的蛋白抗原其構(gòu)象需要盡量接近目的蛋白的天然構(gòu)象或者用于免疫的多肽盡量暴露在目的蛋白的表面。獲得接近天然構(gòu)象的蛋白抗原的途徑有很多，主要有天然提取，原核表達(dá)重組蛋白以及真核表達(dá)重組蛋白三種方式。這其中，就蛋白構(gòu)象角度而言，天然提取是最佳途徑，但這種方法受材料來(lái)源限制和純化方法復(fù)雜等多因素影響，一般很少采用。原核表達(dá)因?yàn)槌杀镜土?，操作方便最為受歡迎，但其受表達(dá)環(huán)境與大部分蛋白天然存在環(huán)境差別巨大，構(gòu)象失真情況嚴(yán)重，抗原的構(gòu)象質(zhì)量有嚴(yán)重問(wèn)題。大規(guī)模瞬時(shí)真核表達(dá)是近期新興的表

達(dá)系統(tǒng)，具有表達(dá)環(huán)境接近天然，操作方便等諸多優(yōu)點(diǎn)，是獲取具有天然構(gòu)象蛋白抗原的首選工具。

b(親和力要比普通的抗體應(yīng)用要求高得多。多克隆抗體由于可以結(jié)合目的抗原的多個(gè)抗原決定簇，所以在親和力方面是首選。但考慮到特異性，獲得單克隆抗體群是更好的選擇。具體優(yōu)缺點(diǎn)總結(jié)如下表。

單克隆抗體群(由一個(gè)免疫原產(chǎn)生的多 多克隆抗體 單克隆抗體 個(gè)單克隆抗體混合物)抗體抗原作由抗體的親和力決定(極佳極佳 極佳 用信號(hào)強(qiáng)度 或者極弱)通常很好，但有時(shí)會(huì)極佳(由于選擇可以進(jìn)行IP且沒(méi)有交特異性 極佳，但有時(shí)會(huì)有交叉反應(yīng) 有非特異性相互作用 叉反應(yīng)的抗體組成單克隆抗體群)親和力高(由于抗體特異性好，親和力高(由于選擇可以進(jìn)可以與目的蛋白的多特異性好，且可以無(wú)限量供優(yōu)點(diǎn) 行IP且沒(méi)有交叉反應(yīng)的抗體組成單克個(gè)抗原決定蔟相互作應(yīng) 隆抗體群)用)需要篩選親和力高的抗體;能夠篩選得到的符合條件的單克隆并非特異性相互作用很缺點(diǎn) 抗原表位可能會(huì)被相互作不多，所以單克隆抗體群也就不容易獲難去除 用蛋白遮蔽 得

免疫沉淀效由抗體的親和力決定(極佳極佳(由于選擇可以進(jìn)行IP且沒(méi)有交極佳(由于親和力高)果 或者極弱)叉反應(yīng)的抗體組成單克隆抗體群)由抗體的親和力決定和抗通常很好，但有時(shí)非免疫共沉淀原表位是否被相互作用蛋極佳(由于選擇可以成功進(jìn)行IP且沒(méi)特異性相互作用會(huì)帶效果 白遮蔽決定(極佳或者極有交叉反應(yīng)的抗體組成單克隆抗體群)來(lái)假陽(yáng)性 弱)由抗體的親和力決定和抗

通常很好，但有時(shí)非原表位是否被遮蔽或者以染色質(zhì)免疫極佳(由于選擇可以成功進(jìn)行IP且沒(méi)特異性相互作用會(huì)帶及抗原表位是否被交聯(lián)實(shí)沉淀效果 有交叉反應(yīng)的抗體組成單克隆抗體群)來(lái)假陽(yáng)性 驗(yàn)所破壞決定(極佳或者極

弱)

第二篇：實(shí)驗(yàn)步驟

2.2.3.1最佳蒸煮時(shí)間測(cè)定

參照Aproved Method 66-50（AACC2000）。將面片切成長(zhǎng)10cm的面條，取大約30根，用500mL蒸餾水在電磁爐上，以小火烹煮（尚朋堂的電磁爐在90℃檔上，水處于微沸狀態(tài)）。煮3min后每30s取一根面條，用小刀切開(kāi)橫截面，觀察橫截面有無(wú)白心，記錄白心剛好消失的時(shí)間為最佳蒸煮時(shí)間。

2.2.3.2面條吸水率測(cè)定

準(zhǔn)確稱取25g左右(精確到0.01g)面條放入500mL沸騰的蒸餾水中煮到最佳蒸煮時(shí)間，立即用漏勺撈出，再用50mL蒸餾水沖淋，收集煮面及沖淋的水，室溫下將面條瀝干5分鐘，準(zhǔn)確稱量，計(jì)算公司如下：

公式：面條吸水率（％）=（W2－W1）/ W1×100

W2 —蒸煮后面條重量，g

W1 —蒸煮前面條重量，g

2.2.3.3蒸煮損失率測(cè)定

預(yù)先稱收集有煮面及沖淋的水500mL燒杯的重量（精確至0.01g），在溫度為105℃的烘箱內(nèi)將其蒸發(fā)干，干燥后的燒杯冷卻后稱重，直至恒重，精確至0.01g。

M2公式：L??100%M1*(100?M)

M2—烘至恒重干物質(zhì)重量，g

M1—煮前面條質(zhì)量，g

M—面條含水量，%

2.2.3.4熟面拉伸（Kieffer）測(cè)定

將速凍面塊復(fù)熱后，在冷水（0~5℃）中浸泡1min后在質(zhì)構(gòu)儀TA-XT2i上用A/KIE探頭測(cè)

定，每組數(shù)據(jù)測(cè)6個(gè)平行樣，取平均值。參數(shù)設(shè)定如下：

參數(shù)設(shè)定：

Test Made and Option: Measure force in tension

Pre Test Speed: 2.0mm/secTest Speed: 3.0mm/sec

Post-Test Speed: 10.0mm/secDistance: 40mm

Trigger Force: 5.0g

2.2.3.5剪切力（Firmness）測(cè)定

將速凍面塊復(fù)熱后，在冷水（0~5℃）中浸泡1min后在質(zhì)構(gòu)儀上選用A/LKB-F輕型切刀測(cè)

定，每組數(shù)據(jù)測(cè)6個(gè)平行樣，取平均值。

參數(shù)設(shè)定：

Test Made and Option: Measure force in compression

Pre Test Speed: 1.0mm/secTest Speed: 0.5mm/sec

Post-Test Speed: 10.0mm/secForce: 2000.0g

Trigger Force: 5.0g

2.2.3.6TPA（質(zhì)構(gòu)剖面分析Texture Profile Analysis）測(cè)定

將速凍面塊復(fù)熱后，在冷水（0~5℃）中浸泡1min后，用TPA探頭測(cè)定，鋁合金材料，探頭寬度與長(zhǎng)度分別為：5mm和50mm。TPA測(cè)試是通過(guò)兩次下壓完成對(duì)樣品的測(cè)試，每次下壓過(guò)程均包含下壓和收回兩個(gè)階段。TPA各參數(shù)設(shè)置及意義如下：

參數(shù)設(shè)定：

Pre-Test Speed: 1.0mm/secTest Speed:0.80mm/sec Post-Test Speed: 0.8mm/secTarget Mode: Strain Strain: 70.00%Time: 3.00sec Trigger Force: 5.0gTare Mode:

隨著蒸煮時(shí)間的增加，吸水率隨之增大，蒸煮損失也逐漸變大。這是因?yàn)殡S著面條蒸煮時(shí)間增加，淀粉的糊化更加完全，吸水量逐漸增加，同時(shí)面條淀粉和蛋白的溶出量也增加。

表2-4 蒸煮時(shí)間對(duì)速凍熟面質(zhì)構(gòu)品質(zhì)的影響

剪切 拉伸 拉伸距

蒸煮時(shí)間

TPA

力(g)力(g)離(mm)硬度(g)粘著性 彈性 粘聚性 咀嚼性(g)回復(fù)性 483.08 27.12 85.29 1068.44 504.91 26.98 87.01 1117.30 460.09 24.68 78.58 1028.97 460.8022.37 77.18 1019.39

28.47 0.93 28.14 0.95 25.36 0.95 23.57 0.93

0.54 0.54 0.53 0.53

540.19 567.69 518.68 507.31

0.40 0.41 0.41 0.438 10 12

由表3-2可以看出，在不同蒸煮時(shí)間下，煮8min時(shí)質(zhì)構(gòu)測(cè)得的剪切力、拉伸指標(biāo)和TPA指標(biāo)都較強(qiáng)，而煮10min，12min，使得面條蒸煮時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，所以速凍熟面品質(zhì)變差，面條整體口感偏軟。

蒸煮過(guò)程對(duì)面條品質(zhì)變化影響很大，因此要嚴(yán)格控制蒸煮時(shí)間及其蒸煮方式。本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，蒸煮8min時(shí)面條內(nèi)部白心全部消失，且質(zhì)構(gòu)指標(biāo)和蒸煮指標(biāo)表現(xiàn)最好。因此，確定蒸煮時(shí)間為8min。

隨著復(fù)熱時(shí)間的增加，吸水率隨之增大，蒸煮損失也逐漸變大。

表2-7 復(fù)熱時(shí)間對(duì)速凍熟面質(zhì)構(gòu)品質(zhì)的影響

復(fù)熱時(shí)間 40 60 80 100

剪切 拉伸 拉伸距

TPA

力(g)力(g)離(mm)硬度(g)粘著性 彈性 粘聚性 咀嚼性(g)回復(fù)性 471.69 83.0026.29 1015.9626.97 0.95 472.30 82.4525.50 1001.7923.60 0.92 455.80 78.4123.63

972.8133.22 0.94

0.55 0.54 0.54 0.54

527.85 517.65 513.55 506.63

0.43 0.43 0.42 0.43

455.95 77.6322.718 980.4530.12 0.95

由表2-7可以看出，在不同復(fù)熱時(shí)間下，復(fù)熱40s和60s時(shí)質(zhì)構(gòu)測(cè)得的剪切力、拉伸指標(biāo)和TPA指標(biāo)都較強(qiáng)，而復(fù)熱80s，100s，使得速凍熟面復(fù)熱時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，所以速凍熟面品質(zhì)變差，面條整體口感偏軟。

本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，復(fù)熱60s時(shí)速凍面塊剛好全部化開(kāi)，且質(zhì)構(gòu)指標(biāo)和蒸煮指標(biāo)表現(xiàn)最好。因此，確定復(fù)熱時(shí)間為60s。

第三篇：會(huì)計(jì)電算化實(shí)驗(yàn)步驟

用友U8V11實(shí)驗(yàn)步驟：

1.程序——用友U8V11——系統(tǒng)服務(wù)——應(yīng)用服務(wù)器配置——數(shù)據(jù)庫(kù)服務(wù)器——增加— —數(shù)據(jù)源：default、數(shù)據(jù)庫(kù)服務(wù)器：本機(jī)名（如不知道本機(jī)名，可以通過(guò)單擊右下角類似主機(jī)的圖標(biāo)查看，服務(wù)器名即本機(jī)名）——測(cè)試連接——確定。

2.程序——用友U8V11——系統(tǒng)服務(wù)——系統(tǒng)管理——系統(tǒng)——注冊(cè)。接下來(lái)會(huì)彈出一個(gè) 對(duì)話框，要確保第一行是本機(jī)名，如果不是，請(qǐng)更改成本機(jī)名。倒數(shù)第二行會(huì)自己出來(lái)，如果自己沒(méi)有出來(lái)，請(qǐng)等一等，出來(lái)后，點(diǎn)擊登錄。賬套——建立——新建空白賬套——下一步——賬套號(hào)（學(xué)號(hào)后三位）賬套名稱（姓名班級(jí)，如張三文會(huì)123-6）；啟用會(huì)計(jì)期間（和手工帳的會(huì)計(jì)期間保持一致）——下一步——單位名稱（手工賬單位名稱）——下一步（注意行業(yè)性質(zhì)是2007 年新會(huì)計(jì)準(zhǔn)則科目，其他不用變）——下一步（對(duì)勾全打上）——下一步——完成——是。

編碼方案：第一行 4 2 2 2 2 2 2 2 2。其他行不用填寫——確定。數(shù)據(jù)精度：不用變——確定。

權(quán)限——用戶——增加（編號(hào)：001，姓名：自己的名字，所屬角色：賬套主管。編號(hào)：002-005是小組其他成員的名字，角色是普通員工）。

權(quán)限——權(quán)限——修改（001號(hào)所有的都打?qū)矗?02-005號(hào)只在基本信息和財(cái)務(wù)會(huì)計(jì)前面打鉤）——保存。

3、程序——用友U8V11——企業(yè)應(yīng)用平臺(tái)。此時(shí)會(huì)彈出一個(gè)對(duì)話框：第一行是本機(jī)名。第二行是001（即賬套主管的編號(hào)），第四行會(huì)自動(dòng)過(guò)入。日期是之前設(shè)置的日期——登錄。

進(jìn)入后：

1、增加會(huì)計(jì)科目。基礎(chǔ)檔案——財(cái)務(wù)——會(huì)計(jì)科目——增加（增加二級(jí)會(huì)計(jì)科目點(diǎn)擊增加，增加三級(jí)會(huì)計(jì)科目點(diǎn)擊增加下級(jí)）。

2、錄入期初余額。財(cái)務(wù)會(huì)計(jì)——總賬——期初——期初余額。錄入完畢后，進(jìn)行試算，試算平衡后，開(kāi)始填制憑證。3.填制憑證。財(cái)務(wù)會(huì)計(jì)——總賬——憑證——填制憑證。此時(shí)會(huì)讓設(shè)置憑證，選擇最長(zhǎng)的 那個(gè)，即：現(xiàn)金收款憑證、現(xiàn)金付款憑證、銀行收款憑證、銀行付款憑證、轉(zhuǎn)賬憑證 之后定義憑證類別：

現(xiàn)金收款憑證 借方必有 1001 現(xiàn)金付款憑證 貸方必有 1001 銀行收款憑證 借方必有 1002 銀行付款憑證 貸方必有 1002 轉(zhuǎn)賬憑證 憑證必?zé)o 1001、1002 4.然后開(kāi)始逐筆輸入憑證。

輸入完后：退出當(dāng)前系統(tǒng)，換一個(gè)人開(kāi)始下一步的工作。

比如換成002，進(jìn)入后：

1.財(cái)務(wù)會(huì)計(jì)——總賬——憑證——主管簽字。2.財(cái)務(wù)會(huì)計(jì)——總賬——憑證——審核憑證。3.財(cái)務(wù)會(huì)計(jì)——總賬——憑證——記賬 4.財(cái)務(wù)會(huì)計(jì)——總賬——期末——對(duì)賬。]] 完畢后開(kāi)始截實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求的憑證的圖片和明細(xì)賬的圖片。

截圖完畢后，退出當(dāng)前系統(tǒng)，換成001登陸，填制UFO報(bào)表。1． 財(cái)務(wù)會(huì)計(jì)——總賬——UFO報(bào)表。2． 文件——新建

3． 格式——報(bào)表模板——所在行業(yè)選2007年新會(huì)計(jì)制度科目。財(cái)務(wù)報(bào)表選資產(chǎn)負(fù)債表— —確認(rèn)——確定。此時(shí)會(huì)出現(xiàn)帶有公式單元的資產(chǎn)負(fù)債表。4． 雙擊左下角格式，使之變成數(shù)據(jù)二字。5． 數(shù)據(jù)——關(guān)鍵字——錄入——確認(rèn)——是。

6． 利潤(rùn)表也是這樣編制的。編制完成后，可以對(duì)資產(chǎn)負(fù)債表和利潤(rùn)表截圖。

第四篇：中考化學(xué)實(shí)驗(yàn)操作考試基本步驟

實(shí)驗(yàn)

一、制二氧化碳并檢驗(yàn)二氧化碳的部分性質(zhì)

實(shí)驗(yàn)步驟：1.取一支小試管，向其中滴加少量石蕊試液（膠頭滴管必須垂直懸空在試管口上方），然后

將裝有石蕊試液的試管放在試管架上待用；

2.取一支大試管橫放，用鑷子夾取2—3塊大理石放在試管口，再把試管緩緩豎直，使大理石滑落到試管底部；

3.取稀鹽酸，瓶塞倒放，標(biāo)簽向著手心，容器口緊挨，使稀鹽酸緩緩加入裝有大理石的試管中，鹽酸用量不超過(guò)試管容積的三分之一（鹽酸加好后應(yīng)立即蓋上瓶塞，將試劑瓶放回原處），塞緊橡皮塞，將試管固定在鐵架臺(tái)上，鐵夾夾持在試管中上部；

4.將產(chǎn)生的二氧化碳通入石蕊試液至變紅（觀察現(xiàn)象）；取下已變紅的裝有石蕊試液小試管，用試管夾自下而上夾持在離試管口三分之一處，點(diǎn)燃酒精燈，先預(yù)熱再對(duì)藥品部位加熱，試管與桌面成45°角，試管口不準(zhǔn)對(duì)著人，加熱至紅色溶液變?yōu)樽仙ㄓ^察現(xiàn)象）；

5.將所有廢棄物倒入廢液缸，玻璃儀器清洗干凈并擺放整齊，桌面擦干凈。報(bào)告：實(shí)驗(yàn)完畢

2014化學(xué)實(shí)驗(yàn)考試操作詳細(xì)步驟實(shí)驗(yàn)

二、粗鹽水的過(guò)濾

實(shí)驗(yàn)步驟：1.取濾紙一張，對(duì)折兩次，打開(kāi)成圓錐形，將其尖端朝下放入漏斗中。向?yàn)V紙上加少許蒸

餾水濕潤(rùn)，用玻璃棒輕輕壓平，使濾紙與漏斗相貼。

2.在鐵架臺(tái)的鐵圈下放一個(gè)小燒杯，再把漏斗放在鐵圈上，漏斗下端尖嘴處要緊靠燒杯內(nèi)壁。

3.將玻璃棒一端輕觸濾紙三層處，把盛有粗鹽水的燒杯口緊靠著玻璃棒引流液體，玻璃棒用完及時(shí)清洗干凈放回原處，液面不得超過(guò)濾紙邊緣

4.將所有廢棄物倒入廢液缸，玻璃儀器清洗干凈并擺放整齊，桌面擦干凈。報(bào)告：實(shí)驗(yàn)完畢實(shí)驗(yàn)

三、用5%氯化鈉溶液配制50g1%的氯化鈉溶液

實(shí)驗(yàn)步驟：1.往10ml量筒里倒入8—9ml氯化鈉溶液（瓶塞倒放，標(biāo)簽向著手心，容器口緊挨，用完

后立即蓋上瓶塞，將試劑瓶放回原處），再將10ml的量筒平放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，改用膠頭滴

管逐滴加（滴管懸空在量筒正上方，不得伸入）至9.7ml(視線與凹液面最低處保持水平)

將所量溶液倒入燒杯中，膠頭滴管用完后立即清洗干凈放回小燒杯中備用。

2.往50ml的量筒里倒入38—39ml的蒸餾水（瓶塞倒放，標(biāo)簽向著手心，容器口緊挨，用完后立即蓋上瓶塞，將試劑瓶放回原處），再將50ml量筒平放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，改用膠頭滴管逐滴加至40ml，將所量液體倒入燒杯中，膠頭滴管用完后立即清洗干凈放回原處。

3.用玻璃棒攪拌均勻（攪拌稍慢點(diǎn)，不要觸碰到燒杯內(nèi)壁）。

4.將所有廢棄物倒入廢液缸，玻璃儀器清洗干凈并擺放整齊，桌面擦干凈。報(bào)告：實(shí)驗(yàn)完畢實(shí)驗(yàn)

四、金屬的化學(xué)性質(zhì)

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.用坩堝鉗夾取一銅片，放在酒精燈外焰灼燒至變黑，然后將加熱后的銅片放置于石棉網(wǎng)上。

2.取一支試管橫放，用鑷子夾取一枚鐵釘放在試管口，再把試管緩緩豎直，使鐵釘滑落到試管底部。取硫酸銅，瓶塞倒放，標(biāo)簽向著手心，容器口緊挨將硫酸銅緩緩倒入裝有鐵釘?shù)脑嚬苤?，硫酸銅用量不超過(guò)試管容積的三分之一（用完后應(yīng)立即蓋上瓶塞，將試劑瓶復(fù)位）。觀察現(xiàn)象。

3.另取兩支試管，橫放，用鑷子分別夾取銅片和鋅粒，放在試管口，再把試管緩緩豎直，使銅片和鋅粒滑落到試管底部。分別向兩支試管滴加稀鹽酸，膠頭滴管必須垂直懸空在試管上方，觀察現(xiàn)象。

4.將所有廢棄物倒入廢液缸，玻璃儀器清洗干凈并擺放整齊，桌面擦干凈。報(bào)告：實(shí)驗(yàn)完畢。

實(shí)驗(yàn)

五、酸.堿的部分化學(xué)性質(zhì)

實(shí)驗(yàn)步驟：1.取少量A溶液于試管A中，再取少量B溶液于試管B中（瓶塞倒放，標(biāo)簽向著手心，容

器口緊挨，用完后應(yīng)立即蓋上瓶塞，將試劑瓶放回原處），向試管A、B中各滴入幾滴酚

酞溶液（膠頭滴管垂直懸空于試管口上方），使酚酞溶液變紅的是堿的溶液；

2.向步驟1中變紅的試管中滴加少量稀鹽酸至無(wú)色，膠頭滴管垂直懸空在試管上方，觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象；

3.另取少量A溶液于試管中（瓶塞倒放，標(biāo)簽向著手心，容器口緊挨，用完后應(yīng)立即蓋上瓶塞，將試劑瓶放回原處），用玻璃棒伸入試管內(nèi)蘸取少量A溶液滴在pH試紙上，將試紙與比色卡對(duì)比得出A溶液的pH值，玻璃棒用完及時(shí)洗干凈，放回原處；

4.將所有廢棄物倒入廢液缸，玻璃儀器清洗干凈并擺放整齊，桌面擦干凈。報(bào)告：實(shí)驗(yàn)完畢。

第五篇：點(diǎn)對(duì)點(diǎn)通信實(shí)驗(yàn)步驟2017

基于CAsyncSocket類的點(diǎn)對(duì)點(diǎn)通信客戶機(jī)創(chuàng)建流程 ? 通信流程：

1.服務(wù)器點(diǎn)擊“監(jiān)聽(tīng)”按鈕開(kāi)始監(jiān)聽(tīng)，實(shí)現(xiàn)Create和Listen函數(shù) 2.客戶機(jī)點(diǎn)擊“連接”按鈕進(jìn)行連接，實(shí)現(xiàn)Connect函數(shù) 3.服務(wù)器端接受連接，并觸發(fā)onAccept事件，實(shí)現(xiàn)函數(shù)Aeecpt 4.客戶端或者服務(wù)器端點(diǎn)擊“發(fā)送”按鈕，發(fā)送文本框的數(shù)據(jù)

5.服務(wù)器端或者客戶端接收數(shù)據(jù)，OnReveive事件被觸發(fā)，實(shí)現(xiàn)函數(shù)Receive 6.客戶端或者服務(wù)器端點(diǎn)擊“斷開(kāi)”，執(zhí)行函數(shù)close，觸發(fā)另一端的onClose事件

自定義類獲取對(duì)話框指針的方法

1.先在CMyDialog.cpp中聲明一個(gè)全局變量CMyDialog* pDlg;2在OnInitDialog()初始化的時(shí)候，pDlg = this;3.在自定義類使用的時(shí)候，在自定義的類的Cpp中添加extern CMyDialog* pDlg;4.在自定類中使用pDlg->yourfunction();? 編程過(guò)程： 客戶端：

1、創(chuàng)建MFC應(yīng)用程序，勾選windows socket選項(xiàng)，如創(chuàng)建工程名為client，自動(dòng)創(chuàng)建類CClientAPP和CClientDlg，并生成相應(yīng)的源文件（.cpp）和頭文件(.h)。APP代表應(yīng)用程序。Dlg代表對(duì)話框

2、布置界面如下圖所示

3、建立類向?qū)?，給文本編輯框，列表框定義變量名及類型

4、插入基于CAsyncSocket的類，如取名clientsock，確定后類視圖下右鍵單擊類并載入虛函數(shù)onReceive(),onClose()，如果是服務(wù)器端還要加載onAccept

5、程序的各個(gè)類之間建立聯(lián)系，具體步驟：

5.1對(duì)話框界面與套接字建立連接。在ClientDlg.h文件中將“clientsock.h”文件包含進(jìn)來(lái)，使其能夠訪問(wèn)套接字，代碼為#include” clientsocket.h”;并添加成員變量m_clientsock，代碼clientsock m_clientsock;

5.2套接字與對(duì)話框界面建立聯(lián)系。在套接字的源文件clientsock.cpp中，為使其能夠訪問(wèn)對(duì)話框界面，添加對(duì)話框類頭文件 #include”ClinetDlg.h”

5.3套接字類能夠方便訪問(wèn)對(duì)話框的成員.在對(duì)話框中定義指向本身的指針，并在套接字類中引用該指針

在clientDlg.Cpp中定義個(gè)全局變量，類型為對(duì)話框指針

5.4在初始化函數(shù)中給指針賦值。將當(dāng)前對(duì)話框賦值給指針變量：

5.5在套接字類中使用對(duì)話框指針。在clientsock.cpp文件中引入該全局變量extern CClientDlg * pdlg；

經(jīng)過(guò)以上步驟，類之間的關(guān)系，以及對(duì)話框指針的設(shè)置完成。服務(wù)器過(guò)程與客戶端是一樣的，區(qū)別在于5.1創(chuàng)建套接字變量時(shí)應(yīng)創(chuàng)建兩個(gè)，一個(gè)用于監(jiān)聽(tīng)，一個(gè)用于服務(wù)。

接下來(lái)是具體的編程過(guò)程

服務(wù)器端，如果工程名為server，插入的類名為sersock，且界面如下圖，并按上述客戶端方式已做基本設(shè)置,包括文件互相包含、創(chuàng)建指針機(jī)制、建立類向?qū)?，載入虛函數(shù)。如這些都完成，則開(kāi)始編程

1、在類視圖下，點(diǎn)擊CServerDlg右鍵單擊添加函數(shù)void myaccept（），void myrecv()和void myclose（）

2、雙擊監(jiān)聽(tīng)按鈕，實(shí)現(xiàn)監(jiān)聽(tīng)：使用updatedata(),Create()和Lisen（）

3、雙擊發(fā)送按鈕，實(shí)現(xiàn)發(fā)送：使用Send（）

4、當(dāng)有客戶端連接進(jìn)來(lái)時(shí)，觸發(fā)sersock下的onAccept()此函數(shù)下執(zhí)行 pdlg->myaccept();在myaccept()中執(zhí)行Accept（）

5、當(dāng)有消息進(jìn)來(lái)時(shí)，觸發(fā)sersock下的onreceive()此函數(shù)下執(zhí)行 pdlg->myrecv();在myrecv()中執(zhí)行Receive（）

客戶端

6、在類視圖下，點(diǎn)擊CClientDlg右鍵單擊添加函數(shù) void myrecv()和void myclose（）

7、雙擊連接，實(shí)現(xiàn)updatedata(),Create()和Connect（）

8、雙擊發(fā)送按鈕，實(shí)現(xiàn)發(fā)送：使用Send（）

9、當(dāng)有消息進(jìn)來(lái)時(shí)，觸發(fā)clientsock下的onreceive()此函數(shù)下執(zhí)行 pdlg->myrecv();在myrecv()中執(zhí)行Receive（）