第一篇：葉綠體中色素提取和分離實(shí)驗(yàn)課案例及總結(jié)

“葉綠體中色素提取和分離”實(shí)驗(yàn)課的案例及分析

在倡導(dǎo)教學(xué)形式和學(xué)習(xí)方式多樣化，體現(xiàn)以學(xué)生發(fā)展為本的教學(xué)改革形勢(shì)下，實(shí)驗(yàn)課的教學(xué)改革迫在眉睫。生物學(xué)實(shí)驗(yàn)并不是簡(jiǎn)單的教學(xué)輔助部分，它是學(xué)習(xí)生物學(xué)的主要手段，是培養(yǎng)學(xué)生能力，提高科學(xué)素養(yǎng)的有效途徑。因此，必須考慮：怎樣才能使學(xué)生在實(shí)驗(yàn)課中樂(lè)學(xué)、會(huì)學(xué)、學(xué)有所得。下面介紹作者在“葉綠體中色素提取和分離”實(shí)驗(yàn)課教學(xué)中的嘗試和體會(huì)。1 案例介紹

1.1 案例實(shí)施的背景

現(xiàn)行高二教材中本實(shí)驗(yàn)屬驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，教師在實(shí)驗(yàn)課之前布置了預(yù)習(xí)，并按傳統(tǒng)教學(xué)方法要求學(xué)生根據(jù)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作，但是在學(xué)生完成實(shí)驗(yàn)后，結(jié)果并不理想，很多學(xué)生的色素帶出現(xiàn)顏色不明顯；色素帶不整齊，有重疊等情況，究其原因，主要是學(xué)生實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范造成的，然而令人擔(dān)憂的是當(dāng)老師追問(wèn)“可能是哪些操作步驟出問(wèn)題，會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不理想？”時(shí)，多數(shù)學(xué)生一問(wèn)三不知，很顯然，學(xué)生在做實(shí)驗(yàn)時(shí)，只是按照教材中的實(shí)驗(yàn)步驟，“依葫蘆畫(huà)瓢”，機(jī)械地完成實(shí)驗(yàn)任務(wù)而已，對(duì)實(shí)驗(yàn)步驟缺乏深入思考和有效反思，“只知其然，而不知其所以然”。

要改變這種現(xiàn)狀，必須解決以下幾個(gè)問(wèn)題：①要激發(fā)學(xué)生上實(shí)驗(yàn)課的興趣，提高學(xué)習(xí)積極性，增強(qiáng)學(xué)生的主體意識(shí)；②要提高學(xué)生的自我監(jiān)控意識(shí)，使學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)的各具體操作步驟能不斷進(jìn)行反思。③使學(xué)生深刻認(rèn)識(shí)到生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作的準(zhǔn)確性和規(guī)范性是得到正確實(shí)驗(yàn)結(jié)果的必要前提，提升學(xué)生的生物科學(xué)素養(yǎng)。

1.2 教學(xué)過(guò)程及分析

教師在認(rèn)真學(xué)習(xí)和領(lǐng)會(huì)《高中生物課程標(biāo)準(zhǔn)》的基礎(chǔ)上，結(jié)合學(xué)校和學(xué)生實(shí)際，創(chuàng)造性地進(jìn)行了心得教學(xué)設(shè)計(jì)，并在平行班中加以實(shí)施。教學(xué)實(shí)施情如下：

（1）課前準(zhǔn)備

①教師：編制“自我監(jiān)控”表（附錄）；準(zhǔn)備新鮮的菠菜葉，干燥的定性濾紙，燒杯，研缽，小玻璃漏斗，尼龍布，毛細(xì)吸管，剪刀，小試管，培養(yǎng)皿蓋，量筒。天平，丙酮，層析液，二氧化硅，碳酸鈣。②學(xué)生：進(jìn)行課前預(yù)習(xí)；分組。

（2）創(chuàng)設(shè)問(wèn)題情景

①教師：展示實(shí)驗(yàn)結(jié)果，一條色素帶顏色清晰、整齊、無(wú)明顯重疊（理想）；另一條色素帶顏色不明顯、不整齊、有明顯重疊（不理想）。提問(wèn)：“為什么會(huì)出現(xiàn)不理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)的哪些操作步驟與之有關(guān)？” ②學(xué)生：相互討論，但由于一時(shí)無(wú)法理清實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的內(nèi)在邏輯性，因此難以確定問(wèn)題的答案。

（3）明確監(jiān)控目標(biāo)及意義

①教師：（發(fā)“自我監(jiān)控”表）問(wèn)題的答案就在學(xué)生的實(shí)際操作過(guò)程中，就在于這些實(shí)驗(yàn)操作的“準(zhǔn)確度”的把握上，那么如何把握實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程的“準(zhǔn)確度”？就要求學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的具體步驟進(jìn)行自我監(jiān)控，自我監(jiān)控能力的培養(yǎng)也是提到學(xué)生自學(xué)能力和學(xué)習(xí)效率，掌握好各學(xué)科知識(shí)的重要前提。②學(xué)生：帶著一種新奇感，饒有興趣地去了解“自我監(jiān)控”表中各項(xiàng)監(jiān)控項(xiàng)目。

（4）引導(dǎo)學(xué)生實(shí)施“自我監(jiān)控”學(xué)習(xí)

①學(xué)生：按照“自我監(jiān)控”表對(duì)各項(xiàng)監(jiān)控項(xiàng)目進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作的自我監(jiān)控，并做好相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)記錄。②教師：不斷巡視，進(jìn)行適當(dāng)?shù)闹笇?dǎo)。

（5）開(kāi)展“協(xié)作式”探索

①學(xué)生：以“自我監(jiān)控”表作為重要的參考依據(jù)，以小組為單位，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果成敗的原因進(jìn)行對(duì)照分析，明確問(wèn)題癥結(jié)的原因，并進(jìn)一步驗(yàn)證。如有學(xué)生發(fā)現(xiàn)用棉線蘸取綠葉畫(huà)濾液細(xì)線效果更好，馬上向其他同學(xué)推廣；也有的學(xué)生通過(guò)對(duì)照分析，認(rèn)為自己的色素帶顏色太淺的原因是研磨不夠充分及研磨液過(guò)濾不徹底，則新的監(jiān)控學(xué)習(xí)中調(diào)整研磨的程度，并且不用尼龍布過(guò)濾而直接用少許脫脂棉等操作加以驗(yàn)證。②教師：適當(dāng)指導(dǎo)，并引導(dǎo)學(xué)生了解科學(xué)研究的一般過(guò)程：“實(shí)驗(yàn)觀察—提出假設(shè)—驗(yàn)證假設(shè)”。

（6）反饋和評(píng)價(jià)

①學(xué)生：以小組為單位反饋實(shí)驗(yàn)結(jié)果，實(shí)現(xiàn)小組間的資源共享。②教師：不管學(xué)生的協(xié)作式探索結(jié)果是否正確，教師都要予以適當(dāng)鼓勵(lì)。2

教學(xué)反饋及反思

2.1

教學(xué)反饋

學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的評(píng)價(jià)是考查實(shí)驗(yàn)教學(xué)效果的重要材料。因此該實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，教師以座談的形式進(jìn)行了教學(xué)反饋調(diào)查，現(xiàn)將部分反饋整理如下：

（1）學(xué)生甲：這種實(shí)驗(yàn)方式，不像以前那樣簡(jiǎn)單，給我增加了難度，我無(wú)法從課本的操作步驟中找到明確的答案，有時(shí)甚至感到無(wú)從下手，但卻使我產(chǎn)生挑戰(zhàn)的興趣，而且我也有信心去戰(zhàn)勝困難！

對(duì)“葉綠體色素提取和分離”實(shí)驗(yàn)的一點(diǎn)改進(jìn)

在人教版高中生物（必修）教材第一冊(cè)的“葉綠體色素提取和分離”實(shí)驗(yàn)中，按教材所描述的實(shí)驗(yàn)方法和過(guò)程操作，實(shí)驗(yàn)效果并不理想，往往存在以下問(wèn)題影響實(shí)驗(yàn)效果：（1）實(shí)驗(yàn)過(guò)程繁瑣、操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)；（2）綠葉還未充分研磨，加入的丙酮就以揮發(fā)的差不多了；（3）由于毛線吸管較細(xì)，學(xué)生操作時(shí)極易將其折斷，增加了操作的難度和實(shí)驗(yàn)的成本；（4）用毛細(xì)吸管劃出的濾液細(xì)線，線條粗細(xì)不均，影響層析效果。

針對(duì)上述問(wèn)題，筆者對(duì)該實(shí)驗(yàn)的方法和步驟進(jìn)行了一些改進(jìn)，并做了大量的對(duì)照實(shí)驗(yàn)，獲得了良好的實(shí)驗(yàn)效果?，F(xiàn)將改進(jìn)后的具體方法和步驟介紹如下，一邊和各位同仁交流。1 實(shí)驗(yàn)方法、步驟

提取綠葉中的色素

（1）稱取5g新鮮綠色葉片（如菠菜葉、胡蘿卜葉等），剪碎，放入研缽中。（2）向研缽中加入少許二氧化硅和碳酸鈣，將紙蓋在研缽上，在紙的中心穿一個(gè)洞，將杵棒套入洞口中進(jìn)行迅速充分的研磨。

（3）研磨1-2min后（綠葉接近雨糊狀時(shí)），向研缽中加入3ml丙酮，繼續(xù)迅速充分的研磨約半分鐘。

1.2

制備濾紙條

取一張干燥的定性濾紙，剪成長(zhǎng)6cm，寬1cm的濾紙條，將濾紙條的一段剪去兩角，并在距這一端1cm處用鉛筆畫(huà)一條細(xì)的橫線。1.3

分離色素

（1）用一干凈的蓋玻片，用其一端蘸取研磨液印在濾紙條的鉛筆線上（操作時(shí)注意：蓋玻片要始終與濾紙相垂直），待研磨液干后，再重復(fù)上述操作一次。

“葉綠體中色素的提取和分離”實(shí)驗(yàn)改進(jìn)

一．實(shí)驗(yàn)原理： 色素提取原理：利用相似相溶原理，色素可以溶解于酒精、丙酮等有機(jī)溶劑中，形成色素液。色素分離原理：由于四種色素在層析液的溶解度不同，因而四種色素在濾紙上的擴(kuò)散速度也不同，從而將它們分離開(kāi)來(lái)。

二、目的要求

1.初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法。

2.探索葉綠體中有幾種色素。胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b隨層析液在濾紙上擴(kuò)散速度不同，可以分出四條色素帶

三、重點(diǎn)與難點(diǎn)

重點(diǎn)：初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法和探索葉綠體中有幾種色素。難點(diǎn)：該實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的問(wèn)題和培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的能力,掌握探究實(shí)驗(yàn)的方法。

四、對(duì)實(shí)驗(yàn)的幾個(gè)地方進(jìn)行的改進(jìn) 1實(shí)驗(yàn)材料的改進(jìn)：

用菠菜作為實(shí)驗(yàn)材料，易受季節(jié)性限制，此外，色素提取液呈黃綠色，色素帶顏色淺，實(shí)驗(yàn)效果差。用韭菜，蘿卜葉，蒿菜，天竺葵代替菠菜，所得到的實(shí)驗(yàn)效果很好，又可以克服菠菜因季節(jié)原因，難于取材。2提取液的改進(jìn)：

除丙酮外，也可用酒精（無(wú)水乙醇）替代，用量相同，結(jié)果大致相同；和酒精相比，丙酮有一定毒性，因而不妨換一下。3過(guò)濾和制濾液的改進(jìn)：

獲取高濃度的色素提取液是該實(shí)驗(yàn)成功的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。一般我們要求色素提取液呈墨綠色。為了得到墨綠色的色素提取液，我們可嘗試取消漏斗基部放脫脂棉這一步，而用3～4層紗布包裹充分研磨過(guò)的綠葉，用4層紗布過(guò)濾，通過(guò)漏斗將汁液擠于試管中，將濾液收集到試管或小燒杯中備用。這樣可以降低葉片含水量，從而提高葉綠體中色素的提取效率。實(shí)驗(yàn)證明，改進(jìn)后較改進(jìn)前實(shí)驗(yàn)效果明顯。

將過(guò)濾用的尼龍布改為用棉花塞住漏斗口過(guò)濾，效果更好！

4分離色素的改進(jìn)：

分離色素時(shí)教材中的條形紙層析法，據(jù)許多中學(xué)老師反映實(shí)驗(yàn)效果不很理想，存在的問(wèn)題有:①采用毛細(xì)吸管吸取濾液，畫(huà)線很難達(dá)到“細(xì)、勻、齊”的要求;②制備濾紙條時(shí)剪去兩角，不容易把握;③層析液容易沒(méi)及濾液細(xì)線。④條形紙很容易下滑⑤層析后容易出現(xiàn)色素帶分離不夠充分，或色素帶分離過(guò)度而造成胡蘿卜素在濾紙條上消失的現(xiàn)象。

另一種新的方法叫培養(yǎng)皿法

不用濾紙條，也不劃濾液細(xì)線，而取直徑為10cm的干燥圓形定性濾紙，用毛細(xì)吸管吸取色素濾液，在濾紙的中央點(diǎn)成圓形的色素斑，重復(fù)4～5次。然后取一枚縫衣針，穿一條細(xì)棉線，在棉線末端打個(gè)結(jié)，將針穿過(guò)濾紙上的色素斑中心，在距線結(jié)約4cm處剪斷棉線。取直徑l0cm的培養(yǎng)皿一套，向培養(yǎng)皿底中加入5ml層析液。把上述圓形濾紙扣在培養(yǎng)皿底上面，無(wú)線結(jié)的一面朝下，棉線則浸沒(méi)在層析液中。再將培養(yǎng)皿蓋蓋在濾紙上。

采用該方法，可以看到色素隨層析液由線結(jié)處向周圍均勻擴(kuò)散。因此得到的4條色素帶呈同心環(huán)狀，由內(nèi)而外分別是黃綠色、藍(lán)綠色、黃色和橙黃色，十分清晰。而且層析時(shí)，濾紙上的色素不會(huì)沒(méi)及層析液中，點(diǎn)色素斑比劃濾液細(xì)線容易得多，實(shí)驗(yàn)效果非常顯著。結(jié)果證明：運(yùn)用燈芯法分離色素，色素量大，分層清晰，四種色素分離出鮮明的四圈色素環(huán)，效果顯著；操作過(guò)程較易掌握，失誤較少。此實(shí)驗(yàn)方法關(guān)鍵有兩點(diǎn)需注意：一是幾次滴液體要在同一點(diǎn)上，否則不能形成圓環(huán)：二是要掌握好滴層析液的量和時(shí)間，否則會(huì)影響效果，甚至失敗。

綜述： 要求：教師具有較高的組織教學(xué)能力和啟發(fā)教學(xué)的經(jīng)驗(yàn)，教師要事先根據(jù)教學(xué)內(nèi)容精心設(shè)疑，引導(dǎo)學(xué)生積極思考，獨(dú)立研究，自行設(shè)計(jì)、完成實(shí)驗(yàn)，從而使學(xué)生加深對(duì)實(shí)驗(yàn)原理的理解，并在此基礎(chǔ)上掌握和學(xué)會(huì)獲得知識(shí)的科學(xué)方法。

優(yōu)點(diǎn)：學(xué)生通過(guò)親自參與實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)、操作、分析得出結(jié)論，學(xué)生經(jīng)歷了質(zhì)疑、思考、分析、釋疑等一系列思維加工過(guò)程，成為一個(gè)“發(fā)現(xiàn)者”。獲得了成功感，學(xué)習(xí)興趣極高。

不足：“探討——實(shí)踐”實(shí)驗(yàn)教學(xué)法適合于有一定的知識(shí)基礎(chǔ)，已有一定的實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Φ母吣昙?jí)學(xué)生，教師既要敢于“放”（讓學(xué)生自由討論、動(dòng)手實(shí)驗(yàn)）又要能夠“收”（及時(shí)糾錯(cuò)、分析、總結(jié)），課堂紀(jì)律不好控制，很難保證在按時(shí)完成實(shí)驗(yàn)的前提下全面提高學(xué)生的素質(zhì)。反思和分析：

(1)這個(gè)實(shí)驗(yàn)可以作為驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)處理，也可變?yōu)楣夂仙靥崛》椒ǖ奶骄繉?shí)驗(yàn)

（2）教師的教育觀念一定要轉(zhuǎn)變與更新（3）教師一定要注意學(xué)生的創(chuàng)新需要

（4）教師一定要努力實(shí)踐

綜合同學(xué)們對(duì)各步驟的改進(jìn)，使實(shí)驗(yàn)的完成效果更好，體現(xiàn)了同學(xué)們無(wú)限的創(chuàng)造力！

第二篇：《葉綠體色素的提取和分離》 實(shí)驗(yàn)報(bào)告

《葉綠體色素的提取和分離》 實(shí)驗(yàn)報(bào)告

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)葉綠體色素的提取、分離方法。

2.通過(guò)葉綠體色素提取、分離方法的學(xué)習(xí)了解葉綠體色素的相關(guān)理化性質(zhì)。

3.為進(jìn)一步研究各葉綠體色素性質(zhì)、功能等奠定基礎(chǔ)。

實(shí)驗(yàn)原理

葉綠體色素包括綠色的葉綠素（包括葉綠素a和葉綠素b）和黃色的類胡蘿卜素（包括胡蘿卜素和葉黃素）兩大類，它們均以色素蛋白復(fù)合體形式存在于類囊體膜上。兩類色素均不溶于水而溶于有機(jī)溶劑，故可用乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑提取。由于提取液中不同色素在固定相和流動(dòng)相中的分配系數(shù)不同，所以可借助分配層析方法將其分離。

實(shí)驗(yàn)儀器與藥品

1.綠色植物如菠菜等的葉片。

2.研缽、漏斗、三角瓶、剪刀、滴管、康維皿、圓形濾紙（直徑11cm）。

3.95％乙醇、石英砂、碳酸鈣、展層劑。展層劑按石油醚：丙酮：苯10:2:1的比例配制（V／V）。實(shí)驗(yàn)步驟

1.葉綠體色素的提取

（1）取菠菜或其它新鮮植物葉片4～5片（4g左右），將其洗凈、擦干并去掉中脈，剪碎后置入研缽中。

（2）研缽中加入95％乙醇2～3 ml及少許石英砂、碳酸鈣研磨至勻漿，再加95％乙醇5ml，然后以漏斗過(guò)濾之，即為色素提取液。

2.葉綠體色素的分離

（1）取圓形定性濾紙一張（直徑應(yīng)小于康維皿直徑）于其中心扎一圓形小孔（直徑約3mm），另取長(zhǎng)方形濾紙條一張（5cm×1.5cm），用滴管吸取乙醇葉綠體色素提取液沿濾紙條的長(zhǎng)度方向涂抹，注意涂抹色素?cái)U(kuò)散寬度應(yīng)限制在0.5cm以內(nèi)，風(fēng)干后再重復(fù)操作數(shù)次。然后沿長(zhǎng)度方向?qū)V紙條卷成紙捻，使涂抹過(guò)葉綠體色素溶液的一側(cè)恰在紙捻的一端。

（2）將紙捻帶有色素的一端插入圓形濾紙的小孔中，使與濾紙剛剛平齊（勿突出）。

（3）在康維皿中央小室中加入適量的展層劑，把帶有紙捻的圓形濾紙平放在康維皿中央小室上，使紙捻下端浸入展層劑中，迅速蓋好培養(yǎng)皿。展層劑將借助毛細(xì)管作用順紙捻擴(kuò)散至圓形濾紙上，使葉綠體色素在固定相（濾紙中吸附有水分的纖維素）和流動(dòng)相（展層劑）間反復(fù)分配，從而使不同色素得到分離，分離結(jié)果為濾紙上可見(jiàn)到各種色素的同心圓環(huán)。無(wú)康維皿時(shí)亦可用底、蓋直徑相同的培養(yǎng)皿進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)時(shí)可在培養(yǎng)皿底中放入一平底短玻管或塑料藥瓶蓋以替代康維皿中央小室盛裝展層劑，其余相同。

（4）當(dāng)展層劑前沿接近濾紙邊緣時(shí)便可結(jié)束實(shí)驗(yàn)，此時(shí)可看到不同色素的同心圓環(huán)，各色素由內(nèi)往外的順序?yàn)椋喝~綠素b（黃綠色）、葉綠素a（藍(lán)綠色）、葉黃素（鮮黃色）、胡蘿卜素（橙黃色），再用鉛

筆標(biāo)出各種色素的位置和名稱。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

葉綠體色素分為葉綠體素類和類胡蘿卜素類兩類，前者為雙羧酸酯，后者為類萜，所以均為脂溶性，提取時(shí)應(yīng)選用有機(jī)溶劑，常用的有機(jī)溶劑為酒精等。本試驗(yàn)采用分配層析方法分離葉綠體色素，此法基本原理為利用混合物中不同成分在固定相和流動(dòng)相中的分配系數(shù)不同意分離各成分。本實(shí)驗(yàn)中葉綠素b、葉綠素a、葉黃素、胡蘿卜素在流動(dòng)相中分配系數(shù)依次增大，所以分離形成的4個(gè)同心圓環(huán)由內(nèi)向外依次為葉綠素b、葉綠素a、葉黃素、胡蘿卜素，這可從4種色素的不同顏色直觀看出。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1.為保證色素提取效率應(yīng)注意研磨要充分、殘?jiān)鼞?yīng)用提取溶劑多沖洗幾次。

2.濾紙應(yīng)質(zhì)地均勻，折疊、揉捏均會(huì)影響濾紙均勻度因而影響分離效果。

3.點(diǎn)樣量應(yīng)足夠大但樣點(diǎn)直徑應(yīng)盡量小，所以一次點(diǎn)樣不要過(guò)多，待風(fēng)干后再點(diǎn)樣，如此反復(fù)多次。

4.由于紙捻上端為點(diǎn)樣部位，所以紙捻上端應(yīng)與濾紙平齊以保證展層劑推動(dòng)不同色素的分離。

5.由于展層劑由幾種極易揮發(fā)的溶劑組成，所以實(shí)驗(yàn)中應(yīng)保證康維皿的密封，否則會(huì)因展層劑揮發(fā)損失影響分離效果，此問(wèn)題在以培養(yǎng)皿替代康維皿進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)尤應(yīng)注意。

陜西師范大學(xué)遠(yuǎn)程教育學(xué)院

生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

報(bào)告題目《葉綠體色素的提取和分離》

姓名

學(xué)號(hào)

專業(yè)

批次/層次

指導(dǎo)教師

學(xué)習(xí)中心實(shí)驗(yàn)報(bào)告

第三篇：葉綠體中色素的提取與分離實(shí)驗(yàn)教學(xué)設(shè)計(jì)

葉綠體中色素的提取與分離（實(shí)驗(yàn)）教學(xué)設(shè)計(jì)

學(xué)生們通過(guò)初中的學(xué)習(xí)，對(duì)光合作用已有了一定的基礎(chǔ)，但還很不深入，因此教師要在學(xué)生已有的知識(shí)基礎(chǔ)上幫助學(xué)生構(gòu)建內(nèi)涵豐富的光合作用的概念。本實(shí)驗(yàn)探究葉綠體中光合色素的組成，通過(guò)實(shí)驗(yàn)，使學(xué)生知道葉綠體中參與光合作用的色素，為下一課時(shí)學(xué)習(xí)光合作用奠定基礎(chǔ)。

一、高考考綱對(duì)教材中實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Φ囊?/p>

能獨(dú)立完成實(shí)驗(yàn)。包括理解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、方法和操作步驟，掌握相關(guān)的操作技能，并能將這些實(shí)驗(yàn)的方法和技能進(jìn)行綜合的運(yùn)用。

二、教學(xué)目標(biāo) 1．知識(shí)目標(biāo)

（1）初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法、了解紙層析法的原理。（2）通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，理解各藥劑在實(shí)驗(yàn)中的作用和對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，探索葉綠體中有幾種色素，觀察和區(qū)別葉綠體中色素的種類及顏色。

2．技能目標(biāo)

（1）合理組織語(yǔ)言，描述實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，鍛煉學(xué)生觀察能力和語(yǔ)言表達(dá)能力。（2）對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象相互交流和討論，提高學(xué)生思考問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力。3．情感目標(biāo)

通過(guò)本節(jié)實(shí)驗(yàn)課，激發(fā)學(xué)生對(duì)生物科學(xué)的興趣，培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度，學(xué)會(huì)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的現(xiàn)象和結(jié)果，進(jìn)行分析，推出結(jié)論。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)學(xué)生的自我動(dòng)手和探究問(wèn)題的能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)束完成整理工作。

三、實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)與難點(diǎn)

重點(diǎn)：初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法、探索葉綠體中色素在濾紙上層析的情況。

難點(diǎn)：分離葉綠體色素中綠葉細(xì)線的畫(huà)法。

四、課前準(zhǔn)備 1．教師準(zhǔn)備

（1）實(shí)驗(yàn)材料、儀器及試劑準(zhǔn)備。新鮮的菠菜，干燥的定性濾紙、燒杯、研缽、漏斗、毛細(xì)吸管、試管、棉塞、試管架、剪刀、脫脂棉、藥匙、培養(yǎng)皿、天平、直尺、鉛筆、無(wú)水乙醇、層析液、二氧化硅、碳酸鈣等。

（2）推測(cè)可能出現(xiàn)的情況進(jìn)行探究，分析原因，得出結(jié)論，做到心中有數(shù)。2．學(xué)生準(zhǔn)備

（1）預(yù)習(xí)本實(shí)驗(yàn)。包括實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理，熟悉?shí)驗(yàn)步驟等。（2）復(fù)習(xí)葉綠體中色素的種類和顏色。

五、實(shí)驗(yàn)原理

1．綠葉中的色素能夠溶解在有機(jī)溶劑無(wú)水乙醇或丙酮中，即可以用無(wú)水乙醇或丙酮提取綠葉中的色素。

2．綠葉中的色素不只一種，它們都能溶解在層析液中。然而，它們?cè)趯游鲆褐械娜芙舛炔煌喝芙舛雀叩碾S層析液在濾紙上擴(kuò)散得快，溶解度低的在濾紙上擴(kuò)散得慢?？蓳?jù)此將色素分離。

六、教學(xué)方法

師生合作（以學(xué)生操作為主、教師講解為輔）

七、方法步驟：

1．提取色素：稱取、剪碎、研磨、過(guò)濾（1）稱取5g的綠葉，剪碎，放入研缽中。

（2）向研缽中放入少許二氧化硅和碳酸鈣，再加入10ml無(wú)水乙醇或丙酮，進(jìn)行迅速、充分的研磨。

（3）將研磨液迅速倒入小玻璃漏斗（漏斗基部放少許脫脂棉）。將濾液收集到一個(gè)小試管中，及時(shí)用棉塞將試管口塞緊。

2．制備濾紙條：將干燥的定性濾紙剪成長(zhǎng)條形，濾紙條的一端剪去兩角做標(biāo)記，并在距這一端1cm處用鉛筆畫(huà)一條細(xì)的橫線。

3．畫(huà)濾液細(xì)線：用毛細(xì)管吸取少量濾液，沿鉛筆線均勻地畫(huà)一條細(xì)而直的濾液細(xì)線。待濾液干后，再畫(huà)一兩次。

4．分離色素：將3ml層析液倒入燒杯，將濾紙條（有濾液細(xì)線的一端朝下）輕輕插入層析液中，隨后用培養(yǎng)皿蓋上小燒杯。

5．觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果：觀察燒杯內(nèi)濾紙條上出現(xiàn)了幾條色素帶，以及每條色素帶的顏色。將觀察結(jié)果記錄下來(lái)。

八、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1．葉片要新鮮、顏色要深綠，去掉葉柄和粗的葉脈，盡量將葉片剪得細(xì)碎些。

2．研磨要充分、迅速，研磨時(shí)用紙蓋住研缽。

3．濾液收集后要及時(shí)用棉塞將試管口塞緊，以免濾液揮發(fā)。4．濾液細(xì)線要細(xì)、直、含較多色素。

5．濾線上的濾液細(xì)線不能浸入層析液。（為什么？）

九、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論：

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖，濾紙條上有4條不同顏色的色帶，從上往下依次為：胡蘿卜素(橙黃色)，葉黃素(黃色)，葉綠素a(藍(lán)綠色)，葉綠素b(黃綠色)。這說(shuō)明綠葉中的色素有4種，葉綠素a最寬說(shuō)明葉綠素a含量最多。四種色素在層析液中的溶解度不同，隨層析液在濾紙上擴(kuò)散的速度也不一樣。

十、討論：

對(duì)本次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果作出分析：理論上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是，在濾紙條上出現(xiàn)4條呈平行線分布的色素帶，自上而下依次為橙黃色的胡蘿卜素、黃色的葉黃素、藍(lán)綠色的葉綠素a、黃綠色的葉綠素b。

如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果看不清楚4條色素帶，可能原因：選擇的葉片不夠新鮮、濃綠；研磨不夠迅速、充分；過(guò)慮時(shí)沒(méi)用脫脂棉，而用了濾紙吸附了一定的色素，使提取液色素含量濃度不夠；色素分離時(shí)，層析液沒(méi)及了濾液細(xì)線，使色素溶解到層析液中。

如果4條色素帶不整齊，可能原因是畫(huà)濾液細(xì)線時(shí)，沒(méi)有做到細(xì)、直、齊；濾紙條一端的兩角剪的過(guò)程中不對(duì)稱造成的等等。

十一、板書(shū)設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)4．3 葉綠體中色素的提取與分離

一、實(shí)驗(yàn)原理

1、葉綠體的色素能溶解在有機(jī)溶劑無(wú)水乙醇中，所以可用無(wú)水乙醇提取葉綠素中的色素。

2、葉綠體中的色素在層析液中的溶解度不同。溶解度高的隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得快。溶解度低的隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得慢。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求

1、初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法。

2、探索葉綠素中有幾種色素，觀察和區(qū)別葉綠素中的色素的種類及顏色。

三、實(shí)驗(yàn)材料用具

四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟

1．提取色素 2．制備濾紙條 3．畫(huà)濾液細(xì)線 4．分離色素 5．觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果

五、課后思考題

十二、學(xué)生做好整理工作，并完成以下課后思考題

1．在圓濾紙的中央，點(diǎn)上葉綠體色素的提取液進(jìn)行層析，隨著層析液從濾紙中央向四周擴(kuò)散，形成四個(gè)色素帶，排在最里面的色素是（）

A．葉黃素

B．胡蘿卜素

C．葉綠素a

D．葉綠素b 2．某位同學(xué)在做葉綠體色素的提取分離實(shí)驗(yàn)時(shí)，操作情況如下所述，結(jié)果實(shí)驗(yàn)失敗，請(qǐng)指出其錯(cuò)誤所在：

（1）將5克菠菜葉完整放入研缽中，加入無(wú)水乙醇、石英砂、CaCO3，迅速研磨。

（2）用毛細(xì)管吸取少量濾液，沿鉛筆處小心均勻地畫(huà)出一條濾液細(xì)線，并連續(xù)迅速重復(fù)2-3次。（3）把畫(huà)好細(xì)線的濾紙插入層析液中，并不斷搖晃，以求加快色素在濾紙上的擴(kuò)散。

十三、教學(xué)后記

通過(guò)實(shí)驗(yàn)可以培養(yǎng)學(xué)生實(shí)踐操作的能力及合作的精神，掌握探索實(shí)驗(yàn)的方法。初步掌握提取和分離綠葉中色素的方法，探索高等植物綠葉中有幾種色素及其顏色。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，學(xué)生都能用過(guò)濾方法提取綠葉的色素和用紙層析法分離提取到的色素，學(xué)會(huì)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，但由于學(xué)生的探索（好奇）心理，選擇不同操作方法，得到的結(jié)果有些差別，甚至得不到正確明顯的結(jié)果，但培養(yǎng)了學(xué)生敢于探索的精神。

做實(shí)驗(yàn)前，就要給學(xué)生講明白研磨過(guò)程中加入石英砂、碳酸鈣、無(wú)水乙醇或丙酮的作用，讓學(xué)生明確儀器的原理，實(shí)驗(yàn)原理，是培養(yǎng)學(xué)生使用它們的能力的基礎(chǔ)。在提取葉綠體色素中，要讓學(xué)生了解葉綠體色素是有機(jī)物，可以溶于有機(jī)溶劑。了解葉綠素易被細(xì)胞液內(nèi)某些有機(jī)酸破壞，影響對(duì)色素的觀察，從而使學(xué)生明確為什么在研磨時(shí)要加碳酸鈣。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程需要老師的解讀，讓學(xué)生簡(jiǎn)易掌握，在學(xué)生實(shí)驗(yàn)中，不是單純的出現(xiàn)結(jié)果就行了。而要指導(dǎo)學(xué)生去分析實(shí)驗(yàn)中每一步驟的作用，每一個(gè)處理意義以及各步驟之間的聯(lián)系，從中學(xué)習(xí)解決問(wèn)題、研究事物的方法。備好濾紙條后，在距去兩角的一端 1厘米處用鉛筆畫(huà)一橫線，目的是為劃濾液細(xì)線提供參照線并且防止層析時(shí)在盛有層析液的燒杯中，濾液細(xì)線沒(méi)及層析液。劃濾細(xì)線時(shí)還應(yīng)讓學(xué)生知道干燥后重復(fù)劃2～3次，是為了增加色素的分子數(shù)，以便在紙條上走出四條明顯的色素帶來(lái)。如果在不干燥的情況下連續(xù)劃線，色素會(huì)隨濾液中的液體（如丙酮）在紙條上的擴(kuò)散而擴(kuò)散，劃出的濾液細(xì)線較寬，其結(jié)果是相鄰的兩條色帶會(huì)發(fā)生部分重疊，影響實(shí)驗(yàn)效果。

實(shí)驗(yàn)中有的學(xué)生的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不明顯或失敗，老師應(yīng)幫助學(xué)生查找原因。如葉綠體中色素提取和分離的實(shí)驗(yàn)結(jié)果四條色素帶部分或全部不明顯，老師可提示操作過(guò)程中是否按照老師要求去做的，有沒(méi)有對(duì)忽視實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)而造成實(shí)驗(yàn)的失敗等等，培養(yǎng)學(xué)生探索問(wèn)題的耐心和能力。

第四篇：葉綠體色素的提取分離實(shí)驗(yàn)報(bào)告

葉綠體色素的提取分離、理化性質(zhì)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

第一部分提取與分離

一實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)應(yīng)用薄層色譜法分離葉綠體色素的實(shí)驗(yàn)方法

二實(shí)驗(yàn)原理

葉綠體是進(jìn)行光合作用的細(xì)胞器。葉綠體中的葉綠體a(C55H72O5N4Mg)、葉綠素b(C55H72O6N4Mg)、胡蘿卜素(C40H56)和葉黃素(C40H56O2)與類囊體膜結(jié)合成為色素蛋白復(fù)合體。這些色素都不溶于水，而溶于有機(jī)溶劑，故可用乙醇等有機(jī)溶劑提取。提取液可用薄層色譜法加以分離與鑒別。

薄層色譜分析法是將吸附劑均勻的涂在玻璃板上成一薄層，將此吸附劑薄層做固定相，把待分離的樣品溶液點(diǎn)在薄層板的下端，然后用一定量的溶劑做流動(dòng)相，將薄層板的下端浸入到展開(kāi)劑中。流動(dòng)相通過(guò)毛細(xì)管作用由下而上的逐漸浸潤(rùn)薄層板，并帶動(dòng)樣品在板上也向上移動(dòng)，樣品中各組分在吸附劑和展開(kāi)劑之間發(fā)生連續(xù)不斷的吸附、脫附、再吸附、再脫附……的過(guò)程。由于吸附劑的吸附能力大小不同，吸附力強(qiáng)的物質(zhì)相對(duì)移動(dòng)慢一些，而吸附力弱的則相對(duì)移動(dòng)快一些，從而使各組分有不同的移動(dòng)速度而彼此分開(kāi)。

三實(shí)驗(yàn)材料與試劑新鮮的菠菜葉片體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，碳酸鈣粉末，展開(kāi)劑(石油醚:丙酮:苯=7:5:1，體積比)3 天平，研缽，漏斗，三角瓶，剪刀，點(diǎn)樣毛細(xì)管，層析缸，硅膠預(yù)制板，濾紙

四實(shí)驗(yàn)步驟

(一)色素提取液的制備取新鮮葉片4至5片(2g左右)，洗凈，擦干葉表面，去中脈剪碎，放入研缽中。研缽中加入少量碳酸鈣粉末，加2至3ml體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，研磨至糊狀，再加10至15ml體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，上清液用漏斗過(guò)濾，殘?jiān)儆?0ml體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇沖洗一次，一同過(guò)濾于三角瓶中，即制成葉綠體色素提取液。提取液應(yīng)避光保存。

(二)葉綠體色素的分離取硅膠預(yù)制板一個(gè)，用點(diǎn)樣毛細(xì)管吸取上述提取液，平行于硅膠板的短邊，距下邊緣約1cm處用毛細(xì)管劃線，風(fēng)干后再劃第二次，重復(fù)操作3至4次。在干潔的層析缸中加入適量的展開(kāi)劑，高度約0.5cm，將硅膠預(yù)制板帶有色素的一端放下，使其浸入展開(kāi)劑中(但不要使待測(cè)樣品浸入展開(kāi)劑中)。迅速蓋好層析缸蓋。此時(shí)，展開(kāi)劑借毛細(xì)管作用沿硅膠預(yù)制板向上擴(kuò)散，并把葉綠體色素向上推動(dòng)，不久即可以看到各種色素的色帶。當(dāng)各種色素的得到較好分離，展開(kāi)劑前沿接近硅膠預(yù)制板上端近邊緣處時(shí)，取出硅膠預(yù)制板，并迅速用鉛筆標(biāo)出展開(kāi)劑前沿和各色素帶的位置。

五實(shí)驗(yàn)結(jié)果及數(shù)據(jù)、分析

經(jīng)過(guò)薄層色譜分離后，葉綠素a為藍(lán)綠色，葉綠素b為黃綠色，葉黃素為鮮黃色，胡蘿卜素為橙黃色。各色素帶在薄層中的位置可用相對(duì)比移值Rf表示，即

Rf=斑點(diǎn)中心到原點(diǎn)的距離/溶劑前沿至遠(yuǎn)點(diǎn)的距離

由于不同組分具有不同的Rf值，所以比較Rf值可以進(jìn)行定性分析。但是，實(shí)驗(yàn)中的很多因素也可以影響到Rf的值，例如吸附劑的種類、層析缸的形狀大小、溫度、展開(kāi)劑的濃度等等。

最后測(cè)得數(shù)據(jù)：Rf(胡蘿卜素)=0.972，Rf(葉綠素a)=0.908,Rf(葉綠素b)=0.856，Rf(葉黃素)=0.804。

第二部分理化性質(zhì)

一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康尿?yàn)證葉綠體色素的理化性質(zhì)

二實(shí)驗(yàn)原理

葉綠素是一種由葉綠酸和葉綠醇形成的復(fù)合酯，故可與堿起皂化反應(yīng)而生成甲醇和葉綠醇及葉綠酸鹽，產(chǎn)生的鹽能溶于水，故可用此法將葉綠素和類胡蘿卜素分開(kāi)。葉綠素吸收光量子而轉(zhuǎn)變成為激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)的葉綠素分子很不穩(wěn)定，當(dāng)它變回倒基態(tài)時(shí)可發(fā)射出紅光量子，因而產(chǎn)生熒光。葉綠素的化學(xué)性質(zhì)很不穩(wěn)定，容易受到強(qiáng)光的破壞，特別是當(dāng)葉綠素與蛋白質(zhì)分離以后，破壞更快，而類胡蘿卜素則較穩(wěn)定。葉綠素中的鎂可以被H+所取代而生成褐色的去鎂葉綠素。去鎂葉綠素遇銅則成為銅代葉綠素，銅代葉綠素很穩(wěn)定，在光下不易被破壞，故常用此法制作綠色多汁植物的浸漬標(biāo)本。

三實(shí)驗(yàn)材料及試劑新鮮菠菜葉片刻度試管，小試管，試管架，水浴鍋，10ml移液管體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，苯，醋酸銅粉末，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的稀鹽酸，醋酸-醋酸銅溶液，氫氧化鉀-甲醇溶液

四實(shí)驗(yàn)步驟

(一)光對(duì)葉綠素的破壞作用取2支小試管，各加入2.5ml葉綠體色素乙醇提取液，并用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇稀釋一倍。其中一支放在直射日光下，另外一支放在暗處或用錫箔紙包嚴(yán)，40分鐘后對(duì)比觀察顏色有何變化。另取本實(shí)驗(yàn)中用薄層層析分離成的硅膠色譜板一個(gè)，按長(zhǎng)度方向?qū)⒁话胗煤谏埢蛩芰媳∧ぐ。旁谥鄙淙展庀?，半小時(shí)后觀察，比較色譜板上各色素的顏色有何變化。

(二)皂化作用取1支10ml刻度的試管加入3ml濃的葉綠體色素乙醇提取液，加入1ml氫氧化鉀-甲醇溶液，充分搖勻。片刻后，加入3ml苯，搖勻，再沿試管壁慢慢加入1ml左右的蒸餾水，輕輕搖勻(勿激烈搖蕩)，然后置于試管架上靜置分層。若溶液不分層，則用滴管吸取蒸餾水，沿管壁滴加，邊滴加邊搖動(dòng)，直到溶液開(kāi)始分層時(shí)，靜置。

(三)H+和Cu+對(duì)葉綠素分子中的Mg+的取代作用取兩支試管，第一支試管中加葉綠體色素提取液5ml，作為對(duì)照。第二支試管中加入葉綠體色素提取液5ml后，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的HCl數(shù)滴，搖勻，觀察溶液顏色變化。當(dāng)溶液變褐后，再加入少量醋酸銅粉末，60℃水浴加熱，觀察溶液顏色變化情況，并與對(duì)照試管相比較。取新鮮植物葉片兩片，放入試管中，加醋酸-醋酸銅溶液，使之沒(méi)過(guò)葉片，90℃水浴加熱，隨時(shí)觀察葉片顏色的變化，直至顏色不再變化為止。

(四)熒光現(xiàn)象的觀察

取一支小試管加入3ml濃的葉綠素乙醇提取液，在直射光下照射，比較溶液的透射光與反射光的顏色有何不同。

五實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析在光對(duì)葉綠素的破壞的實(shí)驗(yàn)中，未觀察到提取液的顏色變化以及個(gè)色素的顏色變化，分析其原因，可能是因?yàn)楫?dāng)時(shí)的陽(yáng)光已經(jīng)不夠強(qiáng)烈，不足以對(duì)色素達(dá)到破壞的程度，而且放置的位置不夠好，不能使樣品被陽(yáng)光直射，而且放置的時(shí)間也可能不夠長(zhǎng)，所以導(dǎo)致此試驗(yàn)失敗。2 靜置一段時(shí)間之后，溶液逐漸分為兩層，下層是稀的乙醇溶液，其中溶有皂化的葉綠素a和葉綠素b(以及少量的葉黃素)，呈綠色；上層是苯溶液，其中溶有黃色的胡蘿卜素和葉黃素，呈黃色；最下層有少量黃色乳狀液體，這是由于皂化液沉積引起的?！ぎ?dāng)加入了少量的鹽酸后，溶液在短時(shí)間內(nèi)變?yōu)榱撕稚?，再加入少量的醋酸銅粉末，水浴加熱一段時(shí)間后，溶液又重新變?yōu)榱怂{(lán)綠色。

·90℃水浴加熱約半個(gè)小時(shí)以后，葉片變?yōu)辄S色，約一個(gè)半小時(shí)以后，葉片又逐漸恢復(fù)為藍(lán)綠色。熒光現(xiàn)象:透射光下呈綠色，反射光下呈紅褐色。

第三部分實(shí)驗(yàn)感想實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，同組人員的配合十分重要，因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)的步驟很多，所以兩個(gè)人配合起來(lái)的話可以大大的提高實(shí)驗(yàn)效率。在用毛細(xì)管劃線時(shí)，不可以畫(huà)的太粗，否則會(huì)影響分離的時(shí)間，而且效果也不太好。3 做葉綠素光解的實(shí)驗(yàn)時(shí)，要多等一些時(shí)間，否則時(shí)間太短的話實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象不明顯，或者沒(méi)有出現(xiàn)應(yīng)有的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。

第五篇：綠色植物中色素的提取和分離

綠色植物中色素的提取和分離

一、實(shí)驗(yàn)的目的：

1、學(xué)習(xí)從植物中提取色素的方法。

2、學(xué)習(xí)柱色譜(層析)的原理及其操作方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

柱色譜是通過(guò)色譜柱來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的。在色譜柱內(nèi)裝有固體吸附劑(固定相)如氧化鋁或硅膠。液體樣品從柱頂加入，當(dāng)液體流經(jīng)吸附劑時(shí)，由于吸附劑表面對(duì)液體中各組分吸附能力不同而按一定的順序吸附。然后從柱頂加入洗脫劑(流動(dòng)相)，樣品中的各組分隨洗脫劑按一定的順序從色譜柱下端流出，根據(jù)不同顏色分段收集。

三、器材與試劑

氧化鋁,石油醚,乙酸乙酯,色譜柱,乙醇,綠葉 ,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀

四、實(shí)驗(yàn)步驟

菠菜色素的提取過(guò)程

取3g 新鮮菠菜葉于研缽中拌勻研磨5 分鐘，殘?jiān)?0mL 的石油醚-乙醇（2:1）混合液進(jìn)行提取，共提取兩次。把浸取液合并過(guò)濾，濾液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，加入等體積的水洗滌后棄去下層的水-乙醇層，石油醚層再用等體積的水洗滌兩次，以除去乙醇和其它水溶性物質(zhì)。石油醚層用無(wú)水Na2SO4進(jìn)行干燥、濃縮為2 mL。取一半做柱層析分離，其余留作薄層層析分析。

（4）上樣：將要分離的混合物用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙夂?，用滴管沿柱壁慢慢加入吸附劑表面?/p>

（5）淋洗分離：當(dāng)被分離物的溶液面降至吸附劑表面時(shí)，立即加入洗脫劑進(jìn)行淋洗，此時(shí)可以配合薄層層析來(lái)確定各組分的分離情況。

取15-20g 中性氧化鋁進(jìn)行濕法裝柱。填料裝好后，從柱頂加入上述濃縮液，先用9:1的石油醚-丙酮進(jìn)行洗脫，當(dāng)?shù)谝粋€(gè)橙黃色色帶（胡蘿卜素）即將流出時(shí)，換一接收瓶接收，約需要洗脫劑40 mL。換用7:3的石油醚-丙酮進(jìn)行洗脫，當(dāng)?shù)诙€(gè)棕黃色色帶（葉黃素）即將流出時(shí)，換一接收瓶接收。此時(shí)，繼續(xù)更換洗脫劑，用3:1:1的正丁醇-乙醇-水洗脫，分別在層析柱的上端可見(jiàn)藍(lán)綠色和黃綠色的兩個(gè)色帶，此為葉綠素a和葉綠素b。

(1)用10g中性氧化鋁和石油醚裝層析柱。

(2)將綠色植物色素濃溶液用滴管小心加到層析柱頂部。加完后打開(kāi)下部活塞，讓液面下降到柱面以下1mm左右關(guān)閉活塞。加入數(shù)滴石油醚，重新打開(kāi)活塞使液面下降，重復(fù)幾次使有色物質(zhì)全部進(jìn)入柱體內(nèi)。

(3)依次用不同洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集各色帶

五、注意事項(xiàng)

1.石油醚有毒，請(qǐng)?jiān)谕L(fēng)良好處使用；

2.柱中不可有空氣，必要時(shí)用裝在玻棒上的橡皮塞輕輕敲擊柱身；

3.柱中氧化鋁表面任何時(shí)候都不得露出液面，以防有空氣進(jìn)入；

4.待色素全部進(jìn)入柱體后，方可進(jìn)行洗脫，以防有拖尾影響分離效果。