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菌種傳代操作規(guī)程

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核

批

準

制訂日期

審核日期

批準日期

頒發(fā)部門

質(zhì)量部

生效日期

分發(fā)部門

化驗室

一、目的：為使菌種傳代操作規(guī)范化、制度化，故建立此規(guī)程

二、適用范圍：菌種傳代須按本規(guī)程執(zhí)行。

三、責(zé)任者：微生物限度檢查化驗員，質(zhì)量檢測中心主任。

四、正文：

1、培養(yǎng)基的制備

按微生物限度檢查用稀釋劑、培養(yǎng)基配制操作規(guī)程及斜面配制操作規(guī)程配制好相應(yīng)培養(yǎng)基。大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、沙門菌、用胰酪大豆胨瓊脂斜面培養(yǎng)基，白色念珠球菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基，制備好的培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)48小時后，確認無菌落生長方可使用。

2.菌種傳代

2.1菌種傳代前應(yīng)準備好適于該菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)設(shè)備，所有操作均應(yīng)在符合生物安全保護的生物安全柜內(nèi)進行。

2.2點燃酒精燈，在火焰上部操作，將原有的菌種斜面（簡稱菌種管）與待接種的新鮮斜面培養(yǎng)基（簡稱接種管）持在左手拇指、食指及中指之間，菌種管在前，接種管在后，使試管內(nèi)斜面向上，兩支試管口平齊，應(yīng)斜持試管呈45°角，以免管底凝集水浸濕培養(yǎng)基表面。用右手在火焰旁轉(zhuǎn)動兩支試管膠塞，以便接種時易于撥取。再用右手持接種環(huán)的柄端，垂直或稍斜地把接種環(huán)在火焰上灼燒。將接種環(huán)燒紅約30s，隨后將接種棒金屬部分在火焰上燒灼，以徹底滅菌。用右手的小指和手掌之間以及無名指與小指之間，在火焰旁分別拔除兩支試管的膠塞，持住。在將試管口在火焰上通過以殺滅管口的細菌，但勿燒的過熱，將燒灼的接種環(huán)插入菌種管內(nèi)，先接觸無菌苔生長的培養(yǎng)

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基上，如有溶印則表明接種環(huán)未冷卻，待冷后，再從斜面上挑取少許菌苔。取出時接種環(huán)不能通過火焰，應(yīng)在火焰旁迅速插入接種管，在斜面上由下而上劃

“Z”字型曲線，當接種完畢，立即將管口通過火焰滅菌，右手到火焰旁塞上膠塞，不要將管口離開火焰旁去迎接右手的膠塞。最后將接種環(huán)燒灼滅菌放置備用。

3.培養(yǎng)

將以上接種好的各菌管放入相應(yīng)溫度的培養(yǎng)箱內(nèi)，白色念珠菌放入23-28℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24-48h，黑曲霉放入23-28℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5-7天，其它菌種放入30-35℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18-24小時。

4.保存

除銅綠假單胞菌需室溫保存外，將其它傳代培養(yǎng)后的菌種應(yīng)放入4-6℃的冰箱冷藏保存。

依據(jù)：《中國藥典》2015版及中國藥品檢驗標準操作規(guī)范