第一篇：乙型肝炎血清學檢測中不常見模式分析

乙型肝炎血清學檢測中不常見模式分析

乙型肝炎病毒的血清學檢測是臨床實驗室的常規(guī)檢測項目，應用最廣泛的就是我們俗稱的乙肝“二對半”。人體感染乙肝病毒后，血清中抗原、抗體的變化有一定的規(guī)律性，有一些模式是我們經常遇到的，例如我們通常所稱的“大三陽”、“小三陽”等，而所謂的不常見模式是相對于常見模式而言，這些模式難以用乙型肝炎病毒感染后血清學指標規(guī)律性的改變來解釋。不常見模式的出現是多種因素造成的。如果排除了試劑、操作及其他干擾因素，根本原因是病毒變異或人體免疫狀態(tài)改變所引起。乙型肝炎病毒的變異是在慢性感染過程中為適應生存環(huán)境而自然發(fā)生的，特別是近幾年抗乙肝藥物以及疫苗的廣泛應用，使乙肝病毒的突變發(fā)生率明顯增加。突變可發(fā)生在基因組各個區(qū)域：前S/S區(qū)、前C/C區(qū)、P區(qū)以及X區(qū)，由于基因的變異造成其合成的蛋白構象發(fā)生改變，使臨床檢測血清學指標的模式有所改變。而人體免疫狀態(tài)的改變，無論是由于遺傳性的還是繼發(fā)性的原因，都可能在感染乙肝病毒時發(fā)生無免疫應答或應答低下，使臨床實驗室無法檢測到某種抗原或抗體，繼而使血清學指標的模式發(fā)生改變。

本實驗室統(tǒng)計了8099例用Abbott Axsym試劑檢測乙型肝炎病毒血清學指標的結果，包括乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗體（HBeAb）、乙肝核心抗體（HBcAb）以及乙肝核心抗體-IgM（HBcAb-IgM），其中有150例為不常見模式，占1.85%。雖然所占比例較低，但由于我國是乙肝的高發(fā)區(qū)且人口眾多，因此不常見模式的絕對數仍不容忽視。

我們統(tǒng)計了本實驗室不常見模式出現的百分比，最多見的依次為以下5種不常見模式：HBeAg與HBeAb同時陽性、HBsAg與HBsAb同時陽性、HBsAg單獨陽性、HBsAg陰性而HBcAb-IgM陽性、HBeAg單獨陽性。我們將這些模式可能出現的原因進行分析討論，有以下幾種情況：

1、HBeAg與HBeAb同時陽性：HBeAg陽性一般反映HBV復制活躍，傳染性較強，抗HBe一般在HBeAg由陽性轉為陰性后產生，表明部分病毒被清除，乙肝有所緩解，傳染性降低。而我們統(tǒng)計的HBeAg和HBeAb同時陽性占總的不常見模式的百分比高達44%，并且結合肝功能指標發(fā)現，慢性指標天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、γ-谷氨酰轉移酶（γ-GT）升高的百分比較高，提示急性HBV感染趨向恢復（感染中期），處于血清轉換期，但肝細胞仍有炎癥損傷。

但值得注意的是，并非所有HBeAg陽性轉為陰性都提示病情有好轉的趨勢，一些乙肝患者和健康攜帶者出現-HBeAb的同時可檢測到持續(xù)高滴度的與前C區(qū)/C區(qū)突變相關的HBV復制。此時應檢測HBV-DNA，以觀察患者體內HBV是否有復制。如HBeAg已轉陰，而HBV-DNA仍有復制，高度提示HBV已發(fā)生變異。前C區(qū)1896位（A83）的變異是HBV中最常見，也是目前研

究最多的變異之一，是乙肝病毒為適應生存環(huán)境，使前基因組RNA結構更具穩(wěn)定性，有利于病毒復制而引起的突變（與基因型有關），臨床上表現為HBeAg陰性而HBV-DNA陽性，患者處于活動狀態(tài)的慢性乙型肝炎。

隨著以拉米夫定為代表的核苷類抗病毒藥物的應用，推動了慢性乙型肝炎治療的進程，治療過程中會發(fā)生HBeAg向HBeAb的血清轉化，出現HBeAg和HBeAb同時陽性。但拉米夫定的臨床廣泛應用也遇到了與以往治療類似的問題，如持續(xù)應答率不滿意、部分患者停藥后復發(fā)、需長期用藥和耐藥突變等。其中耐藥突變研究最多是YMDD變異，已有研究證實，YMDD變異株復制活力較野生株低，停用拉米夫定后野生株很快恢復為優(yōu)勢株，因此變異出現并不是停止治療的指標，發(fā)生變異不一定耐藥，只有當變異株成為優(yōu)勢株時才發(fā)生耐藥。臨床應根據患者不同的臨床表現，密切觀察用藥后HBeAg的血清轉換率、治療前后谷丙轉氨酶（ALT）的升降、HBV-DNA的水平高低以及加強對耐藥突變的檢測，綜合評價療效，制定下一步的治療方案，并加強隨訪。

2、HBsAg與HBsAb同時陽性：HBsAg是HBV感染的特異性指標，HBsAb一般于HBsAg消失數周后（也就是急性感染約5個月后）開始在血液中出現，是HBsAg刺激機體產生的特異性保護抗體，是HBV感染終止及有免疫力的標志。一般情況下，血清中HBsAg和HBsAb不可能同時存在。本實驗室統(tǒng)計發(fā)現HBsAg 與HBsAb同時陽性占總的不常見模式百分比為35.26%，居不常見模式的第2位。隨著大量乙肝治療藥物的臨床應用以及乙肝疫苗的推廣使用，此種模式的患者數量還會明顯增加。

分析原因可能有以下幾種：①接種乙型肝炎疫苗后，雖有正常的HBsAb應答，但仍能感染α決定簇變異的免疫逃逸病毒株，從而與HBsAb并存。②前后有不同亞型的HBV感染。③乙肝病毒攜帶者接種疫苗后產生HBsAb，由于S基因的變異，其編碼的HBsAg抗原性改變，原型HBsAb不能將HBsAg清除。有研究者統(tǒng)計，隨訪臺灣地區(qū)10年來乙肝HBV-DNA陽性兒童由于接種疫苗后發(fā)生S基因變異，由1984年（接種前）的6.1%（8/132）上升到了1989年（5年后）的19.6%（10/51）和1994年（10年后）的28.1%（9/32）。而且HBV-DNA陽性兒童接種疫苗后S基因變異率明顯高于未接種疫苗者（12/33對15/153）。由此可見HBV基因變異株有可能在免疫后人群中流行而成為新的公共衛(wèi)生問題。④HBsAb能與HBsAg 構成免疫復合物，所以少數慢性乙肝患者可出現HBsAb和HBsAg 同時陽性。另外，由于干擾素既能抑制病毒復制，又能調節(jié)宿主免疫，因此對于干擾素治療的慢性乙肝患者，在治療中雖出現HBsAb血清轉換，但由于S基因的變異，而不能將HBsAg清除。該模式盡管HBsAb陽性，但由于有免疫逃逸病毒株的存在，因此肝功能的急慢性指標均有不同程度的升高，說明乙肝并未進入恢復期，對于該模式的患者應結合HBV-DNA和前S蛋白等檢測，以了解病毒復制情況，進行正確的治療。

3、HBsAg單獨陽性：不常見模式中還有HBsAg單獨陽性，無抗體出現的模式，主要見于①急性HBV感染的最早期，一般隨之出現HBeAg和HBcAb-IgM，若以后仍為持續(xù)性單一的

HBsAg陽性，需用HBsAg確認實驗以避免假陽性結果。②HBsAg攜帶者母親所生的嬰兒。結合臨床診斷分析，此種模式主要為慢性乙肝，且肝功能指標僅AST升高，提示可能處于乙肝感染的早期或低水平感染。

4、HBsAg陰性而HBcAb-IgM陽性：HBcAb-IgM是HBV感染后較早出現的抗體，高滴度的HBcAb-IgM被認為是診斷急性乙型肝炎的“金標準”，即使HBsAg(-),也可診斷急性乙型肝炎，高滴度的HBcAb-IgM常表示肝臟損害，有肝功能的異常。HBsAg陰性而HBcAb-IgM陽性的模式，其肝功能急性指標升高的患者較少，而慢性指標升高的患者較多，有報道認為此種模式可能是急性乙肝處于恢復的窗口期。

5、HBeAg單獨陽性：HBsAg陰性而HBeAg陽性。有文獻報道，HBV-S基因區(qū)突變可使患者感染HBV后，產生HBsAg陰性結果，若運用PCR技術在血清或肝組織中能檢測出HBV-DNA，此可視為HBsAg陰性的HBV感染，但較為少見。另有報道：HBsAb與HBsAg 可形成免疫復合物，當抗體的數量恰好將抗原決定簇位點全部覆蓋時，便造成了血清中既不能檢測到HBsAg 又不能檢測到HBsAb的現象；類風濕因子與HBeAg有交叉抗原存在，當類風濕因子陽性時，可能造成HBeAg假陽性，此時如遇到HBeAg單獨陽性時應做類風濕因子檢測，以排除假陽性的可能。少數病例可能與干擾素治療中C基因區(qū)的短暫整合或S基因序列中決定簇前有插入變異有關。

特別需要注意的是有些不常見模式是由于一些外在的因素造成的，如試劑質量、方法學差異、操作誤差及樣本干擾等，例如HBsAg濃度過高，有些采用“一步法”檢測的試劑盒會產生“鉤狀效應”，出現假陰性的結果，以上提到的不常見模式中4、5兩種模式就有可能為“鉤狀效應”造成，要避免這種情況，可將標本稀釋后再測或采用“二步法”的試劑進行檢測。因此，對臨床實驗室檢測到的乙肝不常見模式不能輕易發(fā)出報告，首先要進行復查，排除試劑及操作過程造成的誤差，并且最好采用不同的試劑及方法加以驗證；其次應及時與臨床溝通并結合HBV-DNA、肝功能等檢查以及臨床癥狀進行綜合分析；此外，有條件的實驗室還可以對這些標本進行基因突變的檢測，這樣有利于分析這些模式產生的真正原因，也為臨床的診斷和治療提供可靠依據。

第二篇：17102例乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒檢測結果分析

【摘要】 目的 回顧性分析傳染病乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒4項檢測結果，分別探討其在就診患者中診療的意義。方法 對17102例患者的傳染病4項檢測結果進行回顧性分析，所有患者均采用時間分辨免疫熒光法檢測乙型肝炎表面抗原（hbsag），采用酶聯(lián)免疫法檢測丙型肝炎病毒抗體（抗-hcv）、人類獲得性免疫缺陷病毒抗體（抗-hiv）和梅毒螺旋體抗體，并分析檢查結果。結果 ①4 項

檢測結果中hbsag、抗-hcv、梅毒螺旋體抗體、抗-hiv陽性率分別為21.60%、0.71%、0.75%、0.35%。②科室分布：門診部作為相對獨立的大科室，在傳染病4項中均占有較高的比例，住院患者中腹部外科的hbsag陽性率較其他科室高，整個外科的陽性比例要比內科高。結論 傳染病4項陽性率在門診及體檢患者中較為常見，住院患者以外科陽性率為高，及時檢查能降低醫(yī)源性陽性率，避免發(fā)生醫(yī)療糾紛，減少醫(yī)院內感染。

【關鍵詞】 乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；艾滋??；梅毒

doi：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.16.004

傳染病4項檢測在臨床上具有相當廣泛的實用性和必要性，由于經過血液傳播的疾病初期在臨床上往往無明顯特異性，容易被忽視，并可能對患者及他人造成嚴重后果，傳染病患者在不知曉的情況下進行輸血及無償獻血，對血液安全造成嚴重威脅[1]。本文分析傳染病4項檢測在臨床中的意義，報告如下。

資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1～12月在本院參與hbsag、抗-hcv、抗-hiv、梅毒螺旋體抗體檢測的17102例就診患者，年齡1～90歲。

1.2 試劑及儀器 hbsag采用上海新波生物有限公司試劑，抗-hcv檢測試劑盒購自北京萬泰生物藥業(yè)有限公司，抗-hiv檢測試劑盒購自珠海麗珠試劑股份有限公司，梅毒螺旋體抗體試劑盒購自北京貝爾生物工程有限公司，儀器采用hr801全自動酶標儀。

1.3 檢測方法 所有患者均清晨空腹采集靜脈血3～5 ml并及時送檢。hbsag采用時間分辨免疫熒光分析法檢測，抗-hcv、抗-hiv、梅毒螺旋體抗體均采用酶聯(lián)免疫法進行檢測。

結果

2.1 檢測結果 17102例中hbsag陽性3694例（21.60%），陽性率最高；抗-hcv陽性122例（0.71%）； 梅毒螺旋體抗體陽性129例（0.75%）；抗-hiv陽性60例（0.35%）。

2.2 科室分布情況 門診部作為相對獨立的大科室，在傳染病4項中均占有較高的比例，住院患者中腹部外科的hbsag陽性率較其他科室高，整個外科的陽性比例要比內科高，這種情況也反映在抗-hcv、抗-hiv和梅毒螺旋體抗體的陽性情況上。見表1。

討論

我國肝炎高發(fā)，尤其以乙型肝炎、丙型肝炎最多[2]。據報道，hcv的慢性陽性率約為我國總人口的3%，而隱性 hbsag感染者超過8%[3-8]。自 1981 年 6月美國疾病控制中心（cdc）報道首例艾滋病以來，短短 30 年間，艾滋病已在

230 多個國家和地區(qū)流行，至少有5000萬hiv感染者，中國內地1985年6月發(fā)現首例外籍艾滋病患者，截止2007年7月

底，全國已累計艾滋病病毒感染者21.43萬例，艾滋病患者達56758 例，死亡18246 例。本組發(fā)現抗-hiv呈陽性反應者達60例，以門診部、感染科和其他內科比例為最高；感染科是集中了全院大部分艾滋病病毒感染病例，或是首診或是其他住院科室轉來或是進入艾滋病發(fā)病期的過往患者，因此比例較高，而其他內科由較多科室組成，各內科科室比例不高；門診部的比例較高，因此必需高度注意門診首診患者的艾滋病病毒抗體篩查。梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種慢性全身性疾病，我國近年來開展梅毒臨床監(jiān)測，發(fā)現醫(yī)院皮膚科門診就診患者中梅毒約占10%，部分地區(qū)的城市人口中5%患有梅毒，農村地區(qū)為2%～3%[9，10]。

本組17102例傳染病4項檢測結果中hbsag陽性率最高；整個外科hbsag、抗-hcv、抗-hiv和梅毒螺旋體抗體陽性比例要比內科高，因此外科術前篩查傳染病4項和術中醫(yī)務人員注意防護十分重要。

綜上所述，傳染病4項陽性在門診患者中較為常見，而住院患者又以外科較為多見，及時進行傳染病檢出，可降低醫(yī)源性感染發(fā)生率，避免醫(yī)療糾紛，預防醫(yī)院內感染，同時可為阻斷母嬰4項傳染病的垂直傳播提供重要指引。

第三篇：不定時工作制常見爭議問題匯總分析

不定時工作制常見爭議問題匯總

不定時工作制，它沒有固定工作時間的限制，是針對因生產特點、工作性質特殊需要或職責范圍的關系，需要連續(xù)上班或難以按時上下班，無法適用標準工作時間或需要機動作業(yè)的職工而采用的一種工作時間制度，是中國現行的基本工作時間制度之一。

在各行各業(yè)中，并不是每種工作都是朝九晚五這樣規(guī)定好上下班時間的，有些工作沒有固定的工作時間限制，而是等待老板或者客戶隨叫隨到，工作起來不分晝夜。例如企業(yè)高管、外勤人員、推銷人員、長途運輸司機等，這些崗位的工作時間無法按照標準工作時間進行衡量，于是另外一種工作制順勢而生了——不定時工作制。

因為勞動法中缺少細則，不定時工作制在實踐當中時常導致一些勞動爭議，例如員工績效難以考核，加班費難以計算，甚至未經批準而實施不定時工作制等。

相關問題：

問題一：不定時工作制沒有在勞動合同中約定是否就無效？

筆者認為，根據《勞動合同法》第八條規(guī)定，用人單位招用勞動者時，應當如實告知勞動者工作內容、工作條件、工作地點、職業(yè)危害、安全生產狀況、勞動報酬，以及勞動者要求了解的其他情況；第十七條規(guī)定，工作時間和休息休假是勞動合同的必備條款，而且第三十五條規(guī)定，用人單位與勞動者協(xié)商一致，可以變更勞動合同約定的內容。變更勞動合同，應當采用書面形式。因此，筆者認為，不定時工作制會切實影響勞動者的利益，用人單位實行不定時工作制的，應當主動告知，并且在勞動合同中明確注明，由標準工時制等變更為不定時工時制時，應當采用書面形式與勞動者協(xié)商一致。有些地方就是如此規(guī)定的，例如江蘇省人社廳出臺的規(guī)范特殊工時制的相關通知，就要求企業(yè)今后申請?zhí)厥夤r制時，不僅要事先征得勞動者的書面同意，還要在相關的勞動合同和勞務派遣合同中予以注明。

問題二：法定節(jié)假日上班的，應當為不定時工作制的職工支付加班費嗎？ 根據勞動部頒布的《工資支付暫行規(guī)定》中第十三條規(guī)定，實行不定時工作制的勞動者，不執(zhí)行普通用人單位加班工資計算的相關規(guī)定。而各地區(qū)可以輔以出臺適合本地情況的地方法規(guī)。

有些地方對此作出了明確規(guī)定，例如《深圳市員工工資支付條例》第二十條規(guī)定：“用人單位安排實行不定時工作制的員工在法定休假節(jié)日工作的，按照不低于員工本人正常工作時間工資的百分之三百支付員工加班工資?！?/p>

但是在很多地方就沒有針對不定時工作制如何支付加班費的具體規(guī)定，如果地方政府未出臺具體的地方法規(guī)，那么應當按照國家規(guī)定來執(zhí)行，而按照《工資支付暫行規(guī)定》不定時工作制的，用人單位可以不支付加班工資，即使在法定節(jié)假日被安排工作。

問題三：不定時工作制獲得許可后能否改變勞動合同的約定？

行政許可是一種授益性行政行為，按照行政法理論，授益性行政行為不具有強制執(zhí)行力。不定時工作制許可“授益”的范圍，只是為用人單位與勞動者對特殊崗位進行“不定時工作制”協(xié)商提供了條件，并不能當然地改變合同關于工時制的約定。

而且，根據前述問題一的分析，由其他工時制變更為不定時工時制的，應當與勞動者協(xié)商一致并采用書面形式，可見，不定時工時制的許可決定不能改變勞動合同的約定。

問題四：改變標準工時制要與勞動者協(xié)商嗎？

有些用人單位針對某些工作崗位獲得不定時工時制的審批后，沒有變更原勞動合同的約定，或者有些用人單位在規(guī)章制度中規(guī)定了某些工作崗位實行不定時工時制，但是在勞動合同中做相應的變更。這時，對某個具體的員工，他能否以勞動合同沒有變更為由主張不定時工時制對自己不適用呢？

筆者認為，根據《勞動合同法》第十七條規(guī)定 “工作時間與休息休假” 是勞動合同必備條款，而且按照《勞動合同法》第八條關于用人單位告知義務的規(guī)定，用人單位應當就該崗位實行的是不定時工作制的情況對勞動者進行告知，并須與勞動者協(xié)商一致，否則，有可能被視為欺詐而導致勞動合同無效。如果勞動關系成立在前，并且已經約定為標準工時制或約定不明確，而后勞動行政部門許可該崗位為不定時工作制，這種情況下，用人單位要改變標準工時制為不定時工作制，屬于勞動合同的變更。按照《勞動合同法》第三十五條的規(guī)定，用人單位仍然要與勞動者協(xié)商，并用書面形式變更勞動合同。如果勞動者不同意變更，只能按照勞動合同約定的條款繼續(xù)履行勞動合同。

另外，根據《最高人民法院關于審理勞動爭議案件適用法律若干問題的解釋(二)》第十六條規(guī)定，用人單位制定的內部規(guī)章制度與集體合同或者勞動合同約定的內容不一致，勞動者請求優(yōu)先適用合同約定的，人民法院應予支持。因此，即使用人單位的規(guī)章制度與集體合同中約定了某工作崗位實行不定時工時制，但是如果勞動合同中約定的時標準工時制或其他工時制的，仍然應當按照原來的約定履行勞動合同。

但是根據目前的司法實踐，很多案例中，只要是用人單位取得行政許可的，法院都認定該許可已經變更了勞動合同，按照不定時工作制的規(guī)定履行。

問題五：不定時工作制員工是否存在遲到曠工？

案例：

老陳是A科技公司的高級業(yè)務經理，在A公司已經10多年，負責業(yè)務及客戶接待等工作，需要經常外出。早在幾年前，A公司為部分崗位包括老陳在內申請了不定時工作制，簽訂了協(xié)議書。2012年1月，集團空降了總經理到A公司，大力整頓A公司，發(fā)文要求全體人員（包括不定時的高管人員）從2012年2月起每天按時（9點）上班，而且必須打卡考勤，否則嚴格按照考勤制度處罰。

老陳并不在意，2012年3月，老陳突然收到公司的處罰通知書，理由是老陳多次遲到、甚至曠工，并明確如再曠工，將立即解除勞動合同。2012年4月，老陳由于無法改變10多年的習慣，多次不打卡，被A公司以“多次遲到，多次曠工”為由解除勞動合同。老陳不服，遂申請勞動仲裁。

問題：A公司解除老陳勞動關系合理嗎？你的理由是什么？

評析：

根據勞動部《關于企業(yè)實行不定時工作制和綜合計算工時工作制的審批辦法》第四條規(guī)定：“企業(yè)對符合下列條件之一的職工，可以實行不定時工作制：

（一）企業(yè)中的高級管理人員、外勤人員、推銷人員、部分值班人員和其他因工作無法按標準工作時間衡量的職工”

法律法規(guī)規(guī)定，經批準實行不定時工作制的職工，是不受平時工作日延長工作時間標準和月度延長工作時間標準的限制；即不存在加班加點之說法。

不定時工作制的本質是，員工的累計的工作量大概也是每天8小時左右，只是其工作很難在一段固定的連續(xù)的時間內完成，其工作往往是分階段、分時段完成的；員工很可能在早上、下午、晚上、深夜都需要工作或在此等部分時間段內工作。如果勞動者有充分證據證明其工作時間客觀上確實明顯超出8小時，且此狀態(tài)是經常性的，那么用人單位還是存在支付加班費的風險（可能被認定為以合法形式掩蓋非法目的）！

實行不定時工作制的單位，往往不要求員工登記考勤。如果一定要求“不定時工作制”的員工進行考勤登記，那么應該在其出勤、工作的時候登記；而不應該要求其跟普通員工一樣“朝九晚五”標準式地登記。否則，這些員工白天可能沒有工作任務，而晚上去工作的時候他們將可能要求加班費。這樣反而對用人單位很不利！

本案中，老陳的崗位實行了不定時工時制，不應參照標準工時進行打卡考勤。用人單位后面發(fā)文要求按標準工時去打卡，此做法未必對老陳有效，因為用人單位的單方行為未必能對抗雙方的約定《勞動爭議司法解釋

（二）第十六條》。假設內部發(fā)文具有法律效力，且老陳日后執(zhí)行該做法，那么將來老陳就有機會索賠加班費，因為其工作性質決定了老陳肯定存在加班的狀態(tài)！用人單位應衡量得失利弊！

問題六：不定時工作制就是可以隨意“加班”嗎？

【案例】： 今年54歲的老金是某鋼板加工公司的專職駕駛員。2007年9月28日，公司向勞保局提出申請，要求對單位的6名駕駛員實行不定時工作制，申請期從同年10月1日至2008年9月30日。第二天，勞保局作出批復，同意公司對老金在內的6名駕駛員實行不定時工作制，有效期為1年，周一到周五7： 00－19： 00，以外算作加班時間。同時要求公司對于實行該制度的員工，應在保障身體健康的基礎上，采用適當的工作和休息方式，確保員工休息休假的權利。為此，鋼板加工公司要求司機老金等人早上7點上班，晚上7點下班。

對于公司的決定，老金卻不認可。他認為，公司采取的每天工作12小時不定時工作制違法。雙方就此發(fā)生爭議，2008年12月16日，老金將同意公司實行不定時工作制的勞保局告上法庭，要求撤銷其對第三人某鋼板加工公司作出批復的具體行政行為。

在庭審中，被告勞保局表示，自2002年9月起，某鋼板加工公司就駕駛員崗位每年向勞保局申請不定時工作制，并經審批同意。原告在2006年時確認公司對其等成功申請了不定時工作制，每位駕駛員須按照這個規(guī)章制度工作，周一到周五7： 00－19： 00，以外算作加班時間。所以，勞動部門作出的批復具體行政行為合法，事實清楚，適用法律正確。

第三人某鋼板加工公司認為，原告老金起訴超過訴訟時效，他在進入公司時就已知道工作崗位的特殊，是實行不定時工作制的，如有異議，也早應提起訴訟，現原告對已經執(zhí)行完畢、已失效的具體行政行為起訴，顯然不合理。另外，公司對老金從來沒有實行考勤制度，原告所稱每天工作12小時沒有事實根據，公司定7點至19點為上班時間，是為了在此時間段外便于計算加班費。法院審理后認為，根據相關規(guī)定，企業(yè)實行不定時工作制和綜合計算工時工作制的，應向注冊地的區(qū)縣勞動和社會保障局提出申請，因生產特點、工作特殊需要或職責范圍的關系，適合實行不定時工作制的職工，企業(yè)可以實行不定時工作制。

司機老金等人從事駕駛員崗位，工作性質具有一定的特殊性，公司據此向勞保局申請對駕駛員實行不定時工作制，符合規(guī)定。勞保局在2007年9月28日受理原告老金的申請后，進行了審核，并于次日作出批復，同意公司對駕駛員實行不定時工作制，并強調該公司對于實行不定時工作制的員工，在保障其身體健康的基礎上，采用適當的工作方式和休息方式，確保員工的休息休假的權利，該具體行政行為并無不當。另外，行政機關作出具體行政行為時，未告知公民、法人或者其他組織訴權或起訴期限，起訴期限從公民、法人或者其他組織知道或者應當知道訴權或者起訴期限之日起計算，但從知道或者應當知道具體行政行為內容之日起最長不得超過2年。故原告老金的起訴未超過法定期限。至于某鋼板加工公司對原告等實行不定時工作制的員工是否采用了適當的工作方式和休息方式，是第三人對不定時工作制的執(zhí)行問題，不屬于本案審理范圍。據此，鑒于訴爭批復目前已自行失效，法院依法作出判決：駁回司機老金的訴訟請求。爭議焦點。勞保局的批準行為是否合法，認定事實是否清楚，適用法律是否正確。

【評析】：

1、對司機老金能否實行不定時工時制？

根據原勞動部《關于企業(yè)實行不定時工作制和綜合計算工時工作制的審批辦法》（勞部發(fā)[1994]503號）的規(guī)定,企業(yè)中的下列三類職工經勞動行政部門審批，可以實行不定時工作制：（1）企業(yè)中的高級管理人員、外勤人員、推銷人員、部分值班人員和其他因工作無法按標準工作時間衡量的職工；（2）企業(yè)中的長途運輸人員、出租汽車司機和鐵路、港口、倉庫的部分裝卸人員以及因工作性質特殊,需機動作業(yè)的職工；（3）其他因生產特點、工作特殊需要或職責范圍的關系,適合實行不定時工作制的職工。根據上述分析，是可以對司機老金實行不定時工時制的。

2、不定時工時制可以要求隨意“加班”嗎？

《憲法》第四十三條規(guī)定：“中華人民共和國勞動者有休息的權利。國家發(fā)展勞動者休息和休養(yǎng)的設施，規(guī)定職工的工作時間和休假制度?！?/p>

根據原勞動部《關于企業(yè)實行不定時工作制和綜合計算工時工作制的審批辦法》第六條規(guī)定：“對于實行不定時工作制和綜合計算工時工作制等其他工作和休息辦法的職工，企業(yè)應根據《中華人民共和國勞動法》第一章、第四章有關規(guī)定，在保障職工身體健康并充分聽取職工意見的基礎上，采用集中工作、集中休息、輪休調休、彈性工作時間等適當方式，確保職工的休息休假權利和生產、工作任務的完成?！币虼?，不定時工時制的員工，也有休息休假的權利，只是其休息是集中進行或者輪休調休、彈性工作時間等方式進行的而已，并非可以讓他們任意加班。對此，有些地方性規(guī)定也有規(guī)定，例如《深圳市實行不定時工作制和綜合計算工時工作制審批管理工作試行辦法》第七條規(guī)定：“用人單位應當根據標準工時制度，合理確定實行不定時工作制員工的勞動定額，建立健全考勤制度，規(guī)范勞動用工，保障員工休息權?！?/p>

可見，休息休假是勞動者的法定權利，對不定時工時制的員工，用人單位也必須采取彈性工作時間等適當的工作和休息方式,確保職工的休息休假權利。

問題七：違法實行不定時工時制需要承擔什么法律責任？

對此，《勞動保障監(jiān)察條例》第25條規(guī)定：勞動保障部門可以對違反法律、法規(guī)延長工作時間的單位警告、責令限期改正，并可以按照受侵害的勞動者每人100~500元的標準處以罰款。

問題八：不定時工時制的工作崗位是否都必須經過審批？

對此，有些地方有不同的規(guī)定，例如《深圳市實行不定時工作制和綜合計算工時工作制審批管理工作試行辦法》第十五條規(guī)定，用人單位中符合《公司法》規(guī)定的高級管理人員實行不定時工作制的，不需辦理審批手續(xù)。因此，在深圳，對總經理、財務負責人、董事會秘書和公司章程規(guī)定的其他高級管理人員，可以不辦理不定時工時制的審批手續(xù)實行不定時工時制。

應對措施：

1.用人單位應擔保障勞動者的休息休假權。

在不影響勞動者身心健康的情況下，企業(yè)由于生產經營需要而要求職工加班加點是法律允許的，但是必須符合法定的條件。

2.必須經過勞動行政部門的批準。

非因地方規(guī)定，實行不定時工作制不能由用人單位單方決定，也不能僅僅由雙方在勞動合同約定，只有經過勞動行政部門審批才合法。

3、在勞動合同中注明 為避免爭議，如果經過勞動行政部門審批同意的，建議用人單位在勞動合同中明確注明實行不定時工時制。

【作者簡介】

段海宇，勞動法專家，畢業(yè)于華僑大學。

著有《人力資源全流程法律風險管理手冊》、《人力資源法律風險管控操作實務》和《勞資法律風險管理手冊》（電子書）等著作，當當網有售。

第四篇：壓力容器中圖紙常見錯誤分析

壓力容器審圖中圖紙常見錯誤分析

（反應釜）

1． 壓力容器類別錯誤，主要未按多腔容器劃類原則進行。

例如：有一符合監(jiān)察條件的反應釜，內筒最高工作壓力為0.052MPa(400mmHg),最高工作溫度：120℃，介質：易燃、易爆、中度危害。夾套：最高工作壓力為0.6MPa(表壓)，最高工作溫度165℃，介質：飽和水蒸汽。定出容器類別：一類。內筒實際上不成類別，只需按夾套來確定類別。

2． 由于類別的錯誤，帶來一系列的錯誤，如：無損檢測的比例、焊接接頭系數等錯誤。3． 技術特性表中主要受壓元件材質缺少或者是少裝量系數、操作容積等數據。

4． 內筒與夾套焊接，異種金屬（如碳鋼與不銹鋼焊接）未采用高鉻鎳焊條，僅采用普通

不銹鋼焊條，如：A102。

二、三壓力容器不要用酸性焊條和酸性焊劑。5． 技術要求中鍛件級別不正確，出現Ⅰ級鍛件。6． 立式反應釜水壓試驗時，注明是臥試，應為立試。

7． 水壓試驗時，內筒為不銹鋼材料未在技術要求中說明控制水中的氯離子含量不超過

25mg/l。

8． 技術要求中關于攪拌試運轉未按照HG/T20569-1994執(zhí)行。9． 水壓試驗時，軸封處泄漏量的數據不正確。

10．內筒介質為易燃、易爆特性，軸封形式采用填料密封，未采用機械密封。11． 設備法蘭的公稱壓力等級錯誤，密封面形式錯誤。12． 設備法蘭的緊固件選用錯誤。（螺栓、螺母、墊片）13． 管法蘭的公稱壓力等級錯誤，密封面形式錯誤。14． 管法蘭的緊固件選用錯誤。（螺栓、螺母、墊片）

15． 技術要求中缺少設備法蘭與內筒焊接C縫的無損檢測要求。

16． 技術要求中設備法蘭與內筒焊接C縫的無損檢測方法不正確，如奧氏體焊縫采用MT，應該為PT。

17． 介質為易燃、易爆的，未注明防爆電機和設備靜電接地的要求。18． 夾套上端缺少直徑不小于10mm的排氣口。19． 管口方位圖上少定位尺寸或定位角度。

20． 夾套與內筒焊接節(jié)點圖標注不全面，扳邊圓弧太小。21． 缺少非徑向焊接節(jié)點圖。

22． 不等厚對接焊接節(jié)點圖削邊長度不夠，CS、LAN為1：3；SS為1：4或1：5。23． 溫度計接管的長度太短，插不到液面以下。24． 水壓試驗、氣密性試驗的試壓步驟不正確。25． 懸臂軸應注明軸端到底封頭的距離。

26． 帶保溫層的立式反應釜耳座選了A型，未采用B型。27． 夾套進蒸汽口未設置防沖扳。

28． 導流板設置結構不合理，導致制造困難。29． 底部接管不合理，開擋太小。

30． 技術要求中不銹鋼鋼板未注明應按壓力容器用鋼板交貨。

31． 視鏡在管口方位圖上位置有誤，應錯開一個角度，不能在一直線上。32． 管口在同一圓周上分布得太多了，強度削弱太多 33． 單垮軸的反應釜結構不合理，未設置人孔。

壓力容器審圖中圖紙常見錯誤

（換熱器）

1． 壓力容器類別搞錯，特別是有一腔的設計壓力已是1.6MPa，還是定為一類，應該為二類。2． 管板本身具有凸肩與圓筒（或封頭）對接連接時，沒有采用鍛件，采用了板材。3． 管板采用鍛件時，級別不正確。4． 管程、殼程的進出口溫度調反。

5． 水壓試驗的壓力不正確，管程與殼程對調了。6． 結構上未設置放氣口或排液口。

7． F型、S型位置安放錯誤，應對調，并注意是熱膨脹型還是冷收縮型的長圓形孔的位置。8． 鞍座安放尺寸不正確，未按照GB151-1999P87執(zhí)行。9． CS、LAN制的焊有分程隔板的管箱未提出熱處理要求，并且密封面應在熱處理以后進行機加工。10． 設備法蘭的公稱壓力等級不正確，緊固件選用不合理，密封面形式不對。11． 管法蘭的公稱壓力等級不正確，密封面形式不對，緊固件選用不合理。12． 折流板缺口的方向不正確。13． 折流板間距不正確，太大，不符合最大無支撐跨距要求。14． 圖紙上有非徑向接管，但無非徑向焊接節(jié)點圖。15． 管板固定端未遠離圓筒焊有防沖板的接管端，圓筒組裝困難。16． 圖樣上進出口與管口表不一致，介質沒有按逆向進出。17． 甲型法蘭或乙型法蘭與圓筒組焊的C 縫沒有提無損檢測的要求。18． 采用乙型法蘭時，未設置法蘭短節(jié)。19． 乙型法蘭短節(jié)與圓筒不等厚焊接未按JB/T4700—2000要求進行削邊處理。20． 采用長頸對焊法蘭時，法蘭與圓筒不等厚焊接未按JB/T4700—2000要求進行處理。21． 對長頸對焊法蘭，應注意：當工作壓力大于或等于0.8倍標準中規(guī)定的最大允許工作壓力時，法蘭與圓筒的對接焊縫必須進行100％的RT或UT，合格級別為RTⅡ級、UTⅠ級。22． 不銹鋼換熱器水壓試驗時，技術要求中沒有提水質要求，控制水中的氯離子含量不超過25mg/l。

對帶襯環(huán)的法蘭（不銹鋼與碳鋼、低合金鋼之間的焊接）焊接材料用錯，未采用高鉻鎳焊條。23． 技術數據欄中可能會少一部分數據，如：管束級別等。而且級別可能搞錯。24． 技術要求中缺少部分內容，如材料的標準等，特別時是有關換熱管的有關內容。25． 當管程試驗壓力高于殼程試驗壓力時，接頭試壓在圖樣上未作要求。26． 設備法蘭應注意螺栓的跨中問題，圖樣上可能沒有跨中。27． 圓筒厚度未滿足換熱器規(guī)定的最小厚度。28． 分程隔板的厚度未滿足最小厚度的要求。

U形管換熱器應注意U形管的彎曲半徑不小于兩倍的換熱管外徑，并注意防短路結構。29． 管束能抽出來的換熱器應設置防松支耳。30． 重量超過30Kg的管箱最好設置吊耳。31． 立式換熱器如有膨脹節(jié)應注意它與耳座的位置。32． 殼程進口處沒有按標準設置防沖裝置。33． 管板與換熱管焊接節(jié)點圖中，換熱管的厚度與標準中的厚度不一致時，未調整焊接坡口深度。34． 在圖紙上應注意尺寸標注是否齊全，管口定位尺寸是否齊全。

第五篇：食品中常見毒素的化學性質和檢測方法

食品中常見毒素和幾種典型毒素的性質和檢測方法

07應用化學，2007055079黎健豪

（暨南大學生命科學技術學院，廣州 510632）

摘 要 本文綜述了食品中常見毒素的化學性質和化學的檢測方法，重點討論了河豚毒素，黃曲霉毒素和肉毒毒素的化學性質和檢測方法。

關鍵詞： 食品檢測

霉菌毒素 河豚毒素 肉毒毒素 Keyword：food detecting

tetrodotoxin

aflatoxin

botulism neurotoxins

在日常生活中，我們每天都會接觸到由不同公司，不同地方生產的食品。但在近幾年，國內經常出現食品質量問題。五年前，肯德基的雞翅被發(fā)現加入了工業(yè)染料蘇丹紅。隨后，問題咸蛋又發(fā)現含有工業(yè)染料蘇丹紅。不法商人用 “瘦肉精”喂養(yǎng)豬只，令食用的豬肉里含有對人體心臟有害的“瘦肉精”。市場用孔雀石綠養(yǎng)魚，令魚類中含有有害物質孔雀石綠。去年，又發(fā)現三鹿奶粉中非法添加有害物質三聚氰胺。

食品安全不但發(fā)生在國內，而且在我們身邊也經常發(fā)生。2007年暨南大學珠海學院就發(fā)生了一起嚴重的食物中毒事件，不少師生感到身體不適。學生因為進食不干凈食物發(fā)生腸胃炎的事件時有發(fā)生。質量不安全食品也在市場上泛濫。因此，食品質量問題不得不引起人們關注。

本文結合自己專業(yè)所學的化學知識和《身邊毒物的認識與應對》 《食品分析》《文獻檢索與利用》的相關信息和技能，介紹了食品中常見毒素同時詳細介紹了幾種典型毒素的化學性質和檢測方法。食品中常見毒素

食品中常見毒素有霉菌毒素，動物性天然毒素和植物性天然毒素。其中 食品中常見的霉菌毒素有黃曲霉毒素，展青霉毒素，單端孢霉烯族化合物，玉米赤霉烯酮，雜色曲霉素，棒曲霉素，島青霉毒素和其他霉菌毒素。常見的動物性天然毒素有動物肝臟中的毒素，河豚毒素，巖蛤毒素，螺累毒素和組胺。常見的植物性天然毒素有氰苷，紅細胞凝集素，皂苷，龍葵堿，秋水仙堿，棉酚和毒蘑菇。

2霉菌毒素——黃曲霉毒素的性質與檢測方法

黃曲霉毒素是黃曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(A.parasiticus)等的代謝產物,主要存在于霉變的花生、谷物、果仁和大米等食物中,食用油等制品中也經常發(fā)現黃曲霉毒素。它是由黃曲霉和寄生曲霉代謝產生的一組化學結構類似、致毒基團相同的化合物,目前已分離鑒定出18 種,主要是黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 以及由B1 和B2 在體內經過羥化而衍生成的代謝產物M1、M2 等,B1 為毒性及致癌性最強的物質。B1 是二氫呋喃氧雜萘鄰酮的衍生物,即含有一個雙呋喃環(huán)和一個氧雜萘鄰酮(香豆素),前者為基本毒性結構,后者與致癌有關。黃曲霉毒素對人類健康的危害主要是由于人們食用被黃曲霉毒素污染的食物,途徑有二,其一是由受黃曲霉毒素(主要為B1)污染的植物性食物攝入,其二是經飼料而進入奶或乳制品(包括乳酪、奶粉等)的黃曲霉毒素(主要為M1)。黃曲霉毒素B1 的半數致死量為0.36 mg/ kg 體重,屬特劇毒的毒物范圍(動物半數致死量10 mg/ kg ,它的毒性比氰化鉀大10 倍,比砒霜大68 倍),它引起人的中毒主要是損害肝臟,發(fā)生肝炎、肝硬化、肝壞死等。因此，黃曲霉素的檢測方法在食品檢測中極為重要。

2.1檢測方法

國內外有關黃曲霉素B1 的檢測方法主要有:薄層色譜法、酶聯(lián)免疫測定法、高效液相色譜法和熒光光度法。試驗采用了免疫親和柱對飼料中黃曲霉素B1 進

行凈化,對高效液相色譜熒光檢測方法進行了研究,為監(jiān)控飼料中黃曲霉素B1 提供了簡便可行的方法。

2.1.1薄層色譜法(TLC)

薄層色譜法(TLC)是傳統(tǒng)的檢測AFB1 最常用方法,是應用最早、最廣的分離、分析技術,曾是我國測定食品及飼料中AFB1 的國家標準方法之一。此法所用的試劑、設備簡單,費用低廉,容易掌握,適用大量樣品的分離、篩選,一般的實驗室均可開展,屬于定性和半定量的功能。靈敏度低、重現差、操作煩瑣、時間長且安全性差等缺點,已越來越不適用現代分析的要求。

2.1.2高效液相色譜法(HPLC)高效液相色譜法(HPLC)具有高效、快速、準確性好、靈敏度高、重現性好、檢測限低、定量準確的特點,可同時分離多種黃曲霉毒素,操作簡便,適于大批量樣品的分析。高效液相色譜法是目前國內測定黃曲霉毒素使用最多、也是比較權威的方法,靈敏度高、精度高、能同時分析多種黃曲霉毒素類型,但該法的樣品前處理相對復雜,檢測周期長、程序復雜、所需試劑繁多、操作時需要專門的技術人員,難以滿足現代檢測。其中免疫親和色譜-高效液相色譜法(HPLC)測定飼料中黃曲霉素B1 ,采用甲醇-水提取飼料中的黃曲霉素B1 ,用免疫親和色譜柱凈化,以甲醇和水為流動相,反相高效液相色譜熒光檢測法進行測定,激發(fā)波長為365 nm ,發(fā)射波長為435 nm。方法的檢測限為0.01μg/ kg ,定量限為0.03μg/ kg ,平均回收率為77.5 % ,變異系數為0.03 %。此法適宜用于普通實驗室檢測食品中的黃曲霉素。物性天然毒素——河豚毒素的性質與檢測方法

河豚毒素的化學研究始于1909 年, 1964 年以后由Woodward 測定了TTX 的結構, 1972 年Kishi 等采用化學方法成功合成了河豚毒素。河豚毒素分子式為C11H17N3O8, 分子量為319.27。分子主要由3 個氮原子組成, 它們與氫氧原子形成特殊的結構。其結構特征, 含有1 個碳環(huán), 1 個胍基, 6 個羥基, 在C—5 和C

—10位有一個半醛糖內酯連接著分開的環(huán)。有專家將其稱為“自然界最奇特的分子之一”, 也是世界上最致命的毒藥之一。1 g 河豚毒素的毒性是1 g 氰化物的1 萬倍。

TTX 粗制品為棕黃色粉末, 純品為無色晶體, 呈針狀或菱形, 無臭, 無味, 易吸濕潮解, 不溶于無水乙醇、乙醚、苯等有機溶劑, 微溶于水, 極易溶于稀酸水溶液。TTX 在溶液中存在TTX、半縮醛型TTX、內酯型TTX動態(tài)平衡的三種結構。TTX 理化性質比較穩(wěn)定, 在中性和酸性條件下對熱穩(wěn)定, 240℃開始碳化, 但300 ℃以上也不分解。在堿水溶液中易分解, 在5%氫氧化鉀溶液中于80 ℃～100 ℃可分解成黃色結晶2-氨基-6-羥甲基-8-羥基-喹唑啉, 這也是TTX 化學檢測法的理論。

3.1檢測方法

河豚毒素的檢測方法主要有生物檢測法，儀器檢測法和免疫檢測法。以下主要介紹儀器檢測發(fā)。

3.1.1光分析發(fā)

儀器檢測發(fā)有熒光光度法和色譜法熒光檢測法[9]是早期的檢測方法之一，主要是利用TTX 加堿水解后生成2-氨基-6-羥甲基-8-羥基喹唑啉(簡稱C9 堿), 該物質在特定波長發(fā)熒光, 從而可進行檢測。由于河豚毒素在紫外區(qū)間吸收很少, 使其紫外檢測受到限制, 所以紫外分光光度法采用TTX 在生成C9 堿的同時定量生成草酸鈉, 草酸鈉在紫外區(qū)有明顯吸收, 從而間接定量TTX。此法操作簡便,但靈敏度低,專一性差。

3.1.2色譜法

另外一種較常用的方法就是色譜法。有關高效液相色譜(HPLC)用于定量檢測TTX 的報道很多, 大多采用反相色譜, 用硅膠柱作固定相。張虹等建立了反相離子對-高效液相色譜法測定河豚毒素含量的方法。選用SHIM ADZU ODS 色譜柱(150×6 mm 5 μm), 以0.2 %(v/v)醋酸液為流動相,流速為1.2 mL/min, 檢測波長為230 nm。河豚毒素線性范圍20 μg/mL~100 μg/mL, r=0.996 0(n=5): 回收率為93.32 %, 最低檢測限50 ng。色譜法由于具有簡單、快速等特點, 再加上高靈敏度的檢測器成為眾多檢測方法中主要的方法, 但它要求檢測樣品的純度比較高。

4細菌毒素———肉毒桿菌毒素和金黃色葡萄球菌腸毒素的性質與檢測方法

肉毒毒素(botulism neurotoxins,BoNTs)是肉毒梭菌產生的一種外毒素,屬于高分子量蛋白質類神經毒素。根據肉毒毒素抗原不同,將其分為A～G 7個亞型。A型肉毒桿菌由毒性和非毒性蛋白兩部分組成,可高度特異地與突觸前膜結合,阻滯神經興奮傳遞。BoNT/A的LD50為1.2 ng/kg,是迄今為止發(fā)現的生物毒素中毒性最強的物質。在弱酸條件下, 150 kDa毒性亞基以非共價鍵方式與非毒性亞基結合成復合物以保持其生物活性。溫度40 ℃以上,尤其在堿性條件下,A型肉毒桿菌毒素迅速變性。黃金色葡萄球菌腸毒素(staphylococcus aureus enterotoxin, SE)是金黃色葡萄球菌產生的數種可引起急性胃腸炎的蛋白質類腸毒素,分子量約為26～30 kDa。根據血清學特征不同分為A～J 10個毒素血清型,其中A型毒力最強。腸毒素通過刺激中樞神經系統(tǒng)引起中毒反應,小鼠LD50為25μg/kg。腸毒素易溶于水和鹽溶液,對熱穩(wěn)定, pH耐受范圍較寬(pH 4～10),不易被蛋白水解酶和消化酶降解。一株金葡菌產毒株能產生一種或兩種以上亞型的腸毒素,故腸毒素的型別不能代表細菌的型別。

4.1檢測方法

進來常用的檢測方法有: 質譜法,熒光分析法 ,免疫測定法，PCR檢測法（基于SYBR Green染料的實時PCR檢測技術）。以下介紹質譜法和熒光分析法。

4.1.1質譜法

Endopep2MS是基于肽鏈內切酶的質譜方法,可分辨肉毒毒素的不同亞型并測定其活性。該方法將抗體親和反應與生物質譜有機結合起來, 血清樣品中的LOD 為: 肉毒毒素A:0.02 mouse LD50 /L,B: 0.001 mouse LD50 /L, E: 2 ×1024 mouse LD50 /L, F: 0.001 mouse LD50 /L。該方法與EL ISA相比靈敏度更高,且不易出現假陽性結果。應用LC2ESI2MS/MS檢測SEB不僅可以精確測定分子量,還可對SEB酶切后的肽段進行氨基酸序列分析,近年來開發(fā)的micro2ESI2TOF2MS具有更小的柱內徑,對SEB的分析時間可顯著縮短至30 min,LOD降至約0.8μg/L(水)。

4.1.2熒光分析法

Anne等利用BoNT/B的蛋白水解酶活性實現對BoNT/B的檢測,該方法以人突

觸囊泡蛋白21的60～94部分的片段作為底物,用L 2芘基丙氨酸和熒光淬滅基團(p2硝基苯丙氨酸)分別修飾74和77位點。肉毒毒素的活性鏈可選擇性地將突觸囊泡蛋白在76～77位點間切斷,去除77位點上修飾的熒光猝滅基團,再通過檢測60～76位點間發(fā)出的強熒光進行直接定量檢測。該方法可檢測3.5 ng/L的肉毒毒素B。

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