第一篇：冰凍切片中常見問題分析

冰凍切片中常見問題分析

鄭則欽

龐瑾昱

陳斌

【摘要】 目的 探討冰凍切片技術在臨床病理診斷中的應用。方法 收集外科手術中冰凍診斷病例，應用快速冰凍切片法、快速冰凍染色法等對冰凍診斷病例進行分析。結(jié)論 冰凍切片技術中常見的問題及改進；影響冰凍切片質(zhì)量的因素；冰凍切片在病理診斷中的作用。

【關鍵詞】 冰凍切片； 病理診斷

冰凍切片是借助低溫使組織凍結(jié)達到一定的硬度進行切片的一種方法，是手術過程中采取活體標本，進行快速的組織學診斷的方法，其便捷的優(yōu)點，利于術中確診病變性質(zhì)，決定手術范圍，但由于各種原因，影響冰凍切片的質(zhì)量，拖延病理報告發(fā)出的時間，直接影響著病理診斷的及時性、準確性，間接影響病人的預后。

材料與方法

1.材料：收集外科手術中冰凍診斷病例

2.方法：應用快速冰凍切片法、快速冰凍染色法等

結(jié)

果 組織取材大小要適宜，約為1.5×1.5㎝,厚2㎜。2 壞死組織影響冰凍切片的完整性。3 冰凍時間根據(jù)組織的大小及性質(zhì)所決定。4 冰凍溫度一般設置在－18～－20℃。5 染液的酸堿度要適宜。1 組織取材對制片的影響 組織取材大?。航M織塊大小要適宜，冷凍切片機內(nèi)切片刀移動的范圍有一定的限制，超出其范圍時，易致切片不全。一般情況下，冰凍切片的組織大小為1.5×1.5㎝,厚2㎜。但卵巢腫瘤及脂肪組織可稍微大些。組織塊過大，切片時阻力過大，易產(chǎn)生皺折，刀痕，組織易崩碎，增加制片難度，影響診斷。如需在同一標本托上放大于兩塊組織時，應盡量凍成一個平面，與刀鋒平齊，以防切片不完整，發(fā)生漏診。若送檢組織過小，請預先速凍一冷臺面，再行包埋，利于制片。另外，包埋時，應將組織平放在凍頭的中央。組織內(nèi)含過多的脂肪或壞死組織：脂肪或壞死組織較一般的組織冷凍的溫度要低些，當活組織達到所需的溫度時，其還比較軟，從而影響切片的完整性和拖延冷凍報告發(fā)出的時間。組織塊過冷：組織冷凍過度易致切片破碎或呈粉沫狀，不能制作一張完整的切片。組織塊冷凍不均勻：在配合使用液氮時，組織塊放入液氮時不能保持水平狀態(tài)且液氮量不足的情況下，可產(chǎn)生此現(xiàn)象。凍頭的溫度不足：冷凍切片時要求凍頭的溫度保持在－25℃～－30℃左右，凍頭的溫度達不到要求時，組織很快回軟，也不能保證切片的完整。冷凍時間對制片的影響：根據(jù)組織塊的大小、性質(zhì)，確定冷凍時間，一般13～17s（使用液氮者），若組織較大或脂肪組織時間可適當長些，而甲狀腺、腦組織和淋巴組織等冷凍的時間相對要短些。冷凍時間要嚴格掌握，時間過長，切片易脆碎，其處理方法是：切出完整平面后用戴乳膠手套的拇指按壓回溫，直到切片完整為止，反之，時間過短，則需繼續(xù)冷凍，直到組織不粘刀片出現(xiàn)完整切片為基準。冷凍箱體工作溫度對制片的影響：一般組織設定為－18～－20℃。但對一些較特殊的組織標本，溫度應適當調(diào)整，如脂肪成分較多的組織以－30～－35℃為宜，纖維腺瘤，子宮等為－20℃，淋巴結(jié)，甲狀腺為－18℃，切片時，表面玻璃機器蓋子不要打開過大，以免箱體回溫過快，影響制片。保持凍箱的溫度，做到每次做完冷凍切片應關好冷凍箱的蓋子。染色對制片的影響：尤以細胞核的染色最為關鍵，在寒冷的冬季，室溫過低時，影響核的著色，可適當加溫，用以增色，蘇木素的酸堿度應適宜，經(jīng)常觀察其染液的ph值，過堿時應及時更換，鹽酸酒精分化適度，時間控制到位，否則易造成核著色不佳，染色質(zhì)不清晰，影響診斷的準確性。冰晶的形成對制片的影響：此原因主要取決于組織含水量的大小，尤以組織細胞水腫，淋巴結(jié)，縱隔腫瘤，卵巢腫瘤為甚，送檢取材過程中接觸水源，速凍過程中使用的液氮時間尚未控制好，同是造成冰晶形成的原因，其解決方法為，使用液氮時間上控制到位，保證一次凍透標本，組織送檢取材時，盡量避開水源，如遇含水量高的標本時，應盡量用干紗布吸干水分后再行冷凍，避免由于冰晶形成出現(xiàn)診斷上的失誤。操作者的動作應迅速。6 切片皺縮或卷縮：這也是影響切片質(zhì)量的重要因素之一。常見的原因有：①刀鋒變鈍。② 防卷板粘有異物，防卷板的作用是防止切片卷縮，但若粘有異物，切片時組織會被擠壓而縮在一起。③ 防卷板與刀鋒的位置不平行、不協(xié)調(diào)。④ 組織塊包埋不完全，缺乏支撐作用。

預防與處理的方法：① 注意檢查刀具，及時更換刀口，定期磨刀。② 保持防卷板的清潔，每做一例冷凍切片，均應將刀口及防卷板拭擦干凈，防止切片的污染和切片皺縮。③ 調(diào)整刀、防卷板的位置，保證兩者平行，且防卷板比刀鋒前0.2㎜左右。④ 包埋組織應完全，沒法切片者再滴加包埋膠。7 切片脫落：冷凍切片是利用溫度差（即玻片與組織切片的溫度差）將切片粘貼在玻片上，然后進行固定、染色。下面幾種情況下可影響切片粘貼的牢固程度，而導致切片脫落：① 組織內(nèi)含過多的壞死組織。組織細胞壞死崩解后，局部的滲透壓升高，吸收水分，切片一經(jīng)固定，水分逸出，壞死組織失去支撐作用，染色時組織容易脫落。② 固定液濃度過低，這是最常見的原因。③ 載玻片不干凈。④ 切片太厚。

預防及處理方法：避免組織內(nèi)帶有壞死組織，條件允許者重新取材；若沒有組織可代替，切片固定時間長些，經(jīng)95％乙醇雙重固定后，用電吹風將切片吹干（溫度不能過高，以防破壞組織結(jié)構(gòu)）然后再進行染色且動作應輕柔。② 定期更換固定液。一般每周更換一次，例數(shù)較多者，適當增加次數(shù)；另外，每次做完冷凍，應及時將盛固定液的瓶蓋蓋好，以防固定液揮發(fā)而降低其濃度。③ 保持載玻片干凈，平時應將玻片蓋好，防止灰塵或其它異物的污染。若新購買的玻片較臟，洗滌過后才使用。④ 調(diào)好切片的厚度，切片厚度以5～7um較為合適（脂肪組織可稍為厚些）。組織塊脫落：冷凍切片一般要求在30min內(nèi)發(fā)出病理報告，以便手術醫(yī)生能盡快選擇手術方式。但若組織塊脫落，會拖延病理報告發(fā)出的時間，而耽誤病人的手術時間。常見原因有：① 凍頭在冷凍機內(nèi)放置時間過長，致使包埋膠還來不及滲到凍頭的底部便凝固了，導致包埋膠與凍頭粘連不緊，稍受外力的作用便脫落；② 凍頭上的包埋膠沖洗不干凈。

總之，對于冰凍切片的質(zhì)量因素主要有以上幾點。如果能正確對待以上幾方面的問題，冰凍切片的質(zhì)量方可得到保證，且能制備出一張質(zhì)量優(yōu)秀的切片，為明確病理診斷提供較為便利的客觀條件。

第二篇：冰凍切片技術經(jīng)驗總結(jié)

冰凍切片制作技巧

1.從鋒利的刀片開始

我發(fā)現(xiàn)使用新的鋒利的刀片時常常做出高質(zhì)量的片子。我覺得在醫(yī)療場合中某些盡量省錢的做法顯得有些因小失大。一般我對每位患者的標本都使用一組新的刀片，當片子的質(zhì)量開始下降時，我會立刻更換刀片。某些組織如質(zhì)地較硬的膠原和鈣化組織會使刀片很快變鈍，因此，經(jīng)常更換刀片顯得很有必要，有時候我在切片過程中要連續(xù)更換2-3次刀片。

2.坐著還是站著

我切片時總是坐在一張凳子上。要學會把刷子作為一種便捷的輔助工具來操作，從而精細地控制顯微厚薄程度的片子。切片時俯身彎腰，頸部過伸的姿勢有些不妥，要盡量處于放松和舒適的姿勢以便能最大程度控制你的左手。

3.刷子

我是一位刷子的使用者。我相信要想切好片子首先學會使用刷子。刷子的作用就在于粘住片子并把片子弄到臺子上。冷凍的片子會自發(fā)的卷縮并從刷子上脫離下來，因此，我使用一把有硬毛、夾取面寬的刷子。我發(fā)現(xiàn)來自中國的野豬毛十分堅硬，非常管用。你可以花3美元從工藝店買一把1/4英寸長的#2號扁平無色的刷子，把毛削成一個角度。由于是個有角的頭端，加上握持刷子成一定的角度，這樣刷子與組織接觸時就會象掃帚一樣的平。我不能理解為什么有人使用脆弱的駱駝毛刷子，組織片很容易從這些柔軟的毛上掉下來。

4.握持刷子

左手象拿筆一樣握持刷子，將第五指輕壓于臺面上以穩(wěn)定握筆的手(或根據(jù)手和切片機尺寸的大小置于你感覺合適的地方)，這樣可以保證操作者動作的靈活及可控性。我把刷子削成一個角度，大致與左手握持刷子的角度相同，這樣使刷子平著接觸組織的1/4。

5.搖柄的旋轉(zhuǎn)

以連續(xù)均勻的力量轉(zhuǎn)動切片機的搖柄，且要毫不猶豫。我看到很多冰凍切片者手握著刷子在開始切片時總要停一下，緩慢的抓取組織，然后再開始轉(zhuǎn)動搖柄。依我的經(jīng)驗看來，這種動作增加了起始切片假象的可能，會使片子的厚度不均勻，也增加了處理脂肪類組織的難度。我切片時，象前面所說的那樣手握刷子，以一種連續(xù)的動作抓取組織，這個動作與刀片接觸組織同時開始并貫穿于整個過程。

6.刷子的移動

組織塊移向刀片時刷子也要同步地向下移動，當組織塊剛好接觸刀片時刷子輕輕停在其底部2mm處并迅速抽離。正是刷子的向下移動使你能連續(xù)地抓取組織，當開始的幾毫米組織穿過刀片時便有自發(fā)卷曲的現(xiàn)象，這時，運動中的刷子立刻粘住其游離的邊緣部分并水平地拖向切片者。刷子的運動路徑是一個朝下的“肘”形，然后再朝向你自己，連續(xù)不斷。但要注意有時候把組織壓向臺面時會使組織粘在臺面上，可能會導致碎片，應盡量避免。當然預先將組織包埋起來可以使刷子不用接觸到組織，切片也容易多了。

7.貼片

可以從切片機的臺面上也可直接從組織塊面粘貼組織片，我一般采用前者。片子切好后，手持玻片在片子上方，向下以一個角度粘住片子的一角，在靜電作用下片子會吸附在玻片上并迅速融化。當然在周圍涂一些包埋物對貼片有利，這種多余的包埋物可以保護片子的邊緣免受皺縮的損壞。有時候碰到貼片困難，我會在切到最后2mm包埋物的時候停下來，讓片子留在組織塊上，然后倒轉(zhuǎn)搖柄，使組織塊退離刀片，再用刷子從邊緣把組織片攤平，這樣就可以從組織塊面貼片了，這對卷曲的片子或者脂肪組織非常管用。

8.快速固定

我右手轉(zhuǎn)動搖柄也同時拿著玻片，片子一切好，立刻粘起片子并將它浸沒于固定液中。固定液需置于方便夠到的地方，我一般將染色架放在染色缸的旁邊，先將片子置于95%的乙醇溶液中固定，然后插于染色架上。如果組織固定延遲會出現(xiàn)風干的假象，我的經(jīng)驗是組織片還在切片機的臺面時，風干效應很小，當組織片粘在有溫度的玻片上時就會出現(xiàn)明顯的風干假象，表現(xiàn)為核的細節(jié)丟失及胞漿液的溢出。下面幾張圖片是延遲15秒固定和立刻固定的相同組織的比較，差異非常明顯。

9.切片的厚度

對于一般的手術病理我推薦切6um厚，這種厚度使染色更加飽滿，層次清晰，病理學家通常在2x 和 4x的放大倍數(shù)下可以獲得更多的信息。太薄的片子在這種放大倍數(shù)下顯得蒼白，容易忽略一些細節(jié)。6um的片子可以有更多的時間去避免風干假象，也會減少冰晶所造成的細胞核空洞。當然特殊情況下可能需要更厚或更薄的片子。

10.為什么會掉片

我不能確定組織片粘附到玻片的具體機制，但我相信可能與組織內(nèi)的液體與玻片發(fā)生分子交聯(lián)有關。下面我例出幾種染色過程中組織片脫落的情況： 1）本身非常干燥或過度脫水的組織；

2）組織片的周長與面積比過大，象細條形的組織容易受染色缸內(nèi)液體渦旋應力的影響而脫落，同樣包括薄的纖維囊腫及不規(guī)則的壞死組織，太厚的組織也不例外； 3）返藍用的氨水濃度太高；

4）少數(shù)情況需要使用100%的乙醇固定；

5）一張玻片貼多個片子時，片子周圍的包埋物相互重疊。

組織塊的準備

1.調(diào)整好組織與刀片的方向

這是冰凍切片準備中極為重要的方面，使用一些包埋物可以使這項工作變得簡單，在我的工作中我總結(jié)出一些經(jīng)驗可供參考。

a.脂肪放在最后切。脂肪由于硬度不夠，對絕大多數(shù)組織均合適的溫度卻切不好脂肪組織，如果一刀下去，組織中的脂肪先接觸刀片，就會破碎并使整個片子損壞。如果脂肪最后接觸刀片，則切片過程不受干擾。最糟糕的情況是脂肪部分先接觸刀片而沒有包埋物的保護，包埋物可以給片子提供一個起始的緩沖，如果沒有包埋，脂肪就會切碎并把整個片子破壞。當切片過程中由于脂肪的出現(xiàn)而影響質(zhì)量時，我要么把搖柄轉(zhuǎn)回去盡量避免，要么把脂肪挖出來。

b.組織與刀片垂直或成角是關鍵。讓我們假設組織由起始端、中間部分及末尾端三部分構(gòu)成，起始端容易卷縮，或受到刷子的損害，還可能由于操作者的猶豫而引起片子的厚薄不均，這些都增加了假象的風險。末尾端在貼片時容易拉長，最好的是中間部分，最不可能出現(xiàn)假象，并且組織學上最干凈，這是片子中最理想的部分。

非常堅實的組織容易產(chǎn)生橫皺，切片時應包埋成角且盡可能的加溫。成角包埋就像坐著船沖浪一樣，如果你直線行駛，就會承受波浪線上最大的沖擊，如果成角行駛，波浪線就會拉伸，所受的顛簸也會減小。跟公路上的減速脊一樣的原理。

上皮和粘膜貼附的組織如皮膚，胃腸，膀胱，子宮，頸部等，應當使上皮面垂直于刀片。

2.組織塊的溫度

任何組織都有一個理想的切片溫度，在此溫度下切片，組織片以平滑均一的形式流過刀片，幾乎沒有卷縮。當溫度、組織類型、刀片均處于理想狀態(tài)時，切片十分流暢，幾乎不用刷子。如果溫度太低，片子容易卷曲和破碎；如果溫度太高，片子就會皺成一堆。如果需要加溫，只需要把大拇指置于組織塊面幾秒鐘；如果需要降溫，可以使用機子的精確低溫包埋系統(tǒng)，簡單的做法就是把過凍的凍臺放在組織面上幾秒鐘，大多數(shù)的冰凍切片機都有一種熱吸收器可以使用。

3.組織塊的填涂——基本的修復

填涂可以解決組織塊自身的缺陷，下面我舉幾個具體的例子。

扁平包埋組織的填涂 包埋扁平的組織時，只有一層薄薄的包埋物貼附在底面，而且包埋物會輕微地收縮與組織塊分離，如果想以最小的休整開始切片，那么收縮的空間必須填涂上包埋物，如果不填涂，切片時組織便會與包埋物分離，從而很難獲得一張完整的片子。下面這個簡單的技巧可以使你獲得一個整齊的組織面。

針頭的移除

在工作中經(jīng)常會收到布滿針頭的標本，有時候針頭會穿過整個組織，導致刀片的損壞并使片子一分為二，下面有一種簡單的解決辦法。

縫線的移除

同樣的方法移除組織塊中的縫合線

挖鑿的技術

當組織塊中某些部分不需要或阻礙我們獲得高質(zhì)量的切片時，我們就可以將它挖除掉。最好的例子就是脂肪組織干擾切片，常見于切除的淋巴瘤用于檢查是否癌轉(zhuǎn)移。如果脂肪先于組織塊中的其他部分接觸刀片，你首先可以試著轉(zhuǎn)動組織塊，如果不行，就可以將它挖掉，然后用包埋物填充。

學會看片子

這里指的是片子滑過刀片時就要辨別出質(zhì)量的好壞，如果到鏡下才發(fā)現(xiàn)片子的缺陷那就無法挽救。

1.觀察片子的厚薄

盡管冰凍切片機可以設置厚度，但人為辨別片子的厚度是否合適仍然很重要。片子太薄看起來象半透明的鏡紙，片子太厚看起來混濁、柔性差，對我來說，5-6um的片子較合適，象一張薄的打印紙。

2.片子破裂

這種假象往往是組織塊冷凍過度所致，可以通過升溫來解決，含水量多的組織切片很容易破裂，必須升高到一個合適的溫度使裂開程度降到最小。水腫或血液組織經(jīng)常有這種問題，活檢的腦組織也很明顯。下面的片子來源于腎腫瘤，含水量豐富，破裂也比較明顯，我覺得水性的腫瘤組織在常規(guī)溫度下冷凍將會變得異常的堅硬。

我覺得組織破裂的過程同一塊濕布結(jié)冰一樣的道理，當你用刀去挑這塊濕布時它會自然彎曲，當濕布已經(jīng)結(jié)冰時刀會將冰片弄裂。下面有6張片子，上面的3張破裂很明顯，底部的3張很輕微，你必須仔細看才能發(fā)現(xiàn)，如果在切片時你集中注意力，你能感覺到甚至聽到碎裂的聲音。

3.片子上的條紋

垂直于刀片的細條紋為刀片缺口所致，這往往是切到鈣化組織、針頭或縫線的結(jié)果。寬條紋，組織破碎或突然無法解釋的切片困難往往意味著組織粘在刀片下面了，這在脂肪組織比較常見，這時刀片需要取下來清洗干凈，注意清洗刀片時不要傷到自己。

4.波浪線樣的橫皺

這是切片機零件松動的征象，可能需要修理，切片時刀片有移動或支撐刀片的機子有移動時，往往有這種規(guī)則的條紋出現(xiàn)。為了獲得干凈整齊的片子，所有固定刀片、刀架、支撐臺、支撐栓子及切片機的旋鈕、螺釘、軸承都必須上緊，并且不帶有垃圾殘骸，支撐臺或刀片下面有一點包埋物都會影響切片的質(zhì)量。

脂肪組織的處理

脂肪組織無疑是冰凍切片者的絆腳石，道理很簡單脂肪不會結(jié)冰，把溫度降低讓脂肪變硬可以切出較薄的片子，但是這個溫度對同一組織中的其他成分來說顯得太低而不合適切片，當脂肪破碎影響切片時這個問題就變得明顯，下面是一些我的經(jīng)驗總結(jié)。

1.盡可能的削掉不需要的脂肪組織

當我準備切淋巴結(jié)時，我會先檢查一遍，小心翼翼地除掉表面及髓內(nèi)的脂肪，結(jié)內(nèi)的脂肪用解剖刀刮擦掉，被膜線附近的脂肪用刀切除，這樣就不需要切開整個淋巴結(jié)被膜。有人會說，我把一些組織去掉后，可能導致漏判一些陽性的淋巴結(jié)，但我的經(jīng)驗是好的干凈的片子比含有太多脂肪的差片子更容易獲得陽性的結(jié)果。當你在休整組織或切片的過程中脂肪組織意外出現(xiàn)時，你也可以使用前面的挖鑿技術。

2.調(diào)整組織塊的方向使脂肪最后接觸刀片

切片時盡量避免脂肪先接觸刀片，因為脂肪會脫離包埋物，在切片上留下一個洞，如果不能避免，也要在其周圍加上包埋物，讓包埋物先接觸刀片。

3.保證刀片、臺面的干凈及組織塊的冷凍程度

切片機的臺面和刀片必須保持干凈，假如你弄碎了一張片子必須即時用一塊干紗布清理干凈，但要防止刀片割手，如果你發(fā)現(xiàn)切出來的片子有條紋或者堆積成束，可能是組織粘著在刀片的下方了，必須除掉刀片上的組織，并將刀片清理干凈。

組織塊越冷就越容易切脂肪，只是其他非脂肪組織就變得堅硬難切，同時水性的組織會裂開，這就有必要在切片溫度的最冷端和最溫端取一個二者兼顧的中間值，以使脂肪和非脂肪組織都能切好。我一般將組織塊凍在-24度，可以獲得滿意的結(jié)果，冷凍噴霧劑有用，但要注意先清掉切片機內(nèi)的污穢。

4.靈活地轉(zhuǎn)動搖柄而不猶豫

假如組織塊是脂肪和結(jié)締組織的混合物，那要好切于純脂肪組織，有時候按照我前面所講的技巧來做，片子會出乎意料的好。用運動的刷子快速粘住組織片并把它拖上臺面，不要把刷子和組織片壓上臺面，以免粘在一起使切片完全中斷。同樣，好的刀片也很重要，如果你能用刷子敏捷地做出這套動作，那你肯定也能對脂肪組織切出理想的片子，脂肪在片子上會留下空的間隙，但它們之間的纖維條卻保存完好。下面這塊乳腺癌及其周圍有數(shù)毫米覆蓋著墨水的脂肪組織，假如你調(diào)整好組織塊的方向使脂肪邊緣垂直于刀片，腫瘤組織就切得好，脂肪切片的角度會有變動，也會留下空隙，但總有一條墨跡線指示著邊緣的所在。很多時候我都用這種方法來區(qū)別腫瘤和脂肪組織。

5.試著對脂肪過多的組織切厚些

厚的片子對閱讀薄片上的細節(jié)也是一種輔助，厚片可以通過各種方法獲得，我先試著按一下切片機上的精細前進按鈕，如果組織塊保持完整，我繼續(xù)嘗試按一下粗前進按鈕，這樣會切出很厚的片子。你也可以調(diào)節(jié)機子的厚度刻度盤，或者讓搖柄轉(zhuǎn)兩次，先向前1/4圈，再向后，再向前，采用這些技巧會切出厚度不一的片子。如果你連續(xù)均與地轉(zhuǎn)動搖柄并配合使用刷子，你最后會在玻片上貼出良好的片子，后面的固定和染色還是一樣的，只是時間可能要加倍或翻兩番，染液中的片子輕拿輕放，不要劇烈攪動。費盡全力后最后回報給你的是一張有三維立體感染色優(yōu)良的片子，而且脂肪組織也變得相當?shù)耐该髑逦?，你可以看到沿各個方向走行的毛細血管，我還可以幸運地識別非脂肪部分的結(jié)構(gòu)，這種用墨跡標記組織邊緣的方式包含于整個組織面，有助于解讀脂肪邊緣有缺損的薄片，粉刺癌中高度惡性的細胞核和壞死同樣可以識別。在切脂肪組織的過程中，如果你連做了兩三次而沒做好，你可能會耗盡了一些寶貴的組織標本，可以在切那些乳腺癌組織之前用正常的脂肪練練手。

冰凍切片的局限 1.時間的限制

確實在冰凍切片室經(jīng)常受到快速出結(jié)果的壓力，我的經(jīng)驗是欲速則不達，急躁和慌亂容易出錯。我們最好的辦法就是樹立自信，良好的態(tài)度及教育外科醫(yī)生，受到加快制片的催促時應當學會從各方面抵制壓力，假如你是一位專業(yè)的受過良好訓練的冰凍切片家，從切片到染出一張片子只需要幾分鐘，如果你對組織的處理很粗糙，這個過程可能要幾分鐘到十分鐘，碰到比較大的復雜的組織需要多重染色則需要的時間會更多，對病理學家來說，閱片需要幾秒到數(shù)十秒的時間，有時候需要搜尋一些細小的線索，翻閱書籍，或向同行咨詢等，所需時間會更多?？紤]到外科醫(yī)生的處境，我們必須動作迅速，但是當所做的結(jié)論會更改手術的進程時，我們會顯得格外謹慎。我們會要求提供患者的詳細資料以便得到正確的答案，即使耽誤幾分鐘，總比重做手術或提供錯誤的結(jié)論所付出的代價小很多，如果連續(xù)碰到幾例患者，或復雜的病例，多個標本，那我們只有尋求幫助，當然，在手術不過急的依賴冰凍切片的結(jié)果時，這些事情盡量不做。不要粗糙地準備和閱讀片子，這是最可能出錯的地方，同時，也要識別超出你個人能力的處境，很多需要尋求外界咨詢的場合，我象一根樹樁一樣站在那里閱片，幾分鐘都無法得出結(jié)論，就象看到一只從來沒有在后院出現(xiàn)過的老虎一樣。這個時候我會不顧一切的尋找就近的幫助，并且告訴我的外科醫(yī)生要耐心的等待。2.特殊染色的局限

這個問題討論起來很難，我們只能面對，當今時代如果沒有免疫過氧化物酶染色和基因突變的檢測，仍然無法對淋巴瘤和肉瘤及其他類似的疾病進行分類，也許不久的將來能有快捷的方法用于冰凍切片，但是現(xiàn)在，確實是一個缺陷。

3.冰凍假象

這是水的特性，水在結(jié)冰時因氫鍵的交聯(lián)而膨脹，正是這個原因，冰塊才能浮在水面上。我相信組織在冰凍時候的變化與水結(jié)冰膨脹是密切相關的，在此，我會盡量解釋冰凍片子和石蠟片子的差異。象處理其他病理假象一樣，正確的識別這些冰凍假象有助于我們不至于誤判。

冰晶的形成

含水量特別多的組織冷凍時會出現(xiàn)肥皂泡樣的空隙，我認為當組織中的水分凝固時形成球形的冰晶，擠壓纖維組織條而產(chǎn)生泡沫樣的形狀。下面的冰凍對照顯示當組織片進一步處理時泡沫樣的水分又重新分布于間質(zhì)，而未曾冷凍的組織顯示出間質(zhì)的水腫。這些水分巨多的組織在切片時很難保證不裂開，應盡可能高切片的溫度。

擠壓假象

細胞實性的組織會受到冰泡膨脹的擠壓，這在水腫組織非常明顯，下面的腎細胞癌提供了一個很好的例子，中間的圖片顯示腎小管被透明的冰晶所擠壓，右邊的圖片為來源于同一組織的非冷凍切片。

核性的冰晶

細胞核產(chǎn)生冰晶的趨勢不一，根據(jù)我的觀察，這似乎跟組織的類型及狀態(tài)有關，我注意到在損傷的組織出現(xiàn)較多，從道理上講也是如此，燒傷的組織或缺血損傷的組織由于失去了滲透壓的平衡從而導致眾多數(shù)量的核水腫，同時，囊狀的核越多，核冰晶形成的可能性越大。我也注意到：片子切得越薄，這種冰晶越容易留下空洞，下面的例子可以很好的說明我的觀點。

核染色質(zhì)的改變

中間這張片子先前冷凍過，顯示染色質(zhì)特別明顯，與左邊冰凍后立刻固定的圖片相比，核的密度更大，更深染，注意到冰凍片中胞漿含有較多的空泡，也是冷凍假象的一種。探討如何合理的保養(yǎng)冰凍切片機

技術員除了要做好冰凍切片之外，合理的保養(yǎng)冰凍切片機也至關重要，合理的保養(yǎng)有利于工作順利地進行，同時又能延長冰凍切片機的壽命。

1、冰凍切片機對電壓穩(wěn)定性要求較高-------安裝穩(wěn)壓電源。

2、為了保證工作人員的安全及設備安全可靠運行，設備安裝時應有接地。

3、應注意機箱周圍通風網(wǎng)清理避免阻塞，不可使機器緊靠墻壁，應保證空氣的自由流通。

4、冰凍切片機對環(huán)境的溫度要求較高，特別是夏天所在的房間應安裝空調(diào)，以減少氣溫過高引起的壓縮機連續(xù)運轉(zhuǎn)。

5、設備應專人使用和保養(yǎng)，嚴格遵守操作規(guī)程，非專業(yè)人員不準操作機器。

6、因停電或其它原因停機后再啟動一定要間隔十分鐘后進行。

7、有機玻璃窗開啟時間不宜過長。

8、及時清理冷室內(nèi)的組織碎屑，保證室內(nèi)外清潔。

9、移動機器后應注意使機器著地平穩(wěn)。

10、設備不可帶故障使用，出現(xiàn)問題時及時修理。

11、冰凍量大的醫(yī)院，建議購置兩臺冰凍切片機。

12、關機時，CT溫度和OT溫度下調(diào)10度，關閉OT的壓縮機，然后再關機。

冰凍切片機的使用

1.切片前先安裝好刀片，調(diào)整切片厚度及切片角度，確認標本組織類型，根據(jù)不同組織類型調(diào)整好最佳切片溫度。

2.盡可能快地取新鮮活體標本，不經(jīng)任何試劑處理，切成2.0cm×2.0cm×0.2cm大小的組織塊放到組織托上，涂敷包埋劑后即放到冷臺上冷凍，待包埋劑稍凝后(以組織塊不流動為宜)，迅速固定到冷凍頭上急凍。一般在取材后就要立刻對組織塊進行速凍，使組織溫度驟降，縮短降溫的時間，減少冰晶的形成。

3.待組織塊凍好后用快進鍵將其移近刀口，利用按鈕修片，修好后即可放下防卷板切片。切片時，低溫室內(nèi)溫度以-15℃～-20℃為宜，溫度過低組織易破碎，根據(jù)各種組織的軟硬度來掌握切片速度，軟組織切片速度較慢，較硬的組織切片速度快。

4.調(diào)節(jié)防卷板。防卷板的位置及角度要適當，載玻片附貼組織切片時，切勿上下移動。5.將切好的切片附貼在載玻片上，固定、染色、脫水、封固。冰凍切片制作完成。

第三篇：1091例手術中冰凍切片病理診斷準確性分析

內(nèi)容摘要： 作者：張劍虹 成日青 林媛媛 趙秀芳 張凡 劉軍超 張九鴻

作者：張劍虹 成日青 林媛媛 趙秀芳 張凡 劉軍超 張九鴻

【關鍵詞】 冰凍切片;病理診斷;準確性

隨著臨床醫(yī)學手術水平的不斷提高，手術中要求送檢冰凍病理切片快速診斷的病例日益增多，臨床手術醫(yī)師對病理報告的依賴性也逐漸增加，快速病理冰凍診斷已成為指導臨床手術醫(yī)師確診和制訂合理手術方案的必需手段之一。然而手術中冰凍切片病理診斷受到很多因素的制約，準確性很難達到與常規(guī)石蠟切片相一致的效果。為此我們收集我院病理科近兩年的冰凍切片資料1091例，分析探討冰凍切片診斷價值和準確性及其影響因素，旨在不斷提高手術中病理診斷質(zhì)量，從而降低醫(yī)療事故隱患。1 材料與方法

選取我院2003.1～2005.12月的冰凍切片資料1091例，為防止制成的冰凍切片鏡下組織形態(tài)發(fā)生改變，送檢標本要求用干紗布包裹或置于不加任何液體的潔凈容器內(nèi)及時送達病理科，病理醫(yī)師詳細檢查大體標本后取肉眼確認病變最明顯區(qū)域1～2塊組織，迅速置全自動恒冷切片機（英國產(chǎn)shandn as 620e型）上制作切片。每個組織塊切取兩張切片，厚4μm，經(jīng)酒精固定，he染色，普通光鏡（olympus bx51）下觀察，并經(jīng)2～3名醫(yī)師閱片后集體討論確診；如送檢組織不合格（凝血塊、壞死滲出物等），立即請手術醫(yī)師第二次取材送檢，冰凍殘余組織做常規(guī)石蠟切片，并與另外多處取材石蠟切片對照分析。2 結(jié)果

1091例冰凍組織分布在12個系統(tǒng)及組織，如女性生殖系統(tǒng)485例，占總例數(shù)44.4%，乳腺病變364例，占33.3%，甲狀腺58例，占5.3%，消化系統(tǒng)52例，占4.7%等。送檢最活躍的科室為婦科、產(chǎn)科，其次為普外科等，見表1。表1 1091例冰凍標本在各系統(tǒng)分布情況石蠟證實良性病變775例，其中771例冰凍符合，冰凍準確率96.9%；石蠟證實惡性病變286例，冰凍報告惡性281例，冰凍準確率97.6%；石蠟證實交界性病變29例，冰凍報告交界性24例，冰凍準確率82.8%。1091例冰凍標本中，與石蠟切片報告相符的為1056例，冰凍切片總的診斷準確率為96.8%，誤診14例，誤診率為0.13%，見表2。表2 1091例冰凍與石蠟切片診斷結(jié)果比較

討論

3.1 冰凍切片病理診斷病變的價值 冰凍在外科手術中應用廣泛，術中冰凍可使外科醫(yī)生在手術中知曉病變性質(zhì)（良性、交界性、惡性），從而決定適當?shù)氖中g方案。自1960年cryostat冷凍切片機在臨床病理應用以來，隨著病理技術人員素質(zhì)的提高和切片設備的更新?lián)Q代，冷凍切片質(zhì)量與石蠟切片已相差無幾，使病理醫(yī)師對手術中冰凍切片診斷準確率不斷提高。我院近年內(nèi)投資進口大型衡冷柜式切片機，為冰凍切片的準確性提供了必要的保障。所以目前冰凍切片為臨床快速確定診斷和決定手術范圍的一個重要依據(jù)，主要應用價值體現(xiàn)在：1.決定病變的性質(zhì)，要求病理醫(yī)師在最短的時間內(nèi)確定送檢組織是腫瘤或是非腫瘤性病變，如為腫瘤則需再確定良性或惡性，因病變不典型而不能確定良性、惡性病變時，則提一個考慮性或傾向性意見供臨床考慮，或待石蠟切片再定。2.確定切除腫瘤的邊緣是否殘留腫瘤組織。我們遇到最多的是乳腺癌手術實施保乳治療時的上、下、左、右及基底五個切緣，如切緣發(fā)現(xiàn)癌組織，則需擴大切除范圍，此時冰凍切片結(jié)果對臨床手術范圍起到了決定性作用。3.辨認組織，如先天性巨結(jié)腸須證實手術切緣的腸壁內(nèi)是否有肌間神經(jīng)節(jié)細胞存在，如未見神經(jīng)節(jié)細胞則須再切腸管,直至查見肌間神經(jīng)節(jié)細胞為止。4.確定淋巴結(jié)有無癌轉(zhuǎn)移，手術醫(yī)師取局部淋巴結(jié)確定有無癌轉(zhuǎn)移以決定手術方案，對于存在淋巴結(jié)隱性癌轉(zhuǎn)移的病理尤其必要。5.頭面部惡性腫瘤手術確定切緣有無腫瘤組織殘留對于清掃范圍和擴大切除的方向關系重大，因為頭面部血管、神經(jīng)豐富，微小的損傷都會使面容受到影響，因此手術中需要多個方向取組織，確定有無腫瘤殘留。冰凍切片診斷可預防手術切除過度或不足，有的也可避免不必要的二次手術。有報道冰凍切片準確率為94%～97%[1,2]，本組資料為96.8%，與 文獻 報道基本相符合。

第四篇：術中快速冰凍切片技術工作制度

術中快速冰凍切片技術工作制度

手術中快速冷凍切片病理診斷（以下簡稱“冷凍”）是將手術切下的病變組織在冷凍切片機中迅速冷凍后制成切片，進行病理診斷。一般在30分鐘左右得出診斷意見，為臨床手術提供參考。冷凍是一種高技術、高難度、高風險的病理項目。其主要作用：⑴確定送檢標本組織是否有病變存在；⑵確定病變或腫瘤的性質(zhì)；⑶確定手術切緣有否腫瘤；⑷確定送檢組織有否癌浸潤或轉(zhuǎn)移等。但由于取材局限、標本冰晶及時間短等問題，冷凍切片質(zhì)量不能達到常規(guī)石蠟切片的精確度，診斷準確率受到影響?？梢猿霈F(xiàn)以下情況： ⑴只能做良、惡性鑒別，為臨床提供一個參考性意見；（2）診斷困難，允許發(fā)延遲報告或等待石蠟切片診斷，發(fā)出最終報告；（3）冷凍診斷與常規(guī)石蠟診斷不符時，以石蠟切片報告為準?！叭住贬t(yī)院要求冷凍診斷的準確率≥96%。為減少和防止醫(yī)療差錯和糾紛，有利于此項工作的規(guī)范化開展，特制定該制度。

1.“冷凍”預約規(guī)定：需做術中快速冷凍病理診斷時，各手術科室提前1～2天詳細填寫冷凍申請單（可用普通病理申請單代替）送病理科。要求盡可能填全各項內(nèi)容，注明做冷凍的具體年、月、日、時，以便病理科做好準備；除填臨床診斷外，請?zhí)岢鲆鉀Q的問題，如確定“病變性質(zhì)”、“切緣有否浸潤”、”淋巴結(jié)有否轉(zhuǎn)移“等等。一般不提倡急診“冷凍”申請。如確需急診冷凍時，要及時與病理科主任聯(lián)系，說明情況。病理科盡量創(chuàng)造條件，滿足臨床需要。2.病理科實行“冷凍查房“制度：病理各級醫(yī)師在手術前1日應下病房查病人、看病歷或請病人來病理科接受查體，與主管醫(yī)師交換意見，全面了解有關冷凍方面的病人情況。

3.實行“手術中快速冷凍病理診斷知情同意書”（樣本附后）簽字制度。術前由臨床醫(yī)師向病人及其家屬談話，交代冷凍有關事項，征得其理解、同意并簽字。最后將知情同意書放入病歷中。4.單件標本的冰凍切片制片應在15分鐘內(nèi)完成。

5.冷凍病理報告實行三級醫(yī)師檢診及雙簽字制度。初級醫(yī)師參與取材閱片、中級醫(yī)師診斷、高級醫(yī)師復診。報告由中、高級醫(yī)師雙簽字。一般30分鐘左右發(fā)報告，遇特殊情況時間可以適當延長。6.遇到冷凍病理診斷中的交界性病變及“灰色病變”難以確診時，首先在科內(nèi)討論，如意見仍難以統(tǒng)一，不能勉強發(fā)報告。要及時向手術醫(yī)師通報情況，可向醫(yī)務處報告，協(xié)助派車去外院會診；或允許延緩出報告，必要時待常規(guī)石蠟切片后再診斷。臨床醫(yī)師和/或病理醫(yī)師要向患者及家屬講明情況，取得理解并記錄于病歷中。

7.建立冷凍報告登記及隨診制度：冷凍切片剩余組織，一律做石蠟切片對照。對與最后診斷不符的報告要組織相關醫(yī)師討論和隨診，以利提高診斷水平。

第五篇：手術中冰凍切片病理檢查志愿書

接受手術中冰凍切片病理檢查志愿書

門診、住院科 室ID號住院號

姓名年齡性別職別單位

手術中冰凍切片病理檢查是將切下的病變組織在冰凍切片機中迅速冷凍后制成病理切片，由病理醫(yī)師即刻在顯微鏡下檢查，做出病現(xiàn)診斷，主要目的是：（1）幫助判斷病變的性質(zhì)。如：炎癥、腫瘤或其它性質(zhì)的病變；如果是腫瘤，則需進一步判斷是良性還是惡性腫瘤。（2）幫助判斷切除腫瘤組織的邊緣是否有殘留的癌組織。（3）幫助辨認手術切除組織。

（4）判斷手術切除的淋巴結(jié)中有無轉(zhuǎn)移的癌細胞。冰凍切片病理診斷結(jié)果作為術中會診意見提供給臨床醫(yī)生，臨床醫(yī)生將其作為重要的參考依據(jù)決定進一步手術的方式和范圍。與常規(guī)石蠟包埋切片相比，冰凍切片診斷的局限性是：（1）冰凍切片質(zhì)量較差，診斷準確率低于常規(guī)石蠟切片。（2）在做冰凍切片采取活檢組織時，有造成腫瘤種植的可能，特別是在甲狀腺和肺等實質(zhì)器官。（3）術中冰凍切片技術不適用于脂肪組織和骨組織。（4）某些疑難病例和交界性病例有時在石蠟切片診斷都很困難，需要做免疫組化和電鏡觀察，僅憑冰凍切片難以確定診斷，因而要延緩病理診斷。（5）冰凍切片取材局限，有時局部的組織不能代表整個標本。因此，有的病例冰凍切片組織象和手術切除大標本的石蠟切片組織象相差很遠，甚至造成假陰性診斷。（6）病變組織在冷凍過程中不可避免地形成冰晶，以及組織處理和診斷時間緊迫等技術因素所限，“冰凍”診斷的準確率有一定的局限性，有可能與最終的“常規(guī)”病理切片診斷不相符合，最后病理診斷應以“常規(guī)病理診斷為準”。

醫(yī)師簽名：年月日

我已仔細閱讀并了解上述關于“冰凍”切片病理診斷的作用及其局限性，同意對實施手術中切除的病變組織進行冰凍切片快速病理檢查。

患者本人簽字：

代表簽字：（與患者關系：）

年月日

注：本志愿書除不能明辨是非、不能正確表達的傷病員可由法定代理人簽字外，均由傷病員本人簽字