第一篇：利用峰面積分析混合DNA樣品

【關鍵詞】陰道混合物，強奸，dna

【中圖分類號】d919．2；q7

5【文獻標識碼】b

【文章編號】1007～9297(2004)01—0051—0

3在法醫(yī)dna檢驗過程中，經常會遇到多個體的混合樣本，如受害人和嫌疑人的混合樣品，幾個嫌疑人的混合樣品。熒光

標記自動分析str系統(tǒng)，不僅能根

據(jù)位點等位基因的個數(shù)判斷

樣品是否為混合樣品，而且還能根據(jù)等位基因峰面積(譜帶熒光

總強度)確定混合樣品中各組分的混合比例，推斷混合樣品中各

組分的基因分型_1j。gill等建立了利用峰面積分析混合樣品的方法_2]。本文利用該法對一宗案件中的混合樣品進行了分析，推斷混合樣品各組分的比例及各組分的基因分型。

材料和方法

2001年于中山某地發(fā)生一宗強奸案，送檢材料為事主血紗，嫌疑人1血紗，嫌疑人2血紗，以及在嫌疑人2住處提取的一根

帶毛囊的陰毛(上沾有少量分泌液)，分別編為1～4號樣品。按

chelex一100法 提取dna，采用ampfi str identifiler復合擴

增試劑盒(美國abi公司)同時擴增d8sl179、d21sll、d7s820、(f1p0、193s1358、tho1、d13s317、d16s539、d2s1338、d19s433、vwa、tpox、d18s51、d5s818、fga等15個位點和性

別位點amelogenin，擴增產物在abi310遺傳分析儀上進行電泳

分離，genescan~3．0軟件分析結果，genotypern 2．5軟件進行基

因分型。

結 果

一、樣品分型

樣品分型結果見表1。

表1 樣品分型結果

二、結果分析

結果分析方法參照文獻[2]。

(一)確定是否有混合樣品

1．根據(jù)譜帶數(shù)目。正常情況下進行常染色體str分型時，純合子應檢出一條帶，雜合子檢出2條帶，混合樣品會出現(xiàn)譜帶

數(shù)目增多。4號樣品在d8sl179等3個位點檢出4個等位基因

(表現(xiàn)為4條譜帶)，在d21s11等6個位點檢出3條譜帶，提示

該樣品為混合樣品。

2．等位基因峰面積的不對稱。理論上對于雜合子來說，兩

個等位基因的峰面積應大致相等，比例接近于1；而混合樣品由

于等位基因的疊加，可能會出現(xiàn)不正常的雜合子現(xiàn)象，兩個等位

基因的峰面積差異會增大。表2列出了混合比例為1：

10、1：

1、10：1時出現(xiàn)2個等位基因時峰面積的比例。4號樣品在th01、d13s317、tpox、d18s51、amelogene等位點均檢出2條帶，類似

雜合子，但2條帶的峰面積明顯不平衡(見表3)，同樣提示4號

樣本為混合樣本，且為男女混合。

(二)確定混合樣品中供體的數(shù)目

樣品4所有位點出現(xiàn)的等位基因數(shù)最多為4個，提示供體數(shù)

為2個。

(三)確定混合樣品中各供體的基因型組合對于雜合子來說，兩個等位基因的峰面積應大致相等，比例

接近于1。基于此原理，分析者可以通過觀察到的峰面積來推斷

可能的基因型組合和各組分的比例。對確定是二供體組成的混

合樣本來說，分型結果可以表現(xiàn)為一帶型、二帶型、三帶型或四

帶型。除一帶型外，其余各種表現(xiàn)均可提供基因型組合的信息。

其中．四帶型由于直觀地表現(xiàn)出2個供體的基因型，所以最易于

通過其推斷2個供體的基因型組合及其比例。

假設某一位點出現(xiàn)的4個等位基因依片段由小到大的順序

定為a、b、c、d，觀察到的面積分別為paa、pab、pac、pad，定義

mx為所有位點都接近相等，然后給出一個估計的混合比例

(mx)，如果解釋正確的話，觀察值和期望值應接近，這對任意基

因型組合可用峰面積的剩余值eq來檢驗，峰面積的剩余值eq=

σ(pa觀察值一pa期望值)，峰面積的剩余值越低，該基因型組

合的可能性越高。以4號樣品的d8sl179位點為例，混合物中

檢出10(a)、14(b)、15(c)、16(d)，據(jù)eq值可推斷混合比例

(mx)bc／ad=0．62，相反混合比例(mx)ad／bc =0．38，其他的基因型組合(如ab，cd)不可能存在，因為eq不可能接近零。

表4列出了對出現(xiàn)4個等位基因的位點的分析，在列出某個

位點的所有可能的基因型組合后，計算他們各自的eq值，將eq

值最小的基因型組合作為推斷的基因型組合列入表4中。

取表4計算出的mx的平均值0．36，并定義mx為所有位點

都接近相等，計

算各位點的eq值，見表4。

可以看出取mx的平均值后，各位點的eq值變化不大

· 52 ·

分析出現(xiàn)3個等位基因比出現(xiàn)4個等位基因的模式復雜的多，因為排列組合更多，不過可應用同樣原則。除部分位點可推

斷基因型并推斷各組分比例，大部分出現(xiàn)3個等位基因的位點

只能推斷各組分的多少而不能計算出具體數(shù)

值。

法律與醫(yī)學雜志2004年第ll卷(第l期)

取表l計算出的mx的平均值0．36，并定義mx為昕有位點

都接近相等，計算各位點推斷基因型組合的eq值，表5列出eq

為最小值時的基因型組合。

表2 出現(xiàn)2個等位基因時峰面積的比例的分析

表3 出現(xiàn)2個等位基因的位點的分析

表4 出現(xiàn)4個等位基因的位點的分析

表5 出現(xiàn)3個等位基因的位點的分析

律與醫(yī)學雜志2004年第11卷(第1期)

表6 混合樣品各組分基因型的推斷結果

· 53 ·

從單個str位點等位基因峰面積計算得出的混合物比例

mx通?？蓱糜谒形稽c，但當某幾個位點可以推斷基因型組

合并推斷混合物比例時，取mx的平均值去驗證各位點的eq值

顯得更為準確。

組分的比例越懸殊，基因型組合越易鑒別，比例越接近，可

能的基因型組合越多，越難判斷。需注意的是峰面積值太低(<000個單位)時判型不準確，應通過增加或減少dna樣品濃

度、增加電泳上樣濃度、增加電泳進樣時間等方法來提高峰面積

及增加相應峰的平衡，使峰面積更好地反映混合樣品中各組分的dna比例。研究表明，當混合比例為1：10和10：1時，較少組

分的等位基因峰面積已接近與主要組分等位基因的“stutter”峰

面積?，所以混合比例過分懸殊時，分析應多加注意。

根據(jù)上述計算、分析推斷得出樣品4的混合物比例為0．36，基因型組合見表6，可以看出組分1有8個str位點與嫌疑人

1基因型相同，可達認定。而組分二則有8個str位點與事主基

因型相同。在vwa位點中，18／18、14／17的基因型組合eq值經

計算為0．013 9，并非最小，可能由于等位基因擴增不平衡所致。

討 論

本文利用峰面積對兩組份的簡單混合斑進行分析，方法簡

單，貫穿推斷過程的是各等位基因的峰面積剩余值要接近于零，峰面積的剩余值越低，該基因型組合的可能性越高。(1)在確定

樣本為兩組份的簡單混合物后，通過出現(xiàn)4個等位基因的位點的各峰的峰面積推斷可能的基因型組合和該組合的混合比例，取平均值。(2)利用此混合比例平均值對出現(xiàn)3個等位基因的位點和性別位點進行分析，推斷出可能的基因型組合和性別組

合。(3)將推斷出的各組分基因型與相關樣品基因型比對：(4)

需注意的是擴增時混合物dna 的濃度應控制在一個合適的范

圍，使各等位基因擴增盡量平衡，這樣結果更準確。(5)應盡可

能多做幾個位點，位點越多，信息量越大，認定的幾率也越大。

(6)分析時盡量進行盲分析，這樣可以保證分析的可重復性和科

學性，可能會有個別位點出現(xiàn)錯誤，可將該位點去除或進行修

正。

參考文獻

[1]鄭秀芬，紀貴金，劉超，等．二組份混合dna樣品str圖譜解釋中國

法醫(yī)學雜志，2001，15(4)：203～207

[2]gill p，sparker r，pinchin r，et a1．interpreting simple str mixtures us

ing allele peak areas forensic sci inter，1998，91(1)：41～53

[3]公安部物證編寫組．法醫(yī)物證檢驗技術與應用北京：人民法院出版

社．1997 333～334

(收稿；2003—06—13，修回；2003—07—27)

第二篇：理化樣品分析的質量保證.

理化樣品分析的質量保證

理化樣品分析的目的是利用可靠的、簡便的方法和靈敏度高的儀器設備，將樣品中的有效成分和有毒有害成分快速測定出來，并能準確地進行定量分析或定性分析，為疾病預防控制、衛(wèi)生監(jiān)督和衛(wèi)生評價學工作提供可靠的實驗數(shù)據(jù)。理化樣品分析的質量控制是保證測試結果準確無誤的一種重要手段。

質量保證即確認測試數(shù)據(jù)達到預定目標的步驟，理化樣品分析數(shù)據(jù)質量保證是一個復雜的系統(tǒng)工程，它包括既有區(qū)別又有聯(lián)系的質量控制和質量評定兩個方面，貫穿于從采樣、收樣、取樣、測試至報告的實驗室樣品分析全過程中。質量控制［1，2］

質量控制即為產生達到質量要求的測定所遵循的步驟。質量控制技術的關鍵：（1）較高的人員素質：實驗人員的責任心、基礎水平、技術能力和經驗是保證測定質量的首要條件。（2）測量儀器設備能滿足分析要求：分析測試儀器不僅要滿足方法檢出限的要求，而且要處于適用狀態(tài)，即按規(guī)定進行周期檢定、校準、保養(yǎng)、日常保管和正確使用。（3）量值溯源：量值必須準確可靠，并具有良好均勻性和穩(wěn)定性。工作標準溶液的濃度準確與否，將直接影響測量結果的準確度。因此，要保證不間斷的溯源鏈，使用標準物質時，必須向提供標準物質的部門（供應商）索取有效的標準物質證書，保證標準物質使用的可靠性和可溯源性。（4）有一個好的實驗室操作基礎并嚴格執(zhí)行標準操作步驟：實驗室操作包括測試環(huán)境的合理、清潔、儀器設備的使用記錄、樣品處理、試劑控制、玻璃器皿的清洗等；標準操作步驟即標準分析方法所闡述的操作步驟。（5）有一套嚴格的實際有效的規(guī)章制度：包括樣品、儀器設備、各類實驗室管理制度和實驗數(shù)據(jù)、報告的審核制度，應歸納在質量管理手冊和標準操作規(guī)程中。

1.1 樣品的采集與管理

樣品是實驗對象，分析的前提，要求有惟一性、真實性和安全性特征。樣品的采集應具有代表性：取決于現(xiàn)場科室采樣人員的職責和技能，樣品的采集、保存與運輸?shù)募夹g和措施。如果采集的樣品不具有代表性及真實性或采集的樣品不能保證質量，就會造成檢驗結果數(shù)據(jù)失控。

樣品管理是一項看似簡單而實際易出問題的工作。作為實驗室樣品分析的質量控制部分，首先要求有一套嚴格的樣品管理制度、素質較高的管理員、符合要求的樣品存放室和細致的樣品交接手續(xù)。采集的樣品數(shù)量應符合檢驗要求，樣品要有專人接收和登記，由接樣人將樣品編好號后送實驗室交檢驗人員，對不合格的送檢樣品應拒收并向送檢人員說明拒收原因，告知正確送檢樣品的要求，重新采樣送檢。

1.2 取樣的質量控制

取樣的質控關鍵是要注意樣本的均勻性和穩(wěn)定性，即被測特性在空間分布和隨時間變化的問題。

1.3 檢驗方法的選擇

測試前應核對檢測項目和指標，查閱標準分析方法和有關檢驗資料，一般采用現(xiàn)行有效的國家標準方法，無國家標準方法而采用其他方法進行檢測的，要知道該方法是否已通過驗證、鑒定和審批，對該分析方法誤差的預測與控制，以保證即使沒有很多經驗的檢驗人員也能得到可以接受的分析結果。

1.4 分析測試的內控

樣品分析測試幾乎涉及了質量保證全部內容。在實際測試工作中誤差無時不有，無處不在，質控的根本目的就是要控制誤差。清楚誤差的來源、分類、轉化等概念，并從分析者本身、測試環(huán)境、試驗用水、試劑、器皿及每一個分析測試的步驟中減少分析空白值的引入，就是要杜絕過失誤差，及時發(fā)現(xiàn)并消除系統(tǒng)誤差，減小隨機誤差。

重要的工作：（1）實驗室基礎工作—反映出實驗室管理水平：如測試環(huán)境滿足分析項目的要求，儀器設備檢查核準，實驗用水、試劑的純度、級別達到要求等。（2）分析方法的質控—反映操作者個人技術水平：即便是標準分析方法，不同的操作者得出分析結果的不確定度是不同的。應要求做好分析方法的校正曲線、精密度、檢出限、方差齊性檢驗(確定線性有效范圍)、方法AQC試驗(誤差的估計)、質控圖(判斷測量系統(tǒng)是否處于控制狀態(tài)之中)等工作。

1.5 數(shù)據(jù)報告的質量審核

1.5.1 原始記錄

在檢驗過程中，要嚴格操作規(guī)程，按操作方法中的程序進行操作，不得隨意改動操作程序。并做到同時做好原始記錄，原始記錄的內容應為：（1）檢驗樣品名稱、編號、樣品始檢日期和檢驗結束日期；（2）樣品檢驗項目和檢驗方法；（3）檢測儀器的編號、名稱、型號、工作條件；（4）影響實驗結果的檢測環(huán)境條件；（5）檢測過程中所出現(xiàn)的問題；（6）被檢樣品原始數(shù)據(jù)的記錄和數(shù)據(jù)處理結果；（7）檢驗人員的簽名和校核人員的簽名及日期。

第三篇：樣品分析方法參考

樣品分析方法參考

石灰石：0.15克錫+0.15克樣品+0.3克純鐵+一勺鎢粒 白云石：0.15克錫+0.15克樣品+0.3克純鐵+一勺鎢粒 鐵礦石：0.15克錫+0.15克樣品+0.3克純鐵+一勺鎢粒 土壤：0.15克錫+0.1克樣品+0.3克純鐵+一勺鎢粒 一般鋼樣：0.5克樣+一勺鎢粒

一般鐵樣：0.3克樣+一勺鎢粒

高碳錳鐵：0.1g樣+0.3g純鐵+一勺鎢粒

錳鐵及錳合金：0.3克樣+一勺鎢粒

氮化錳：0.2克樣+0.3克純鐵+一勺鎢粒

錳礦：0.2克樣+0.3克純鐵+一勺鎢粒

硅鐵：0.15克錫+0.1克樣+0.3克純鐵+一勺鎢粒 高爐渣：0.1克樣+一勺鎢粒

煤：0.15克錫+0.03克樣+0.3克純鐵+一勺鎢粒 硫精礦：0.15克錫+0.03克樣+0.3克純鐵+一勺鎢粒 白灰：0.15克錫+0.1克樣+0.3克純鐵+一勺鎢粒 高碳鉻鐵；0.1克樣+一勺鎢粒

還原鈦：0.3克樣+一勺鎢粒

焦炭:0.15克錫+0.015克樣+0.3克純鐵+一勺鎢粒 助熔劑加入量說明：

1、純鐵：一般加入量在0.3~0.4克左右,當樣品為非鐵基(磁性)物品，或鐵基(磁性)物質含量少的時候加入。

2、錫：一般加入量在0.1~0.15克左右，難熔或高熔點樣品。

3、鎢：一般加入量在1.5~2克左右每種分析都要加入。

注意事項：

1、粉末樣品做樣之前需在110℃烘2小時以上，確保樣品干燥無水（水分對硫含量影響相當大）

2、制樣確保樣品無油（油對碳含量影響相當大）

3、樣品稱樣量可以根據(jù)樣品碳、硫含量適當調整，含量高及難熔樣品稱樣量可以適當減少，稱樣量盡可能保持0.05克以上（煤、硫精礦等碳、硫含量特高樣品除外）。

4、助熔劑加入量盡可能保持一致。

第四篇：DNA親子鑒定分析及方案

前言：為什么要談親子鑒定可行方案呢，親子鑒定近來很火，火也就是說明做親子鑒定的人有很多。那么因此做親子鑒定時會面臨很多問題。為此，我們就來探討一個全面、穩(wěn)妥的親子鑒定方案。

由上海親仁親子鑒定中心提供的數(shù)據(jù)表明，親子鑒定中50%做的是個人親子鑒定，也就是占一半左右，司法鑒定和胎兒鑒定分別占25%。該中心還透露了一條消息，胎兒鑒定每年都在逐漸上升。

那么為什么個人親子鑒定占的比例有這么大呢？原因很顯示，相對司法鑒定的復雜流程，做個人鑒定不需要提供任何身份信息，上海親仁親子鑒定負責人談到這方面時說到：“做個人親子鑒定的不需要提供任何身份信息，完全可以匿名做，只需要客戶提供聯(lián)系方式用來通知結果以及快遞報告就行。而司法鑒定就得本人及鑒定人到我們中心來拍照由法醫(yī)親自取樣?！?/p>

通過以上說明來分析，可知個人親子鑒定為何占有這么大的比例。下面我們具體來分析并制定親子鑒定的解決方案。

親子鑒定按照類型分類：

一、個人親子鑒定：

優(yōu)點：可以完全匿名，樣本可以自行取樣，樣本可快遞到鑒定中心。

缺點：鑒定報告沒有任何法律效力，報告不可用于任何司法用途，結果只做自己了解。

說明：鑒定結果的準確性與司法報告完全相同。

二、司法親子鑒定：

優(yōu)點：鑒定報告可以用于報戶口、打官司、移民公證等，受國內公、檢、法、司四大司法部門認可采信。

缺點：需要本人到鑒定中心取樣拍照，需要實名做。

說明：司法鑒定的報告由3-5名法醫(yī)簽名蓋章，司法鑒定與個人鑒定不同的也就是這個蓋有法醫(yī)的章。但是結果是一樣的。

三、胎兒親子鑒定：

說明：胎兒親子鑒定一般是懷孕2個半月到7個月做，超過這個時段就不好做了。最佳時間是2個半月--6個月。

具體方案制定分析：

一、鑒定結果用途：

A：自己了解一下情況的：一般是做個人親子鑒定。

B：鑒定報告用于司法用途：如上戶口、打官司、公證移民、財產分割等所有需要用于公檢法司部門的，一定要做司法鑒定。

C：先看結果如果結果對不上需要打官司的：推薦做司法鑒定，也可先做個人鑒定后，如果結果不是自己的可以再做司法鑒定。

二、鑒定人年齡：

A：未出生的胎兒：胎兒鑒定時間是2個半月到7個月間，最佳時間是2個半月到6個月，胎兒鑒定是有一定的流產風險的，超出這個時間不建議做胎兒鑒定。

B：5歲以下、70歲以上：一般用血液樣本。

親仁親子鑒定中心400-660-2922

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親仁親子鑒定分點：

上海親子鑒定 http://

深圳親子鑒定 http://

胎兒親子鑒定 http://

廈門親子鑒定 http://

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第五篇：混合運算教學設計(朱耀峰)

混合運算教學設計

灌南縣教育局教研室 朱耀峰

教學內容:義務教育課程標準實驗教科書蘇教版四年級上冊數(shù)學P30—31 教學目的: 1.讓學生經歷解決問題的過程,體會列綜合算式解決兩步計算的實際問題,掌握沒有括號的混合算式的運算順序,并能正確計算沒有括號的混合運算兩步式題；

2．讓學生領悟并掌握混合運算兩步式題計算過程的書寫格式，養(yǎng)成良好的學習習慣；

3．讓學生在學習過程中體會數(shù)學思考的嚴謹性與數(shù)學結論的確定性，培養(yǎng)對數(shù)學的積極情感。

教學重點：含兩級運算的混合運算的運算順序。教學難點：克服從左往右計算的思維定勢。教學準備：課件，課堂作業(yè)本、演算本。教學過程：

一、基本訓練，喚醒舊知

聽算練習（簡單的連加、連減、加減混合、連乘、連除、乘除混合，題目略），練習后引導小結以前學過的這幾種類型兩步計算式題的運算順序。

二、結合實際，領悟新知

1．教學例1，結合情境圖，引導學生讀取圖中的信息（書包每個12元、筆記本每本5元、水彩筆每盒18元、訂書機每個12元），讓根據(jù)圖中信息提出一個數(shù)學問題，并解答；老師出示（1）小軍買3本筆記本和1個書包，一共用去多少錢？關注點：先分步列式，再列成綜合算式；數(shù)量關系；綜合算式的讀法；；書寫格式；變式練習：如果小軍買1個書包和2盒水彩筆，一共要花多少錢？兼顧加在前乘在后。引導概括乘、加兩步混合運算的運算順序。規(guī)范板書兩道式題。

鞏固練習：A.口算（題目略），B.P31/1①③、2①、6①⑥，先練習再選擇展示、反饋交流。注意巡視尋找發(fā)現(xiàn)練習中出現(xiàn)的不同情況。

2．出示（2）小晴買2盒水彩筆，付出50元，就找回多少元？關注點：數(shù)量關系；直接列綜合算式；運算順序；書寫格式；變式練習：如果只付40元，夠不夠？引導學生概括乘、減兩步混合運算的運算順序。

鞏固練習：A.口算（題目略），B.P31/1②、2②③、6②③，先練習再選擇展示、反饋交流。C.P31/3④⑤，引導與前幾組題進行比較。兼顧同級運算與兩級運算完善運算順序。

三、對比練習，完善認知

完成P31/4，按組逐題出示，先說出正確的運算順序，再計算，后比較提升，完善對兩步計算式題運算順序的認知。

四、聯(lián)系實際，遷移應用

完成P31/5，重視讀圖交流圖意，先提出問題再解決問題（列綜合算式）

五、總結全課，提升認識

今天你學會了什么樣的運算？（兩步計算、混合運算、綜合算式）板書：混合運算，這樣的兩步計算的運算順序是怎樣的？書寫時就注意些什么？提示：以后我們還會學習一些更復雜的、更挑戰(zhàn)性的混合運算，比如12＋80÷10、60－（50-20）。