第一篇：微生物,痰培養(yǎng)相關(guān)總結(jié)

關(guān)于痰標(biāo)本

1.痰標(biāo)本中需要檢測的主要致病菌：肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌（可引起原發(fā)性肺炎）、流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌（各種器官的化膿性感染，呼吸道的有氣管炎、肺炎膿胸等）、銅綠假單胞菌(條件致病菌，院感主要病原菌之一，在人體抵抗力低下時可引起呼吸道感染等感染，該菌引起的慢性肺部感染占有較大比例)。

2.非病原菌：酵母菌、草綠色鏈球菌、凝固酶陰性葡萄球菌。3.省醫(yī)院對痰標(biāo)本的處理過程：

1）每個接收的痰標(biāo)本進(jìn)行痰涂片（老師稱之為痰質(zhì)控片），鏡下觀察痰標(biāo)本是否合格。合格的痰標(biāo)本標(biāo)準(zhǔn)為WBC>25/LP,EPC<10/LP或二者比值大于2.5。由于種種原因，不合格的痰標(biāo)本是不會退回的。痰質(zhì)控片記錄的相關(guān)信息包括：每低倍鏡下的WBC數(shù)和EPC數(shù)，若查見細(xì)菌，報告細(xì)菌的種類（如G+C、G-b）、排列方式、數(shù)量（幾個+）。還要記錄真菌和孢子的鏡檢結(jié)果。不合格的痰標(biāo)本依然會接種（若申請單上有培養(yǎng)）。痰質(zhì)控片的作用：在篩查標(biāo)本接種出來的平板時根據(jù)痰質(zhì)控片的結(jié)果進(jìn)行相關(guān)分析。

2）痰標(biāo)本接種：接種三種平板，分別是血平板、麥康凱平板、巧克力平板（安圖篩選嗜血桿菌的平板，名稱為CAH）。

3）孵育和接種平板篩選：接收的痰標(biāo)本均要兩夜的孵育。第一夜過夜孵育后取出進(jìn)行平板篩選，做好相關(guān)記錄。第二次過夜孵育后取出再篩選一次，和前一天的記錄相比較，記錄或改正相關(guān)篩選結(jié)果。孵育兩夜的意義在于防止某些生長緩慢的致病菌被漏檢。4.關(guān)于如何篩選需要進(jìn)行下一步檢驗的標(biāo)本 1)數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)

手工接種：血平板上第四區(qū)有5個菌落，表示有105，已經(jīng)達(dá)到治病的數(shù)量?？梢岳^續(xù)往下做鑒定和/或藥敏。

儀器接種：因使用消化液，計數(shù)需有107（痰標(biāo)本使用消化液，使很多胞內(nèi)菌釋放，上機(jī)前都是加過生理鹽水的，經(jīng)過這兩步那么這個判斷治病的數(shù)量級是如何得出的，經(jīng)驗，實驗結(jié)果？）。2)其他

在微生物室的老師經(jīng)過一定時間的經(jīng)驗積累，對于常見的致病菌，根據(jù)其菌落形態(tài)就可以將其鑒別出來。比如通常情況下在血平板上G+菌的菌落較小，圓形，光滑，而G-菌的菌落較大，扁平，粗糙。而痰標(biāo)本接種后的血平板上哪些細(xì)菌需要進(jìn)行下一步試驗不僅需要相應(yīng)的理論知識作基礎(chǔ)還需要經(jīng)驗積累。

在血平板上達(dá)到量的細(xì)菌，還要看是否是優(yōu)勢生長和純量生長。但是優(yōu)勢生長的細(xì)菌并不一定是致病菌，如培養(yǎng)出來的全是口腔的正常菌群，相對來說，必定有優(yōu)勢生長得細(xì)菌。所以優(yōu)勢生長得細(xì)菌要是相關(guān)的致病菌。

在引起呼吸道感染的G-b有肺炎克雷伯桿菌、流感嗜血桿菌、銅綠假單胞菌等。是否痰標(biāo)本培養(yǎng)出G-b就一定是致病菌？答案是痰中出現(xiàn)革蘭陰性菌不一定就是致病菌。因為某些病人，如ICU病人，在呼吸道插管存在的情況下，呼吸道是與外界相通的，這時就會定植很多細(xì)菌，如銅綠假單胞菌，這些細(xì)菌只是定植但不會引起感染。如果一個病人來自ICU，且是第二次或者多次做痰培養(yǎng)的時候，培養(yǎng)出大量純量的銅綠假單胞菌或者鮑曼不動桿菌（這兩種菌常從ICU病人分離到）就需要考慮是定植菌。省醫(yī)院遇到這樣的情況只會報一個該細(xì)菌的量，而不是進(jìn)行鑒定和/或藥敏。判斷一株細(xì)菌是不是致病菌，單獨在實驗室很難做到，必須與臨床聯(lián)系。有的時候，即使從痰標(biāo)本中只分離到根本不占優(yōu)勢幾個菌落的革蘭陰性或陽性菌，這種細(xì)菌也可能是真正引起感染的致病菌。痰標(biāo)本的培養(yǎng)、鑒定和藥敏結(jié)果通常情況下對臨床醫(yī)生只是起到一個輔助的作用，如果病人有癥狀，也分離到相應(yīng)的致病菌，那么可以幫助臨床醫(yī)生肯定診斷。如果培養(yǎng)結(jié)果和臨床癥狀不相符合，臨床醫(yī)生會從多方面考慮原因（送檢標(biāo)本不合格，某種細(xì)菌實驗室檢出能力低）并且經(jīng)驗性用藥（病人有明確的感染癥狀）。

總之，致病菌的篩選不僅需要檢驗工作者的豐富經(jīng)驗還需要多和臨床溝通，多了解臨床才能做好。

（整理的報告內(nèi)容根據(jù)省醫(yī)院老師的講解和相關(guān)資料查詢而得，不一定完全正確，而且必定不全面。在接下來的學(xué)習(xí)中會去完善。有錯誤的地方希望郭老師指出?。?/p>

第二篇：微生物實驗室培養(yǎng)

平陸中學(xué)高二生物

課題一：微生物的實驗室培養(yǎng)第二課時

車柳順2.24學(xué)習(xí)目標(biāo)：

1、明確配制培養(yǎng)基的步驟

2、說出純化微生物的方法和步驟

目標(biāo)一：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基

1、步驟：計算→稱量→溶化→→滅菌→倒平板。

2、演示倒平板操作

導(dǎo)思：（完成倒平板操作的討論題1——4）

目標(biāo)二：純化大腸桿菌

1、微生物接種最常用的方法是劃線法和涂布平板法。

2、平板劃線法通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)分散到培養(yǎng)基的表面。稀釋涂布平板法則是將菌液進(jìn)行一系列的梯度，然后將不同稀釋度的菌液分別到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。

3、總結(jié)平板劃線法和稀釋涂布平板法的操作步驟并演示

（1）平板劃線操作：

導(dǎo)思：（完成平板劃線法的討論題）

（2）稀釋涂布平板法：

導(dǎo)思：（完成稀釋涂布平板法操作的討論題）

4、平板劃線法和稀釋涂布平板法的異同點是

目標(biāo)三：菌種的保存

（1）對于頻繁使用的菌種，可以采用的方法

（2）對于需要長期保存的菌種，可以采用的方法。

自我反思

1、以下關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述錯誤的是（）

A.操作順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌

B.將稱量好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯

C.將培養(yǎng)皿冷卻至50C左右時進(jìn)行倒平板

D.待平板冷卻凝固約5—10min后將平板倒過來放置

2、有關(guān)倒平板的操作錯誤的是（）

A.將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上

B.將打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰

C.將培養(yǎng)皿打開，培養(yǎng)皿蓋倒放在桌面上

D.等待平板冷卻凝固后需要倒過來放置

3、有關(guān)稀釋涂布平板法，敘述錯誤的是（）

A.先將菌液進(jìn)行一系列的稀釋

B.然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面

C.適宜條件下培養(yǎng)

D.結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落

4、產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目和培養(yǎng)基分別是（）

A.一個細(xì)菌、液體培養(yǎng)基B.許多細(xì)菌、液體培養(yǎng)基

C.一個細(xì)菌、固體培養(yǎng)基D.許多細(xì)菌、固體培養(yǎng)基

第三篇：微生物總結(jié)

微生物：一類分布廣泛、體積微小、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼直接看不到，微小生物的總稱。

細(xì)菌L型：細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖結(jié)構(gòu)受理化或生物因素直接破壞或合成被抑制，這種細(xì)胞壁受損的細(xì)菌在高滲環(huán)境下仍可存活，稱細(xì)菌細(xì)胞壁缺陷型或L型。

質(zhì)粒：是染色體外的遺傳物質(zhì)，控制某些特定的生物學(xué)性狀，不是細(xì)菌生長所必需。

莢膜：是細(xì)菌合成分泌的包繞于細(xì)胞壁外的一層粘液性物質(zhì)。界限清晰性質(zhì)穩(wěn)定結(jié)合牢固。培養(yǎng)基：由人工方法經(jīng)滅菌后制成，專供微生物生長使用的混合營養(yǎng)制品。一般pH為7.2-7.6。

兼性厭氧菌：兼有需氧呼吸和無氧發(fā)酵兩種功能，無論在有氧或無氧環(huán)境中都能生長，但以有氧時生長較好，大多數(shù)病原菌屬于此。菌落：在固體培養(yǎng)基中，經(jīng)過十八到24小時培養(yǎng)后，單個細(xì)菌分裂繁殖成一堆肉眼可見的細(xì)紅細(xì)胞吸附：流感病毒等感染細(xì)胞后，由于細(xì)胞膜上出現(xiàn)了血凝素（HA），具有吸附脊椎動物紅細(xì)胞的能力，這一現(xiàn)象稱為紅細(xì)胞吸附?？苟舅兀和ǔＪ怯眉?xì)菌類毒素給馬多次注射后，取其免疫血清提取免疫球蛋白精制而成抗生素：微生物來源的抗菌藥物，以及人工化學(xué)修飾或半合成的衍生物

無菌：就是指沒有活菌的意思。

1：細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及功能？答：化學(xué)組成：G+①肽聚糖：聚糖骨架、四肽側(cè)鏈、五肽交聯(lián)橋②磷壁酸：粘附功能，與致病性有關(guān)；抗原性很強(qiáng)③其他成分：如A群鏈球菌的M蛋白G-①肽聚糖：聚糖骨架；四肽側(cè)鏈②外膜：脂蛋白；脂質(zhì)雙層；脂多糖：脂類A（毒性成分，無種屬特異性）；核心多糖；特異多糖。功能：①維持細(xì)菌固有形態(tài)②保護(hù)細(xì)菌抵抗低滲環(huán)境③物質(zhì)交換④決定菌體的抗原性。2：G-菌與G+菌細(xì)胞壁的異同點及其意義？答：兼性厭氧菌、專性厭氧菌。

11：與醫(yī)學(xué)有關(guān)的合成代謝產(chǎn)物？答：① 毒素與侵襲性酶：外毒素和內(nèi)毒素②熱原質(zhì)：G-菌細(xì)胞壁的脂多糖，耐高溫，250℃干烤破壞。③抗生素：某些微生物代謝中產(chǎn)生的一類能抑制或殺死其他微生物或腫瘤細(xì)胞的物質(zhì)。④維生素：如VitK、B族維生素。⑤色素：脂溶性和水溶性色素。⑥細(xì)菌素：無治療應(yīng)用價值。13：病毒的形態(tài)、結(jié)構(gòu)與化學(xué)組成。答：多數(shù)病毒呈球形或近似球形，少數(shù)呈桿狀（植物病毒）、絲狀（初分離的流感病毒）、彈狀（狂犬病毒）、磚塊狀（如痘類病毒）和蝌蚪狀（噬菌體）。病毒的核心和衣殼，二者構(gòu)成核衣殼，病毒包膜和其他輔助結(jié)構(gòu)?；瘜W(xué)組成：核心：主要為核酸，化學(xué)組成為DNA或RNA。衣殼：包繞在核心外面的一層蛋白質(zhì)，由許多蛋白質(zhì)亞單位（殼粒）組成。包膜：化學(xué)組成： 脂質(zhì)蛋白質(zhì)糖類。

答：單細(xì)胞真菌呈圓形或卵圓形。多細(xì)胞真菌

結(jié)構(gòu)：菌絲和孢子，菌絲：分為營養(yǎng)菌絲、氣中菌絲、生殖菌絲；孢子：是真菌的繁殖體。結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁外成分；細(xì)胞壁；隔膜；其他結(jié)構(gòu)。

25：真菌培養(yǎng)特性。答：最常用的培養(yǎng):沙保弱培養(yǎng)基。溫度:多數(shù)都在22 ~ 28oC，但深部感染真菌最適溫度為37oC，pH4.0 ~ 6.0病原菌通常生長緩慢，1~4周。

26：真菌繁殖方式。答：①無性生殖：①由菌絲斷裂形成新個體②細(xì)胞直接分裂產(chǎn)生子細(xì)胞③產(chǎn)生芽生孢子④產(chǎn)生孢子囊孢子和分生孢子②有性生殖：指經(jīng)過兩性細(xì)胞配合產(chǎn)生新個體的繁殖方式。

27：真菌抵抗力答：①對干燥、陽光、紫外線及常用消毒劑有強(qiáng)抵抗力②不耐熱，菌絲與孢子60℃ 1小時均可殺死③2﹪石炭酸、10%甲醛、0.1%升汞、2.5%碘酊敏感④抗真菌藥物：菌集團(tuán)。

純培養(yǎng)基：挑取一個菌落，移種到另一培養(yǎng)基中，生長出來的細(xì)菌均為純種。

毒性噬菌體：在宿主菌細(xì)胞內(nèi)噬菌體增殖產(chǎn)生子代噬菌體，宿主菌被裂解，形成溶菌性周期。溫和噬菌體：噬菌體基因與宿主菌染色體整合，成為前噬菌體，噬菌體DNA能隨細(xì)菌DNA復(fù)制而復(fù)制，并隨細(xì)菌的分裂而傳到子代細(xì)菌的基因組中，變成溶原性細(xì)菌，形成溶原性周期。前噬菌體：整合在細(xì)菌染色體上的噬菌體基因。轉(zhuǎn)座子：細(xì)菌基因組中的一段DNA序列，可以在染色體、質(zhì)?；蚴删w之間自行移動的遺傳成分，伴隨轉(zhuǎn)座子的移動，會出現(xiàn)插入突變。基因轉(zhuǎn)移：遺傳物質(zhì)由供體菌轉(zhuǎn)入受體菌的過程為基因轉(zhuǎn)移。

重組：轉(zhuǎn)移的基因與受體菌DNA整合在一起稱為重組，重組使受體菌獲得供體菌的某些性狀。轉(zhuǎn)化：細(xì)菌通過性菌毛相互連接溝通，將質(zhì)?；蛉旧w等遺傳物質(zhì)從供體菌轉(zhuǎn)移給受體菌的過程。

接合：是受體菌直接攝取供體菌DNA片段，從而獲得新的遺傳性狀的過程。

轉(zhuǎn)導(dǎo)：以噬菌體為載體將供菌的DNA片段轉(zhuǎn)移到受菌體內(nèi)使受菌獲得供菌的部分遺傳性狀。溶原性轉(zhuǎn)換：某些前噬菌體可導(dǎo)致細(xì)菌基因型和性狀發(fā)生改變，例如白喉棒狀桿菌產(chǎn)生白喉毒素的機(jī)理，溫和噬菌體感染細(xì)菌時，其基因可整合于宿主菌染色體中，使宿主菌獲得噬菌體基因賦予的新的性狀，稱溶原性轉(zhuǎn)換。原生質(zhì)體融合：將兩種不同的細(xì)菌經(jīng)溶菌酶或青霉素等處理，失去細(xì)胞壁成為原生質(zhì)體后進(jìn)行融合的過程。融合后的染色體之間發(fā)生重組。病毒的自我復(fù)制：以病毒核酸為模板，經(jīng)過復(fù)雜的生化過程，復(fù)制子代病毒的核酸并通過轉(zhuǎn)錄翻譯產(chǎn)生病毒蛋白質(zhì)，裝配成熟后釋放到細(xì)胞外，這種增殖方式稱為病毒的自我復(fù)制。頓挫感染：被病毒侵入的細(xì)胞如不能為病毒增殖提供必需成分，則病毒不能合成本身成分，或能合成但不能組裝和釋出有感染性的病毒顆粒。非容納細(xì)胞與容納細(xì)胞

缺陷病毒：病毒基因組不完整或某一基因位點改變，不能正常增殖，不能復(fù)制出完整有感染性的病毒顆粒，此病毒即缺陷病毒。缺陷病毒+輔助病毒?完成復(fù)制

干擾現(xiàn)象：當(dāng)兩種病毒感染同一宿主細(xì)胞時，發(fā)生一種病毒的增殖抑制另一種病毒增殖的現(xiàn)象。某些病毒感染細(xì)胞時不出現(xiàn)CPE或其他易于測出的變化（如HAd），但能干擾其后感染的另一病毒的增殖，從而阻抑后者所特有的CPE 芽孢：某些細(xì)菌在一定環(huán)境條件下，胞質(zhì)脫水濃縮，在菌體內(nèi)部形成的一個圓形或卵圓形小體。

正常菌群：正常人的體表和與外界相通的眼結(jié)膜，口腔、鼻腔、腸道、泌尿生殖道等腔道粘膜中的不同種類和數(shù)量及對人體無害而有益的微生物。正常微生物群通稱為正常菌群

細(xì)菌群體：細(xì)菌附著在有生命或無生命的材料表面后，由細(xì)菌及其所分泌的胞外多聚物共同組成的呈膜狀的細(xì)菌群體。機(jī)會性感染：由正常菌群在機(jī)體免疫功能低下、寄居部位改變、菌群失調(diào)等特定條件下引起的感染。

毒力：致病性的強(qiáng)弱程度。

侵襲素：某些細(xì)菌的基因編碼一些具有侵襲功能的蛋白多肽，促進(jìn)該病原菌向鄰近組織擴(kuò)散甚至介導(dǎo)進(jìn)入鄰近黏膜上皮細(xì)胞內(nèi)。

包涵體：細(xì)胞漿或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)光鏡下可見的斑塊狀結(jié)構(gòu)

G+ 菌:①肽聚糖：聚糖骨架,四肽側(cè)鏈,五肽交聯(lián)橋,三維立體②磷壁酸:重要表面抗原，與粘附致病有關(guān)，加強(qiáng)穩(wěn)定細(xì)胞壁G－菌:①肽聚糖：聚糖骨架,四肽側(cè)鏈組成二維結(jié)構(gòu), ②外膜（脂蛋白、脂質(zhì)雙層、脂多糖組成）功能:屏障結(jié)構(gòu)LPS是G－菌的內(nèi)毒素。細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)異同:G+菌/G－菌--強(qiáng)度:較堅韌/較疏松--厚度:厚20-80nm/薄10-15nm--肽聚糖層數(shù):多可達(dá)50層/少，1-2層--肽聚糖結(jié)構(gòu):聚糖骨架,四肽側(cè)鏈,五肽交聯(lián)橋,三維立體/聚糖骨架,四肽側(cè)鏈,二維平面--脂類含量/少/多--磷壁酸:有/無--外膜:無/有,由脂蛋白、脂質(zhì)雙層、脂多糖組成3：細(xì)菌L型，特殊結(jié)構(gòu)種類、化學(xué)組成、抗原性及意義？答：定義：細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖結(jié)構(gòu)受理化或生物因素直接破壞或合成被抑制，這種細(xì)胞壁受損的細(xì)菌在高滲環(huán)境下仍可存活，稱細(xì)菌細(xì)胞壁缺陷型或L型。種類：G+菌細(xì)胞壁缺失后，僅有胞膜，稱原生質(zhì)體，G--菌肽聚糖層受損，尚有外膜，稱原生質(zhì)球?？乖约耙饬x：高度多形性，大小不一；大多染成G－；高滲低瓊脂含血清培養(yǎng)基—油煎蛋樣菌落；去除誘因后，有些可回復(fù)為原菌；某些L型仍有致病性,引起慢性感染。作用于胞壁的抗菌性藥對L型感染治療無效

4：細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)？答：①莢膜：多糖或多肽的多聚體。功能a抗吞噬b黏附作用c抗有害物質(zhì)的損傷d有抗原性，用于細(xì)菌的鑒定和分型②鞭毛：蛋白質(zhì)，由基礎(chǔ)小體絲狀體鉤狀體組成，高度抗原性。功能a是細(xì)菌的運動器官b某些細(xì)菌的鞭毛與致病性有關(guān)c根據(jù)鞭毛的動力和鞭毛的抗原性可用以細(xì)菌的鑒別和分類③菌毛：由亞單位菌毛蛋白構(gòu)成。功能a黏附作用b傳遞遺傳物質(zhì)④芽孢：生產(chǎn)芽孢的細(xì)菌都是革陽菌。功能：a增強(qiáng)抵抗力b不直接致病c鑒定。

5：細(xì)菌的遺傳物質(zhì)？答：細(xì)菌染色體，質(zhì)粒，噬菌體：

6：基因轉(zhuǎn)移與重組方式的種類及定義？答：定義：基因轉(zhuǎn)移：遺傳物質(zhì)由供體菌轉(zhuǎn)入受體菌的過程為基因轉(zhuǎn)移。重組：轉(zhuǎn)移的基因與受體菌DNA整合在一起稱為重組，重組使受體菌獲得供體菌的某些性狀。分類：轉(zhuǎn)化,接合,轉(zhuǎn)導(dǎo),融合,轉(zhuǎn)換.【表格】類型：基因來源/轉(zhuǎn)移方式--轉(zhuǎn)化：供菌游離的DNA片段/直接攝入--接合：供菌質(zhì)粒DNA/ 性菌毛--轉(zhuǎn)導(dǎo)：供菌任意DNA或噬菌體與供菌特定DNA/噬菌體--融合：兩菌原生質(zhì)體的DNA/融合--轉(zhuǎn)換：溫和噬菌體/吸附穿入

7：噬菌體及其相關(guān)概念。答：1）毒性噬菌體：在宿主菌細(xì)胞內(nèi)噬菌體增殖產(chǎn)生子代噬菌體，宿主菌被裂解，形成溶菌性周期。2）溫和噬菌體：噬菌體基因與宿主菌染色體整合，成為前噬菌體，噬菌體DNA能隨細(xì)菌DNA復(fù)制而復(fù)制，并隨細(xì)菌的分裂而傳到子代細(xì)菌的基因組中，變成溶原性細(xì)菌，形成溶原性周期。

8：細(xì)菌生長繁殖的條件？答:營養(yǎng)物質(zhì)/酸堿度 多數(shù)病原菌最適pH為7.2~7.6/溫度 多數(shù)病原菌生長最適溫度為37℃/氣體 據(jù)代謝時對分子氧的需要與否，專性需氧菌、微需氧菌、兼性厭氧菌、專性厭氧菌/滲透壓。

9：細(xì)菌群體的生長繁殖？答：生長曲線：一定數(shù)量的細(xì)菌接種到定量的液體培養(yǎng)基中，連續(xù)定時取樣測定活菌數(shù)量，以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，以活菌數(shù)的對數(shù)為縱坐標(biāo)作圖，得到的一條曲線。遲緩期：適應(yīng)階段。對數(shù)期：對抗生素敏感，細(xì)菌鑒定選此期。穩(wěn)定期：代謝產(chǎn)物形成（如外毒素、抗生素、芽胞等）。衰亡期：菌體細(xì)胞呈現(xiàn)多種形態(tài)。

10：按細(xì)菌對氧需要的分類？答：據(jù)代謝時對分子氧的需要與否，專性需氧菌、微需氧菌、14：雙鏈DNA病毒的復(fù)制周期？答：vDNA（RNA聚合酶）→早期mRNA（翻譯）→早期蛋白（酶）→ vDNA（酶）子代DNA →? mRNA?→結(jié)構(gòu)蛋白.→子代DNA+結(jié)構(gòu)蛋白→子代病毒。簡要過程：吸附，穿入，脫殼，生物合成，組裝、成熟與釋放。

15：頓挫病毒，缺陷病毒的概念？答：頓挫病毒：被病毒侵入的細(xì)胞如不能為病毒增殖提供必需成分，則病毒不能合成本身成分，或能合成但不能組裝和釋出有感染性的病毒顆粒。非容納細(xì)胞與容納細(xì)胞。缺陷病毒：病毒基因組不完整或某一基因位點改變，不能正常增殖，不能復(fù)制出完整有感染性的病毒顆粒，此病毒即缺陷病毒。缺陷病毒+輔助病毒=完成復(fù)制 16：細(xì)菌的感染與致病。答：感染：在一定條件下，微生物與機(jī)體相互作用并導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生不同程度的病理過程?！?/p>

17：細(xì)菌的毒力比較，外毒素與內(nèi)毒素生物學(xué)特性。答：【表格】種類：內(nèi)毒素★外毒素。來源：G-菌★G+菌部分G-菌。編碼基因：染色體基因★質(zhì)?；蚯笆删w或染色體基因。存在部位：細(xì)胞壁成分、細(xì)菌裂解后釋出★活菌分泌或細(xì)菌溶解后散出?；瘜W(xué)成分：脂多糖★蛋白質(zhì)。穩(wěn)定性：好(160℃2~4h才破壞）★差（60~80 ℃30m可破壞）。毒性作用：弱、各種內(nèi)毒素作用大致相同★強(qiáng)、對機(jī)體組織器官有選擇性?？乖裕喝酰兹┨幚砗蟛荒苄纬深惗舅亍飶?qiáng)，能刺激機(jī)體形成抗毒素，經(jīng)甲醛脫毒后能形成類毒素。

18：細(xì)菌感染的類型答：①不感染②隱性感染③潛伏感染④顯性感染：急慢性感染；局部、全身感染⑤帶菌狀態(tài)。

19：病毒感染類型。答：①隱性感染②顯性感染：急性病毒感染：潛伏期短，發(fā)病急，數(shù)日或數(shù)周回復(fù)，病原消滅型感染。持續(xù)性病毒感染：慢性病毒感染；潛伏性病毒感染；慢發(fā)病毒感染。

20：細(xì)菌的致病機(jī)制。答：細(xì)菌的致病性強(qiáng)弱取決于毒力，細(xì)菌的毒力因子：①侵襲力：致病菌突破宿主生理屏障，進(jìn)入機(jī)體并在體內(nèi)定植、繁殖和擴(kuò)散的能力包括黏附素、莢膜和微莢膜、侵襲性物質(zhì)②毒素：細(xì)菌產(chǎn)生的損傷宿主引起生理功能紊亂的毒性物質(zhì)，包括內(nèi)毒素和外毒素。

21：正常菌群的生理作用。答：①生物拮抗：競爭粘附（占位性保護(hù)）作用；產(chǎn)生有害代謝物質(zhì)；營養(yǎng)競爭②營養(yǎng)作用③免疫作用④抑癌作用⑤抗衰老作用。

22：病毒分離鑒定方法及病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中的增殖的指標(biāo)。答：病毒的分離：①動物接種②雞胚培養(yǎng)；流感病毒初次分離接種于羊膜腔；流感病毒的再培養(yǎng)接種于尿囊腔③組織培養(yǎng)④細(xì)胞培養(yǎng) — 病毒分離鑒定中最常用的方法單層細(xì)胞培養(yǎng)；原代細(xì)胞培養(yǎng)；二倍體細(xì)胞培養(yǎng)；傳代細(xì)胞培養(yǎng)。指標(biāo)：1）細(xì)胞的變化①細(xì)胞病變效應(yīng)：有些病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖時引起的特有的細(xì)胞病變，如細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落②多核巨細(xì)胞形成：有些病毒如麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒等作用于細(xì)胞膜，使鄰近的細(xì)胞融合，形成多核巨細(xì)胞③胞質(zhì)或核內(nèi)包涵體的形成狂犬病病毒、巨細(xì)胞病毒。2）紅細(xì)胞吸附流感病毒等感染細(xì)胞后，由于細(xì)胞膜上出現(xiàn)了血凝素，具有吸附脊椎動物紅細(xì)胞的能力，這一現(xiàn)象稱為紅細(xì)胞吸附。常用來鑒定具有血凝素的黏病毒或副黏病毒的增殖3）.紅細(xì)胞凝集檢測含血凝素病毒的方法4）干擾現(xiàn)象5）空斑形成試驗。

23：病毒成份的檢測（抗原、核酸檢測）答：1.病毒抗原的檢測2.病毒核酸的檢測

24：真菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)（單細(xì)胞和多細(xì)胞真菌）。

灰黃霉素、制霉菌素B、二性霉素B、氟康唑和酮康唑；對抗生素不敏感。

28：抗菌藥物的種類與作用機(jī)制。答：殺菌藥和抑菌藥。機(jī)制：①抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成②抑制細(xì)菌

細(xì)胞膜功③抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成④抑制細(xì)菌核酸合成。29：細(xì)菌耐藥的機(jī)制。答：產(chǎn)生鈍化酶；細(xì)胞通透性的改變；靶位結(jié)構(gòu)的改變；建立代謝旁路；代謝酶分子的改變

30：醫(yī)院感染的定義。答：由醫(yī)院的病原生物或其毒素導(dǎo)致的局部或全身感染性疾病。

31：細(xì)菌分離培養(yǎng)和鑒定、生化試驗、血清學(xué)試驗？答：細(xì)菌分離培養(yǎng)和鑒定：原則上應(yīng)對所有送檢標(biāo)本做分離培養(yǎng)，以便獲得單個菌落后進(jìn)行純培養(yǎng)，從而對細(xì)菌做進(jìn)一步的生物學(xué)、免疫學(xué)、致病性或細(xì)菌的藥物敏感性等方面的檢查，最終獲得確切的報告。生化試驗：得到細(xì)菌的純培養(yǎng)物后，用糖發(fā)酵試驗，吲哚試驗，硝酸鹽還原實驗等對細(xì)菌的酶系統(tǒng)和其代謝產(chǎn)物的檢查，是鑒別細(xì)菌的重要方法之一。血清學(xué)實驗：利用含已知的特異性抗體的免疫血清，對細(xì)菌進(jìn)行群和型的鑒別。

微生物種類名稱★生物學(xué)性狀★致病物質(zhì)、致病機(jī)理及所致疾病

破傷風(fēng)梭菌：菌體細(xì)長，芽胞正圓比菌體粗，位于菌體頂端菌體鼓槌狀★不發(fā)酵糖類，不分解蛋白質(zhì)。條件：局部傷口需形成厭氧微環(huán)境，傷口窄而深，有泥土或異物污染，大面積創(chuàng)傷，壞死組織多，局部組織缺血，同時有需氧菌或兼性厭氧菌混合感染的傷口。防治原則：特異性預(yù)防：注射破傷風(fēng)類毒素主動免疫；迅速對傷口清創(chuàng)擴(kuò)創(chuàng)，防止形成厭氧微環(huán)境；緊急預(yù)防：TAT（精制破傷風(fēng)抗毒素）；治療： 早期足量使用TAT，抗生素。產(chǎn)氣莢膜梭菌：G+粗大桿菌，芽胞位于次極端，橢圓形，直徑小于菌體形成明顯莢膜★血平板：雙層溶血環(huán)，代謝十分活躍，牛奶培養(yǎng)基：“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象。增加血管通透性，組織壞死，氣性壞疽，食物中毒，壞死性腸炎。

肉毒梭菌：G+粗短桿菌，芽胞位于次極端，橢圓形，菌體呈網(wǎng)球拍狀，嚴(yán)格厭氧，分型多，生化反應(yīng)復(fù)雜★肉毒毒素，抑制乙酰膽堿釋放，引起運動神經(jīng)末梢失調(diào)→肌肉麻痹；食物中毒，嬰兒肉毒中毒。

支原體：菌落油煎蛋型，高度多形態(tài)型，細(xì)胞膜含高度固醇，無細(xì)胞壁，對青霉素有抵抗作用★支原體肺炎，病變?yōu)殚g質(zhì)性肺炎，可合并支氣管肺炎。稱為原發(fā)性非典型性肺炎。不規(guī)則發(fā)熱，刺激性咳嗽，頭痛。嬰幼兒病情嚴(yán)重，發(fā)病急，病程長，以呼吸困難為主。有些合并其他系統(tǒng)病變，如循環(huán)系統(tǒng)等。飛沫傳播。立克次體：是一類體積微小，絕大多數(shù)為自身代謝不完善，嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生的原核細(xì)胞型微生物★流行性斑疹傷寒、地方性斑疹傷寒、恙蟲病、Q熱

衣原體：嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生，有獨特發(fā)育周期，能通過細(xì)菌濾器，原核細(xì)胞型微生物★ 沙眼:感染眼結(jié)膜上皮細(xì)胞→增殖，包涵體→局部炎癥→早期流淚、有粘液膿性分泌物、結(jié)膜充血及濾泡增生→后期結(jié)膜瘢痕、眼瞼內(nèi)翻、倒睫以及角膜血管翳引起的角膜損害→影響視力或致盲包涵體結(jié)膜炎、泌尿生殖道感染、沙眼衣原體肺炎、性病淋巴肉芽腫

螺旋體：是一類細(xì)長、柔軟、彎曲、運動活潑的原核細(xì)胞型微生物基本結(jié)構(gòu)及生物學(xué)形狀與細(xì)菌相似★梅毒，人是唯一傳染源，致病物質(zhì)為莢膜樣物質(zhì)，透明質(zhì)酸酶；后天通過性接觸傳播或者先天經(jīng)過母體傳播。

第四篇：微生物總結(jié)

第一章、緒論

巴斯得的貢獻(xiàn)：

1、徹底否定了“自生說”

2、免疫學(xué)—預(yù)防接種

3、證實發(fā)酵是由微生物引起的3、巴斯德消毒法

柯赫貢獻(xiàn)：

1、證實炭疽病菌是炭疽病的病原菌

2、發(fā)現(xiàn)了肺結(jié)核病的病原菌

3、提出了證明某種微生物是否為某種疾病病原體的病原菌——柯赫原則

4、固體培養(yǎng)基分離純化微生物的技術(shù)

5、配制培養(yǎng)基

微生物的5大共性：

1、體積小、面積大

2、吸收多、轉(zhuǎn)化快

3生長旺、繁殖快

4、分布廣、種類多

5、適應(yīng)性強(qiáng)、易變異 第二章、微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)

一、涂布平板法作用：用于純種分離、篩選菌落、得到單菌落，對一些細(xì)菌進(jìn)行計數(shù) 五區(qū)劃線發(fā)作用：純化菌種、得到單菌落

搖瓶實驗作用：菌種篩選、發(fā)酵實驗、種子培養(yǎng)等 穿刺法的作用：保藏厭氧菌種、研究微生物的動力 之字劃線法的作用：保藏菌種、單菌落的獲取

二、斜面菌種保藏法：保藏期限3個月以內(nèi)，沙土管保藏法：保藏期限1~10年主要適用于產(chǎn)孢子的，如芽孢桿菌、放線菌 石蠟油封藏法：保藏期限1~2年

真空冷凍干燥法：保藏期限5~10年，液氮超低溫病結(jié)法：保藏期限5~10年 第三章

一、細(xì)胞壁：根據(jù)細(xì)胞壁將原核生物分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌兩種。

1、革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁的特點：厚度大（20~80nm）和化學(xué)組分簡單，一般只含90%肽聚糖和10%磷壁酸。

革蘭氏陽性菌的機(jī)械阻攔與保護(hù)作用有肽聚糖完成。磷壁酸：是結(jié)合在革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁上的一種酸性多糖，主要成分為甘油磷酸或核糖醇磷酸。

磷壁酸為革蘭氏陽性菌所特有。對于革蘭氏陽性菌而言，抗原性由磷壁酸完成。磷壁酸的主要生理功能：1）、其磷酸分子上較多的負(fù)電荷可提高細(xì)胞周圍鎂離子的濃度進(jìn)入細(xì)胞后就可以保證細(xì)胞膜上一些需鎂離子的合成提高活性 2）儲藏磷元素 3）、增強(qiáng)某些致病菌如A族鏈球菌對宿主細(xì)胞的黏連、避免被白細(xì)胞吞噬以及補(bǔ)抗體的作用 4）賦予革蘭氏陽性菌以特異的表面抗原 5）可作為噬菌體的特異性吸附受體

6）調(diào)節(jié)細(xì)胞自溶素的活力，借以防止細(xì)胞自溶而死亡

2、革蘭氏陰性菌：由肽聚糖和外膜組成，外膜中的脂多糖是革蘭氏陰性菌所特有的 外壁層可分為3層：外層為脂多糖層，中層為磷脂層，內(nèi)層為脂蛋白 革蘭氏陰性菌外膜的作用：1）控制細(xì)胞透性

2）提高鎂離子濃度 3）決定細(xì)胞的抗原性

4）類脂A是類毒素的主要成分

脂多糖：是位于革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁最外層的一層較厚的類脂多糖物質(zhì)，由類脂A、核心多糖和O-特異側(cè)鏈

脂多糖的功能：1）其中類脂A是革蘭氏陰性菌致病物質(zhì)——內(nèi)毒素的物質(zhì)基礎(chǔ) 2）因其負(fù)電荷較強(qiáng)，有吸附鎂離子、鈣離子等陽離子以提高其在細(xì)胞表面的濃度作用 3)由于LPS結(jié)構(gòu)多變，決定了革蘭氏陰性菌細(xì)胞表面抗原決定族 4）是許多噬菌體在在細(xì)胞表面的吸附受體 5）具有控制某些物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞的部分選擇性屏障功能

3、革蘭氏染色機(jī)制：通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞膜內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物。革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚，肽聚糖網(wǎng)層次多和交聯(lián)致密，故與乙醇與丙酮作脫色處理時因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會溶出縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其任呈紫色。反之革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層的類脂含量高、肽聚糖層薄和交聯(lián)度差，遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物的溶出，因此，通過乙醇脫色后細(xì)胞退成無色。這時，再經(jīng)沙黃等紅色染料進(jìn)行復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈現(xiàn)紅色，而革蘭氏陽性則保留紫色。

二、芽孢

芽孢：某些細(xì)胞在生長發(fā)育后期，在細(xì)胞內(nèi)形成一個圓形或橢圓形、厚壁、含水量極低、抗逆性極強(qiáng)的休眠體

芽孢的特點：1）芽孢內(nèi)新陳代謝幾乎停止，處于休眠狀態(tài)，但保持潛在萌發(fā)力

2）芽孢不具生殖能力，僅只是一種休眠體 3）抗逆性最強(qiáng)的生命體之一，有抗熱、抗化學(xué)藥物、抗輻射和抗靜水壓能力 4）含水量低，壁厚而致密，通透性差，不易著色，折光性強(qiáng)

5）一個孢子萌發(fā)只產(chǎn)生一個營養(yǎng)狀態(tài)的細(xì)胞 芽孢的耐熱機(jī)制：芽孢的耐熱性在于芽孢衣對多價陽離子和水分的透性很差和皮層的離子強(qiáng)度很高，從而是皮層產(chǎn)生極高的滲透壓去奪取芽孢核心中的水分，其結(jié)果造成皮層的充分膨脹，而核心部分的細(xì)胞質(zhì)卻變得高度失水，因此，導(dǎo)致核心具極強(qiáng)的耐熱性。第四章微生物的營養(yǎng)要求

一、營養(yǎng)物質(zhì)：能夠滿足微生物機(jī)體生長、繁殖和完成各種生理條件所需的物質(zhì) 營養(yǎng)：微生物獲得U和利用營養(yǎng)物質(zhì)的過程

二、1、碳源：是在微生物生長過程中為微生物提供碳素來源的物質(zhì)。為微生物提供碳元素與能量

2、氮源：為微生物提供氮元素來源，只有少數(shù)自養(yǎng)微生物能利用銨鹽、硝酸鹽同時作為氮源與能源（是構(gòu)成細(xì)胞中核酸和蛋白質(zhì)的重要元素）氮源的類型：無機(jī)氮、有機(jī)氮、氣體氮

3、無機(jī)鹽：作用：作為酶活性中心的組成部分、維持生物大分子和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性、調(diào)節(jié)并維持細(xì)胞的滲透壓、控制細(xì)胞的氧化還原電位和作為某些微生物生長的能源物質(zhì)。

4、生長因子：通常是指那些微生物生長所必需的的且需量很少，但微生物自身不能合成或合成量不足以滿足機(jī)體生長需要的有機(jī)化合物

5、水：生理功能：1)起到溶劑與運輸介質(zhì)的作用

2）參與細(xì)胞內(nèi)一系列的化學(xué)反應(yīng)

3）維持蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子穩(wěn)定的天然構(gòu)象

4）是良好的導(dǎo)熱體，調(diào)節(jié)細(xì)胞溫度 微生物的營養(yǎng)類型分類（P84表格）

三、1、培養(yǎng)基的配制原則：1）目標(biāo)明確

2）營養(yǎng)協(xié)調(diào)

3）物理化學(xué)條件適宜

4）原料來源的選擇

2、C多有助于次生物質(zhì)分泌，N多有助于個體生長發(fā)育

3、PH：細(xì)菌：7.0~8.0

酵母菌：4.0~6.0

放線菌：8.0~9.0

霉菌：4.0~5.8

4、維持培養(yǎng)基PH的方法：1）加緩沖劑一氫和二氫磷酸鹽的混合物

2）備用堿：CaCO3、CaHCO3 3）弱酸鹽：檸檬酸鹽、乳酸鹽

4）液氨或鹽酸

5、原料來源：1）經(jīng)濟(jì)節(jié)約原則：以粗代精、以廢代好、以簡代繁

2）原料來源要廣泛

3）原料藥易處理、處理成本要低

4）原料處理后廢物、廢液、廢氣要少

6、選擇和配制培養(yǎng)基的方法四種：生態(tài)模擬、查閱文獻(xiàn)、精心設(shè)計、實驗比較

四、培養(yǎng)基的分類

1、按成分不同劃分：天然培養(yǎng)基：優(yōu)點為取材方便，營養(yǎng)豐富，種了多樣，配制方便合成培養(yǎng)基：優(yōu)點：組分精確，重復(fù)性好確定：較昂貴，一般用于研究

2、根據(jù)物料狀態(tài)劃分：固體培養(yǎng)基：一般用于進(jìn)行微生物的分離、鑒定、活菌計數(shù)及菌種保藏半固體培養(yǎng)基：用于觀察微生物的運動特征、分類鑒定及噬菌體效價滴定液體培養(yǎng)基：用于大量培養(yǎng)微生物，研究生理代謝

3、按用途劃分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基：用于培養(yǎng)野生型微生物和原養(yǎng)型微生物 加富培養(yǎng)基（營養(yǎng)培養(yǎng)基）：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營養(yǎng)物質(zhì)制成的一類營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基作用一般為分離某種微生物而專門設(shè)計或培養(yǎng)營養(yǎng)要求嚴(yán)謹(jǐn)?shù)漠悩游⑸?鑒別培養(yǎng)基：在培養(yǎng)可中加入某種特殊化學(xué)物質(zhì) 選擇培養(yǎng)基：根據(jù)不同種類微生物的特殊營養(yǎng)需求或?qū)δ撤N化學(xué)物質(zhì)的敏感性不同，在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長，有利于所需要微生物的生長，有利于所需微生物的生長 第五章、微生物代謝

微生物發(fā)酵過程的三個階段：脫氫（電子）、遞氫（或電子）和受氫（或電子）發(fā)酵：是指微生物細(xì)胞將有機(jī)物氧化釋放的電子直接交給底物本身未完全氧化的某些中間產(chǎn)物，同時釋放能量并產(chǎn)生各種不同的代謝產(chǎn)物

代謝：生命存在的基本特征，是微生物體內(nèi)所進(jìn)行的全部生化反應(yīng)的總稱。主要由分解代謝和合成代謝兩個過程組成。分解代謝：是指將大分子物質(zhì)降解成小分子物質(zhì)，并在這個過程中產(chǎn)生能量（都是氧化反應(yīng)）合成代謝：是指細(xì)胞利用簡單的小分子物質(zhì)合成復(fù)雜大分子，在這個過程要消耗能量（都是還原反應(yīng)）

代謝途徑都是有一系列連續(xù)的酶促反應(yīng)構(gòu)成的

P102~P105EMP HM ED途徑的特點功能以及途徑路線

根據(jù)氧化還原反應(yīng)電子受體的不同可將發(fā)酵和呼吸分為有氧和無氧呼吸兩種 P108 TCA途徑圖

TCA循環(huán)特點：1）氧雖然不直接參與其中反應(yīng)，但必需在有氧條件下運行

2）每個丙酮酸產(chǎn)生15個ATP 3）位于一切分解代謝與合成代謝的樞紐地位，可為生物合成提供各種碳價原料

TCA的生理意義：1）為細(xì)胞提供能量

2）各種能源物質(zhì)徹底氧化的共同代謝途徑（對于微生物來說）3）物質(zhì)轉(zhuǎn)化樞紐

無氧呼吸：電子受體不是氧氣而是外源無機(jī)物與部分簡單小分子有機(jī)物

發(fā)酵作用：沒有外源電子受體，底物具有的能量只釋放一小部分，合成少量ATP 三種磷酸化：底物水平磷酸化，高能磷酸化，氧化磷酸化

光合磷酸化的特點：1）光驅(qū)使下電子自菌綠素上逐出后經(jīng)類似呼吸鏈又回到菌綠素

2）產(chǎn)還原力[H]和產(chǎn)ATP分別進(jìn)行，還原力來自于H2O等無機(jī)物

3）不產(chǎn)生氧氣 合成代謝：微生物利用能量代謝所產(chǎn)生的能量、中間代謝產(chǎn)物以及從外界吸收的小分子合成復(fù)雜細(xì)胞物質(zhì)的過程

P118~P119 CO2固定路線圖

藍(lán)細(xì)菌孤單的抗氧化保護(hù)機(jī)制：1）分化出特殊的還原性異形胞

2）非異形胞藍(lán)細(xì)菌固氮酶的保護(hù)將固氮與光合進(jìn)行時間上分隔

微生物固氮反應(yīng)6要素：1）ATP的供應(yīng)

2)還原力[H]及傳遞氫載體

3）固氮酶

4）還原底物——氮氣

5）鎂離子

6）嚴(yán)格厭氧微環(huán)境

聯(lián)合固氮菌：指必需生活在植物根莖葉，動物腸道等處才能進(jìn)行固氮的微生物，不形成類似根瘤的共生結(jié)構(gòu) 微生物的代謝調(diào)節(jié)主要有兩種類型：一是酶活性的調(diào)節(jié)，即調(diào)節(jié)已經(jīng)存在的酶分子的活性，是酶在化學(xué)水平的變化。另一類是酶合成的調(diào)節(jié)，即調(diào)節(jié)酶分子的合成量，是遺傳水平發(fā)生的變化 第六章

一、生長曲線延滯期

特點：1）生長速率常數(shù)為零，細(xì)胞數(shù)目不增加或增加很小

2）細(xì)胞形態(tài)變大或 增長許多桿菌可長成絲狀

3）合成代謝十分活躍，核糖體、酶類和ATP 的合成加速產(chǎn)生各種誘導(dǎo)酶

4）對外界不良條件如NaCl溶液，溫度和抗 生素等理化因素反應(yīng)敏感

出現(xiàn)原因：1）微生物接種到一個新的環(huán)境，暫缺乏足夠的能量和必需的生長因子

2）“種子”老化即處于未對數(shù)期或種子未活化

3）接種時損傷

影響其長短的因素與實踐意義：1）接種齡：對數(shù)期種子延滯期短，延滯期或衰亡期的種子延滯期較長

2）接種量：接種量大，延滯期較短，接種量小，延滯期較長

3）培養(yǎng)基成分：培養(yǎng)基成分豐富的延滯期較短，培養(yǎng)基成分與種子培養(yǎng)基一致的延滯期較短

二、生長曲線指數(shù)期

特點：1）生長速率最快，細(xì)胞呈指數(shù)增長

2）生長速率恒定

3）代謝旺盛，細(xì)胞組分平衡發(fā)展

4）群體的生理特性一致

影響指數(shù)期的意義：1）菌種：不同菌種代時差異極大

2）營養(yǎng)成分：營養(yǎng)越豐富代時越短

3）營養(yǎng)物濃度：影響微生物的生長速率和生長總量

4）培養(yǎng)溫度：影響微生物的生長速率和生長總量

指數(shù)期的實踐意義：1）是代謝、生理研究的良好材料

2)是增殖噬菌體的最適宿主菌齡

4）革蘭氏染色是采用此期微生物

生長曲線穩(wěn)定期特點：1）活細(xì)胞總數(shù)維持不變即新增殖的細(xì)胞數(shù)與衰亡的細(xì)胞數(shù)相等，菌體總數(shù)達(dá)到最高點

2）細(xì)胞生長速率為零

3）細(xì)胞生理上處于衰老，代謝活力鈍化，細(xì)胞成分合成緩慢，革蘭氏染色發(fā)生變化

三、生長曲線衰亡期

特點：細(xì)胞以指數(shù)速率死亡，有時細(xì)胞速率的降低是由于抗性細(xì)胞的積累，細(xì)胞變形退化，有的發(fā)生自溶，革蘭氏染色發(fā)生變化

影響衰亡期的因素及實踐意義：1）與菌種的遺傳特性有關(guān)：有些細(xì)菌的培養(yǎng)經(jīng)歷所有的各個生長時期，幾天以后死亡，有細(xì)菌培養(yǎng)基個月乃至幾年以后任然有一些貨細(xì)胞

2）與是否產(chǎn)芽孢有關(guān)：產(chǎn)芽孢的細(xì)菌更易幸存下來

3）與營養(yǎng)物質(zhì)和有毒物質(zhì)有關(guān)：補(bǔ)充營養(yǎng)和能源，以及中和環(huán)境毒性，可以減緩死亡細(xì)胞的死亡速率，延長細(xì)菌培養(yǎng)物的存貨時間

四、分批培養(yǎng)：是指將微生物置于一定容積的的培養(yǎng)基中，經(jīng)過生長培養(yǎng)，最后一次收獲培養(yǎng)方式 連續(xù)培養(yǎng)：在一個恒定容積的的流動系統(tǒng)中培養(yǎng)微生物，一方面以一定速率加入新的培養(yǎng)基，另一方面又以相同的速率流出培養(yǎng)物（菌體和代謝產(chǎn)物）

連續(xù)發(fā)酵的優(yōu)點：1）高效

2）產(chǎn)品質(zhì)量較穩(wěn)定

3）節(jié)約了大量動力、人力、水和蒸汽，且使水、汽、電的負(fù)荷均衡合理

連續(xù)發(fā)酵的缺點：1）菌種易退化

2）易污染雜菌 3）營養(yǎng)物質(zhì)的利用率一般 同步生長：就是指在培養(yǎng)物中所有微生物細(xì)胞都同一生長階段，并都能同時分裂的生長方式 同步培養(yǎng)法包括誘導(dǎo)法與選擇法

誘導(dǎo)法：是采用物理、化學(xué)一男子使微生物生長到某一階段而停下來，使所有細(xì)菌都達(dá)到這個階段時再使其生長 恒濁器：根據(jù)培養(yǎng)器內(nèi)微生物的生長密度并借光電控制系統(tǒng)來控制培養(yǎng)液流速，以取得菌體密度高，生長速度恒定的微生物細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)

恒化器：與恒濁器相反，是一種設(shè)法使培養(yǎng)液流速保持不變 最高生長速率條件下進(jìn)行生長繁殖的一種連續(xù)培養(yǎng)裝置 裝置

控制對象

培養(yǎng)基

培養(yǎng)基流速

生長速率

產(chǎn)物

應(yīng)用范圍

恒濁器

菌體密度(內(nèi)控制)

無限制生長因子

不恒定

最高速率

大量菌體或與菌體平行的代謝產(chǎn)物

生產(chǎn)為主

恒化器

培養(yǎng)基流速（外控制）

有限制生長因子

恒定

低于最高速率

不同生長速率的菌體、并使微生物始終在低于其

實驗室為主

五、防腐：是在某些化學(xué)物質(zhì)或物理因子作用下防止或抑制微生物生長的一種措施，它能防止食物腐敗或防止其他物質(zhì)霉變 消毒：利用某種殺死或滅活物質(zhì)或物體中所有微生物的一種措施，它可以起到防止感染或傳播的作用

滅菌：利用某種方法殺死物體中包括芽孢在內(nèi)的所有微生物的一種措施 第七章

1、病毒的特點:1)形態(tài)及其微小，一般能通過細(xì)菌濾器必須自電鏡下才能觀察

2）沒有細(xì)胞構(gòu)造，主要成分僅為核酸與蛋白質(zhì)

3）每一種病毒致含有一種核酸

DNA和RNA 4）依靠自身的核酸進(jìn)行復(fù)制，一病毒的核酸和蛋白質(zhì)等原件實現(xiàn)裝配，實現(xiàn)繁殖

5）嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生，缺乏完整的酶和產(chǎn)能系統(tǒng)，只能利用宿主細(xì)胞的現(xiàn)成的代謝系統(tǒng)合成病毒自身的核酸和蛋白質(zhì)

6）在離體條件下，能以無生命力的大分子狀態(tài)存在，并可長期保持器侵染力

7）對一般抗生素不敏感，但對干擾素敏感

8）有些病毒的基因可以整合到宿主的基因中去

2、病毒與活細(xì)胞的區(qū)別：1）結(jié)構(gòu)簡單，沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)

2）幾乎所有的毒粒中只有DNA或RNA一種類型的核酸

3）在細(xì)胞外不能增殖

3、得到一步生長曲線的實驗：二院培養(yǎng)系統(tǒng)：1）低濃度病毒宿主細(xì)胞(給幾分鐘時間侵染)2）高倍稀釋病毒與細(xì)胞的培養(yǎng)物

3）保濕培養(yǎng)

4）不同時間取樣，涂布平板，得到效價

5）以時間為橫坐標(biāo)，病毒濃度為縱坐標(biāo)繪圖

4、烈性噬菌體：感染宿主后增殖裂解宿主 溶原性噬菌體（溫和性細(xì)菌）：感染后大多數(shù)可整合到宿主基因中少數(shù)以染色體外獨立存在

5、病毒分為真病毒和亞病毒，亞病毒又分為類病毒、衛(wèi)星病毒、衛(wèi)星RNA、朊病毒 類病毒：是一種只包含RNA的病毒，只在植物中出現(xiàn)，分質(zhì)量極小，不能編碼蛋白質(zhì) 衛(wèi)星病毒：寄生于與之無關(guān)的輔助病毒的基因產(chǎn)物的病毒 衛(wèi)星RNA：是指必需依賴一些輔助病毒進(jìn)行復(fù)制的小分子單鏈RNA，他們被包藏在輔助病毒的殼體中

朊病毒：是一類能引起哺乳動物亞急性海綿樣腦病的病原因子 第八章

P204頁Griffith轉(zhuǎn)化實驗等3個實驗

基因組：是指位于細(xì)菌或細(xì)胞中的所有基因 大腸桿菌基因組的特點：1）遺傳信息的連續(xù)性

2）功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因組成操縱子結(jié)構(gòu)

3）結(jié)構(gòu)基因的單拷貝及rRNA基因的多拷貝

4）基因組重復(fù)序列少而短

質(zhì)粒：是一種獨立于染色體外，能進(jìn)行自主復(fù)制的細(xì)胞質(zhì)遺傳因子，主要存在于各種微生物中

轉(zhuǎn)座子：是位于染色體或質(zhì)粒上的一種能改變自身位置的DNA序列，廣泛分布于原核和真核細(xì)胞中

質(zhì)粒的主要類型：致育因子、抗性因子、Col質(zhì)粒、毒性質(zhì)粒、代謝質(zhì)粒、隱秘質(zhì)粒

致育因子：又稱F質(zhì)粒，其大小約100kb，這是最早發(fā)現(xiàn)的一種與大腸桿菌的有性生殖現(xiàn)象（結(jié)合作用）有關(guān)的質(zhì)粒

抗性因子：是另一類普遍而重要的質(zhì)粒，主要包括抗藥性和抗重金屬兩大類，簡稱R質(zhì)粒 Col質(zhì)粒：該質(zhì)粒含有編碼大腸菌素的基因，大腸菌素是一種細(xì)菌蛋白，只殺死近緣且不含Col質(zhì)粒的菌株，而宿主不受其產(chǎn)生的細(xì)菌素的影響

毒性質(zhì)粒：致病菌中攜帶的能引起致病性的質(zhì)粒，這些質(zhì)粒具有編碼毒素的基因 代謝質(zhì)粒：攜帶有能降解某些基質(zhì)的酶的基因的質(zhì)粒

隱秘質(zhì)粒：不顯示任何表型效應(yīng)，它們的存在只有通過物理方法檢測出來 原核生物中對的轉(zhuǎn)座因子有3種類型：插入順序（IS）、轉(zhuǎn)座子（Tn）、病毒（Mu）轉(zhuǎn)座的遺傳學(xué)效應(yīng)：插入突變、產(chǎn)生染色體畸變、基因的移動和重排

基因突變：一個基因內(nèi)部遺傳結(jié)構(gòu)或DNA序列的任何改變包括一對或幾對堿基的缺失、插入或置換，而導(dǎo)致的遺傳變化

堿基變化對遺傳信息改變的四種類型：同義突變，錯義突變，無義突變，移碼突變 同義突變：是指某個堿基的變化沒有改變產(chǎn)物氨基酸序列的密碼子變化

錯義突變：是指堿基序列的改變引起了產(chǎn)物氨基酸的改變（可能為致死突變）無義突變：是指某個堿基的改變，使代表某種氨基酸的密碼子變?yōu)榈鞍踪|(zhì)的合成的終止密碼子，蛋白質(zhì)的合成提前終止，產(chǎn)生短截的蛋白質(zhì)

移碼突變：由于DNA序列中發(fā)生1~2個核苷酸的缺失或插入，使翻譯的閱讀框發(fā)生改變，從而導(dǎo)致改變位置以后的氨基酸序列的完全變化（一般為致死突變）

表型變化的突變型：營養(yǎng)缺陷型，抗藥性突變型，條件致死突變型，形態(tài)突變型 營養(yǎng)缺陷型：缺乏合成其生存所必需的營養(yǎng)物的突變型，只有從周圍環(huán)境或培養(yǎng)基中獲得這些營養(yǎng)或前體物才能生長 影印平板P218 抗藥性突變型：是由于基因突變使菌株對某種或某幾種藥物，特別是抗生素產(chǎn)生抗性的一種突變型

條件致死突變型：是指在某一條件下具有致死效應(yīng)，而在另一條件下沒有致死效應(yīng)的突變型 形態(tài)突變型：是指造成形態(tài)改變的突變型（包括菌落形態(tài)、顏色一件噬菌斑形態(tài)）

自發(fā)突變的緣由：1）NDA復(fù)制過程產(chǎn)生的錯誤

2）堿基互變異構(gòu)體的相互轉(zhuǎn)變

3）轉(zhuǎn)座子的隨機(jī)插入基因

自發(fā)突變的特性：1）非對應(yīng)性

2）稀有性

3）規(guī)律性

4）獨立性

5）遺傳和回復(fù)

6）可誘變性

誘發(fā)突變：堿基類似物、插入染料、直接與DNA其化學(xué)反應(yīng)的誘變劑、輻射和熱、生物誘變因子

DNA損傷修復(fù)：光復(fù)活作用、切除修復(fù)、重組修復(fù)、SOS修復(fù) 光復(fù)活：由phr基因編碼的光解酶進(jìn)行

切除修復(fù)：又稱暗修復(fù)，該修復(fù)系統(tǒng)除了堿基錯誤配對和單核苷酸插入不能修復(fù)外，幾乎其他DNA損傷均可修復(fù)，是細(xì)胞內(nèi)主要修復(fù)系統(tǒng)

重組修復(fù)：是一種越過損傷而進(jìn)行的修復(fù)，這種修復(fù)不將損傷堿基除去

SOS修復(fù)：是DNA分子受到較大范圍的重大損傷時誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種應(yīng)急反應(yīng) P226~227 高頻重組菌等

轉(zhuǎn)導(dǎo)：是由病毒介導(dǎo)的細(xì)胞間進(jìn)行遺傳交換的一種方式

供體DNA進(jìn)入受體的命運：1）發(fā)生穩(wěn)定的轉(zhuǎn)導(dǎo)子

2）流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)：即不被降解，又不被整合，也不被復(fù)制

3）外源DNA被降解，轉(zhuǎn)導(dǎo)失敗

遺傳轉(zhuǎn)化：是指同源或異源的游離DNA分子被自然或人工感受態(tài)細(xì)胞攝取，并得到表達(dá)的水平方向的基因轉(zhuǎn)移過程

4個影響供體DNA與受體細(xì)胞間的最初相互作用：1）轉(zhuǎn)化片段的大小

2）形態(tài)：雙鏈DNA 3）濃度：在在臨界值出現(xiàn)之前成正比

4）生理狀態(tài)：感受器——剛停止DNA合成 微生物育種：誘變育種、代謝育種、體內(nèi)基因組育種 代謝育種：改變代謝途徑、擴(kuò)展代謝途徑、構(gòu)建新的代謝途徑 體內(nèi)基因組育種：原生質(zhì)體融合，雜交育種

融合子的判別：1）親本遺傳標(biāo)記的互補(bǔ)的2）親本滅活后性狀的恢復(fù)

3）具有雙親本的熒光標(biāo)記 第九章

順式作用元件：位于基因的旁側(cè)，可以調(diào)控影響基因表達(dá)的核酸序列。其本身并不編碼蛋白質(zhì)

反式作用因子：通常為蛋白質(zhì)或RNA，其特征是可以合成并擴(kuò)散到目標(biāo)場所發(fā)揮作用 正調(diào)控：控制因子通過與啟動子原件結(jié)合來激活基因的表達(dá) 負(fù)調(diào)控：抑制物與操縱基因結(jié)合起來阻止基因表達(dá) P248 操縱子的結(jié)構(gòu)

P249圖

P250 圖

啟動子：是RNA聚合酶和CAP的結(jié)合位點，控制著轉(zhuǎn)錄的起始，一個啟動子可以啟動多個基因的表達(dá)

操縱基因：DNA上的一個結(jié)合位點，阻抑物能與之結(jié)合抑制相鄰啟動子的起始轉(zhuǎn)錄，操縱基因不表達(dá)任何東西 終止子：控制轉(zhuǎn)錄結(jié)束

轉(zhuǎn)錄因子：轉(zhuǎn)錄起始過程中RNA聚合酶所需要的輔助因子

轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控:1）DNA的結(jié)構(gòu)

2）RNA聚合酶的功能

3）蛋白質(zhì)因子及其他小分子配基的相互作用

第五篇：微生物的分離與培養(yǎng)

病原物的分離與培養(yǎng)

病原物的分離與培養(yǎng)在植物病害的研究中具有重要意義，分離、培養(yǎng)病原菌的方法是植物病理學(xué)研究工作中最常應(yīng)用的實驗技術(shù)。一方面，在一個新的病害研究中，通過分離與培養(yǎng)獲得病原物的純培養(yǎng)，完成柯氏法則，以明確該病病原；研究病原物的生物學(xué)特性和病害循環(huán)（侵染、病程等等）。所謂病原物的分離，即把該病原菌從發(fā)病組織上與其他微生物分開；所謂病原物的培養(yǎng)，即將分離的病原菌移到可以讓這種病原菌正常生長的營養(yǎng)基質(zhì)即培養(yǎng)基上，從而獲得其純培養(yǎng)。病原物的分離與培養(yǎng)，需經(jīng)以以幾個步驟: 1.有關(guān)器皿的滅菌和消毒； 2.制作培養(yǎng)基； 3.病原菌的分離 4.病原菌的培養(yǎng)。－、滅菌與消毒

滅菌與消毒是兩個不同的概念。滅菌則是指殺死一切微生物的營養(yǎng)體和孢子。消毒一般是指消滅病原菌和有害微生物的營養(yǎng)體，在植物病理學(xué)實驗中，需要進(jìn)行純培養(yǎng)，不能有任何雜菌污染，因此對所用器材、培養(yǎng)基和工作場所都要進(jìn)行嚴(yán)格的消毒和滅菌。消毒與滅菌的方法很多，一般可分為加熱、過濾、輻射和使用化學(xué)藥品等方法。

(一)熱力滅菌

熱力滅菌分干熱滅菌和濕熱滅菌兩類。

1．干熱滅菌

干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)疑固性與其本身的含水量有關(guān)。在菌體受熱時，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快，反之含水量越小，凝固越慢。因此，與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度高(160～170℃)，時間長1～2 h。但干熱滅菌溫度不能超過180 ℃，否則包器皿的紙或棉塞就會燒焦，甚至引起燃燒。干熱滅菌使用的儀器是烘箱。

干熱滅菌有火焰燒灼滅菌和熱空氣滅菌兩種。火焰燒灼滅菌適用于接種環(huán)、接種針和金屬用具如鑷子等，無菌操作時酌試管口和瓶口也在火焰上作短暫燒灼滅菌。涂布平板用的三角玻棒也可在蘸有乙醇后進(jìn)行灼燒滅菌。通常所說的干熱滅菌是在烘箱內(nèi)利用高溫干燥空氣(160～170℃)進(jìn)行滅菌。此法適用于玻璃器皿如吸管和培養(yǎng)皿等的滅菌。

進(jìn)行干熱滅菌要注意以下問題：物品不要擺得太擠，以免妨礙空氣流通；滅菌物品不要接觸烘箱內(nèi)壁的鐵板，以防包裝紙烤焦起火；在升溫過程中，如果紅燈熄滅，綠燈亮，表示箱內(nèi)停止加溫；電烘箱內(nèi)溫度未降到70℃以前，切勿自行打開箱門以免驟然降溫導(dǎo)致玻璃器皿炸裂。濕熱滅菌

(1)高壓蒸汽滅菌 此法是將物品放在密閉的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，0.1MPa，121℃保持15～30 min進(jìn)行滅菌。時間的長短可根據(jù)滅菌物品種類和數(shù)量的不同而有所變化，以達(dá)到徹底滅菌。這種滅菌適用于培養(yǎng)基、工作服、橡皮物品等，也可用于玻璃器皿的滅菌。

(2)常壓蒸汽滅菌 在不具備高壓蒸汽滅菌的情況下：常壓蒸汽滅菌是一種常用的滅菌法。對于不宜用高壓蒸汽滅菌的培養(yǎng)基如明膠培養(yǎng)基、牛乳培養(yǎng)基、含糖培養(yǎng)基等可采用常壓蒸汽滅菌。這種滅菌方法可用阿諾氏流動蒸汽滅菌器進(jìn)行，也可用普通蒸籠進(jìn)行滅菌。由于常壓，其溫度不超過100℃，僅能使大多數(shù)微生物被殺死，而芽孢細(xì)菌卻不能在短時間內(nèi)殺死，因此可采用間歇滅菌以殺死芽孢細(xì)菌，達(dá)到徹底滅菌的目的。

常壓間歇滅菌是將滅菌培養(yǎng)基放人滅菌器內(nèi)，每天加熱100℃，30 min，連續(xù)3 d，第一天加熱后，其中的營養(yǎng)體被殺死，將培養(yǎng)物取出放室溫下18～24 h，使其中的芽孢發(fā)育成營養(yǎng)體，第二天再加熱100℃，30 min，發(fā)育的營養(yǎng)體又被殺死，但可能仍留有芽孢，故再重復(fù)一次，使徹底滅菌。

(二)過濾除菌

許多材料例如血清、抗生素及糖溶液等用加熱消毒滅菌方法，—均會被熱破壞，因此采用過濾除菌的方法。應(yīng)用最廣泛的過濾器有：

(1)蔡氏過濾器 該過濾器是由石棉制成的圓形濾板和一個特制的金屬（銀或鋁）漏斗組成，分上、下兩節(jié)。過濾時，用螺旋把石棉板緊緊夾在上、下兩節(jié)濾器之間，然后將溶液臵于濾器中抽濾。每次過濾必須用一張新濾板。根據(jù)其孔徑大小，濾板分為3種型號：K型最大，作一般澄清用；EK濾孔較小，用來除去一般細(xì)菌；EK-S濾孔最小，可阻止大病毒通過。使用時可根據(jù)需要選用。

(2)微孔濾膜過濾器 這是一種新型濾器，其濾膜是用醋酸纖維酯和硝酸纖維酯的混合物制成的薄膜。微孔濾膜過濾器是由上下二個分別具有出口和入口連接裝臵的塑料蓋盒組成。出口處可連接針頭，入口處可連接針筒。使用時將濾膜裝入兩塑料蓋盒之間，旋緊蓋盒，當(dāng)溶液從針筒注入濾器時，此濾器將各種微生物阻留在微孔濾膜上面，從而達(dá)到除菌的目的。根據(jù)待除菌溶液量的多少，可選用不同大小的濾器。此法除菌的最大優(yōu)點是可以不破壞溶液中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。但由于濾量有限，所以一般只適用于實驗室中小量溶液的過濾除菌。實驗室中用于除菌的微孔濾膜孔徑一般為0.22μm，但若要將病毒除掉，則需更小孔徑的微孔濾膜。微孔濾膜過濾除菌的主要操作步驟為：

① 組裝、滅菌 將0.22μm孔徑的濾膜裝入清洗干凈的塑料濾器中，旋緊。壓平，包裝滅菌后待用(0.1MPa、121.5℃滅菌：20 min)。連接。將滅菌濾器的入口在無菌條件下，以無菌操作方式連接于裝有待濾溶液注射器上，將針頭與出口處連接并插入帶橡皮塞的無菌試管中。

② 壓濾 將注射器中的待濾溶液加壓緩緩擠壓過濾到無菌試管中。濾畢，將針頭撥出。壓濾時，用力要適當(dāng)，不可太猛太快，以免細(xì)菌被擠壓通過濾膜。

提示: 整個過程應(yīng)在無菌條件下嚴(yán)格無菌操作以防污染，過濾時應(yīng)避免各連接處出現(xiàn)滲透現(xiàn)象。

(三)輻射滅菌 紫外線滅菌是用紫外線燈進(jìn)行的。波長為200～300 nm的紫外線都有殺菌能力，其中以260 nm的殺菌力最強(qiáng)。在波長一定的條件下，紫外線的殺菌效率與強(qiáng)度和時間的乘積成正比。紫外線殺菌機(jī)理主要是因為它誘導(dǎo)了胸腺嘧啶二聚體的形成和DNA的交聯(lián)，從而抑制了DNA的復(fù)制。另一方面，由于輻射能使空氣中的氧電離成[O]，再使O2氧化生成臭氧(O3)，或使水氧化生成過氧化氫(H2O2)。O3和H2O2有殺菌作用。紫外線穿透力不大，所以只適用于無菌室、接種箱的空氣及物體表面的滅菌。

注意事項: 紫外線對眼結(jié)膜及視神經(jīng)有損傷作用，對皮膚有刺激作用，故不能直視紫外線燈光，更不能在紫外線燈光下工作。紫外線燈距照射物以不超過1.2 m為宜。

此外，采用60Co-γ射線滅菌，也已廣泛用于不能進(jìn)行加熱滅菌的紙、塑料薄膜，各種積層材料制作的容器以及醫(yī)用生物敷料皮等的滅菌。γ射線滅菌的最大優(yōu)點是穿透力強(qiáng)，可在厚包裝完好條件下滅菌。

(四)化學(xué)藥品滅菌

化學(xué)藥品消毒滅菌法是應(yīng)用能抑制或殺死微生物的化學(xué)制劑進(jìn)行消毒滅菌的方法。能破壞細(xì)菌代謝機(jī)能并有致死作用的化學(xué)藥劑為殺菌劑，如重金屬離子等；只是阻抑細(xì)菌代謝機(jī)能，使細(xì)菌不能增殖的化學(xué)藥劑為抑菌劑，如磺胺類及大多數(shù)抗生素等?；瘜W(xué)藥品對微生物的作用是抑菌還是殺菌以及作用效果還與化學(xué)藥品濃度的高低、處理微生物的時間長短、微生物的種類以及微生物所處的環(huán)境等有關(guān)。

植物病理學(xué)實驗室中常用的化學(xué)藥品有2％煤酚皂溶液(來蘇爾)、0.25％新潔爾滅、0.1％升汞、3％～5％酌甲醛溶液、75％乙醇溶液等。

消毒與滅菌不僅是從事植物病理學(xué)和整個生命科學(xué)研究必不可少的重要環(huán)節(jié)和實用技術(shù)，而且在醫(yī)療衛(wèi)生、環(huán)境保護(hù)、食品、生物制品等各方面均具有重要的應(yīng)用價值。根據(jù)不同的使用要求和條件選用合適的消毒滅菌的方法。

二、培養(yǎng)基的制作

1、目的要求

了解培養(yǎng)基的配制原理，掌握培養(yǎng)基的制備方法。

2、基本原理

在植物病理學(xué)研究工作中經(jīng)常要使用各種不同的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基是按照生物生長繁殖所需要的各種營養(yǎng)，用人工方法配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。其中含有碳源、氮源、無機(jī)鹽、維生素以及水分等。微生物在培養(yǎng)基上生長繁殖還必須在最適pH范圍內(nèi)才能生長得更好，因此，對不同種類的微生物應(yīng)將培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到一定的pH范圍。－般而言，真菌調(diào)節(jié)到微酸，細(xì)菌調(diào)節(jié)到微堿。

培養(yǎng)基的種類很多，不同的微生物所需要的培養(yǎng)基不同。依物理性狀可分為液體的、固體的和半固體的三種。固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基中加入1.5 %～2 %的瓊脂，半固體培養(yǎng)基是加入0.2 %～0.5 %的瓊脂。瓊脂(agar)起凝固作用，一般微生物均不能分解利用。

根據(jù)營養(yǎng)物質(zhì)來源的不同，培養(yǎng)基可分為天然、半合成和合成培養(yǎng)基三類。天然培養(yǎng)基是以自然界原有的有機(jī)物為材料經(jīng)滅菌后制成，如馬鈴薯、胡蘿卜、水果、大麥粒、高粱粒等。半合成培養(yǎng)基中既有一些天然的有機(jī)物質(zhì)，又有一些成分簡單或明確的化合物。如常用的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(PDA)、肉汁胨培養(yǎng)基(NA)等。合成培養(yǎng)基是由一些成分明確的化合物配制而成的，無任何成分不明確的物質(zhì)，常用于研究微生物的生理生化性狀，如查氏(Czapek)培養(yǎng)基等。

根據(jù)培養(yǎng)基用途不同，可分為生長繁殖培養(yǎng)基、富集培養(yǎng)基、貯存培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基等。在植物病理學(xué)研究中，最常用培養(yǎng)基有馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，主要用于分離培養(yǎng)病原真菌。

在培養(yǎng)基配制完之后，必須經(jīng)過滅菌，以便徹底殺死其中原有的一切微生物。

3、材料、試劑與儀器 材料 馬鈴薯。

試劑 葡萄糖、瓊脂等。

儀器與用品 高壓蒸汽滅菌鍋、pH試紙(或酸度計)、試管、鋁鍋、攪拌棒、三角瓶、燒杯、漏斗、量筒、紗布、棉花、天平等。

4、操作步驟

PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基)馬鈴薯（去皮）200 g、葡萄糖20 g、瓊脂15～20g、蒸餾水1000 ml，自然pH。

在PDA培養(yǎng)基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖，這樣配制的培養(yǎng)基也稱為PSA培養(yǎng)基。(1)稱量 稱量去皮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂15～20 g。提示：瓊脂加入的量取決于瓊脂的質(zhì)量，質(zhì)量好的15 g就夠了，質(zhì)量差的應(yīng)適當(dāng)增加。另外，在夏天氣溫較高時，適當(dāng)增加用量。

(2)將馬鈴薯切成小塊，放入鍋中，加水1000 ml，煮沸30 min。用紗布濾去馬鈴薯殘渣。

(3)將馬鈴薯濾液放回鍋中，加入瓊脂，加熱熔化。

提示：在瓊脂熔化的過程中，需要用玻璃棒不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。

(4)加入葡萄糖 葡萄糖溶解后，加入適量的水以補(bǔ)充加熱過程中損失的水分，定容至1000 ml。

提示：通常在制作培養(yǎng)基的鍋內(nèi)用紅藍(lán)鉛筆標(biāo)記出不同體積的刻度，如1 000 ml、2000 ml等，在定容時直接將水加至已標(biāo)記的刻度即可。

(5)分裝 根據(jù)不同的實驗?zāi)康?，可將配制的培養(yǎng)基分裝于試管內(nèi)或三角瓶內(nèi)。分裝試管，其量為管高的1／5，滅菌后制成斜面。分裝三角瓶的容量以不超過三角瓶容積之一半為宜。

(6)加塞 在管口或瓶口塞上棉塞。棉塞要用未脫脂的經(jīng)彈松的棉花，棉塞可過濾空氣，防止雜菌侵入并可減緩培養(yǎng)基水分的蒸發(fā)，故在植物病理學(xué)研究工作中普遍使用。

正確的棉塞是形狀、劃、、松緊與管口或瓶口完全適合，過緊時妨礙空氣流通，操作不便；過松則達(dá)不到濾菌的目的，且棉塞過小往往容易掉進(jìn)試管內(nèi)。正確的棉塞頭較大，約有1／3在外，2／3在試管內(nèi)。分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾染在管(瓶)口上以免浸濕棉塞，引起污染。

(7)包扎 加塞后，將試管用線繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道線繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、配制日期、組別、制作人等。

(8)滅菌 將上述培養(yǎng)基以0.1MPa，121℃，高壓蒸氣滅菌20 min。

(9)擱臵斜面 將滅菌的試管培養(yǎng)基豎臵冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多)，將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上，擱臵的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。

培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，必須放在37℃溫箱培養(yǎng)24h，無菌生長者方可使用。

PDA培養(yǎng)基一般不需要調(diào)pH。對于要調(diào)節(jié)pH的培養(yǎng)基，一般用pH試紙測定其pH。如果培養(yǎng)基偏酸或偏堿時，可用l mol／L NaOH或l mol／L HCl溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)時應(yīng)逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部過酸或過堿破壞培養(yǎng)基成分。

三、病原菌的分離培養(yǎng)和純化

1、目的要求

(1)了解分離與純化微生物的基本原理及方法。

(2)掌握倒平板的方法和組織分離、稀釋分離、平板劃線分離的基本操作技術(shù)。

(3)掌握在平板、斜面及液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)病原菌及觀察其培養(yǎng)性狀的方法。

2、基本方法

植物病原真菌的分離方法主要有組織分離法和稀釋分離法兩種。最常用的方法是組織分離法，而稀釋分離法主要用于病組織上產(chǎn)生大量孢子的病原真菌的分離。病原細(xì)菌的分離方法以劃線分離法為最常用，在有些情況下也采用稀釋分離法。

為了獲得分離菌的純培養(yǎng)，必須要進(jìn)行分離菌的純化，純化的方法類似于分離工作中采用的稀釋分離法或劃線分離法。

3、材料、儀器與用具 3.1 材料

(1)稻瘟?。ㄈ~、病節(jié)、病穗頸）(Pyricularia oryzae)。(2)柑桔炭疽?。–olletotrichum gloeosporioides）。(3)黃瓜灰霉病（Botrytis cineria）。(4)番茄灰霉?。ü?Botrytis cinerea)。

(5)黃瓜菌核?。ü?Sclerotinia sclerotiorum)。(6)黃瓜細(xì)菌性角斑?。ㄈ~）(Pseudomonas syringae pv．1achryrnans)。

(7)水稻白葉枯?。ㄈ~）(Xanthomonas campestris pv．oryzae)。(8)白菜軟腐?。ㄈ~）(Erwinia carotovora subspp．carotovora)。

3.2．培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基；肉膏蛋白脈培養(yǎng)基；加寄主組織煎汁的培養(yǎng)基等。

3.3．儀器與用品 超凈工作臺、培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿、吸管、吸水紙、三角玻璃棒、剪刀、解剖刀、鑷子、接種鏟(針)、接種環(huán)(鉺)、70％酒精、0.1％升汞、酒精燈、火柴、記號筆、橡皮筋套、可調(diào)式電爐、不銹鋼鍋等。

4、實驗操作

(一)病原真菌的分離

1．組織分離法 其步驟為：

(1)取滅菌培養(yǎng)皿一個，臵于濕紗布上，在皿蓋上用玻璃鉛筆注明分離日期、材料和分離人的姓名。提示：無菌操作應(yīng)注意下面幾點：工作前將所需的物品都放在超凈工作臺內(nèi)；操作前用肥皂洗手，操作時還需用70 ％酒精擦拭雙手；無菌操作時，呼吸要輕，不要說話。

（2）用無菌操作法向培養(yǎng)皿中加入25％乳酸1～2滴(可減少細(xì)菌污染)，然后將融化而冷至60℃左右的PDA培養(yǎng)基倒人培養(yǎng)皿中，每皿倒10～15 ml，輕輕搖動使之成平面。凝固后即成平板培養(yǎng)基。

提示：加入25％乳酸1～2滴，可減少平板上出現(xiàn)污染細(xì)菌菌落。除乳酸外，在培養(yǎng)基中加入適當(dāng)?shù)目咕匾种萍?xì)菌的生長，也是常用的方法。加青霉素(20μg／m1)可以抑制G+ 細(xì)菌生長；加多黏霉素B(5.0μg／ml。)可以抑制G-細(xì)菌生長；加鏈霉素(40μg／ml)或氯霉素(50μg／m1)可以抑制大部分細(xì)菌的生長。除了氯霉素可在滅菌前加入外，其他抗菌素都應(yīng)在滅菌后并冷卻到45℃左右(以手背觸三角瓶感到燙，但尚可以忍耐為宜)時加入。倒平板過程中只要遵循“穩(wěn)、輕、快”要領(lǐng)，不必在火焰上方，一般很少污染。(3)取真菌葉斑病的新鮮病葉(或其他分離材料)，選擇典型的單個病斑，用剪刀或解剖刀從病斑邊緣(病健交界處，)切取小塊(每邊長3～4 mm)病組織數(shù)塊。

提示：選擇新患病的組織作為分離的材料，可以減少腐生菌混入的機(jī)會。腐生菌一般在發(fā)病很久而已經(jīng)枯死或腐敗的部分滋生，因此，一般斑點病害應(yīng)在臨近健組織的部分分離。

（4）將病組織放入70％酒精中浸3～5s后，按無菌操作法將病組織移入0.1％升汞液中分別表面消毒0．5、1、2、3、5 min(也可使用其他表面消毒劑)，如植物組織柔嫩，則表面消毒時間宜短；反之則可長些。然后放入滅菌水中連續(xù)漂洗三次，除去殘留的消毒劑。

提示：先用70％的酒精浸2～3 s是為了消除寄主表面的氣泡，減少表面張力，70％的酒精亦用于表面消毒，處理的時間較短(一般數(shù)秒至l min)升汞溶液消毒的時間因材料而異，可自30s至30min不等，一般情況下，需時間3～5 min。

(5)用無菌操作法將病組織移至平板培養(yǎng)基上，每皿內(nèi)放4～6塊。

提示：在將病組織小塊移放到平板表面之前，應(yīng)將其在無菌吸水紙上吸去多余的水，以大大減少病組織附近出現(xiàn)細(xì)菌污染。

(6)將培養(yǎng)皿倒臵放入25℃左右恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。一般3～4 d后觀察待分離菌生長結(jié)果。

(7)若病組織小塊上均長出較為一致的菌落，則多半為要分離的病原菌。在無菌條件下，用接種針(鏟)自菌落邊緣挑取小塊移入斜面培養(yǎng)基上，在25 ℃左右恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，數(shù)日后，觀察菌落生長情況，如無雜菌生長即得該分離病菌純菌種，便可臵于冰箱中保存。

提示：除根據(jù)菌落的一致性初步確定長出的菌落是否目標(biāo)菌外，還要在顯微鏡下檢查，進(jìn)一步確定。如果是對未知病原菌的組織分離，則要將長出的菌落分別轉(zhuǎn)出，通過進(jìn)一步的接種實驗明確哪一種為其病原菌。

在組織分離工作中，如果植物材料體積較大且較軟(如患灰霉病的番茄果實)，在分離過程中可直接挖取內(nèi)部患病組織移入平板培養(yǎng)基上，完成分離工作。

2.稀釋分離法

(1)取滅菌培養(yǎng)皿三個，平放在濕紗布上，編號，并注明日期、分離材料及分離人姓名。

(2)用滅菌吸管吸取滅菌水，在每一皿中分別注入0.5～1.0 ml。(3)用移植環(huán)蘸一滴孢子懸浮液，與第一個培養(yǎng)皿中的滅菌水混合，再從第一個培養(yǎng)皿移三環(huán)到第二個培養(yǎng)皿中，混合后再移三環(huán)到第三個培養(yǎng)皿中。

(4)將熔化并冷卻到45～50℃的培養(yǎng)基，分別倒在三個培養(yǎng)皿中(為防止細(xì)菌污染，也可以向每個培養(yǎng)皿中事先加入1～2滴25％乳酸)，搖勻，凝固，要使培養(yǎng)基與稀釋的菌液充分混勻。

提示： 倒平板時的培養(yǎng)基溫度一定要掌握好，過熱易將病原菌燙死而使分離失敗，過冷則倒入培養(yǎng)皿中后難以形成平板，不利于分離。

(5)將培養(yǎng)皿翻轉(zhuǎn)后臵恒溫箱(25℃)中培養(yǎng)，數(shù)日后觀察菌落生長情況。

(6)挑菌 將培養(yǎng)后長出較為整齊一致的單個菌落分別挑取，接種到斜面培養(yǎng)基上，臵25℃左右培養(yǎng)。待菌長出后，檢查菌是否單純，若有其他菌混雜，就要再一次進(jìn)行分離純化，直到獲得純培養(yǎng)。

(二)病原細(xì)菌的分離

病原細(xì)菌的分離方法以稀釋分離法和劃線分離法為最常用。在進(jìn)行分離之前，首先應(yīng)對病組織材料進(jìn)行細(xì)菌學(xué)初步診斷，即經(jīng)過鏡檢確認(rèn)有噴菌現(xiàn)象以后，才對該病組織作分離工作。稀釋分離法是最經(jīng)典的標(biāo)準(zhǔn)分離法，方法同上述真菌分離。

除去上述稀釋分離法以外，較為方便的是劃線分離法：(1)預(yù)先把熔化好的肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，凝成平板后，翻轉(zhuǎn)放在30℃恒溫箱中2～4 h，使表面無水滴凝結(jié)。也可凝成平板后直接使用。(2)將病組織先用0.1％升汞表面消毒0.5～2 min，再用無菌水換洗3次后，放在滅菌培養(yǎng)皿中的滅菌水中，用滅菌玻棒研碎，并讓組織碎塊在水中浸泡20～60 min，讓細(xì)菌釋放到滅菌水中。

(3)用滅菌的接種鉺，(接種環(huán))；蘸取浸泡液在干燥的培養(yǎng)基平板表面劃線，盡量不要把平板表面劃破。劃過第一批線后的接種環(huán)應(yīng)放在火焰上燒灼，冷卻后直接在第一批劃線的末端向另一方向劃線。滅菌后再劃第三次線。

提示：劃過第一批線后接種鉺放在火焰上燒過這一步驟非常重要，這樣做可以使第一批線和第二批線上的細(xì)菌數(shù)量相差很大。

(4)用玻璃鉛筆在培養(yǎng)皿上寫上分離材料、日期和分離者姓名后，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，放在26～28℃恒溫箱中培養(yǎng)。1～3 d后觀察有無細(xì)菌生長，在哪些地方有單菌落生長出來?其中的優(yōu)勢單菌落應(yīng)為待分離菌形成的。

(5)仔細(xì)挑取病原菌的單菌落，并移植到斜面培養(yǎng)基上。同時，再把單菌落用滅菌水稀釋成懸浮液作第二次劃線分離，經(jīng)培養(yǎng)后出現(xiàn)的菌落在形態(tài)特征都趨于一致，并與典型描述的特征相一致時，即表明已獲得純培養(yǎng)。最好要經(jīng)過連續(xù)三次單菌落的分離，才能確保純化。

(三)真菌、細(xì)菌培養(yǎng)性狀

1．真菌培養(yǎng)性狀觀察 取已分離，純化的某種真菌菌種；按前述稀釋分離法中(1)～(5)步驟進(jìn)行，待某培養(yǎng)皿中形成單個菌落后觀察。記載以下內(nèi)容：菌落顏色、菌叢密集及繁茂程度、是否有色素分泌出來而滲透到培養(yǎng)基中、菌落生長速度快慢等。同時要記載培養(yǎng)基種類(成分及pH)和培養(yǎng)溫度、光照條件。

2．細(xì)菌培養(yǎng)性狀觀察

(1)仿照上述真菌菌落形成步驟，觀察記載以下內(nèi)容：菌落顏色、菌落邊緣形狀、菌落表面是光亮還是粗糙或有皺折、、菌落隆起情況、是否有色素分泌到培養(yǎng)基中，菌落生長速度快慢，是否有特殊氣味形成等。同時要記載培養(yǎng)基種類(成分及pH)和培養(yǎng)溫度、光照條件。

(2)用接種鉺(環(huán))蘸細(xì)菌菌種后，通過無菌操作在牛肉膏蛋白胨等斜面培養(yǎng)基表面從下向上劃一直線，過2～3 d后長出的細(xì)菌群體稱為菌苔，可仿照觀察記載細(xì)菌菌落的記載內(nèi)容，記載菌苔顏色、邊緣形狀、表面是光亮還是粗糙有皺折、隆起情況、是否有色素分泌到培養(yǎng)基中，是否有特殊氣味生成，生長速度快慢等。也要記載培養(yǎng)基種類(成分及pH)和培養(yǎng)溫度、光照條件。

(3)用接種鉺(環(huán))蘸取細(xì)菌菌種后，通過無菌操作，將其接種在某種液體培養(yǎng)基中，數(shù)日后觀察記載培養(yǎng)基中是否變混濁、是否有色素、氣體、沉淀生成，培養(yǎng)液表面是否可生成菌膜等。也要記載培養(yǎng)基種類(成分及pH)和培養(yǎng)溫度、光照條件。