第一篇：淺析影響直腸癌細(xì)胞增值的因素

淺析影響直腸癌細(xì)胞增值的因素

一、細(xì)胞培養(yǎng)

人結(jié)腸癌細(xì)胞系CaCo2、HT29、HCT116、SW480、SW620、SW1116、LoVo均購自ATCC，并由上海消化外科研究所傳代保存。LoVo采用含10％胎牛血清的F-12K培養(yǎng)傳代；CaCo2、HT29、HCT116、SW480、SW620、SW1116均使用含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，置于37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中，以1∶2至1∶4的比例傳代培養(yǎng)。

二、方法

1.樣本收集及免疫組化染色：結(jié)腸直腸腫瘤標(biāo)本取自上海市微創(chuàng)外科臨床醫(yī)學(xué)中心手術(shù)室。手術(shù)標(biāo)本切除后生理鹽水清洗，打開腸腔，剔除瘤體表面壞死及炎性肉芽組織；取腫瘤中心部位及距腫瘤5cm以上的正常腸黏膜全層組織，切成1cm塊狀后置入樣本管。組織標(biāo)本經(jīng)4%甲醛溶液充分固定后，制作蠟塊，切片、貼片。隨后采用鏈霉素親和素-過氧化酶復(fù)合物（SP）法進(jìn)行免疫組化染色，DAB顯色。TMPRSS4多克隆抗體購自美國Proteintech公司，1∶50稀釋。

2.半定量RT-PCR：采用Trizol試劑（Invitrogen，美國）提取細(xì)胞總RNA。電泳鑒定RNA完整性，分光光度計(jì)260nm處測(cè)定RNA濃度，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Takara，日本）在ABIPrismSDS7000中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成。上海吉瑪生物有限公司合成如下引物：TMPRSS4上游引物5′-TCCAAGGACCGATCCACACT-3′，下游引物5′-AAGTTGTCGAAACAGGCAGAG-3′；GAPDH上游引物5′-GACATCAAGAAGGTGGTGAA-3′，下游引物5′-TGTCATACCAGGAAATGAGC-3′。cDNA在PCR儀(AppliedBiosystems，美國)中進(jìn)行反應(yīng)，50℃2min、95℃10min、95℃15s、60℃30s、72℃30s，共35個(gè)循環(huán)；然后，72℃10min，擴(kuò)增產(chǎn)物于1％瓊脂糖凝膠中，130V、30min條件下電泳并在紫外燈下攝片，成像保存。

3.Western印跡法：細(xì)胞在10cm培養(yǎng)皿（Corning，美國）中生長(zhǎng)融合約90%時(shí)，PBS清洗2次后加入300μLRIPA，置冰上30min裂解充分后煮沸10min，隨后13000r/min離心5min。取上清液，BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。每孔上樣量100μg，加入5×上樣緩沖液、去離子水至總體積一致后變性電泳（積層膠80V，分離膠120V），半干轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜（15V）70min后脫脂牛奶室溫封閉2h，4℃下一抗（兔抗人TMPRSS4多抗，112831-AP，Proteintech，美國，1∶600稀釋）孵育過夜。TBST洗膜3遍后加入一定比例稀釋的相應(yīng)二抗室溫孵育1h，TBST洗膜2次，PBS洗膜1次后熒光發(fā)光顯色。

4.siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染：細(xì)胞生長(zhǎng)至70%融合時(shí)胰酶消化，計(jì)數(shù)后按每孔3×105細(xì)胞鋪6孔板，過夜。24h后按照Lipofectamine2000（Invitrogen，美國）說明書操作進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。由上海吉瑪生物有限公司設(shè)計(jì)并合成TMRPSS4-siRNA序列：5′-AAGUUGUCGAAACAGGCAGAGAACC-3′（si組）。僅轉(zhuǎn)染Lipo2000的細(xì)胞為空白對(duì)照組，轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照序列的細(xì)胞為陰性對(duì)照組（NC組）。轉(zhuǎn)染48h后用Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA，72h提取總蛋白質(zhì)。

5.CCK-8測(cè)細(xì)胞增殖：取轉(zhuǎn)染后SW480細(xì)胞計(jì)數(shù)后鋪于96孔板，每孔100個(gè)；設(shè)干擾組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組，每組6個(gè)復(fù)孔。在第0、24、48、72、96和120h，分別于各孔加入CCK-8試劑（cellcountingkit-8，Dojindo,日本）10μL，37℃孵育2.5h，酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在450nm的吸光度值。以時(shí)間為橫坐標(biāo)、吸光度值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。6.AnnexinⅤ/PI流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡：轉(zhuǎn)染48h后收細(xì)胞，取100μL細(xì)胞懸液（1×106個(gè)/mL）至流式管，用PBS洗滌1次，離心后加入300μL結(jié)合緩沖液，混勻，再加入5μL的AnnexinⅤ-FITC和5μL的PI，孵育15min后用流式細(xì)胞儀（BD，美國）上機(jī)檢測(cè)。

7.劃痕試驗(yàn)：6孔板轉(zhuǎn)染，待細(xì)胞鋪滿后，用無菌槍頭每孔筆直劃線，PBS清洗3次，加入無血清培養(yǎng)液置培養(yǎng)箱孵育。24h后在顯微鏡下每孔隨機(jī)選取視野觀察攝片。

8.transwell遷移試驗(yàn)：取轉(zhuǎn)染24h后細(xì)胞，無血清RPMI1640培養(yǎng)液重懸后計(jì)數(shù)，調(diào)至終密度為5×105個(gè)/mL。24孔板每孔內(nèi)加入900μL含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，隨后置入transwell小室（Corning，美國），小室內(nèi)加入200μL細(xì)胞懸液（105個(gè)細(xì)胞）。培養(yǎng)箱孵育24h后取出，棉簽拭去內(nèi)室面細(xì)胞，甲醇固定小室外穿出細(xì)胞10min，1%結(jié)晶紫染色10min，PBS清洗3遍后，顯微鏡下觀察攝片。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS11．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.免疫組化檢測(cè)TMPRSS4蛋白在結(jié)腸直腸癌組織和正常腸上皮中表達(dá)標(biāo)本免疫組化染色顯示，TMPRSS4蛋白定位于細(xì)胞膜上，本人系天天論文網(wǎng)就職11年的資深論文編輯；工作中與各大醫(yī)學(xué)期刊雜志社進(jìn)行學(xué)術(shù)交流過程中建立了穩(wěn)定的編輯朋友圈，系多家醫(yī)學(xué)雜志社的特約編輯，常年為醫(yī)學(xué)期刊雜志供稿，負(fù)責(zé)天天論文網(wǎng)醫(yī)學(xué)論文·分檢·編?！ね扑汀ぶ笇?dǎo)等工作！工作企鵝1:1550116010工作企鵝2：766085044在腫瘤組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中均染色陽性，且轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中TMPRSS4蛋白染色更強(qiáng)。表明TMPRSS4表達(dá)可能與腫瘤細(xì)胞遷移能力有一定相關(guān)性。

2.半定量RT-PCR和Western印跡檢測(cè)TMPRSS4在結(jié)腸癌細(xì)胞株中的表達(dá)通過半定量RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，TMPRSS4基因在7株結(jié)腸癌細(xì)胞中有不同程度的表達(dá)，其中在HT29、SW480、SW620、SW1116中的表達(dá)相對(duì)較高。Western印跡檢測(cè)亦有類似結(jié)果，有細(xì)胞均不同程度表達(dá)TMPRSS4蛋白，而HCT116、SW480和SW1116蛋白表達(dá)量相對(duì)較高。因此，本研究決定選用SW480細(xì)胞進(jìn)行下一步試驗(yàn)。

三、siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后SW480細(xì)胞中TMPRSS4蛋白表達(dá)下調(diào)在轉(zhuǎn)染siRNA48h后，Western印跡法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組和NC組相比，siRNA干擾組（si組）的TMPRSS4蛋白表達(dá)明顯下降。

3.TMPRSS4下調(diào)可顯著抑制SW480細(xì)胞的增殖能力siRNA處理SW480細(xì)胞株后，采用CCK-8法測(cè)定細(xì)胞增殖能力。在第1、2、3、4、5天不同時(shí)間點(diǎn)分別測(cè)定吸光度值，吸光度值可間接反映細(xì)胞增殖能力的強(qiáng)弱。與空白對(duì)照組和NC組相比，si組細(xì)胞增殖能力在48~96h時(shí)受到明顯抑制（P<0.05)。

4.下調(diào)TMPRSS4誘導(dǎo)SW480細(xì)胞凋亡SW480細(xì)胞株轉(zhuǎn)染TMPRSS4siRNA后孵育48h，收集細(xì)胞，用AnnexinⅤ/PI雙染色法檢測(cè)細(xì)胞周期，si組細(xì)胞凋亡比值為14.0%，而空白對(duì)照組和NC組分別為10.4%和10.1%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。提示下調(diào)TMPRSS4可能有誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的作用。

5.siRNA干擾TMPRSS4表達(dá)顯著影響SW480細(xì)胞的遷移能力采用siRNA處理SW480細(xì)胞后，進(jìn)行細(xì)胞劃痕及transwell遷移試驗(yàn)。結(jié)果顯示，si組的SW480細(xì)胞在劃痕試驗(yàn)中的運(yùn)動(dòng)能力比對(duì)照組顯著降低(P<0.05)；si組在transwell試驗(yàn)中的穿膜細(xì)胞數(shù)亦比對(duì)照組顯著降低(P<0.05)。

四、討論

Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶是一類新近發(fā)現(xiàn)的特殊蛋白酶，具有明顯的組織表達(dá)特異性，且與耳聾、貧血、高血壓和腫瘤等的發(fā)生相關(guān)。本研究探討該家族成員TMRPSS4在結(jié)腸直腸癌組織中的表達(dá)及其對(duì)增殖、凋亡、遷移等方面的影響。采用siRNA干擾TMPRSS4表達(dá)后，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的增殖能力減弱，同時(shí)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)遷移能力也降低，這與Jung等先前的研究結(jié)果相一致。針對(duì)該蛋白質(zhì)的其他研究表明，TMPRSS4可能通過作用于細(xì)胞間黏附分子或激活其他蛋白酶在組織發(fā)育和細(xì)胞分化中發(fā)揮重要作用；并通過發(fā)揮其蛋白酶的水解作用裂解病毒表面的紅細(xì)胞凝集素，促進(jìn)病毒在肺部的擴(kuò)散而致病。因此，推測(cè)該基因可能通過靶向作用于細(xì)胞外基質(zhì)及細(xì)胞-細(xì)胞間連接分子而在調(diào)控SW480細(xì)胞的增殖及遷移中發(fā)揮作用，具體機(jī)制尚有待后續(xù)研究來揭示。同時(shí)，流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)顯示，在siRNA干擾后，SW480細(xì)胞的凋亡比例明顯增加，這與干擾后細(xì)胞的增殖能力降低相一致，表明敲除TMPRSS4基因可能通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而抑制增殖。最近有研究表明，乳腺癌中TMPRSS4表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期差、腫瘤體積大以及總生存率和無病生存率低相關(guān)。本研究初步顯示，TMPRSS4在結(jié)腸直腸癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中有不同程度表達(dá)，且轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)染色強(qiáng)度略高。因此，有必要進(jìn)一步探討TMPRSS4與結(jié)腸直腸癌病理分期、分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病人預(yù)后間的相關(guān)性，為其作為預(yù)后預(yù)測(cè)因素提供依據(jù)。我們將繼續(xù)探討TMPRSS4對(duì)于結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲方面的具體作用機(jī)制，揭示這一基因?qū)τ诮Y(jié)腸直腸癌發(fā)生、發(fā)展的作用。

第二篇：教學(xué)效果影響因素

管理研究方法論

影響課堂教學(xué)效果的關(guān)鍵因素

討論報(bào)告書

學(xué) 院： 題 目： 研究對(duì)象： 組 別： 資料收集： 資料整理： 指導(dǎo)教師：

二Ｏ一二 年 十 月

影響課堂教學(xué)效果的關(guān)鍵因素 討論報(bào)告

一．內(nèi)容摘要

教學(xué)效果是學(xué)校的生命線，對(duì)學(xué)生的素質(zhì)培養(yǎng)和發(fā)展有重要影響。影響教學(xué)效果的因素有許多，例如：學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣、教師授課水平、教學(xué)設(shè)備、班級(jí)規(guī)模等。當(dāng)然教學(xué)效果的好差很大程度是同教與學(xué)環(huán)節(jié)密切相關(guān)，教與學(xué)的過程中最活躍的主體是學(xué)生，充分調(diào)動(dòng)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，可以有效的提高教學(xué)效果。

二．提出假設(shè)

假設(shè)教師授課水平是影響教學(xué)效果的關(guān)鍵因素，學(xué)生學(xué)習(xí)興趣、教學(xué)設(shè)備、班級(jí)規(guī)模、課程內(nèi)容等是影響教學(xué)效果的重要因素。

三．變量定義

1.自變量:教師授課水平

教師的講課水平是教師在講課時(shí)運(yùn)用自己的教學(xué)方法、課件、語言、教學(xué)風(fēng)格等傳授知識(shí)并被學(xué)生認(rèn)可接受的能力。也跟老師的責(zé)任心有關(guān)，老師能否調(diào)動(dòng)學(xué)生的興趣，增加課堂互動(dòng)也是影響教學(xué)效果的重要因素。

2.中介變量：學(xué)生學(xué)習(xí)興趣

指一個(gè)人對(duì)學(xué)習(xí)的一種積極的認(rèn)識(shí)傾向與情緒狀態(tài)。學(xué)習(xí)興趣大體上可以分為直接學(xué)習(xí)興趣與間接學(xué)習(xí)興趣兩種。前者是由所學(xué)材料或?qū)W習(xí)活動(dòng)──學(xué)習(xí)過程本身直接引起的。后者是由學(xué)習(xí)活動(dòng)的結(jié)果引起的。間接學(xué)習(xí)興趣具有明顯的自覺性。

3.因變量：教學(xué)效果

駕馭程度、學(xué)生的理解程度及運(yùn)用能力。教學(xué)效果綜合反映了教師對(duì)課堂信息的掌握程度、教師課堂的 4.控制變量：教學(xué)設(shè)備、班級(jí)規(guī)模、座位安排、上課時(shí)間等

教學(xué)設(shè)備是教師在授課過程中所采用的硬件和軟件設(shè)施，班級(jí)規(guī)模指的是上課的人數(shù)；座位安排前后左右安排，性別安插等情況；上課時(shí)間是上課的具體時(shí)間段及持續(xù)時(shí)間。它們?cè)谝欢ǔ潭壬嫌绊懼虒W(xué)效果。

5.調(diào)節(jié)變量:課程內(nèi)容

課程內(nèi)容包括課程名稱及課程所要學(xué)習(xí)的內(nèi)容，那些容易激發(fā)學(xué)生思維并且內(nèi)容豐富的課程更能調(diào)動(dòng)學(xué)生的學(xué)習(xí)熱情。

四．變量間的關(guān)系

在教學(xué)設(shè)備、班級(jí)規(guī)模、座位安排、上課時(shí)間等條件確定的情況下，教師授課水平直接影響學(xué)生學(xué)習(xí)興趣，授課水平高，課堂氣氛會(huì)更活躍，學(xué)生學(xué)習(xí)興趣隨之提高，課程內(nèi)容對(duì)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣也有影響，一般豐富的課程內(nèi)容更能調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性。從而提高教學(xué)效果。

五． 變量模型化

教師授課水平（IV）→ 學(xué)生學(xué)習(xí)興趣（MV）→ 教學(xué)效果（ＤＶ）

↑ ↑ 課程內(nèi)容（EMV）教學(xué)設(shè)備（ＣＶ）班級(jí)規(guī)模、座位安排 上課時(shí)間等

六．總結(jié)

授課水平較高的老師；先進(jìn)的教學(xué)設(shè)備；合理的班級(jí)規(guī)模、座位安排、上課時(shí)間等；豐富的課程內(nèi)容；較高的學(xué)習(xí)興趣，能產(chǎn)生更好好的教學(xué)效果。

第三篇：企業(yè)文化及其影響因素

企業(yè)文化及其影響因素

企業(yè)文化就是企業(yè)明確的價(jià)值觀。是在價(jià)值觀基礎(chǔ)上形成的涵蓋企業(yè)各個(gè)方面的管理準(zhǔn)則和思想體系。

企業(yè)文化主要三個(gè)層次的主要內(nèi)容：企業(yè)的精神文化、企業(yè)的制度文化、企業(yè)的物質(zhì)文化。

一般來說，精神文化主要包括企業(yè)精神、企業(yè)宗旨、經(jīng)營理念、價(jià)值觀念、管理哲學(xué)、道德準(zhǔn)則、企業(yè)口號(hào)等；制度文化主要包括經(jīng)營規(guī)模、運(yùn)作方式、治理形式、人際關(guān)系、管理制度、激勵(lì)機(jī)制、利益分配等；物質(zhì)文化主要包括生產(chǎn)或服務(wù)、工作環(huán)境或廠容廠貌、技術(shù)裝備、后援服務(wù)、人力資源、福利待遇等。企業(yè)文化作為一個(gè)觀念系統(tǒng)，要傳達(dá)到企業(yè)員工、社會(huì)和公眾存在一定的困難。因此有必要將企業(yè)文化特質(zhì)形成一個(gè)統(tǒng)一概念，必須通過個(gè)性化、鮮明的視覺形象（圖形、圖案）表達(dá)出來，在傳導(dǎo)給社會(huì)才會(huì)更有效率、效果。這就是人們常說的企業(yè)形象系統(tǒng)CIS。CIS主要由三個(gè)內(nèi)容構(gòu)成：企業(yè)理念系統(tǒng)MI、企業(yè)行為系統(tǒng)BI、企業(yè)視覺系統(tǒng)VI。

很多人認(rèn)為，有了企業(yè)才會(huì)形成企業(yè)文化，企業(yè)文化是企業(yè)在成功之后總結(jié)才形成的自己企業(yè)文化的模式。其實(shí)，企業(yè)文化的萌芽不自覺地植根于創(chuàng)辦企業(yè)及企業(yè)運(yùn)作過程中的動(dòng)機(jī)和觀念中之中。

從企業(yè)文化的發(fā)展和經(jīng)驗(yàn)總結(jié)分析，影響企業(yè)文化的因素眾多，但至少有一下幾個(gè)重要因素必須給予特別關(guān)注。

一是企業(yè)特征。企業(yè)主要屬于哪個(gè)行業(yè)，哪個(gè)門類。那么該企業(yè)特征應(yīng)反映在企業(yè)文化中。例如對(duì)制造業(yè)，強(qiáng)調(diào)“個(gè)人向上的資質(zhì)”，即以人為本，自我實(shí)現(xiàn)，輸出并實(shí)現(xiàn)技術(shù)、可信度、安全性、規(guī)模；對(duì)一般服務(wù)業(yè)，強(qiáng)調(diào)“對(duì)顧客的服務(wù)”；對(duì)傳媒業(yè)、金融業(yè)強(qiáng)調(diào)“對(duì)社會(huì)的服務(wù)”。

二是企業(yè)家特質(zhì)。實(shí)踐已經(jīng)證明，企業(yè)家對(duì)企業(yè)決定性作用毋容置疑。企業(yè)家特質(zhì)、個(gè)人魅力、工作作風(fēng)和經(jīng)營哲學(xué)均對(duì)企業(yè)文化的形成具有重大影響。

三是國內(nèi)國際企業(yè)文化新潮。國內(nèi)、國際知名企業(yè)均具有自己的企業(yè)文化模式，并形成了一些流行概念。不難發(fā)現(xiàn)使用較多的概念有和諧、誠實(shí)、努力、敬業(yè)、信用、服務(wù)、責(zé)任、奉獻(xiàn)、創(chuàng)造力、創(chuàng)新力、安全、滿意等，不一而足。

四是追求獨(dú)特模式。企業(yè)文化最忌流于形式，趨于雷同。應(yīng)在大同小異的大背景下，刻意追求自身特有的、特點(diǎn)鮮明的企業(yè)文化。

五是長(zhǎng)期形成。企業(yè)文化的形成絕非一朝一夕之功，需要長(zhǎng)時(shí)間潛移默化和滲透到心靈深處，通過不斷培育才能成為企業(yè)員工的共同行為規(guī)范和共同意志。

企業(yè)文化及企業(yè)文化建設(shè)是一項(xiàng)艱巨的系統(tǒng)工程。企業(yè)文化在企業(yè)的不斷倡導(dǎo)下，以企業(yè)全體員工集體意識(shí)為基礎(chǔ)，達(dá)到全企業(yè)的共識(shí)和認(rèn)同，最終融合為全體企業(yè)人的默契、習(xí)慣和氛圍才是最高境界。有時(shí)為了企業(yè)文化的深入人心，還必須進(jìn)行“洗

腦”，強(qiáng)化企業(yè)文化的灌輸教育及企業(yè)內(nèi)亞態(tài)文化的整合。加強(qiáng)與企業(yè)政治思想、群工工作的緊密結(jié)合。甚至于注重調(diào)動(dòng)和發(fā)揮有益的非正式組織的積極性。

第四篇：影響角色游戲因素

影響幼兒角色游戲的因素

一、角色游戲中要有主題

角色游戲與其它游戲不同之處，首先就在于有主題（反映在名稱上）。所謂主題，就是兒童在游戲中反映的周圍人們的生活與活動(dòng)中的一定動(dòng)作、事件和相互關(guān)系，可以概括為游戲名稱。因此，主題取決于時(shí)代、地域、兒童的生活環(huán)境及生活習(xí)慣等。觀察表明，某些角色游戲的主題無論在小、中、大班都會(huì)出現(xiàn)，例如：“娃娃家”、“醫(yī)院”、“商店”等。主題的發(fā)展是從生活主題到生產(chǎn)主題，最后到社會(huì)政治事件的主題。這種順序同兒童眼界的擴(kuò)大、同兒童生活經(jīng)驗(yàn)的增長(zhǎng)有關(guān)。

二、角色游戲中的角色

兒童在角色游戲中扮演假裝的角色，而不是他自己。撇開自己，扮演角色，這要求達(dá)到一定的心理水平，即了解和認(rèn)識(shí)成人的行動(dòng)，能脫離成人行動(dòng)進(jìn)行概括，把頭腦中已有的人物表象重新組合，能用游戲材料、動(dòng)作、語言扮演新形象。在游戲中，角色是游戲的中心，兒童常扮演他們認(rèn)為重要的人物。游戲的實(shí)質(zhì)在于扮演某個(gè)角色、創(chuàng)造新地位。如果是自己，那就不是角色游戲了。例如：幼兒扮演“媽媽”，可能是因?yàn)閶寢尶梢灾笓]家中其他成員；幼兒扮演“醫(yī)生”，可能是因?yàn)橄矚g醫(yī)生使用的聽診器。幼兒所扮演的角色與現(xiàn)實(shí)生活中的人物相比是高度概括了的，他們表現(xiàn)的是人物的典型言語和行為，是以幼兒自己的標(biāo)準(zhǔn)選擇的。例如：“醫(yī)生”只是問“病人”：“哪里不舒服？”然后就什么也不問了。拿起聽診器聽一會(huì)兒，一句話：“拿藥去，吃了就好了”?！安∪恕币蛔?，看病就結(jié)束了。而“病人”也不會(huì)對(duì)此提出異議，拿了藥心滿意足地走了。在現(xiàn)實(shí)生活中看病的許多細(xì)節(jié)，如：?jiǎn)柌∪说木唧w情況、各種檢查、關(guān)照病人注意事項(xiàng)等都被省略了。這里表現(xiàn)的是概括化了的人物形象及主要活動(dòng)過程，這與角色游戲的象征性特點(diǎn)是一致的，概括化了的角色就是現(xiàn)實(shí)人物的象征性代表。

三、角色游戲中的動(dòng)作和語言

動(dòng)作和語言是角色游戲中人物的基本行為方式。無論是小班幼兒簡(jiǎn)單的角色游戲，還是大班幼兒復(fù)雜的角色游戲，人物的動(dòng)作和語言總是發(fā)揮著重要的作用。小班幼兒抱著一個(gè)“娃娃”搖搖拍拍，然后放下“娃娃”，拿件衣服或別的東西蓋在“娃娃”身上，最簡(jiǎn)單的娃娃家游戲就完成了?；蛘哂變簩?duì)別人說一句：“我是媽媽”。于是，一個(gè)象征性人物就誕生了，一場(chǎng)角色游戲就此拉開帷幕。語言和動(dòng)作在角色游戲中的作用既是不可取代的，又是互相聯(lián)系、相輔相成的。幼兒可以用語言來假設(shè)人物身份，假設(shè)情境，用語言規(guī)定特定的游戲情境，還可用語言來概括人物的動(dòng)作，游戲的具體過程。另一方面，幼兒也可以用動(dòng)作來表示人物的想法、感情，用動(dòng)作完成游戲的一些情節(jié)。語言和動(dòng)作成為幼兒在角色游戲中相互作用的兩種互相補(bǔ)充的主要方式。幼兒象征能力的發(fā)展為語言和動(dòng)作的發(fā)展提供了心理基礎(chǔ)，隨著象征能力的提高，語言和動(dòng)作的概括性隨之提高。

四、角色游戲中的物品

游戲材料是幼兒表現(xiàn)游戲內(nèi)容，發(fā)展游戲水平的重要物質(zhì)支柱。角色游戲情節(jié)的豐富、人物關(guān)系的發(fā)展也與物品材料的數(shù)量和種類密切相關(guān)。人物間關(guān)系因物品而發(fā)生，如：“媽媽”借助“鍋、碗、飯、菜”等完成角色的規(guī)定動(dòng)作。物品數(shù)量的充足與否和物品使用的形式、種類如何影響著情節(jié)的發(fā)展。例如：幼兒先用積塑裝插成一個(gè)小“蛋糕”，娃娃家的“爸爸”、“媽媽”就可以為孩子過生日了。接著又用積塑裝插成“電視機(jī)”，一家人就可以看電視了。一會(huì)兒又拆了“電視機(jī)”，裝插成一架“照相機(jī)”，于是，一家人又可以出去拍照了。游戲的內(nèi)容隨物品的變化而顯得多姿多彩了。物品在角色游戲中的作用顯而易見，物品的主要特性是象征性，幼兒在角色游戲中使用的物品既可以是模擬物品，也可以是替代品，其中，象征性發(fā)揮著作用。例如：娃娃家里來了“客人”，當(dāng)“客人”提出要打電話時(shí)，“爸爸”拿出一個(gè)插有吸管的空飲料盒，說是最新的“手機(jī)”，當(dāng)“爺爺”提出要去看病，“爸爸”找出紙棍，讓爺爺拄著拐杖出門。幼兒用言語或非言語的符號(hào)來表示具體的物品，物品的象征性也是從低級(jí)向高級(jí)發(fā)展的。隨著幼兒認(rèn)知能力的發(fā)展，他們?cè)絹碓蕉嗟厥褂锰娲泛头?hào)物。

五、游戲情境

游戲情境指角色游戲進(jìn)行的物質(zhì)環(huán)境狀況與心理氣氛，它包括人和物這兩大因素。不同的情境有不同的人物、物品及場(chǎng)所，同時(shí)還受到游戲者的影響，由不同的游戲參加者組成的游戲團(tuán)體在心理氛圍上也不是不同的?！巴尥藜摇敝杏小鞍职謰寢?、兄弟姐妹”等。人物之間的關(guān)系是親密的、氣氛是愉快的。但如果“哥哥”是任性的、“媽媽”是獨(dú)斷的，那么氣氛就可能是令人不安的。另外，角色游戲的情境還受到角色游戲主題的制約。一旦主題確定了，情境也隨之確定。不過，游戲主題只規(guī)定了情境的總趨勢(shì)，情境的具體細(xì)節(jié)是受游戲開展的時(shí)間、空間及游戲者個(gè)體特點(diǎn)的影響的。如果空間狹小，“醫(yī)院”只能有門診，沒有病床，或者看病的、掛號(hào)的、打針的擠在一起，“病人”、“醫(yī)生”都草草了事。結(jié)果是“醫(yī)院”里嘈雜一片。這樣，盡管主題確定了，但情節(jié)不能展開，人物關(guān)系也就無從發(fā)生，角色游戲就只有形式而無甚內(nèi)容可談了。可見，情境與角色游戲的其它各種成分密切相關(guān)、相互影響。綜上所述，對(duì)角色游戲結(jié)構(gòu)的分析使我們發(fā)現(xiàn)影響角色游戲的因素不少，而且影響方式也是多種多樣。我們大致可以分為主觀性因素和客觀性因素兩類。主觀性因素包括個(gè)體的認(rèn)知、模仿、象征等心理機(jī)制的發(fā)展水平、個(gè)體已有的知識(shí)經(jīng)驗(yàn)以及個(gè)體的個(gè)性、性格特征等。一個(gè)活潑開朗的幼兒去“商場(chǎng)”做“營業(yè)員”，她主動(dòng)招呼“顧客”，熱情為之服務(wù)。游戲開展得熱烈而豐富。反之，一個(gè)性格內(nèi)向、孤言寡語的幼兒做“營業(yè)員”，只會(huì)消極地等待“顧客”的到來，并按“顧客”的命令行事。游戲便會(huì)缺乏生氣、情節(jié)貧乏。具有初級(jí)象征能力的小班幼兒是無法在大班 幼兒的“娃娃家”中扮演“媽媽”的，只能充當(dāng)“弟弟”、“妹妹”的角色。影響角色游戲的客觀性因素包括幼兒的年齡、性別、游戲的空間狀況、時(shí)間長(zhǎng)短、物品材料的數(shù)量和種類等。如果游戲空間狹小，則游戲內(nèi)容受到限制，且易引起混亂、爭(zhēng)吵；如果時(shí)間倉促，則游戲情節(jié)不能充分展開，人物關(guān)系得不到體現(xiàn)；如果物品材料短缺或種類單一，則不利于幼兒發(fā)揮想象和創(chuàng)造，情節(jié)的發(fā)展和人物關(guān)系表現(xiàn)就會(huì)受到限制。這些影響因素可能是平行地發(fā)生作用，也可能是交叉地發(fā)生作用。教育者的任務(wù)就是正確地分析和利用這些因素，恰當(dāng)?shù)乜刂七@些因素，從而在指導(dǎo)幼兒開展角色游戲的過程中，充分發(fā)揮其教育作用，以促進(jìn)幼兒的全面發(fā)展。

第五篇：食品安全主要影響因素分析

食品安全主要影響因素分析

[摘要]各類食品安全事件頻發(fā)，探究食品安全影響因素，并具體探究事物本質(zhì)，是保障食品安全的重要方面?？傮w來說，制約食品安全的因素主要有種植養(yǎng)殖遺留食物安全隱患、食品經(jīng)營者敗德行為、消費(fèi)者消費(fèi)心理以及政府監(jiān)管失效等。

[關(guān)鍵詞]食品安全;消費(fèi);監(jiān)管

中圖分類號(hào)：D035 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1009-914X（2016）24-0321-01

一、種植養(yǎng)殖遺留食物安全隱患

在產(chǎn)品種植和養(yǎng)殖過程中，易遺留食品安全隱患。不難理解，在種植養(yǎng)殖過程中，人為或者非人為的使食物攜帶對(duì)人體，易給人造成健康或者亞健康的傷害，引發(fā)的食品安全事故造成的食品安全問題不可忽視。在種植過程中，農(nóng)戶為經(jīng)濟(jì)利益，使用廉價(jià)催熟劑和有毒有害的肥料，將農(nóng)產(chǎn)品快速催熟。一些打著有機(jī)食品、綠色食品招牌的農(nóng)戶或者不法商販，公然濫用催熟劑，這對(duì)消費(fèi)者的健康造成潛在威脅和影響。比如廉價(jià)的“座果靈”就可以催熟大量的果實(shí)，而催熟劑是國家允許生產(chǎn)的一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，如若使用不當(dāng)，則很可能對(duì)人體造成健康威脅。比如過量使用催熟劑，就會(huì)使有毒物質(zhì)殘留在果實(shí)中，食用后對(duì)人體造成健康隱患。

在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)，抗生素濫用導(dǎo)致的食品安全問題并不少見。然而畜牧行業(yè)抗生素的使用增加的趨勢(shì)比較明顯，豬、雞鴨、奶牛等大型養(yǎng)殖場(chǎng)抗生素的使用都比較普遍。因?yàn)楝F(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)在市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)發(fā)展過程中，為了快速培育出體積大的豬禽等，需要供給大量的蛋白質(zhì)，這就需要給豬禽等動(dòng)物注射抗生素，以防動(dòng)物生病。簡(jiǎn)而言之，養(yǎng)殖場(chǎng)為了快速牟利，減少成本，就在動(dòng)物飼養(yǎng)過程中使用抗生素，引致細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，這種耐藥性隨即通過環(huán)境、食用養(yǎng)殖的動(dòng)物肉制品等方式傳播至人體，從而給人體健康和生命安全帶來危害。

二、食品經(jīng)營者敗德行為加大食品安全風(fēng)險(xiǎn)

截至2015年12月末，全國規(guī)模以上食品企業(yè)僅僅有3.9萬余家，中小型食品企業(yè)特別多，有些企業(yè)雖然取得了生產(chǎn)和經(jīng)營許可，但質(zhì)量差，有的企業(yè)違法經(jīng)營成本較低，存在較大的安全風(fēng)險(xiǎn)。而在食品生產(chǎn)環(huán)節(jié)的食品安全風(fēng)險(xiǎn)是不可低估的，但是，由于目前對(duì)于中小企業(yè)的監(jiān)管仍存在粗放性特點(diǎn)，對(duì)于違法企業(yè)的懲罰力度不夠，在這種情況下，企業(yè)的自律性對(duì)于確保食品安全供給就顯得尤為關(guān)鍵。而現(xiàn)實(shí)情況是，很多食品企業(yè)，特別是小型食品企業(yè)缺乏社會(huì)責(zé)任感，遵守《食品安全法》意識(shí)薄弱，未切實(shí)將食品安全擺在生產(chǎn)經(jīng)營的第一位，公然生產(chǎn)經(jīng)營不符合國家標(biāo)準(zhǔn)的假劣食品。這種食品經(jīng)營者的敗德行為加大了食品安全風(fēng)險(xiǎn)。在鄉(xiāng)村，食品經(jīng)營者就更傾向于經(jīng)營品質(zhì)低劣的食品，以低價(jià)銷售，這也在農(nóng)村形成了良好的市場(chǎng)供求狀態(tài)。塑料米、老鼠羊肉串、化學(xué)豆腐、甲醛鴨血、摻假蜂蜜、被污染的瓶裝水、爛米粉、瘦肉精等假劣食品，曾經(jīng)長(zhǎng)期被消費(fèi)者食用，食品經(jīng)營者為了個(gè)人私利，在明知假劣食品對(duì)人體會(huì)存在潛在安全風(fēng)險(xiǎn)的情況下，仍然制售這樣的食品，在社會(huì)上產(chǎn)生了極其惡劣的影響。有些黑心廠商地址比較隱蔽，也存在一定的流動(dòng)性，對(duì)其監(jiān)管存在較大難度。

三、消費(fèi)者消費(fèi)心理與消費(fèi)過程影響食品安全

消費(fèi)者消費(fèi)心理使食品安全問題的存在成為常態(tài)。普通消費(fèi)者在無法辨別食品安全性的情況下，存在購買廉價(jià)食品的傾向。特別是在農(nóng)村，農(nóng)民食品安全意識(shí)薄弱，缺乏食品安全知識(shí)，對(duì)“三無”食品不但不抗拒，而是圖便宜，更無暇了解食品法律法規(guī)和食品衛(wèi)生知識(shí)。盡管如今網(wǎng)絡(luò)、電視等媒體宣傳食品安全知識(shí)，相關(guān)部門也對(duì)農(nóng)村食品安全亂象進(jìn)行了整治，關(guān)閉了一批農(nóng)村違法食品小型企業(yè)和小作坊然而，農(nóng)村食品安全問題依然很嚴(yán)重。

消費(fèi)者消費(fèi)過程中維權(quán)越來越難。史上最嚴(yán)食品安全法的出臺(tái)，表面上是對(duì)消費(fèi)者的維權(quán)越來越有利，但實(shí)際情況是，消費(fèi)者因?yàn)槿∽C和食品檢測(cè)難以攻克技術(shù)難題，無法有效維權(quán)。比如對(duì)于食品中非法添加的情況，消費(fèi)者維權(quán)需要找到相關(guān)專業(yè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行鑒定，一旦鑒定結(jié)果是食品不存在安全問題，那么消費(fèi)者就會(huì)增加了維權(quán)成本。加上在消費(fèi)者維權(quán)過程中，經(jīng)營者沒有舉證責(zé)任，在消費(fèi)者維權(quán)證據(jù)不足的情況下，維權(quán)就很難實(shí)現(xiàn)。

四、監(jiān)管失效與監(jiān)管盲區(qū)并存影響食品安全效果

長(zhǎng)期以來，我國食品安全監(jiān)管實(shí)行多頭管理模式，多頭交叉的管理格局必然導(dǎo)致全責(zé)錯(cuò)位、資源配置低，而新的監(jiān)管體制并不能在短期內(nèi)很好地調(diào)整各職能部門之間的關(guān)系，受舊體制的制約，人員、權(quán)限、機(jī)構(gòu)等各要素的調(diào)整和優(yōu)化也難以一步到位。這就不可避免的造成在實(shí)際的監(jiān)管過程中的監(jiān)管失效。目前，我國食品安全監(jiān)管體制決定了食品安全監(jiān)管中存在著分段監(jiān)管，各個(gè)部門各負(fù)其責(zé)實(shí)際上就暴露出食品安全監(jiān)管過程的漏洞和監(jiān)管盲區(qū)。各監(jiān)管部門各管一段也容易造成其職能錯(cuò)位，進(jìn)而造成監(jiān)管盲區(qū)。這種分段監(jiān)管的模式最終導(dǎo)致整個(gè)監(jiān)管失效。特別是在廣大農(nóng)村，隨著網(wǎng)絡(luò)的普及，農(nóng)村在享受發(fā)達(dá)的現(xiàn)代網(wǎng)絡(luò)帶來的便利的同時(shí)，也同時(shí)承擔(dān)著由此帶來的不安全風(fēng)險(xiǎn)。網(wǎng)絡(luò)食品安全監(jiān)管這一塊原本就屬于較薄弱環(huán)節(jié)，山寨食品更是在農(nóng)村泛濫成災(zāi)。囿于監(jiān)管資源有限，農(nóng)村食品安全取證難，對(duì)其監(jiān)管更是難上加難?？偟膩碚f，監(jiān)管體制的不完善，監(jiān)管力量薄弱以及監(jiān)管能力差導(dǎo)致監(jiān)管失效的現(xiàn)象經(jīng)常存在。這是影響食品安全的比較關(guān)鍵的因素之一。

針對(duì)以上影響食品安全的因素，擬通過加強(qiáng)政府監(jiān)管、培養(yǎng)企業(yè)社會(huì)責(zé)任、消費(fèi)者個(gè)人消費(fèi)維權(quán)以及加強(qiáng)社會(huì)監(jiān)督等角度，保障食品安全。具體來說，監(jiān)管要從農(nóng)田到餐桌全過程無縫監(jiān)管，在種植過程的監(jiān)管應(yīng)該強(qiáng)化;針對(duì)性消費(fèi)者維權(quán)難的問題，有關(guān)部門應(yīng)為消費(fèi)者提供取證和食品安全監(jiān)測(cè)等服務(wù);企業(yè)要自覺尚德守法，主動(dòng)承擔(dān)主體責(zé)任，樹立良好相信，打造精良品牌，供給優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品;消費(fèi)者維護(hù)自身健康權(quán)益，消費(fèi)過程中應(yīng)有主動(dòng)保留維權(quán)證據(jù)的意識(shí);社會(huì)各界廣泛參與監(jiān)督，特別是要針對(duì)農(nóng)村監(jiān)管盲區(qū)，加強(qiáng)社會(huì)監(jiān)管力度，以逐步實(shí)現(xiàn)食品安全社會(huì)共治格局。

本文作為遼寧社科規(guī)劃基金一般項(xiàng)目：“遼寧省食品安全管理現(xiàn)狀及對(duì)策研究”（編號(hào)：L14BGL022）階段性成果之一。

作者簡(jiǎn)介：

王淑娟（1979―），女，遼寧社會(huì)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)研究所助理研究員，研究方向?yàn)椋汗步?jīng)濟(jì)、公共管理。