第一篇：流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑注冊申報資料 技術(shù)審評指導(dǎo)原則

一、前言

本指導(dǎo)原則旨為注冊申請人準(zhǔn)備及撰寫流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑注冊申報資料提供指導(dǎo)，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料進行技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其它方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

二、范圍

本指導(dǎo)原則中“流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑”是指標(biāo)記有特定發(fā)光物質(zhì)（如熒光素、量子點等）、針對各類血細(xì)胞或組織細(xì)胞分化抗原的單克隆抗體試劑以及相關(guān) 的質(zhì)控品和校準(zhǔn)品，這些抗體與血細(xì)胞或組織細(xì)胞的各類抗原分子特異性結(jié)合，與適用的流式細(xì)胞儀配套使用，對人血液、骨髓液或其它體液組織標(biāo)本中的被標(biāo)記細(xì) 胞或分子進行分類和計數(shù)。由于多方面差異，本文內(nèi)容將不包括預(yù)期用途為利用流式細(xì)胞術(shù)進行特異性目的細(xì)胞分選的檢測試劑。

本指導(dǎo)原則適用于進行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。

三、注冊申報要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、方法學(xué)特征、生物安全性評價、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦 法（試行）》（以下簡稱《辦法》）和《體外診斷試劑注冊申報資料形式與基本要求》（國食藥監(jiān)械[2007]609號）的相關(guān)要求。

流式細(xì)胞分析是一種在功能水平上對單細(xì)胞或其他生物粒子進行定量分析的檢測手段，可以在短時內(nèi)高速分析上萬個細(xì)胞，并能同時從一個細(xì)胞測得多個參數(shù)。流 式細(xì)胞分析主要靠流式細(xì)胞儀和各種特定發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記的單克隆抗體試劑組合檢測來實現(xiàn)。流式細(xì)胞儀是集電子技術(shù)、計算機技術(shù)、激光技術(shù)、流體理論等技術(shù)原理 于一體進行流式細(xì)胞分析的儀器，其工作原理為：將待測細(xì)胞或微粒進行特異性染色標(biāo)記后制成細(xì)胞懸液標(biāo)本，在一定氣體壓力下將待測樣品壓入流動室，用不含細(xì) 胞或微粒的緩沖液（鞘液）在高壓下從鞘液噴出，包繞著細(xì)胞或微粒高速流動形成圓形流束（鞘流），依次通過流式細(xì)胞儀的檢測區(qū)域。被熒光染色的細(xì)胞在激光束 的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。前向散射光（forward scatter,FSC）和側(cè)向散射光（side scatter,SSC）檢測器把散射光信號轉(zhuǎn)換成電信號，熒光則被聚光器收集，不同顏色熒光被雙色反光鏡轉(zhuǎn)向不同的光電倍增管（PMT）檢測器，把熒光 信號轉(zhuǎn)換成電信號。散射光信號和熒光信號經(jīng)過放大后，再經(jīng)過數(shù)據(jù)化處理輸入電腦并儲存，根據(jù)散射光和熒光信號對細(xì)胞或微利進行分類或計數(shù)。其中，F(xiàn)SC反 映了細(xì)胞體積的大小，SSC則反應(yīng)細(xì)胞部分結(jié)構(gòu)的信息；熒光信號強度代表了所測細(xì)胞膜表面抗原的強度或其細(xì)胞內(nèi)、核內(nèi)物質(zhì)的濃度。臨床流式細(xì)胞分析是將流 式細(xì)胞分析技術(shù)與方法應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)，與臨床疾病的診斷、分型、治療、預(yù)后及預(yù)防等相結(jié)合的綜合應(yīng)用學(xué)科。其應(yīng)用范圍廣泛，包括細(xì)胞生物學(xué)、血液免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、感染性疾病、造血干細(xì)胞移植、器官移植等多個方面。臨床流式細(xì)胞分析要求實驗人員對整個分析系統(tǒng)、各種相關(guān)實驗技術(shù)和方法有深入理解和掌握，并能 對檢測結(jié)果給予合理的醫(yī)學(xué)解釋。

（二）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、實驗操作方法、檢測結(jié)果解釋以及相關(guān)注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué) 解釋的重要依據(jù)，也是體外診斷試劑注冊申報的重要文件之一。流式細(xì)胞儀檢測專業(yè)性較強，對產(chǎn)品說明書的編制進行必要的指導(dǎo)顯得更為重要。該類產(chǎn)品說明書除 對單克隆抗體試劑做必要的介紹外，還應(yīng)對樣本采集、樣本處理及保存、儀器校準(zhǔn)、檢測質(zhì)量控制、結(jié)果分析等相關(guān)步驟做詳細(xì)描述，以保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可 重復(fù)性。

產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性及完整 性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以 規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標(biāo)注，并單獨列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。結(jié)合相關(guān)法規(guī)要求及流式細(xì)胞分析的特性，下面對流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑說明書的重點內(nèi)容作詳細(xì)說 明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【產(chǎn)品名稱】

單色試劑通用名稱建議采取以下命名方式：被檢標(biāo)志物名稱+檢測試劑盒（流式細(xì)胞儀法-熒光素）。多色試劑可以結(jié)合靶抗原、目標(biāo)細(xì)胞或組織、熒光素及臨床預(yù)期用途等信息綜合判斷。

2.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

（1）適用的樣本類型：如全血、骨髓液、組織細(xì)胞等，并明確對所需抗凝劑的要求。

（2）待測靶抗原的特征簡介，如分子結(jié)構(gòu)、分子量、產(chǎn)生和代謝主要途徑、表達(dá)細(xì)胞等。

（3）與被檢標(biāo)志物相關(guān)的臨床背景介紹、正常表達(dá)情況、異常表達(dá)的主要疾病、與其他抗原的共表達(dá)情況以及可能的醫(yī)學(xué)解釋等。

（4）強調(diào)：實驗操作人員應(yīng)接受過流式細(xì)胞儀檢測的專業(yè)培訓(xùn)，具備相關(guān)的實驗操作資格，實驗室應(yīng)具備合理的生物安全防備設(shè)施及防護程序。

3.【主要組成成份】

（1）主要是對特定熒光素標(biāo)記的單克隆抗體特征的描述，應(yīng)包括抗體特異性（CD標(biāo)志），雜交瘤細(xì)胞，免疫球蛋白特征（Ig鏈），純化方式，熒光激發(fā)及發(fā)射波長，偶聯(lián)的熒光素，抗體濃度以及其他非抗體成分組成及濃度。

（2）如包括多種不同熒光素標(biāo)記的單克隆抗體，則應(yīng)對不同的抗體分別列表詳述上述特征。

（3）建議將實驗需要但本試劑盒未提供的主要成分進行列舉：如與之配套使用的紅細(xì)胞溶解試劑，稀釋劑，細(xì)胞/血球計數(shù)儀等。

4.【儲存條件及有效期】

試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性等。以及當(dāng)試劑表面變化或變質(zhì)時情況的描述及相關(guān)警示。

5.【樣本要求】

樣本采集和處理的目標(biāo)是獲得均勻的單細(xì)胞懸液，同時必須盡量保證細(xì)胞的活力和完整性，防止目標(biāo)細(xì)胞的損失。樣本操作不宜過度，避免對細(xì)胞結(jié)構(gòu)和抗原性造成破壞。故對于流式細(xì)胞分析而言，樣本處理對實驗結(jié)果至關(guān)重要，應(yīng)盡量減少由于樣本采集或處理不當(dāng)對實驗造成的影響。

在產(chǎn)品說明書中應(yīng)重點對以下內(nèi)容予以明確：

（1）所需的樣本量、采樣方法（對抗凝劑或抗凝管的要求）及樣本采集的注意事項，盡量引述相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

（2）樣本處理：溶血洗滌（或非洗滌）、細(xì)胞分離和提純描述、離心和固定等方法；樣本保存、轉(zhuǎn)運的條件和方法。

（3）染色前穩(wěn)定性：即采樣后在合理的保存條件下，多長時間內(nèi)必須進行抗體標(biāo)記（染色）；如果不同抗凝劑樣本的穩(wěn)定時間有差異，則應(yīng)分別進行闡述。

（4）染色后穩(wěn)定性：即樣本在完成抗體標(biāo)記后至上機分析前可以穩(wěn)定保存的條件及期限。最好結(jié)合染色前穩(wěn)定性的要求對上機分析前的穩(wěn)定性進行綜合評價。

（5）避免使用的樣本類型，如有微生物污染、乳糜、凝集或細(xì)胞活力不達(dá)標(biāo)準(zhǔn)等，在一般情況下應(yīng)避免使用上述樣本，除非樣本有不可替代性，則應(yīng)說明處理該種樣本的方法，并應(yīng)在結(jié)果報告時明示。

（6）達(dá)到最佳染色效果所要求的目標(biāo)細(xì)胞計數(shù)。①盡量采用公認(rèn)的國際或國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)操作方法進行細(xì)胞計數(shù)，保證計數(shù)準(zhǔn)確性；②詳述計數(shù)與預(yù)期不符時應(yīng)采取的處理方法（濃縮或稀釋等）；③提醒實驗操作人員細(xì)胞計數(shù)的注意事項。

（7）樣本活力要求及評估方法：為避免非活性細(xì)胞的非特異性結(jié)合，應(yīng)評估細(xì)胞活性并設(shè)定有活力細(xì)胞的百分比下限，并推薦相關(guān)的有活力細(xì)胞評估方法。

（8）優(yōu)化為最佳染色效果所需注意的重要信息；其他有關(guān)樣本采集、處理及保存的注意事項。

6.【適用機型】所有適用的儀器型號，如對配套用軟件有要求也應(yīng)做特別說明，并提供與儀器或軟件有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

7.【檢驗方法】對于流式細(xì)胞分析而言，實驗操作步驟對實驗結(jié)果的影響至關(guān)重要，因此，應(yīng)詳細(xì)說明達(dá)到最佳染色效果的實驗操作各個步驟，包括：

（1）試劑使用條件：溫度/濕度條件、試劑用量、染色時間、是否需無菌操作等。

（2）簡述試驗開始前流式細(xì)胞儀的設(shè)置方法，校準(zhǔn)及質(zhì)控程序。

（3）詳細(xì)闡述試驗操作步驟、注意事項。如對照的設(shè)定方式及類別（同型陰性對照、陽性對照、正常人血細(xì)胞對照等），設(shè)門方法舉例及代表性數(shù)據(jù)圖示；靶細(xì)胞分類計數(shù)的方法及步驟、計算公式以及相關(guān)注意事項。

（4）校準(zhǔn)：適用校準(zhǔn)品的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱及貨號等詳細(xì)信息，校準(zhǔn)品的使用方法、推薦的校準(zhǔn)周期及相關(guān)注意事項。

（5）質(zhì)量控制：適用質(zhì)控品的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱及貨號等詳細(xì)信息，質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，提示檢測結(jié)果不可靠，不應(yīng)出具檢測報告。如質(zhì)控不合格應(yīng)提供相關(guān)的解決方案。

8.【參考值（參考范圍）】

應(yīng)注明待測標(biāo)記細(xì)胞或分子在常用樣本類型的正常參考值（范圍），簡單介紹設(shè)定該參考值（范圍）所選健康人群的特征，如有必要，需對不同年齡段人群、不同性別或具有明確地理差異人群的參考值分別進行詳述。

建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考值（范圍）”。

9.【檢驗結(jié)果的解釋】

由于流式細(xì)胞儀分析技術(shù)的專業(yè)性較強，檢測過程中的影響因素較多且同一分析目標(biāo)在不同人群的表達(dá)復(fù)雜多樣，因此，流式細(xì)胞檢測的數(shù)據(jù)分析、結(jié)果解釋和出 具臨床報告經(jīng)常具有較大的挑戰(zhàn)性，結(jié)果解釋不當(dāng)可能對病人的診治造成很大影響。建議負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)解釋和出具報告的實驗人員需經(jīng)過正規(guī)的技術(shù)培訓(xùn)且有一定的臨床 經(jīng)驗，二者結(jié)合有助于對實驗數(shù)據(jù)做出合理的醫(yī)學(xué)解釋。

產(chǎn)品說明書中的本部分內(nèi)容應(yīng)對上述情況進行必要的建議，還應(yīng)對設(shè)門方法、數(shù)據(jù)分析、異常值處理、臨床相關(guān)提示等內(nèi)容做出合理解釋。

10.【檢驗方法局限性】

（1）本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其它實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

（2）使用該試劑的其他限制，如樣本、保存方法、保存時間，特殊患者可能出現(xiàn)的不正確結(jié)果，儀器設(shè)置不當(dāng)?shù)挠绊懙取?/p>

（3）是否與經(jīng)其他試劑或儀器獲得的同類數(shù)據(jù)具直接可比性。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 詳述以下性能指標(biāo)：

（1）精密度：簡要說明精密度評價的方法，建議以列表的方式列出批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間、運行內(nèi)/運行間精密度等信息，以標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）的形式表示精密度研究結(jié)果。

（2）線性：包括細(xì)胞計數(shù)濃度范圍和待測目標(biāo)物陽性細(xì)胞百分比濃度范圍兩類，申請人應(yīng)至少對其中一個進行合理驗證并在此列出，簡要注明實驗方法、所用儀器及軟件等信息。

（3）對比試驗研究：簡要介紹參比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計學(xué)方法及統(tǒng)計分析結(jié)果、圖示。

（4）分析特異性：有關(guān)交叉反應(yīng)和干擾因素的驗證信息。如：對溶血、高脂、黃疸等內(nèi)源性干擾因子的濃度限值要求（如有必要），樣本中可能存在某些內(nèi)生物 質(zhì)與待測抗原有相似化學(xué)結(jié)構(gòu)或抗原表位，如自身抗體、蛋白、激素或近期服用的某些藥物（如生物制劑），這些物質(zhì)可能與試劑中的單克隆抗體發(fā)生交叉反應(yīng)而影 響檢測結(jié)果，如未進行相關(guān)研究也應(yīng)提供相關(guān)警示說明。

12.【注意事項】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

（1）生物安全性警告：接觸到的臨床樣本、質(zhì)控/校準(zhǔn)品、實驗廢棄物等材料應(yīng)當(dāng)作為潛在傳染物進行處理，并且采用符合法規(guī)的預(yù)防措施對其處理。

（2）有關(guān)儀器設(shè)置的警示，如：流式細(xì)胞儀未經(jīng)正確校準(zhǔn)、熒光滲漏未行合理補償以及檢測區(qū)域（設(shè)門）未精確定位，則可能產(chǎn)生錯誤的檢測結(jié)果。

（3）有關(guān)試劑準(zhǔn)備的注意事項：如冷藏避光保存、切勿冷凍、使用前恢復(fù)室溫等

（4）針對某些白細(xì)胞濃度過高或過低的情況，在樣本處理時需采用的特殊處理方式，如血樣稀釋或細(xì)胞濃縮等操作。

（5）試劑特殊成分或操作使用試劑危害性的警告及注意事項：如疊氮化鈉、甲醛等；使用不當(dāng)?shù)奶幚矸绞?/p>

（6）保證試驗結(jié)果準(zhǔn)確的其他操作注意事項。

（三）擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說明

擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合《辦法》和《體外診斷試劑注冊申報資料基本要求》的相關(guān)規(guī)定。另外，對于國產(chǎn)第三類體外診斷試劑，應(yīng)參考《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），將擬申報產(chǎn)品的主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定等內(nèi)容作為附錄附于標(biāo)準(zhǔn)正文后，并在正文的“產(chǎn)品分類”項中引出該附錄內(nèi)容。

該類產(chǎn)品注冊檢測的技術(shù)要求主要包括：準(zhǔn)確度、線性、精密度、染色穩(wěn)定性等相關(guān)指標(biāo)，具體要求的設(shè)置應(yīng)參考相關(guān)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（如有）執(zhí)行，企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求不得低于國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。

（四）注冊檢測

對于首次注冊產(chǎn)品，申請人擬定申報產(chǎn)品的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)后，應(yīng)當(dāng)在國家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行連續(xù)3個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢測。

對于已經(jīng)有國家參考品的流式細(xì)胞檢測項目，在注冊檢測時應(yīng)采用相應(yīng)的國家參考品進行,對于目前尚無國家參考品的項目，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立自己的質(zhì)控體系并提供相應(yīng)的內(nèi)部參考品。

（五）主要原材料研究資料

應(yīng)提供主要原材料如單克隆抗體、標(biāo)記熒光素的選擇、來源、制備過程、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)檢報告等研究資料。若主要原材料為企業(yè)自行生產(chǎn)，則應(yīng)詳述原材料（主要 是單克隆抗體）的制備及生產(chǎn)過程、雜交瘤細(xì)胞的選擇、技術(shù)指標(biāo)、質(zhì)量控制、國際相關(guān)權(quán)威機構(gòu)（如國際人類白細(xì)胞分化抗原協(xié)作組織，HLDA）的認(rèn)證情況（如有）等；如主要原材料來自外購，則應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，外購方名稱，提交外購方出具的有關(guān)單克隆抗體后雜交瘤細(xì)胞的性能分析或檢驗證書，詳 述申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。對熒光染色方法、染料選擇依據(jù)，多色標(biāo)記中熒光的交叉重疊驗證等研究。

（六）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1、生產(chǎn)工藝的研究資料主要包含：

（1）主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式（工藝流程圖）表示。

（2）生產(chǎn)工藝中關(guān)鍵步驟的質(zhì)量控制要求及質(zhì)控方法。

（3）生產(chǎn)工藝的確定資料，如：生產(chǎn)工藝的選擇依據(jù)，生產(chǎn)工藝的優(yōu)化過程及方法等。

2、反應(yīng)體系的研究資料主要包含：

（1）反應(yīng)原理介紹。

（2）產(chǎn)品說明書中描述的最佳反應(yīng)條件各步驟的確定方法，包括需要的樣本體積、樣本的處理、保存時間，反應(yīng)時間、溫度的確定、抗體的用量（重要）、是否需反向加樣、溶血/洗滌操作、去除干擾等。

（3）如產(chǎn)品說明書中使用了其他前處理試劑或流式細(xì)胞儀、儀器設(shè)定方法、或分析軟件等達(dá)到最佳反應(yīng)條件，則應(yīng)將使用這些試劑或儀器的研究內(nèi)容包含至該項資料中。

（4）應(yīng)說明配合該產(chǎn)品所使用的分析方法并進行驗證，如不同平臺方法、不同軟件分析、操作注意事項等。

（5）不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

（6）質(zhì)量控制：同型陰性對照、正常成人樣本對照、商業(yè)化陽性質(zhì)控品、熒光信號與散射光結(jié)合對各細(xì)胞群的確認(rèn)等。

（七）分析性能評估資料

企業(yè)應(yīng)提交原廠在產(chǎn)品研制階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，對于每一項性能的評價，都應(yīng)包括研究目的、實驗設(shè)計、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計 方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、所用軟件、臨床樣本來源等。對用于多色流式細(xì) 胞分析的試劑（如CD3/CD4/CD8淋巴細(xì)胞亞群檢測試劑），其待測每個指標(biāo)（如CD3、CD4和CD8三個指標(biāo)）的所有分析性能均應(yīng)分別進行相關(guān)的 驗證。分析性能評價的實驗方法可以參考相關(guān)的CLSI-EP文件或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行。

1.準(zhǔn)確度

對測量準(zhǔn)確度的評價主要包括：與國家標(biāo)準(zhǔn)品（和/或國際標(biāo)準(zhǔn)品）的偏差分析和方法學(xué)比對兩種方法，企業(yè)可根據(jù)實際情況選擇合理方法進行研究。

（1）國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品的檢測及偏倚情況

如果研究項目有相應(yīng)國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品，則使用國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品進行驗證，重點觀察對相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果的偏差情況。

（2）方法學(xué)比對

采用國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品，從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏 倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié) 果。

在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進行比對試驗。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本采集及處理的差異、濃度分布范圍及不同濃度范圍的可接受標(biāo)準(zhǔn)及合理的統(tǒng)計學(xué)分析等要素。

2.精密度：

精密度是指在規(guī)定的檢測條件下，相互獨立的測試結(jié)果間的一致程度，本類試劑的精密度評價主要考慮細(xì)胞計數(shù)結(jié)果和熒光強度兩方面。建議采用多個水平的質(zhì)控 品用于細(xì)胞計數(shù)精密度的評價，各個濃度均應(yīng)在試劑盒的線性范圍內(nèi)且有一定的臨床意義（醫(yī)學(xué)決定水平），通常包括該檢測指標(biāo)的正常范圍、異常低值和高值樣 本。對于質(zhì)控品或校準(zhǔn)品的精密度評價，應(yīng)包括其所有質(zhì)控或校準(zhǔn)項目，如熒光信號及散射光要求等。

在進行精密度評價時，除申報試劑本身的影響外，還應(yīng)對操作者、適用機型、不同軟件及實驗地點等要素進行相關(guān)的驗證。企業(yè)應(yīng)制定合理的精密度評價方案，例 如：在每個適用機型上進行至少20天的連續(xù)檢測，每天至少由2人完成不少于2次的完整運行，每天內(nèi)兩次運行間的時間間隔不少于3小時，從而對批內(nèi)/批間、日間、運行內(nèi)/運行間、不同操作者間的精密度以及各變量綜合的總精密度進行評價。除精密度質(zhì)控品外，建議選擇適量臨床采集的新鮮病人樣本（包括所有適用樣 本類型）作為無靶值質(zhì)控品進行精密度評價，以更好地模仿臨床檢測環(huán)境。

3.線性范圍：

本類產(chǎn)品線性主要包括稀釋細(xì)胞濃度范圍和標(biāo)記抗體陽性細(xì)胞的百分率范圍兩種線性范圍。企業(yè)可根據(jù)實際需要及以往的研究習(xí)慣自行選擇其中一種對線性的要求 進行驗證。企業(yè)應(yīng)對每個測量參數(shù)建立合理的線性范圍，在建立一個參數(shù)的線性范圍時，應(yīng)該盡量將預(yù)期測定范圍加寬，在合理范圍內(nèi)選擇7-11個濃度水平，每 個水平2-4份復(fù)制液，取每個濃度水平重復(fù)測量的均值用于線性回歸分析，依據(jù)實驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出最寬的線性范圍，擬合回歸直線的判定系數(shù)（R2）應(yīng)大于0.95。

建立稀釋細(xì)胞濃度線性范圍時，所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，建議采用混合血漿或自體血漿進行稀釋，同時應(yīng)考慮多倍稀釋可能造成的基 質(zhì)效應(yīng)。對于標(biāo)記抗體陽性細(xì)胞百分率的線性范圍，建議企業(yè)選擇經(jīng)確認(rèn)的陽性細(xì)胞株和陰性細(xì)胞株按照恒定的細(xì)胞總數(shù)將兩種細(xì)胞進行不同比率的混合，陽性細(xì)胞 數(shù)與陰性細(xì)胞數(shù)比例可以從0%到100%不等，從而確認(rèn)合理的有關(guān)陽性細(xì)胞百分率的線性范圍。

4．特異性：

（1）采用多種方法對申報抗體與靶抗原結(jié)合的特異性驗證研究，如采用競爭性抑制法、抗體與抗原純品的結(jié)合研究、免疫印跡技術(shù)或胞膜抗原的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)等 方法對抗原抗體結(jié)合的特異性進行相關(guān)的驗證；有關(guān)靶抗原的細(xì)胞或組織分布特異性的研究，如抗體與不同細(xì)胞系的反應(yīng)譜等。

（2）交叉反應(yīng)性：驗證所申報單克隆抗體除與目標(biāo)抗原的結(jié)合外，是否與樣本中可能存在其它內(nèi)生或外源物質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)，如與待測抗原有相似化學(xué)結(jié)構(gòu)或抗原表位的蛋白、激素或近期服用的某些藥物等。

（3）干擾：本處所指的干擾是指經(jīng)過生產(chǎn)商指定的樣本處理方法后，檢測時是否還存在其他影響結(jié)果干擾因素或干擾物質(zhì)。如有，生產(chǎn)商應(yīng)進行說明并驗證，使 用醫(yī)學(xué)相關(guān)水平的干擾物濃度進行驗證，另外，亦建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(“最差條件”)條件下進行評價。

（八）參考值（范圍）確定資料

應(yīng)詳細(xì)描述用于參考值（范圍）確定健康人群的地域、年齡、性別等特征，并對統(tǒng)計分析方法進行詳細(xì)解釋?？梢詤⒖紘鴥?nèi)或國際有關(guān)參考值（范圍）制定的指南文件推薦的方法進行。不同種族、年齡或性別人群如有明顯差異應(yīng)分別進行相關(guān)的統(tǒng)計分析并設(shè)置不同的參考值（范圍）。

（九）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、高溫加速破壞穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性以及 開瓶穩(wěn)定性等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

樣本穩(wěn)定性主要考慮染色前和染色后穩(wěn)定性，前者是指樣本采集后至染色（標(biāo)記）前的穩(wěn)定性，后者是指染色（標(biāo)記）后到上機分析前的穩(wěn)定性。樣本染色前、染 色后穩(wěn)定性需結(jié)合試劑的穩(wěn)定性研究綜合進行考慮。可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇多個時間點（應(yīng)至少包括范圍的上限和下限溫度），每間隔一定的時間段對采集樣 本或標(biāo)記后樣本進行全性能的分析驗證，從而確認(rèn)樣本染色前和染色后的合理保存條件和有效期。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細(xì)說明。

（十）臨床試驗研究

1.樣本例數(shù)

考慮到流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑種類繁多、臨床用途廣泛但主要原料、生產(chǎn)工藝及檢測原理等非常相似的特點，該類試劑臨床試驗研究的總樣本數(shù)為不少于500例。

2.臨床研究單位的選擇

流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑的臨床研究應(yīng)在三家以上（含三家）省級醫(yī)療衛(wèi)生單位進行，對于特殊使用目的產(chǎn)品可以在相應(yīng)的市級以上?？漆t(yī)院或其它診療機構(gòu)開 展臨床研究。建議在國內(nèi)不同城市選擇臨床單位，盡量使各單位的臨床樣本有一定地域代表性；臨床研究單位須具有流式細(xì)胞儀專業(yè)的技術(shù)人員及相應(yīng)的儀器設(shè)備，確保該項研究的實施。實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試 劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，定期對儀器進行校準(zhǔn)，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。流式細(xì)胞儀檢測的專業(yè)性較強，實驗操作人員須接受過流式細(xì)胞 儀技術(shù)的專業(yè)培訓(xùn)，并經(jīng)過考核合格后上崗，具備實驗室檢測和臨床病情相結(jié)合的流式細(xì)胞儀相關(guān)的檢測經(jīng)驗，3.研究方法

（1）境內(nèi)已有同類試劑批準(zhǔn)上市產(chǎn)品的臨床研究：

選擇中國境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對照試劑，采用擬申報產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進行對比試驗研究，證明考核試劑與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。

（2）境內(nèi)尚無同類試劑批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品臨床研究：

可以選擇國外已上市、普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對照試劑，采用考核試劑與之進行對比試驗研究，證明本品與對照試劑等效或優(yōu)于對照試劑。同時，還應(yīng) 結(jié)合每個患者的臨床病情對申報試劑的檢測結(jié)果進行綜合判斷，如有必要，需對研究對象進行相關(guān)的跟蹤監(jiān)測研究，以綜合判斷申報試劑的檢測結(jié)果，驗證其與臨床 病情的一致性。

4.試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確 說明原因。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

5.臨床病例選擇

絕大多數(shù)采用流式細(xì)胞儀方法檢測的血細(xì)胞或組織細(xì)胞抗原對于疾病診斷的靈敏度和特異性較低，與器官/組織定位、疾病良惡性區(qū)分以及與病情的進展程度雖有 一定關(guān)聯(lián)但多無明確的量值-病情相關(guān)關(guān)系，而且，多數(shù)情況下，該類試劑在用于病變的診療時需要多個標(biāo)記物組合檢測才能體現(xiàn)其臨床意義。因此，在進行臨床研 究時，除有針對性選擇目的性較強的病例外，還應(yīng)選擇部分其他相關(guān)的抗原表達(dá)類似或需鑒別診斷的病例。

臨床研究試驗中應(yīng)包括對部分來自正常健康人群的樣本作為正常對照。驗證試劑的正常參考值（范圍），比較正常組和疾病組結(jié)果，以便對申報產(chǎn)品的臨床性能做 出全面分析。建議對健康人群例數(shù)的選擇以不超過50例為宜。對于新試劑或臨床意義有待明確的試劑，可適當(dāng)增加正常樣本數(shù)。不管是健康人群或不同病種的患 者，每一組受試者的最小入選人數(shù)均須滿足統(tǒng)計學(xué)分析的基本要求。

6.結(jié)果差異樣本的驗證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑的檢測結(jié)果有明顯差異的樣本，應(yīng)采用臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的第三種同類試劑或其他標(biāo)準(zhǔn)方法進行驗證試驗，同時結(jié)合患者的臨床病情對差異原因及可能結(jié)果進行分析。

7.統(tǒng)計方法：對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析、線性回歸、ROC曲線分析等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對實驗試劑和 對照試劑的兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸方程斜率及y軸截距等指標(biāo)。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng) 計檢驗假設(shè)，即評價實驗試劑與對照試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

8.臨床試驗結(jié)果報告

根據(jù)《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。

（1）臨床試驗總體設(shè)計及方案描述

①臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；

②病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同病種的預(yù)期選擇例數(shù)及健康人群的選擇標(biāo)準(zhǔn)；

③樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；

④統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

（2）具體的臨床試驗情況

①考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息；

②對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比；

③質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估；

④具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。

（3）統(tǒng)計學(xué)分析

①數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

②相關(guān)性和一致性分析

用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)，同時應(yīng)給出b的95%（或99%）置信區(qū)間，定量值結(jié)果應(yīng)無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。

另外考慮到某些檢測指標(biāo)在不同的樣本濃度區(qū)間、不同年齡段人群或不同疾病來源的樣本可能有較明顯的差異，因此，如有必要，建議以上述相關(guān)要素為依據(jù)分組并對各組數(shù)據(jù)分別進行統(tǒng)計分析，以更好的驗證兩種試劑的相關(guān)性。

（4）討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

四、名詞解釋

1.準(zhǔn)確度（accuracy）：一個測量值與可接受的參考值間的一致程度。

2.精密度（precision）：在規(guī)定條件下，相互獨立的測試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計學(xué)方法得到的測量不精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。

3.線性（linearity）：在給定測量范圍內(nèi)，給出的測量結(jié)果與樣品中實際存在的被測量物的值成比例的能力。線性是描述一個測量系統(tǒng)的測量示值或測量結(jié)果相關(guān)于樣本的賦值符合直線的屬性。

4.分析特異性（analytical Specificity）：測量程序只測量被測量物的能力。分析特異性用于描述檢測程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估 的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學(xué)相關(guān)濃度值水平的分析干擾程度（潛在干擾物包括干擾物和交叉反應(yīng)物）。

五、參考文獻(xiàn)：

1.《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（國食藥監(jiān)械[2007]229號）

2.《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》（國食藥監(jiān)械[2007]240號）

3.《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國食藥監(jiān)械[2007]240號）

4.NCCLS EP9-A2：Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;Approved Guideline-Second Edition(September 2002).5.NCCLS EP5-A2:E, valuation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices;Approved Guideline-Second Edition(August 2004).6.NCCLS EP6-A: Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach;Approved Guideline.7.H20-A2:Reference Leukocyt(WBC)Differential Count(Proportional)and Evaluation of Instrumental Methods;Approved Standard—Second Edition.8.H42-A2:Enumeration of Immunologically Defined Cell Populations by Flow Cytometry;Approved Guideline—Second Edition.9.H43-A2:Clinical Flow Cytometric Analysis of Neoplastic Hematolymphoid Cells: Approved Guideline—Second Edition.10.H44-A2: Methods for Reticulocyte Counting(Automated Blood Cell Counters, Flow Cytometry, and Supravital Dyes);Approved Guideline—Second Edition.11.H52-A: Fetal Red Cell Detection;Approved Guideline.12.ILA26-A: Performance of Single Cell Immune Response Assays;A pproved Guideline.13.王建中：《臨床流式細(xì)胞分析》，上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社

14.杜立穎，馮任青：《流式細(xì)胞術(shù)》，北京大學(xué)出版社

15.馮仁豐，《臨床檢驗質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)》（第二版），上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社

16.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社

第二篇：流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑注冊申報資料技術(shù)指導(dǎo)原則征求意見稿

指導(dǎo)原則編號

流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑 注冊申報資料技術(shù)指導(dǎo)原則

（征求意見稿）

二O一一年八月

目錄

一、前言………………………………………………………………

二、范圍………………………………………………………………

三、注冊申報資料要求

（一）綜述資料…………………………………………………

（二）產(chǎn)品說明書………………………………………………

（三）擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說明………………………………

（四）注冊檢測…………………………………………………

（五）主要原材料研究資料……………………………………

（六）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料…………………

（七）分析性能評估資料………………………………………

（八）參考值（范圍）確定資料………………………………

（九）穩(wěn)定性研究資料 …………………………………………

（十）臨床試驗研究資料…………………………………………

四、名詞解釋……………………………………………………………

五、參考文獻(xiàn)……………………………………………………………

一、前言

本指導(dǎo)原則旨為注冊申請人準(zhǔn)備及撰寫流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑注冊申報資料提供指導(dǎo)，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料進行技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其它方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

二、范圍

本指導(dǎo)原則中“流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑”是指標(biāo)記有特定發(fā)光物質(zhì)（如熒光素、量子點等）、針對各類血細(xì)胞或組織細(xì)胞分化抗原的單克隆抗體試劑以及相關(guān)的質(zhì)控品和校準(zhǔn)品，這些抗體與血細(xì)胞或組織細(xì)胞的各類抗原分子特異性結(jié)合，與適用的流式細(xì)胞儀配套使用，對人血液、骨髓 液或其它體液組織標(biāo)本中的被標(biāo)記細(xì)胞或分子進行分類和計數(shù)。由于多方面差異，本文內(nèi)容將不包括預(yù)期用途為利用流式細(xì)胞術(shù)進行特異性目的細(xì)胞分選的檢測試劑。

本指導(dǎo)原則適用于進行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。

三、注冊申報要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、方法學(xué)特征、生物安全性評價、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（以下簡稱《辦法》）和《體外診斷試劑注冊申報資料形式與基本要求》（國食藥監(jiān)械[2007]609號）的相關(guān)要求。

流式細(xì)胞分析是一種在功能水平上對單細(xì)胞或其他生物粒子進行定量分析的檢測手段，可以在短時內(nèi)高速分析上萬個細(xì)胞，并能同時從一個細(xì)胞測得多個參數(shù)。流式細(xì)胞分析主要靠流式細(xì)胞儀和各種特定發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記的單克隆抗體試劑組合檢測來實現(xiàn)。流式細(xì)胞儀是集電子技術(shù)、計算機技術(shù)、激光技術(shù)、流體理論等技術(shù)原理于一體進行流式細(xì)胞分析的儀器，其工作原理為：將待測細(xì)胞或微粒進行特異性染色標(biāo)記后制成細(xì)胞懸液標(biāo)本，在一定氣體壓力下將待測樣品壓入流動室，用不含細(xì)胞或微粒的緩沖液（鞘液）在高壓下從鞘液噴出，包繞著細(xì)胞或微粒高速流動形成圓形流束（鞘流），依次通過流式細(xì)胞儀的檢測區(qū)域。被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。前向散射光（forward scatter,FSC）和側(cè)向散射光（side scatter,SSC）檢測器把散射光信號轉(zhuǎn)換成電信號，熒光則被聚光器收集，不同顏色熒光被雙色反光鏡轉(zhuǎn)向不同的光電倍增管（PMT）檢測器，把熒光信號轉(zhuǎn)換成電信號。散射光信號和熒光信號經(jīng)過放大后，再經(jīng)過數(shù)據(jù)化處理輸入電腦并儲存，根據(jù)散射光和熒光信號對細(xì)胞或微利進行分類或計數(shù)。其中，F(xiàn)SC反映了細(xì)胞體積的大小，SSC則反應(yīng)細(xì)胞部分結(jié)構(gòu)的信息；熒光信號強度代表了所測細(xì)胞膜表面抗原的強度或其細(xì)胞內(nèi)、核內(nèi)物質(zhì)的濃度。臨床流式細(xì)胞分析是將流式細(xì)胞分析技術(shù)與方法應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)，與臨床疾病的診斷、分型、治療、預(yù)后及預(yù)防等相結(jié)合的綜合應(yīng)用學(xué)科。其應(yīng)用范圍廣泛，包括細(xì)胞生物學(xué)、血液免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、感染性疾病、造血干細(xì)胞移植、器官移植等多個方面。臨床流式細(xì)胞分析要求實驗人員對整個分析系統(tǒng)、各種相關(guān)實驗技術(shù)和方法有深入理解和掌握，并能對檢測結(jié)果給予合理的醫(yī)學(xué)解釋。

（二）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、實驗操作方法、檢測結(jié)果解釋以及相關(guān)注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，也是體外診斷試劑注冊申報的重要文件之一。流式細(xì) 胞儀檢測專業(yè)性較強，對產(chǎn)品說明書的編制進行必要的指導(dǎo)顯得更為重要。該類產(chǎn)品說明書除對單克隆抗體試劑做必要的介紹外，還應(yīng)對樣本采集、樣本處理及保存、儀器校準(zhǔn)、檢測質(zhì)量控制、結(jié)果分析等相關(guān)步驟做詳細(xì)描述，以保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性及完整性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標(biāo)注，并單獨列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。結(jié)合相關(guān)法規(guī)要求及流式細(xì)胞分析的特性，下面對流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑說明書的重點內(nèi)容作詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【產(chǎn)品名稱】

單色試劑通用名稱建議采取以下命名方式：被檢標(biāo)志物名稱+檢測試劑盒（流式細(xì)胞儀法-熒光素）。多色試劑可以結(jié)合靶抗原、目標(biāo)細(xì)胞或組織、熒光素及臨床預(yù)期用途等信息綜合判斷。

2.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：（1）適用的樣本類型：如全血、骨髓液、組織細(xì)胞等，并明確對所需抗凝劑的要求。

（2）待測靶抗原的特征簡介，如分子結(jié)構(gòu)、分子量、產(chǎn)生和代謝主要途徑、表達(dá)細(xì)胞等。

（3）與被檢標(biāo)志物相關(guān)的臨床背景介紹、正常表達(dá)情況、異常表達(dá)的主要疾病、與其他抗原的共表達(dá)情況以及可能的醫(yī)學(xué)解釋等。

（4）強調(diào)：實驗操作人員應(yīng)接受過流式細(xì)胞儀檢測的專業(yè)培訓(xùn)，具備相關(guān)的實驗操作資格，實驗室應(yīng)具備合理的生物安全防備設(shè)施及防護程序。

3.【主要組成成份】

（1）主要是對特定熒光素標(biāo)記的單克隆抗體特征的描述，應(yīng)包括抗體特異性（CD標(biāo)志），雜交瘤細(xì)胞，免疫球蛋白特征（Ig鏈），純化方式，熒光激發(fā)及發(fā)射波長，偶聯(lián)的熒光素，抗體濃度以及其他非抗體成分組成及濃度。

（2）如包括多種不同熒光素標(biāo)記的單克隆抗體，則應(yīng)對不同的抗體分別列表詳述上述特征。

（3）建議將實驗需要但本試劑盒未提供的主要成分進行列舉：如與之配套使用的紅細(xì)胞溶解試劑，稀釋劑，細(xì)胞/血球計數(shù)儀等。

4.【儲存條件及有效期】

試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性等。以及當(dāng)試劑表面變化或變質(zhì)時情況的描述及相關(guān)警示。5.【樣本要求】

樣本采集和處理的目標(biāo)是獲得均勻的單細(xì)胞懸液，同時必須盡量保證細(xì)胞的活力和完整性，防止目標(biāo)細(xì)胞的損失。樣本操作不宜過度，避免對細(xì)胞結(jié)構(gòu)和抗原性造成破壞。故對于流式細(xì)胞分析而言，樣本處理對實驗結(jié)果至關(guān)重要，應(yīng)盡量減少由于樣本采集或處理不當(dāng)對實驗造成的影響。

在產(chǎn)品說明書中應(yīng)重點對以下內(nèi)容予以明確：（1）所需的樣本量、采樣方法（對抗凝劑或抗凝管的要求）及樣本采集的注意事項，盡量引述相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

（2）樣本處理：溶血洗滌（或非洗滌）、細(xì)胞分離和提純描述、離心和固定等方法；樣本保存、轉(zhuǎn)運的條件和方法。

（3）染色前穩(wěn)定性：即采樣后在合理的保存條件下，多長時間內(nèi)必須進行抗體標(biāo)記（染色）；如果不同抗凝劑樣本的穩(wěn)定時間有差異，則應(yīng)分別進行闡述。

（4）染色后穩(wěn)定性：即樣本在完成抗體標(biāo)記后至上機分析前可以穩(wěn)定保存的條件及期限。最好結(jié)合染色前穩(wěn)定性的要求對上機分析前的穩(wěn)定性進行綜合評價。

（5）避免使用的樣本類型，如有微生物污染、乳糜、凝集或細(xì)胞活力不達(dá)標(biāo)準(zhǔn)等，在一般情況下應(yīng)避免使用上述樣本，除非樣本有不可替代性，則應(yīng)說明處理該種樣本的方法，并應(yīng)在結(jié)果報告時明示。（6）達(dá)到最佳染色效果所要求的目標(biāo)細(xì)胞計數(shù)。①盡量采用公認(rèn)的國際或國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)操作方法進行細(xì)胞計數(shù)，保證計數(shù)準(zhǔn)確性；②詳述計數(shù)與預(yù)期不符時應(yīng)采取的處理方法（濃縮或稀釋等）；③提醒實驗操作人員細(xì)胞計數(shù)的注意事項。

（7）樣本活力要求及評估方法：為避免非活性細(xì)胞的非特異性結(jié)合，應(yīng)評估細(xì)胞活性并設(shè)定有活力細(xì)胞的百分比下限，并推薦相關(guān)的有活力細(xì)胞評估方法。

（8）優(yōu)化為最佳染色效果所需注意的重要信息；其他有關(guān)樣本采集、處理及保存的注意事項。

6.【適用機型】所有適用的儀器型號，如對配套用軟件有要求也應(yīng)做特別說明，并提供與儀器或軟件有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

7.【檢驗方法】對于流式細(xì)胞分析而言，實驗操作步驟對實驗結(jié)果的影響至關(guān)重要，因此，應(yīng)詳細(xì)說明達(dá)到最佳染色效果的實驗操作各個步驟，包括：

（1）試劑使用條件：溫度/濕度條件、試劑用量、染色時間、是否需無菌操作等。

（2）簡述試驗開始前流式細(xì)胞儀的設(shè)臵方法，校準(zhǔn)及質(zhì)控程序。

（3）詳細(xì)闡述試驗操作步驟、注意事項。如對照的設(shè)定方式及類別（同型陰性對照、陽性對照、正常人血細(xì)胞對 照等），設(shè)門方法舉例及代表性數(shù)據(jù)圖示；靶細(xì)胞分類計數(shù)的方法及步驟、計算公式以及相關(guān)注意事項。

（4）校準(zhǔn)：適用校準(zhǔn)品的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱及貨號等詳細(xì)信息，校準(zhǔn)品的使用方法、推薦的校準(zhǔn)周期及相關(guān)注意事項。

（5）質(zhì)量控制：適用質(zhì)控品的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱及貨號等詳細(xì)信息，質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，提示檢測結(jié)果不可靠，不應(yīng)出具檢測報告。如質(zhì)控不合格應(yīng)提供相關(guān)的解決方案。

8.【參考值（參考范圍）】

應(yīng)注明待測標(biāo)記細(xì)胞或分子在常用樣本類型的正常參考值（范圍），簡單介紹設(shè)定該參考值（范圍）所選健康人群的特征，如有必要，需對不同年齡段人群、不同性別或具有明確地理差異人群的參考值分別進行詳述。

建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考值（范圍）”。

9.【檢驗結(jié)果的解釋】

由于流式細(xì)胞儀分析技術(shù)的專業(yè)性較強，檢測過程中的影響因素較多且同一分析目標(biāo)在不同人群的表達(dá)復(fù)雜多樣，因此，流式細(xì)胞檢測的數(shù)據(jù)分析、結(jié)果解釋和出具臨床報告 經(jīng)常具有較大的挑戰(zhàn)性，結(jié)果解釋不當(dāng)可能對病人的診治造成很大影響。建議負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)解釋和出具報告的實驗人員需經(jīng)過正規(guī)的技術(shù)培訓(xùn)且有一定的臨床經(jīng)驗，二者結(jié)合有助于對實驗數(shù)據(jù)做出合理的醫(yī)學(xué)解釋。

產(chǎn)品說明書中的本部分內(nèi)容應(yīng)對上述情況進行必要的建議，還應(yīng)對設(shè)門方法、數(shù)據(jù)分析、異常值處理、臨床相關(guān)提示等內(nèi)容做出合理解釋。

10.【檢驗方法局限性】

（1）本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其它實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

（2）使用該試劑的其他限制，如樣本、保存方法、保存時間，特殊患者可能出現(xiàn)的不正確結(jié)果，儀器設(shè)臵不當(dāng)?shù)挠绊懙取?/p>

（3）是否與經(jīng)其他試劑或儀器獲得的同類數(shù)據(jù)具直接可比性。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 詳述以下性能指標(biāo)：

（1）精密度：簡要說明精密度評價的方法，建議以列表的方式列出批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間、運行內(nèi)/運行間精密度等信息，以標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）的形式表示精密度研究結(jié)果。

（2）線性：包括細(xì)胞計數(shù)濃度范圍和待測目標(biāo)物陽性 細(xì)胞百分比濃度范圍兩類，申請人應(yīng)至少對其中一個進行合理驗證并在此列出，簡要注明實驗方法、所用儀器及軟件等信息。

（3）對比試驗研究：簡要介紹參比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計學(xué)方法及統(tǒng)計分析結(jié)果、圖示。

（4）分析特異性：有關(guān)交叉反應(yīng)和干擾因素的驗證信息。如：對溶血、高脂、黃疸等內(nèi)源性干擾因子的濃度限值要求（如有必要），樣本中可能存在某些內(nèi)生物質(zhì)與待測抗原有相似化學(xué)結(jié)構(gòu)或抗原表位，如自身抗體、蛋白、激素或近期服用的某些藥物（如生物制劑），這些物質(zhì)可能與試劑中的單克隆抗體發(fā)生交叉反應(yīng)而影響檢測結(jié)果，如未進行相關(guān)研究也應(yīng)提供相關(guān)警示說明。

12.【注意事項】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

（1）生物安全性警告：接觸到的臨床樣本、質(zhì)控/校準(zhǔn)品、實驗廢棄物等材料應(yīng)當(dāng)作為潛在傳染物進行處理，并且采用符合法規(guī)的預(yù)防措施對其處理。

（2）有關(guān)儀器設(shè)臵的警示，如：流式細(xì)胞儀未經(jīng)正確校準(zhǔn)、熒光滲漏未行合理補償以及檢測區(qū)域（設(shè)門）未精確定位，則可能產(chǎn)生錯誤的檢測結(jié)果。

（3）有關(guān)試劑準(zhǔn)備的注意事項：如冷藏避光保存、切勿冷凍、使用前恢復(fù)室溫等

（4）針對某些白細(xì)胞濃度過高或過低的情況，在樣本 處理時需采用的特殊處理方式，如血樣稀釋或細(xì)胞濃縮等操作。

（5）試劑特殊成分或操作使用試劑危害性的警告及注意事項：如疊氮化鈉、甲醛等；使用不當(dāng)?shù)奶幚矸绞?/p>

（6）保證試驗結(jié)果準(zhǔn)確的其他操作注意事項。

（三）擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說明

擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合《辦法》和《體外診斷試劑注冊申報資料基本要求》的相關(guān)規(guī)定。另外，對于國產(chǎn)第三類體外診斷試劑，應(yīng)參考《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），將擬申報產(chǎn)品的主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定等內(nèi)容作為附錄附于標(biāo)準(zhǔn)正文后，并在正文的“產(chǎn)品分類”項中引出該附錄內(nèi)容。

該類產(chǎn)品注冊檢測的技術(shù)要求主要包括：準(zhǔn)確度、線性、精密度、染色穩(wěn)定性等相關(guān)指標(biāo)，具體要求的設(shè)臵應(yīng)參考相關(guān)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（如有）執(zhí)行，企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求不得低于國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。

（四）注冊檢測

對于首次注冊產(chǎn)品，申請人擬定申報產(chǎn)品的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)后，應(yīng)當(dāng)在國家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行連續(xù)3個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢測。

對于已經(jīng)有國家參考品的流式細(xì)胞檢測項目，在注冊檢 測時應(yīng)采用相應(yīng)的國家參考品進行,對于目前尚無國家參考品的項目，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立自己的質(zhì)控體系并提供相應(yīng)的內(nèi)部參考品。

（五）主要原材料研究資料

應(yīng)提供主要原材料如單克隆抗體、標(biāo)記熒光素的選擇、來源、制備過程、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)檢報告等研究資料。若主要原材料為企業(yè)自行生產(chǎn)，則應(yīng)詳述原材料（主要是單克隆抗體）的制備及生產(chǎn)過程、雜交瘤細(xì)胞的選擇、技術(shù)指標(biāo)、質(zhì)量控制、國際相關(guān)權(quán)威機構(gòu)（如國際人類白細(xì)胞分化抗原協(xié)作組織，HLDA）的認(rèn)證情況（如有）等；如主要原材料來自外購，則應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，外購方名稱，提交外購方出具的有關(guān)單克隆抗體后雜交瘤細(xì)胞的性能分析或檢驗證書，詳述申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。對熒光染色方法、染料選擇依據(jù)，多色標(biāo)記中熒光的交叉重疊驗證等研究。

（六）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1、生產(chǎn)工藝的研究資料主要包含：

（1）主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式（工藝流程圖）表示。

（2）生產(chǎn)工藝中關(guān)鍵步驟的質(zhì)量控制要求及質(zhì)控方法。（3）生產(chǎn)工藝的確定資料，如：生產(chǎn)工藝的選擇依據(jù)，生產(chǎn)工藝的優(yōu)化過程及方法等。

2、反應(yīng)體系的研究資料主要包含：（1）反應(yīng)原理介紹。

（2）產(chǎn)品說明書中描述的最佳反應(yīng)條件各步驟的確定方法，包括需要的樣本體積、樣本的處理、保存時間，反應(yīng)時間、溫度的確定、抗體的用量（重要）、是否需反向加樣、溶血/洗滌操作、去除干擾等。

（3）如產(chǎn)品說明書中使用了其他前處理試劑或流式細(xì)胞儀、儀器設(shè)定方法、或分析軟件等達(dá)到最佳反應(yīng)條件，則應(yīng)將使用這些試劑或儀器的研究內(nèi)容包含至該項資料中。

（4）應(yīng)說明配合該產(chǎn)品所使用的分析方法并進行驗證，如不同平臺方法、不同軟件分析、操作注意事項等。

（5）不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。（6）質(zhì)量控制：同型陰性對照、正常成人樣本對照、商業(yè)化陽性質(zhì)控品、熒光信號與散射光結(jié)合對各細(xì)胞群的確認(rèn)等。

（七）分析性能評估資料

企業(yè)應(yīng)提交原廠在產(chǎn)品研制階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，對于每一項性能的評價，都應(yīng)包括研究目的、實驗設(shè)計、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、所用軟件、臨床樣本來源等。對用于多色流式細(xì)胞分析的試劑（如 CD3/CD4/CD8淋巴細(xì)胞亞群檢測試劑），其待測每個指標(biāo)（如CD3、CD4和CD8三個指標(biāo)）的所有分析性能均應(yīng)分別進行相關(guān)的驗證。分析性能評價的實驗方法可以參考相關(guān)的CLSI-EP文件或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行。

1.準(zhǔn)確度

對測量準(zhǔn)確度的評價主要包括：與國家標(biāo)準(zhǔn)品（和/或國際標(biāo)準(zhǔn)品）的偏差分析和方法學(xué)比對兩種方法，企業(yè)可根據(jù)實際情況選擇合理方法進行研究。

（1）國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品的檢測及偏倚情況 如果研究項目有相應(yīng)國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品，則使用國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品進行驗證，重點觀察對相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果的偏差情況。

（2）方法學(xué)比對

采用國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品，從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。

在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量 標(biāo)準(zhǔn)后方可進行比對試驗。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本采集及處理的差異、濃度分布范圍及不同濃度范圍的可接受標(biāo)準(zhǔn)及合理的統(tǒng)計學(xué)分析等要素。

2.精密度：

精密度是指在規(guī)定的檢測條件下，相互獨立的測試結(jié)果間的一致程度，本類試劑的精密度評價主要考慮細(xì)胞計數(shù)結(jié)果和熒光強度兩方面。建議采用多個水平的質(zhì)控品用于細(xì)胞計數(shù)精密度的評價，各個濃度均應(yīng)在試劑盒的線性范圍內(nèi)且有一定的臨床意義（醫(yī)學(xué)決定水平），通常包括該檢測指標(biāo)的正常范圍、異常低值和高值樣本。對于質(zhì)控品或校準(zhǔn)品的精密度評價，應(yīng)包括其所有質(zhì)控或校準(zhǔn)項目，如熒光信號及散射光要求等。

在進行精密度評價時，除申報試劑本身的影響外，還應(yīng)對操作者、適用機型、不同軟件及實驗地點等要素進行相關(guān)的驗證。企業(yè)應(yīng)制定合理的精密度評價方案，例如：在每個適用機型上進行至少20天的連續(xù)檢測，每天至少由2人完成不少于2次的完整運行，每天內(nèi)兩次運行間的時間間隔不少于3小時，從而對批內(nèi)/批間、日間、運行內(nèi)/運行間、不同操作者間的精密度以及各變量綜合的總精密度進行評價。除精密度質(zhì)控品外，建議選擇適量臨床采集的新鮮病人樣本（包括所有適用樣本類型）作為無靶值質(zhì)控品進行精密度評價，以更好地模仿臨床檢測環(huán)境。3.線性范圍：

本類產(chǎn)品線性主要包括稀釋細(xì)胞濃度范圍和標(biāo)記抗體陽性細(xì)胞的百分率范圍兩種線性范圍。企業(yè)可根據(jù)實際需要及以往的研究習(xí)慣自行選擇其中一種對線性的要求進行驗證。企業(yè)應(yīng)對每個測量參數(shù)建立合理的線性范圍，在建立一個參數(shù)的線性范圍時，應(yīng)該盡量將預(yù)期測定范圍加寬，在合理范圍內(nèi)選擇7-11個濃度水平，每個水平2-4份復(fù)制液，取每個濃度水平重復(fù)測量的均值用于線性回歸分析，依據(jù)實驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出最寬的線性范圍，擬合回歸直線的判定系數(shù)（R）應(yīng)大于0.95。

建立稀釋細(xì)胞濃度線性范圍時，所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，建議采用混合血漿或自體血漿進行稀釋，同時應(yīng)考慮多倍稀釋可能造成的基質(zhì)效應(yīng)。對于標(biāo)記抗體陽性細(xì)胞百分率的線性范圍，建議企業(yè)選擇經(jīng)確認(rèn)的陽性細(xì)胞株和陰性細(xì)胞株按照恒定的細(xì)胞總數(shù)將兩種細(xì)胞進行不同比率的混合，陽性細(xì)胞數(shù)與陰性細(xì)胞數(shù)比例可以從0%到100%不等，從而確認(rèn)合理的有關(guān)陽性細(xì)胞百分率的線性范圍。

4．特異性：

（1）采用多種方法對申報抗體與靶抗原結(jié)合的特異性驗證研究，如采用競爭性抑制法、抗體與抗原純品的結(jié)合研究、免疫印跡技術(shù)或胞膜抗原的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)等方法對抗原

2抗體結(jié)合的特異性進行相關(guān)的驗證；有關(guān)靶抗原的細(xì)胞或組織分布特異性的研究，如抗體與不同細(xì)胞系的反應(yīng)譜等。

（2）交叉反應(yīng)性：驗證所申報單克隆抗體除與目標(biāo)抗原的結(jié)合外，是否與樣本中可能存在其它內(nèi)生或外源物質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)，如與待測抗原有相似化學(xué)結(jié)構(gòu)或抗原表位的蛋白、激素或近期服用的某些藥物等。

（3）干擾：本處所指的干擾是指經(jīng)過生產(chǎn)商指定的樣本處理方法后，檢測時是否還存在其他影響結(jié)果干擾因素或干擾物質(zhì)。如有，生產(chǎn)商應(yīng)進行說明并驗證，使用醫(yī)學(xué)相關(guān)水平的干擾物濃度進行驗證，另外，亦建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(“最差條件”)條件下進行評價。

（八）參考值（范圍）確定資料

應(yīng)詳細(xì)描述用于參考值（范圍）確定健康人群的地域、年齡、性別等特征，并對統(tǒng)計分析方法進行詳細(xì)解釋?？梢詤⒖紘鴥?nèi)或國際有關(guān)參考值（范圍）制定的指南文件推薦的方法進行。不同種族、年齡或性別人群如有明顯差異應(yīng)分別進行相關(guān)的統(tǒng)計分析并設(shè)臵不同的參考值（范圍）。

（九）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、高溫加速破壞穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性以及開瓶穩(wěn)定性等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方 案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

樣本穩(wěn)定性主要考慮染色前和染色后穩(wěn)定性，前者是指樣本采集后至染色（標(biāo)記）前的穩(wěn)定性，后者是指染色（標(biāo)記）后到上機分析前的穩(wěn)定性。樣本染色前、染色后穩(wěn)定性需結(jié)合試劑的穩(wěn)定性研究綜合進行考慮?？梢栽诤侠淼臏囟确秶鷥?nèi)選擇多個時間點（應(yīng)至少包括范圍的上限和下限溫度），每間隔一定的時間段對采集樣本或標(biāo)記后樣本進行全性能的分析驗證，從而確認(rèn)樣本染色前和染色后的合理保存條件和有效期。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細(xì)說明。

（十）臨床試驗研究 1.樣本例數(shù)

考慮到流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑種類繁多、臨床用途廣泛但主要原料、生產(chǎn)工藝及檢測原理等非常相似的特點，該類試劑臨床試驗研究的總樣本數(shù)為不少于500例。

2.臨床研究單位的選擇

流式細(xì)胞儀配套用檢測試劑的臨床研究應(yīng)在三家以上（含三家）省級醫(yī)療衛(wèi)生單位進行，對于特殊使用目的產(chǎn)品可以在相應(yīng)的市級以上專科醫(yī)院或其它診療機構(gòu)開展臨床研究。建議在國內(nèi)不同城市選擇臨床單位，盡量使各單位的臨床樣本有一定地域代表性；臨床研究單位須具有流式細(xì)胞儀專業(yè)的技術(shù)人員及相應(yīng)的儀器設(shè)備，確保該項研究的實施。實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，定期對儀器進行校準(zhǔn)，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。流式細(xì)胞儀檢測的專業(yè)性較強，實驗操作人員須接受過流式細(xì)胞儀技術(shù)的專業(yè)培訓(xùn)，并經(jīng)過考核合格后上崗，具備實驗室檢測和臨床病情相結(jié)合的流式細(xì)胞儀相關(guān)的檢測經(jīng)驗，3.研究方法

（1）境內(nèi)已有同類試劑批準(zhǔn)上市產(chǎn)品的臨床研究： 選擇中國境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對照試劑，采用擬申報產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進行對比試驗研究，證明考核試劑與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。

（2）境內(nèi)尚無同類試劑批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品臨床研究： 可以選擇國外已上市、普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對照試劑，采用考核試劑與之進行對比試驗研究，證明本 品與對照試劑等效或優(yōu)于對照試劑。同時，還應(yīng)結(jié)合每個患者的臨床病情對申報試劑的檢測結(jié)果進行綜合判斷，如有必要，需對研究對象進行相關(guān)的跟蹤監(jiān)測研究，以綜合判斷申報試劑的檢測結(jié)果，驗證其與臨床病情的一致性。

4.試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設(shè)臵應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

5.臨床病例選擇

絕大多數(shù)采用流式細(xì)胞儀方法檢測的血細(xì)胞或組織細(xì)胞抗原對于疾病診斷的靈敏度和特異性較低，與器官/組織定位、疾病良惡性區(qū)分以及與病情的進展程度雖有一定關(guān)聯(lián)但多無明確的量值-病情相關(guān)關(guān)系，而且，多數(shù)情況下，該類試劑在用于病變的診療時需要多個標(biāo)記物組合檢測才能體現(xiàn)其臨床意義。因此，在進行臨床研究時，除有針對性選擇目的性較強的病例外，還應(yīng)選擇部分其他相關(guān)的抗原表達(dá) 類似或需鑒別診斷的病例。

臨床研究試驗中應(yīng)包括對部分來自正常健康人群的樣本作為正常對照。驗證試劑的正常參考值（范圍），比較正常組和疾病組結(jié)果，以便對申報產(chǎn)品的臨床性能做出全面分析。建議對健康人群例數(shù)的選擇以不超過50例為宜。對于新試劑或臨床意義有待明確的試劑，可適當(dāng)增加正常樣本數(shù)。不管是健康人群或不同病種的患者，每一組受試者的最小入選人數(shù)均須滿足統(tǒng)計學(xué)分析的基本要求。

6.結(jié)果差異樣本的驗證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑的檢測結(jié)果有明顯差異的樣本，應(yīng)采用臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的第三種同類試劑或其他標(biāo)準(zhǔn)方法進行驗證試驗，同時結(jié)合患者的臨床病情對差異原因及可能結(jié)果進行分析。

7.統(tǒng)計方法：對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析、線性回歸、ROC曲線分析等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對實驗試劑和對照試劑的兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R）、回歸方程斜率及y軸截距等指標(biāo)。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價實驗試劑與對照試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

8.臨床試驗結(jié)果報告

根據(jù)《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，2臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。

（1）臨床試驗總體設(shè)計及方案描述

①臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；

②病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同病種的預(yù)期選擇例數(shù)及健康人群的選擇標(biāo)準(zhǔn)；

③樣本類型，樣本的收集、處理及保存等； ④統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。（2）具體的臨床試驗情況

①考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息；

②對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比；

③質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估；

④具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。

（3）統(tǒng)計學(xué)分析 ①數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

②相關(guān)性和一致性分析

用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R是判定系數(shù)，同時應(yīng)給出b的95%（或99%）臵信區(qū)間，定量值結(jié)果應(yīng)無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。

另外考慮到某些檢測指標(biāo)在不同的樣本濃度區(qū)間、不同年齡段人群或不同疾病來源的樣本可能有較明顯的差異，因此，如有必要，建議以上述相關(guān)要素為依據(jù)分組并對各組數(shù)據(jù)分別進行統(tǒng)計分析，以更好的驗證兩種試劑的相關(guān)性。

（4）討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

225

四、名詞解釋

1.準(zhǔn)確度（accuracy）：一個測量值與可接受的參考值間的一致程度。

2.精密度（precision）：在規(guī)定條件下，相互獨立的測試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計學(xué)方法得到的測量不精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。

3.線性（linearity）：在給定測量范圍內(nèi)，給出的測量結(jié)果與樣品中實際存在的被測量物的值成比例的能力。線性是描述一個測量系統(tǒng)的測量示值或測量結(jié)果相關(guān)于樣本的賦值符合直線的屬性。

4.分析特異性（analytical Specificity）：測量程序只測量被測量物的能力。分析特異性用于描述檢測程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學(xué)相關(guān)濃度值水平的分析干擾程度（潛在干擾物包括干擾物和交叉反應(yīng)物）。

五、參考文獻(xiàn)：

1.《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（國食藥監(jiān)械[2007]229號）

2.《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》（國食藥監(jiān)械[2007]240號）

3.《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國食藥監(jiān)械[2007]240號）

4.NCCLS EP9-A2：Method Comparison and Bias Estimation Using

Patient

Samples;

Approved Guideline-Second Edition(September 2002).5.NCCLS

EP5-A2:Evaluation

of

Precision Performance of Clinical Chemistry Devices;Approved Guideline-Second Edition(August 2004).6.NCCLS EP6-A: Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach;Approved Guideline.7.H20-A2:Reference Leukocyt(WBC)Differential Count(Proportional)and Evaluation of Instrumental Methods;Approved Standard—Second Edition.8.H42-A2:Enumeration of Immunologically Defined Cell Populations by Flow Cytometry;Approved Guideline—Second Edition.9.H43-A2:Clinical Flow Cytometric Analysis of Neoplastic

Hematolymphoid

Cells:

Approved Guideline—Second Edition.10.H44-A2: Methods for Reticulocyte Counting(Automated Blood Cell Counters, Flow Cytometry, and Supravital Dyes);Approved Guideline—Second Edition.11.H52-A: Fetal Red Cell Detection;Approved Guideline.12.ILA26-A: Performance of Single Cell Immune Response Assays;A pproved Guideline.13.王建中：《臨床流式細(xì)胞分析》，上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社

14.杜立穎，馮任青：《流式細(xì)胞術(shù)》，北京大學(xué)出版社 15.馮仁豐，《臨床檢驗質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)》（第二版），上海科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社

16.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社

第三篇：體外診斷試劑申報資料技術(shù)審評要求

體外診斷試劑申報資料技術(shù)審評要求及常見問題

安娟娟主講

裝訂成冊

首頁目錄、按順序排列，加分隔頁，資料編號 一式一份（說明書，標(biāo)準(zhǔn)均一式兩份）A4打印，內(nèi)容完整清晰，不得涂改 各項申報資料內(nèi)容一致 中外文資料，提交翻譯件 產(chǎn)品名稱符合要求 提交要求的電子版

部分診斷試劑產(chǎn)品，尤其是進口注冊產(chǎn)品，命名不符合要求，可能會產(chǎn)生發(fā)補和延期

企業(yè)發(fā)布的資料里，企業(yè)要注意提供可編輯功能的WORD電子版。這樣可以減少評審人員工作量，加快審評速度

申請表是一份很重要的文件資料，所有評審均以申請項目為依據(jù)，不要出現(xiàn)打字錯誤。境外申請人項目用英文填寫，申請表一經(jīng)提交，不得更改。

企業(yè)在填寫的過程中，對電子上報資料要特別注意上述問題，避免在注冊過程中變更一些注冊事項。審評過程中，不允許增加該產(chǎn)品的適用范圍、規(guī)格等事項。

證明性文件

生產(chǎn)企業(yè)資質(zhì)證明文件有產(chǎn)品類別描述，應(yīng)覆蓋申報產(chǎn)品

注意生產(chǎn)企業(yè)名稱、地址等信息與申請表或體系資料等不一致的情況：比如企業(yè)生產(chǎn)地址與總部地址差異的問題;或者分公司情況 資質(zhì)證明文件，注意有效期

境外上市文件，應(yīng)為申請人所在國（地區(qū)）批準(zhǔn)該產(chǎn)品在本國（地區(qū)）上市的證明 上市文件應(yīng)完整并公正，如有變更應(yīng)提交原產(chǎn)國注冊管理機構(gòu)批準(zhǔn)變更的證明

(樂爸：個人理解，與進口商充分溝通，了解進口產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)情況。需要說明的內(nèi)容及時利用CFG等渠道進行必要說明，避免信息不全或信息失真所導(dǎo)致的審批困難。)

對境外無需獲得醫(yī)療器械上市許可的產(chǎn)品應(yīng)提交該產(chǎn)品不作為醫(yī)療器械管理的證明文件 對于豁免上市的，應(yīng)該依據(jù)法規(guī)要求提交相關(guān)資料

證明文件中，產(chǎn)品名稱，包裝規(guī)格，預(yù)期用途等應(yīng)與申報產(chǎn)品相同 涉及企業(yè)合并收購等情況應(yīng)提供相關(guān)證明性文件 提供國外產(chǎn)品上市批件，需要提供批件的附件 同時提供

如果產(chǎn)品在國外有多次變更的，希望注冊申報時把所有的批件交全

涉及企業(yè)合并收購等情況應(yīng)提供相關(guān)證明性文件——部分企業(yè)在510K批件情況下，企業(yè)合并收購等情況下原公司信息可能不會更改 所以需要提供額外資料說明情況

歐盟認(rèn)證情況下，注意批件資料的充分性

比如list A 批批檢產(chǎn)品應(yīng)該提供產(chǎn)品的批批檢報告 綜述資料

產(chǎn)品預(yù)期用途——用途，臨床背景，相關(guān)方法

產(chǎn)品描述——技術(shù)原理，原材料，生產(chǎn)工藝，質(zhì)控校準(zhǔn)溯源

生物安全性說明——人源材料，牛羊源性，其他動物源及微生物來源，病毒滅活措施及證明文件 產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價——主要研究結(jié)果總結(jié)，產(chǎn)品評價 其他——同類產(chǎn)品上市情況，技術(shù)方法及臨床應(yīng)用，與同類產(chǎn)品異同，新產(chǎn)品預(yù)期用途文獻(xiàn)

綜述資料不是索引，該描述的內(nèi)容需要進行描述，不能因為其他資料中有相同內(nèi)容就不做。綜述資料寫的質(zhì)量好壞，決定主審人員對申報資料的評審態(tài)度（應(yīng)該來說，他們第一眼看的就是綜述資料，并通過綜述資料整理對產(chǎn)品的概念）

“其他”這部分內(nèi)容，大家在提交資料過程中要特別重視

說明技術(shù)及同類產(chǎn)品的來龍去脈，講清楚自己的產(chǎn)品技術(shù)與同類或現(xiàn)應(yīng)用技術(shù)的異同點，并對自己產(chǎn)品所使用技術(shù)的情況做好評估。

不同方法學(xué)之間，彼此差異及特點。以及在本項目檢測過程中所具有的特性。綜述資料應(yīng)按照法規(guī)要求，逐條展開。

安全性評價說明，尤其是牛源性材料的來源及安全性說明要重視 產(chǎn)品說明書部分

符合指導(dǎo)原則要求，批準(zhǔn)的說明書作為附件隨注冊證發(fā)給企業(yè)，并蓋章。

境外說明書，應(yīng)提供原文說明書，翻譯中文說明書，以及按法規(guī)要求的格式化說明書

如果原本產(chǎn)品在原產(chǎn)國不需要說明書，在國內(nèi)注冊時還是需要按法規(guī)要求制作格式化的說明書 翻譯的中文說明書，其內(nèi)容應(yīng)與原文說明書完全一致，不得刪改任何內(nèi)容

說明書中所聲稱的所有內(nèi)容，均應(yīng)在注冊申報資料中有相關(guān)數(shù)據(jù)支持，如果數(shù)據(jù)來自參考文獻(xiàn)，應(yīng)在說明書中提供參考文獻(xiàn)出處。

過于籠統(tǒng)的內(nèi)容，比如流感試劑。檢測流感A或B。在預(yù)期用途中需要將能夠檢出的毒株列明（安娟娟舉的例子）

注冊標(biāo)準(zhǔn)（文本符合GB/T 1.1）

即使采用國標(biāo)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)未產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的，還是應(yīng)當(dāng)做一個適合自己企業(yè)的一個標(biāo)準(zhǔn) 進口產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包含英文版和中文版，相關(guān)信息應(yīng)與說明書一致。明確對國行標(biāo)的引用，檢測項目技術(shù)要求應(yīng)與說明書技術(shù)參數(shù)要求相符

國行標(biāo)的動態(tài)，企業(yè)在目前國行標(biāo)加速發(fā)布的情況下應(yīng)及時跟進國行標(biāo)的發(fā)布/更新情況 避免因為國行標(biāo)的更新或者發(fā)布對企業(yè)正在進行的產(chǎn)品注冊工作的影響 國產(chǎn)第三類產(chǎn)品應(yīng)該參照《生物制品規(guī)程》來寫 原材料、半成品要求作為標(biāo)準(zhǔn)附錄形勢添加 標(biāo)準(zhǔn)正文中引出附錄內(nèi)容

原料不同廠家，不同來源的性能可能差距較大，所以應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)中寫明，并在后續(xù)變更的情況下及時按要求進行變更

藥品轉(zhuǎn)器械產(chǎn)品，并執(zhí)行試行規(guī)程的，必須先對規(guī)程進行轉(zhuǎn)正后，再進行藥轉(zhuǎn)械。試行標(biāo)準(zhǔn)必須轉(zhuǎn)正，非常重要。

檢測報告部分內(nèi)容

三類要求連續(xù)三批

二類產(chǎn)品實際上要充分考慮批間差計算所需批次要求

企業(yè)送樣檢測時，需要確認(rèn)檢測單位對該項目的檢測能力及承檢范圍

檢測報告，如有新的國行標(biāo)實施，在將側(cè)過程中應(yīng)執(zhí)行，執(zhí)行日期以檢測報告中的送檢日期為準(zhǔn)。

重新注冊及變更注冊過程中，法規(guī)未要求注冊檢驗。但當(dāng)企業(yè)編制產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)發(fā)生改變時應(yīng)當(dāng)提交符合標(biāo)準(zhǔn)的注冊檢驗報告。如被檢項目有國家標(biāo)準(zhǔn)品，注冊檢驗應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品。

企業(yè)應(yīng)當(dāng)管制檢測中心檢測過程中對標(biāo)準(zhǔn)的意見和建議，法規(guī)給了相應(yīng)的責(zé)任，且檢測中心需要對國行標(biāo)的執(zhí)行情況進行跟進。所以，他們意見企業(yè)應(yīng)充分參考 國家標(biāo)準(zhǔn)品的問題，中檢所負(fù)責(zé)國家標(biāo)準(zhǔn)品的制備發(fā)放等等

如果有國家標(biāo)準(zhǔn)品，但企業(yè)未使用的，審評過程需要企業(yè)重新進行注冊檢驗或符合性檢驗。標(biāo)準(zhǔn)的印制問題——今年6月實施的標(biāo)準(zhǔn)最近剛剛印刷完成，大家保持關(guān)注 企業(yè)應(yīng)當(dāng)主動關(guān)注國行標(biāo)的動態(tài)，以保證產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)與國行標(biāo)的一致性

重新注冊及變更申請未要求注冊檢驗 但當(dāng)企標(biāo)發(fā)生改變時應(yīng)當(dāng)提交標(biāo)準(zhǔn)的驗證報告

即交一份企業(yè)自己的驗證報告，證明所改變的方法是成立的

國家標(biāo)準(zhǔn)品升級換代，重新注冊時應(yīng)有一個符合新panel的符合性報告

主要原材料的研究資料

主要原材料選擇過程中，應(yīng)通過相應(yīng)數(shù)據(jù)證實原材料優(yōu)選依據(jù) 相關(guān)數(shù)據(jù)，也應(yīng)該寫到主要原材料選擇的資料中 如果同一原料，選擇多個供應(yīng)商情況

可能出現(xiàn)多種配合檢驗的情況，所以申報資料難度加大 如果真的是自己研發(fā)的，這些都是現(xiàn)成的資料

質(zhì)控需要有定值的過程

溯源如何來做？

1.按照國行標(biāo)有關(guān)溯源要求 2.中檢所現(xiàn)有國家標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)化

原材料無論外購還是生產(chǎn)的，都應(yīng)該具有詳盡的質(zhì)量要求 外購校準(zhǔn)品應(yīng)提交具體試驗資料

在任何產(chǎn)品設(shè)計過程中，輸入輸出過程檢驗碧波可少。主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究資料

本部分內(nèi)容要求的是技術(shù)資料，不是任何陳述或者描述性文字

工藝資料應(yīng)該按照法規(guī)要求提交完整資料，不得使用簡單的圖表進行概述 分析性能評估資料

分析性能評估與標(biāo)準(zhǔn)檢測不是一個概念，是研發(fā)過程中一個操作

進口產(chǎn)品按照NCCLS的EP要求來做，建議國內(nèi)企業(yè)參考EP要求進行，但并不強制 可以比注冊標(biāo)準(zhǔn)簡單，但應(yīng)提供盡量詳盡的技術(shù)資料

不同產(chǎn)品，應(yīng)該根據(jù)產(chǎn)品特性訂合理的性能要求，并在研發(fā)基礎(chǔ)上將分析性能確立下來 注意問題

1.不同適用機型，不同包裝規(guī)格。提交每個規(guī)格的性能評估，適用機型必須寫型號，不能寫系列

不同包裝規(guī)格僅僅是不同裝量問題，目前按照國家法規(guī)來做，有任何問題建議與國家局溝通 參考值，參考范圍確定資料

可以通過文獻(xiàn)得到參考范圍，也可以通過一定范圍人群試驗得到驗證結(jié)論 但均需要在說明書中進行明確

CUT-OFF值需要進行驗證

CUT-OFF值的確立，需要進行試驗得出驗證結(jié)論 穩(wěn)定性研究資料 要求：

1.在說明書聲稱的條件下，留樣。長期穩(wěn)定性

2.產(chǎn)品運輸?shù)炔焕麠l件下可能產(chǎn)生的影響、溫濕度震動等，可以模擬條件 3.開瓶后上機（如有），可能會有積累的穩(wěn)定性

其他根據(jù)產(chǎn)品特性來看，必要時提交加速破壞試驗； 做半年，提交注冊資料，然后接著做再變更是可以的 穩(wěn)定性，至少三批。每批都要做到聲稱的有效期后。

凡是說明書中，對標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控品有額外的開瓶穩(wěn)定性要求，應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)和研究資料中單獨提出。臨床試驗部分

省級以上衛(wèi)生機構(gòu)，比16號令放寬 中心情況：不是省級機構(gòu)但是藥理基地，需要蓋藥理機構(gòu)章，可以接受

?？漆t(yī)院等特殊情況，不能濫用。應(yīng)特指一些特殊產(chǎn)品。在選擇單位時應(yīng)優(yōu)先考慮省級以上醫(yī)療單位 特殊傳染病在有些疾控中心可以做，但也可能要求增加臨床單位臨床數(shù)據(jù) 比如H1N1,雖然很多企業(yè)都在CDC做。但最后都被要求補充臨床單位病例 肝炎艾滋產(chǎn)品允許三家里有一家是中檢所 戒毒中心僅限毒品檢測

臨床數(shù)量，臨床標(biāo)本數(shù)量不足的情況下可以多選醫(yī)院

倫理委員會——可以只通過牽頭單位倫理委員會，如果不通過倫理，必須由醫(yī)院出具不需要倫理的證明 臨床具體樣本數(shù)量并不是首要因素。臨床樣本選擇、人群選擇，干擾樣本的科學(xué)選擇比較重要。臨床試驗機構(gòu)簽章指臨床試驗機構(gòu)公章，和/或臨床試驗主管部門公章

臨床前檢驗報告，可以是企業(yè)自檢報告，目的是保證用于臨床的產(chǎn)品，其質(zhì)量滿足產(chǎn)品的質(zhì)量要求。生產(chǎn)及自檢記錄內(nèi)容，一般沒什么問題，但進口產(chǎn)品往往會僅提交成品檢驗報告，不行的。包裝標(biāo)簽樣稿，應(yīng)提交每種包裝規(guī)格包裝標(biāo)簽樣稿

體系考核報告覆蓋 誰考核向誰申請覆蓋 重新注冊部分

重點：體系有效，不良事件情況

重新注冊合并變更申請，必須在申請表中提出，目前國內(nèi)法規(guī)要求不盡詳細(xì)，因此企業(yè)應(yīng)以法規(guī)未依據(jù)，明確變更申請項目，讓評審人員了解企業(yè)變更具體內(nèi)容 說明書作為注冊證附件，所以說明書有任何修改都視為變更（樂爸個人理解：企業(yè)應(yīng)注意規(guī)避重新注冊合并變更情況；如無法規(guī)避則需要明確并保證藥監(jiān)局能夠理解）許可事項變更

進口產(chǎn)品注意國外產(chǎn)品哪些變更屬于國內(nèi)法規(guī)要求的許可事項變更？

說明書的改變，無論許可事項還是行政事項改變，都要按照變更來做，不能按說明書備案來做。增加適用機型

升級儀器產(chǎn)品，需要按照新增適用機型來進行 增加臨床測定用樣本類型——

如果適用的樣本類型有很大差異，不建議在同一個注冊單元來做

對于血清、血漿等樣本，可能存在符合性驗證差異并不大的情況，但對于定量檢測產(chǎn)品而言，往往不太可能。

注意問題——針對變更申請環(huán)節(jié) 1.變更事項要明確

2.提交對應(yīng)詳細(xì)的試驗資料

3.提交變更前后說明書與標(biāo)準(zhǔn)的對比表 4.充分認(rèn)識產(chǎn)品變更的復(fù)雜性 常見問題：

1.一致性問題，涉及面廣。對每一種情況的描述在不同的申報資料中均應(yīng)該保持一致，甚至有些明顯是拿先前資料直接替換。出現(xiàn)這種問題的資料，評審老師會特別關(guān)注。企業(yè)在提交資料中，很明顯的錯誤應(yīng)該盡量避免

2.收到補充資料后應(yīng)當(dāng)按要求補充齊全，并一次性提對不清楚的問題可以按照中心咨詢的規(guī)定進行咨詢 如果企業(yè)補充資料時，不能夠一次性補齊又缺乏必要溝通的可以按照退審處理。

如果主審提出的問題不合理，可以進行交流，但不能夠?qū)υu審中心主審人員提出的問題置之不理。企業(yè)咨詢應(yīng)遵守審評中心規(guī)定時間要求 企業(yè)注冊申報資料，不可以反復(fù)修改

企業(yè)在遞交注冊資料前，應(yīng)對資料內(nèi)容及關(guān)鍵項目進行仔細(xì)的核查，如果在審評過程中應(yīng)盡量避免隨意變更的情況，如有必要的變化，需要先與諸神人員溝通。

臨床簽章，藥理基地章醫(yī)院章聯(lián)合醫(yī)政處的章可以，單純檢驗科章不可以接收。

不能因為自己產(chǎn)品的某個問題某次沒有被評審老師發(fā)現(xiàn)而認(rèn)為是評審中心的默許，目前在增強評審力量，評審內(nèi)容也在逐漸趨于細(xì)致。其他問題：

1.審評中心僅針對產(chǎn)品技術(shù)資料審評，體系考核或者其它問題應(yīng)按照法規(guī)要求自行或找相應(yīng)部門解決

省級醫(yī)院——醫(yī)院執(zhí)業(yè)許可證上主管部門為省級衛(wèi)生機構(gòu)的

為統(tǒng)一審評尺度，三處會加快指導(dǎo)原則的編寫，會及時公布的

第四篇：孕酮檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

附件3 孕酮檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對孕酮檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對孕酮檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍 從方法學(xué)考慮，在本文中孕酮檢測試劑是指采用化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，以競爭法為基本原理，利用全自動、半自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，在醫(yī)學(xué)實驗室對人體樣本中孕酮的含量進行體外定量分析的試劑。依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、《體外診斷試劑注冊管理辦法修正案》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第30號）和《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），孕酮檢測試劑管理類別為Ⅱ類醫(yī)療器械，分類編碼為6840。

本指導(dǎo)原則不適用于：

（一）單獨申請注冊的孕酮校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。

（二）化學(xué)發(fā)光免疫分析法原理之外的其他孕酮檢測試劑。

二、注冊申報材料要求 （一）綜述資料 孕酮是一種重要的孕激素，屬于類固醇激素，相對分子量 314.5，主要由卵巢黃體和妊娠期胎盤生成，是睪酮、雌激素及腎上腺皮質(zhì)激素的前體。正常男性和女性卵泡期產(chǎn)生的孕酮水平很低，分泌入血后主要結(jié)合于白蛋白和性激素結(jié)合蛋白在體內(nèi)進行循環(huán)。孕酮水平與黃體的發(fā)育和萎縮有關(guān)。

孕酮的主要功能是使子宮為受精卵的著床做好準(zhǔn)備，并維持妊娠。在月經(jīng)周期的卵泡期，孕酮水平很低。排卵之后，由黃體產(chǎn)生的孕酮迅速升高，并在排卵后5—7天達(dá)到濃度最大值10ng/mL—20ng/mL，使子宮內(nèi)膜從增生狀態(tài)轉(zhuǎn)為分泌狀態(tài)。若未受孕，在月經(jīng)周期的最后4天黃體萎縮，孕酮濃度降低。若受孕，黃體不會凋落，繼續(xù)分泌孕酮，使孕酮保持在相當(dāng)于黃體中期的水平，并一直持續(xù)到妊娠的第六周。在懷孕期間，胎盤逐漸成為孕酮的主要來源，濃度從懷孕前3個月的10ng/mL—50ng/mL升高到7—9個月的50ng/mL—280ng/mL。臨床研究證明孕酮在非孕期女性體內(nèi)發(fā)揮著促進排卵和維持黃體的正常功能。如果黃體產(chǎn)生的孕酮不足，可能說明黃體功能不足，而黃體功能不足與不孕及早期流產(chǎn)有關(guān)。

血中孕酮升高可見于以下情況：（1）觀察婦女排卵的時間及黃體酮的生成情況：在排卵的－1、0、+1天，孕酮含量成倍增加，提示為有排卵。（2）正常妊娠、雙胎和多胎妊娠時孕酮合成量明顯增加，血液中孕酮水平相對升高。（3）妊娠毒血癥、先兆子癇、葡萄胎及原發(fā)性高血壓時，孕酮含量也會升高。

血中孕酮含量降低見于以下情況：（1）先兆流產(chǎn)、宮外孕、早產(chǎn)、閉經(jīng)、不孕癥。（2）黃體功能不全、卵巢黃體發(fā)育不全時，孕酮含量相應(yīng)降低。（3）腎上腺、甲狀腺功能嚴(yán)重失調(diào)也可影響卵巢功能，使排卵發(fā)生障礙，孕酮含量也會相應(yīng)降低。

孕酮的檢測方法主要為酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法，化學(xué)發(fā)光免疫分析法是目前臨床檢測孕酮應(yīng)用較多的檢測方法。

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、生物安全性方面的說明、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、臨床應(yīng)用情況、申報注冊產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的異同方面進行介紹，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料研究資料（如需提供）1.主要原材料的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實驗驗證研究資料 檢測試劑所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細(xì)試驗資料。如抗體為申請人自制，則應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價等），且其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定，并對其工藝有相關(guān)的驗證。同時確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；

如為申請人外購，則應(yīng)詳述其名稱及生物學(xué)來源，外購方名稱，提交外購方出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗報告，詳述申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。供貨商應(yīng)相對固定。

其他主要原材料的選擇及驗證資料，申請人應(yīng)詳述每一原材料技術(shù)指標(biāo)的要求以及確定該原材料作為主要原材料的依據(jù)，確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。若為外購，應(yīng)提供外購方名稱并提交外購方出具的檢驗報告。

2.質(zhì)控品、校準(zhǔn)品的原料選擇、制備、定值過程及實驗資料 3.校準(zhǔn)品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、實驗方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析等詳細(xì)資料。申請人應(yīng)根據(jù)GB/T21415—2008/ ISO17511:2003《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》提供所用校準(zhǔn)品的來源、賦值過程和相應(yīng)指標(biāo)，以及不確定度等內(nèi)容。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示；

2.反應(yīng)原理介紹；

3.檢測方法的介紹：含樣本采集、標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品、測試步驟、結(jié)果計算等；

4.反應(yīng)體系研究：含樣本采集及處理、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法（如有）、質(zhì)控方法等的研究資料；

5.不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

（四）分析性能評估資料 申請人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細(xì)資料。應(yīng)當(dāng)對多批（至少3批）產(chǎn)品進行性能評估。對于孕酮檢測試劑，建議著重對以下分析性能進行研究。

1.通過重復(fù)性和批間差考察精密度 1.1重復(fù)性 在重復(fù)性條件下，對濃度（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L的樣品分別重復(fù)測定10次，計算10次測定結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD），根據(jù)公式（1）得出變異系數(shù)（CV），其測量結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于10%（儀器自動操作法）或不大于15%（手工操作法）。

CV=SD/×100%........................................（1）1.2批間差 使用3個批次試劑盒對濃度在（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L范圍內(nèi)的樣本各重復(fù)測定10次，計算30個測量值的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。按公式（1）計算變異系數(shù)（CV）。其測量結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于15%。

2.準(zhǔn)確度性能評估 按以下優(yōu)先順序選擇準(zhǔn)確度性能評估方法：

2.1相對偏差 2.1.1用可用于評價常規(guī)方法的參考物質(zhì)/有證參考物質(zhì)（CRM）對試劑（盒）進行測試，重復(fù)檢測3次，取測試結(jié)果記為（Xi），按公式（2）計算相對偏差（Bi）。如果3次結(jié)果都符合要求，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不合格，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（2）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合要求，則準(zhǔn)確度符合企業(yè)規(guī)定要求。

Bi =（Xi －T）/T………………………（2）式中：Xi—單次測試結(jié)果；

T—有證參考物質(zhì)標(biāo)示值或各濃度人源樣本定值；

Bi—單次相對偏差。

注：首選國家參考物質(zhì)，如無國家參考物質(zhì)可選用國際參考物質(zhì)。

2.1.2對企業(yè)參考品進行檢測 用參考方法定值的企業(yè)參考品對試劑（盒）進行測試，重復(fù)檢測3次，取測試結(jié)果記為（Xi），按公式（2）計算相對偏差（Bi）。如果大于等于2次的結(jié)果不合格，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（2）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合要求，則準(zhǔn)確度符合企業(yè)規(guī)定要求。

2.2回收實驗 選擇接近參考區(qū)間的常規(guī)檢測樣本，分為體積相同的3—4份，在其中2—3份樣本中加入不同濃度相同體積的待測物標(biāo)液制備待回收分析樣本，加入體積不大于原體積的10%，制成2—3個不同濃度的待回收分析樣本，計算加入的待測物的濃度。在另一份樣本中加入同樣體積的無待測物的溶劑，制成基礎(chǔ)樣本。用待評價系統(tǒng)對待回收分析樣本和基礎(chǔ)樣本進行測定，通常對樣本進行3次重復(fù)測定，計算均值，取其均值進行下述計算。

回收率應(yīng)在85%—115%范圍內(nèi)。用公式（3）計算回收率：

…………………………………（3）式中：R-回收率；

V-加入待測物標(biāo)準(zhǔn)液的體積；

V0-基礎(chǔ)樣本的體積 C-樣本加入待測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)后的檢測濃度；

C0-基礎(chǔ)樣本的檢測濃度；

Cs-待測物標(biāo)準(zhǔn)液的濃度。

2.3比對實驗 參考相關(guān)國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行準(zhǔn)確度評估。

用不少于40個覆蓋檢測濃度范圍內(nèi)不同濃度的人源樣品，以申請人指定的試劑（盒）作為比對方法，每份樣品按待測試劑（盒）及比對試劑（盒）的操作方法分別檢測。線性回歸計算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)（r）、斜率及偏差，結(jié)果應(yīng)符合企業(yè)規(guī)定要求。

3.檢出限性能評估 申請人需提供試劑盒的空白限、檢出限及參考區(qū)間等相關(guān)信息。根據(jù)提供信息，對5份濃度近似檢出限的低值樣本進行測定，每份樣本測定5次。對測量結(jié)果按照大小進行排序，符合如下條件，即可認(rèn)為所提供的空白限和檢出限的設(shè)置基本合理。

3.1低于申請人提供的空白限數(shù)值的檢測結(jié)果數(shù)量應(yīng)小于等于3個；

3.2無高于3.18nmol/L的測量結(jié)果。

4.線性范圍性能評估 將接近線性范圍上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5個濃度。其中，低值濃度的樣本須接近線性范圍的下限。將每一濃度的樣本重復(fù)測定最少2次，計算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進行直線擬合，并計算線性相關(guān)系數(shù)（r）。

5.特異性性能評估 推薦參考《WS/T416-2013 干擾實驗指南》或相關(guān)國際、國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行特異性評估。孕酮的干擾物質(zhì)選取可參見表1，企業(yè)可在不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的前提下根據(jù)實際情況選擇適用的干擾物質(zhì)進行評估干擾程度。

5.1溶血（血紅蛋白）、脂血（甘油三酯）、黃疸（膽紅素）等干擾因素對檢測結(jié)果的影響；

5.2樣本中其他可能干擾試劑反應(yīng)的物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響；

5.3資料中所提到的干擾物質(zhì)，其干擾程度均不應(yīng)使用模糊的描述方式，而應(yīng)細(xì)化到干擾量，并提供相應(yīng)的實驗數(shù)據(jù)予以支持。

表 1 孕酮干擾物參考表 序號 干擾物質(zhì) 序號 干擾物質(zhì) 序號 干擾物質(zhì) 1 11-去氧皮質(zhì)酮 6 17β-雌二醇 11 克羅米酚 2 孕烯醇酮 7 雌酮 12 11-脫氧皮質(zhì)醇 3 皮質(zhì)醇 8 雌三醇 13 保泰松 4 皮質(zhì)酮 9 醛甾酮 14 睪酮 5 17a-羥基孕酮 10 丹那唑 15 強的松龍 評估方法：設(shè)置對照樣本組，使孕酮目標(biāo)濃度為64nmol/L（允許相對偏差為±15%），重復(fù)測定（n≥7）并計算平均值（M）與標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。設(shè)置待測樣本組，分別添加潛在干擾物于含有孕酮的樣本中，獲得待測樣本中孕酮的目標(biāo)濃度為64nmol/L（允許相對偏差為±15%），待測樣本測量結(jié)果的平均值（n≥2）應(yīng)在對照樣本組孕酮目標(biāo)濃度M±2SD范圍內(nèi)。其中，所添加潛在干擾物與含有孕酮的樣本之間體積比例為不大于1：9，對照樣本組的基質(zhì)盡可能與待測樣本組樣本的基質(zhì)一致。

6.校準(zhǔn)品及質(zhì)控品 參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品溯源相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料。同時，應(yīng)對校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的瓶間均勻性進行評價。

7.其他需注意問題 7.1對于適用多個機型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說明書【適用機型】項中所列的所有適用機型的性能評估資料。

7.2如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進行的上述項目評估的試驗資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

（五）參考區(qū)間確定資料 應(yīng)提交驗證參考值（區(qū)間）所采用樣本來源及詳細(xì)的試驗資料。參考區(qū)間可參考文獻(xiàn)資料，應(yīng)明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn)，樣本來源應(yīng)考慮不同性別、生理周期等因素，盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性。建議參考相關(guān)國際、國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估文件開展評估。

孕酮參考區(qū)間的確定可以按性別（男性、女性）及女性的不同生理周期。如：非孕正常女性卵泡期、黃體期、絕經(jīng)后 ；

孕早期、中期、晚期等，以下列舉具有代表性的國內(nèi)外廠家參考區(qū)間僅供參考（見表2）。參考值研究結(jié)果應(yīng)在說明書【參考區(qū)間】項中進行相應(yīng)說明。

表2 各廠家參考區(qū)間篩選分組示例 廠家 篩選分組 A ng/mL B ng/mL C ng/mL D ng/mL 男性 0.27—1.22 0.2—1.4 0.026—2.75 0.1—2.0 卵泡期 0.15—1.39 0.2—1.5 0.4—2.3 0.2—2.40 排卵期 / 0.8—3.0 1.2—18.8 0.5—3.60 黃體期 3.33—25.55 1.7—27 / 6.0—20.5 絕經(jīng)期 ND—0.73 0.1—0.8 0.4—1.4 0.1—1.8 早期妊娠 0—12周 / / 15.8—46 / 中期妊娠13—28周 / / 15.6—74 / 晚期妊娠 29—40 周 / / 45—143 /（六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

試劑穩(wěn)定性研究主要包括注冊單元中所有組成部分的效期穩(wěn)定性及開瓶（復(fù)溶）穩(wěn)定性等，如有需要可增加運輸穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性研究等。如試劑需要配制，還應(yīng)對配制后試劑的穩(wěn)定性進行研究。企業(yè)可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。常用的穩(wěn)定性研究方案為證實試劑在經(jīng)過被作用于指定條件后仍能證明主要性能指標(biāo)要求與未被作用于指定條件的試劑性能一致。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體方法及過程。對于效期穩(wěn)定性和開瓶（復(fù)溶）穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期/開封效期后的研究資料。

適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行穩(wěn)定性驗證，從而確認(rèn)不同類型樣本的保存穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果分別在說明書《儲存條件及有效期》和《樣本要求》兩項中進行詳細(xì)說明。樣本在不同儲存條件下的穩(wěn)定性期限若有相關(guān)文獻(xiàn)中已明確說明，亦可作為依據(jù)。

（七）臨床評價資料 此項目已經(jīng)列入《關(guān)于新修訂免于進行臨床試驗醫(yī)療器械目錄的通告》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2018年第94號）中免于進行臨床試驗的體外診斷試劑目錄。根據(jù)體外診斷試劑臨床評價的相關(guān)要求，申請人可按照《免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號）要求進行臨床評價。如無法按要求進行臨床評價，應(yīng)進行臨床試驗。

對于通過臨床試驗方式進行臨床評價時，臨床試驗資料應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，同時研究資料的形式應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式》中臨床研究資料有關(guān)的規(guī)定。臨床試驗中的基本要求如下：

1.研究方法 選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的性能相近的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。建議企業(yè)盡量選擇方法學(xué)相同、線性范圍及精密度等性能接近的同類試劑作為對比試劑。

2.臨床試驗機構(gòu)的選擇 應(yīng)選擇不少于兩家（含兩家）已經(jīng)在備案系統(tǒng)備案的醫(yī)療器械臨床試驗機構(gòu)，臨床試驗機構(gòu)實驗操作人員應(yīng)充分熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，定期對儀器進行校準(zhǔn)、保養(yǎng)，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗方案 臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。臨床試驗中所涉及的樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品說明書一致，且不應(yīng)超越參比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了參比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應(yīng)采用其他合理方法對額外的樣本類型進行驗證。

開展體外診斷試劑臨床試驗，申請人應(yīng)當(dāng)按照試驗用體外診斷試劑的類別、風(fēng)險、預(yù)期用途等特性，組織制定科學(xué)、合理的臨床試驗方案。一般應(yīng)當(dāng)包括以下內(nèi)容：

3.1一般信息（包括產(chǎn)品信息、臨床試驗開展的時間和人員等相關(guān)信息、申請人相關(guān)信息等）；

3.2臨床試驗的背景資料；

3.3試驗?zāi)康模?/span>

3.4試驗設(shè)計；

3.5評價方法；

3.6統(tǒng)計方法；

3.7對臨床試驗方案修正的規(guī)定；

3.8臨床試驗涉及的倫理問題和說明、《知情同意書》文本（如有）；

3.9數(shù)據(jù)處理與記錄保存; 3.10其他需要說明的內(nèi)容。

4.研究對象的選擇 4.1總體要求 選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。企業(yè)在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群/在進行結(jié)果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，孕酮檢測樣本通常為血清，總體樣本數(shù)不少于200例，參考區(qū)間范圍外的樣本數(shù)不少于30%。樣本中待測物濃度應(yīng)覆蓋待評試劑線性范圍。如果樣本類型包含血漿樣本，在上述樣本例數(shù)基礎(chǔ)上再增加100例與血清樣本的同源樣本比對，參考區(qū)間范圍外的樣本數(shù)不少于30%。建議在臨床試驗中選擇部分含干擾物質(zhì)的樣本，包括高脂、溶血、黃疸的樣本、類風(fēng)濕因子陽性樣本及其他可能產(chǎn)生交叉反應(yīng)的樣本等。

4.2非孕女性不同生理周期的考慮 非懷孕正常女性在不同的生理期，其孕酮的含量也不同，樣本選擇時，應(yīng)含有一定數(shù)量的各生理周期的樣本。如:卵泡期、排卵期、黃體期、絕經(jīng)期。

4.3懷孕女性不同孕期的考慮 選取一定數(shù)量的各孕期樣本，如：孕0—12周、孕13—28周、孕29—40周。

4.4樣本數(shù)量的考慮 申報的樣本類型均應(yīng)在臨床試驗中進行驗證。如產(chǎn)品發(fā)生涉及檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床樣本總數(shù)至少為100例，并在至少2家（含2家）臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗；

變更抗體等主要原材料的供應(yīng)商、參考區(qū)間的變化及增加臨床適應(yīng)癥等變更事項，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。

4.5樣本類型的考慮 血清應(yīng)明確存貯條件、可否凍融等。

血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求、離心速度及時間要求、存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本。試驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。

5.統(tǒng)計學(xué)分析 對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析、Bland-Altman分析、線性回歸、配對t檢驗等。建議統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計學(xué)方法進行分析，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

6.結(jié)果差異樣本的驗證 對于比較研究試驗中測定結(jié)果不符的樣本，應(yīng)采用“金標(biāo)準(zhǔn)”或其他合理的方法進行復(fù)核，以便對臨床試驗結(jié)果進行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)詳細(xì)說明理由。

7.臨床試驗總結(jié)報告撰寫 根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。

申請人或臨床試驗牽頭單位應(yīng)對各臨床試驗機構(gòu)的報告進行匯總，并完成臨床試驗總結(jié)報告。臨床試驗報告的格式及內(nèi)容如下：

7.1首篇 首篇是每份臨床試驗報告的第一部分，所有臨床試驗報告均應(yīng)包含該部分內(nèi)容。

7.1.1封面標(biāo)題 包括試驗用體外診斷試劑的通用名稱、試驗開始日期、試驗完成日期、主要研究者（簽名）、臨床試驗機構(gòu)（蓋章）、統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人簽名及單位蓋章、申請人（蓋章）、申請人的聯(lián)系人及聯(lián)系方式、報告日期、原始資料保存地點。

7.1.2目錄 列出整個臨床試驗報告的內(nèi)容目錄和對應(yīng)頁碼。

7.1.3研究摘要 對臨床試驗情況進行簡單的介紹。

7.1.4試驗研究人員 列出臨床試驗主要研究人員的姓名、單位、在研究中的職責(zé)及其簡歷（列于附件中），主要研究人員包括主要研究者及各單位的主要參加人員、統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人、臨床試驗報告的撰寫人。

7.1.5縮略語 臨床試驗報告中所用的縮略語的全稱。

7.2正文內(nèi)容和報告格式 7.2.1基本內(nèi)容 介紹與臨床試驗產(chǎn)品有關(guān)的背景情況，包括：

7.2.1.1被測物的來源、生物及理化性質(zhì)；

7.2.1.2臨床預(yù)期使用目的，所針對的目標(biāo)適應(yīng)癥人群，目前針對該適應(yīng)癥所采用的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等；

7.2.1.3所采用的方法、原理、技術(shù)要求等；

7.2.1.4國內(nèi)外已批準(zhǔn)上市產(chǎn)品的應(yīng)用現(xiàn)狀等。說明申請人和臨床試驗機構(gòu)間的合作關(guān)系。

7.2.2研究目的 說明本臨床試驗所要達(dá)到的目的。

7.2.3試驗管理 對試驗管理結(jié)構(gòu)的描述。

管理結(jié)構(gòu)包括主要研究者、主要參加人員、實驗室質(zhì)量控制情況、統(tǒng)計/數(shù)據(jù)管理情況以及試驗中發(fā)生的問題及其處理措施等。

7.2.4試驗設(shè)計 7.2.4.1試驗總體設(shè)計及方案的描述 試驗的總體設(shè)計和方案的描述應(yīng)清晰、簡潔，必要時采用圖表等直觀的方式。試驗進行時方案修改的情況和任何方案以外的信息來源也應(yīng)詳細(xì)敘述。應(yīng)包括：

7.2.4.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；

7.2.4.1.2病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)；

7.2.4.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；

7.2.4.1.4統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn) 7.2.4.2試驗設(shè)計及試驗方法選擇 試驗設(shè)計中應(yīng)包括以下內(nèi)容：

7.2.4.2.1樣本量及樣本量確定的依據(jù)。

7.2.4.2.2樣本選擇依據(jù)、入選標(biāo)準(zhǔn)、排除標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn)。

7.2.4.2.3樣本采集、保存、運輸方法等。

7.2.4.2.4對比試劑的確立。

7.2.4.2.5臨床試驗用所有產(chǎn)品的名稱、規(guī)格、來源、批號、效期及保存條件，對比試劑的注冊情況。考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息。

7.2.4.2.6質(zhì)量控制方法。對質(zhì)量控制方法進行簡要的闡述。試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估；

7.2.4.2.7臨床試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析方法。對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

定量值相關(guān)性和一致性分析：用相關(guān)分析、Bland-Altman分析、線性分析、配對t檢驗等進行定量值相關(guān)性和一致性分析，應(yīng)給出相關(guān)系數(shù)、95%一致性界限、回歸分析的擬合方程y=ax+b和R2、t值、p值、95%（99%）置信區(qū)間等統(tǒng)計結(jié)果，定量值結(jié)果應(yīng)無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。

7.2.4.2.8具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。

7.2.4.2.9試驗過程中方案的修改 一般情況下，臨床試驗方案不宜更改。試驗過程中對方案的任何修改均應(yīng)說明，對更改的時間、理由、更改過程及有無備案進行詳細(xì)闡述并論證其對整個研究結(jié)果評價的影響。

7.2.5臨床試驗結(jié)果及分析 7.2.6討論和結(jié)論。對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

7.3有關(guān)臨床試驗中特別情況的說明 7.4附件 7.4.1臨床試驗中所采用的其他試驗方法或其他診斷試劑產(chǎn)品的基本信息，如試驗方法、診斷試劑產(chǎn)品來源、產(chǎn)品說明書及注冊批準(zhǔn)情況。

7.4.2臨床試驗中的所有試驗數(shù)據(jù)，需由臨床試驗操作者、復(fù)核者簽字，臨床試驗機構(gòu)蓋章（封面蓋章和騎縫章）。

7.4.3主要參考文獻(xiàn) 7.4.4主要研究者簡歷 7.4.5申請人需要說明的其他情況等。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料 申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進行風(fēng)險分析，應(yīng)符合YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求 產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式》及《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的相關(guān)規(guī)定。產(chǎn)品注冊單元劃分應(yīng)符合《醫(yī)療器械注冊單元劃分指導(dǎo)原則》的要求。如已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則技術(shù)要求中不得低于其相關(guān)要求。

作為定量檢測試劑，孕酮檢測試劑的注冊檢測應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：外觀、裝量、溯源性、準(zhǔn)確度、檢出限、線性范圍、重復(fù)性、批間差、特異性、穩(wěn)定性。各性能指標(biāo)的檢驗方法應(yīng)清晰明了且具可操作性。

下面就技術(shù)要求中涉及的相關(guān)內(nèi)容作簡要敘述。

1.產(chǎn)品型號/規(guī)格及其劃分說明 明確試劑的組成、組成成分及規(guī)格。

注1：如不同包裝規(guī)格適用不同的儀器型號，則應(yīng)在劃分說明中標(biāo)明。

注2：如試劑盒注冊單元中包含校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，校準(zhǔn)品質(zhì)控品可選購，但不能單獨銷售。包裝規(guī)格中可分別設(shè)計含校準(zhǔn)品/質(zhì)控品和不含校準(zhǔn)品/質(zhì)控品的兩種包裝規(guī)格。

2.性能指標(biāo) 2.1外觀 外觀應(yīng)做如下要求：

2.1.1試劑盒各組分組成、性狀；

2.1.2試劑盒內(nèi)外包裝完整，文字符號標(biāo)識清晰。

2.2溯源性 應(yīng)根據(jù)GB/T21415及有關(guān)規(guī)定提供試劑盒校準(zhǔn)品的來源、賦值過程以及不確定度等內(nèi)容。

2.3檢出限 應(yīng)符合企業(yè)規(guī)定要求。

2.4線性范圍 應(yīng)規(guī)定線性范圍，在所規(guī)定的線性范圍內(nèi)，試劑盒相關(guān)系數(shù)（r）應(yīng)≥0.9900.2.5 重復(fù)性 使用同一批試劑盒測試同一份樣本，其測試結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于10%。

2.6批間差 用三批試劑盒測試同一份樣本，其測試結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于15%。

2.7 準(zhǔn)確度 應(yīng)規(guī)定準(zhǔn)確度要求。

注：按相對偏差、比對實驗、回收實驗優(yōu)先順序。

2.8特異性 分別添加潛在干擾物于含有孕酮的樣本中，獲得待測樣本中孕酮目標(biāo)濃度為64nmol/L（允許相對偏差為±15%，潛在干擾物濃度符合企業(yè)規(guī)定要求），各個樣本測量結(jié)果的均值應(yīng)在目標(biāo)濃度平均值（M）±2標(biāo)準(zhǔn)差（SD）范圍內(nèi)。

2.9穩(wěn)定性 根據(jù)產(chǎn)品特性，選擇以下方法進行驗證。

2.9.1應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品有效期，取到效期后一定時間內(nèi)的樣品檢測試劑檢出限、線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確性、特異性應(yīng)符合規(guī)定要求。

2.9.2根據(jù)所聲稱的熱穩(wěn)定性條件取有效期內(nèi)的試劑盒進行熱加速后，測定其檢出限、線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確性，特異性，結(jié)果應(yīng)符合要求。

3.檢驗方法 3.1外觀 目測檢查，應(yīng)符合2.1的要求。

3.2溯源性 應(yīng)根據(jù)GB/T21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量及有校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》要求提供試劑盒校準(zhǔn)品的來源及溯源的賦值過程和不確定度的內(nèi)容2.2的要求。

3.3檢出限 需提供試劑盒的空白限、檢出限及參考區(qū)間等相關(guān)信息。根據(jù)所提供信息，對5份濃度近似檢出限的低值樣本進行測定，每份樣本測定5次。對測量結(jié)果按照大小進行排序，符合如下條件，即可認(rèn)為提供的空白限和檢出限的設(shè)置基本合理。

3.3.1低于提供的空白限數(shù)值的檢測結(jié)果數(shù)量應(yīng)小于等于3個；

3.3.2無高于3.18nmol/L的測量結(jié)果。

3.4線性范圍 將接近線性范圍上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5個濃度，其中低值濃度的樣本須接近線性范圍的下限。將每一濃度的樣本重復(fù)測定最少2次，計算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進行直線擬合，并計算線性相關(guān)系數(shù)（r），所得結(jié)果應(yīng)符合2.4的要求。

3.5重復(fù)性 使用同一批號試劑盒對濃度在（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L范圍內(nèi)的樣本各重復(fù)測定10次，計算10次測量濃度結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。按公式（1）計算變異系數(shù)（CV）。所得結(jié)果應(yīng)符合2.5的要求。

3.6批間差 使用3個批次試劑盒對濃度在（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L范圍內(nèi)的樣本各重復(fù)測定10次，計算30個測量值的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。按公式（1）計算變異系數(shù)（CV）。所得結(jié)果應(yīng)符合2.6的要求。

3.7準(zhǔn)確度 方法見（四）分析性能評估資料部分，結(jié)果符合2.7的要求。

3.8特異性 方法見（四）分析性能評估資料部分，結(jié)果符合2.8的要求。

3.9穩(wěn)定性 3.9.1取到效期后一定時間內(nèi)的產(chǎn)品，按照檢出限、線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確性、特異性檢測方法進行檢測，應(yīng)符合2.9.1的要求。

3.9.2熱穩(wěn)定性 根據(jù)所聲稱的熱穩(wěn)定性條件取有效期內(nèi)的試劑盒進行熱加速后，測定其檢出限、線性、重復(fù)性、準(zhǔn)確性，特異性，應(yīng)符合2.9.2的要求。

如注冊單元中包含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，其性能指標(biāo)的檢驗方法應(yīng)在技術(shù)要求中予以描述。應(yīng)當(dāng)包括準(zhǔn)確度、均勻性檢驗方法的詳細(xì)描述。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告 根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》要求，首次申請注冊的第二類產(chǎn)品應(yīng)該在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行注冊檢測。承接注冊檢測的機構(gòu)在出具檢測報告的同時，應(yīng)出具相應(yīng)的預(yù)評價意見，預(yù)評價意見在提交注冊資料時應(yīng)隨注冊檢測資料時一并提交。

（十一）產(chǎn)品說明書 產(chǎn)品說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。

應(yīng)符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）和《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，以申報產(chǎn)品為基礎(chǔ)，以研究結(jié)果為依據(jù)，對孕酮測定試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【產(chǎn)品名稱】 1.1通用名稱：試劑（盒）名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：孕酮測定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）。名稱中不應(yīng)當(dāng)出現(xiàn)定性/定量等內(nèi)容。

1.2英文名稱（適用進口產(chǎn)品）。如不適用，可刪除。

2．【包裝規(guī)格】 2.1應(yīng)與產(chǎn)品技術(shù)要求包裝規(guī)格一致；

2.2應(yīng)能清晰地描述出試劑盒的構(gòu)成，不得出現(xiàn)試劑盒的組成成分與包裝規(guī)格中描述不一致的情況。

2.3應(yīng)注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××mL。

2.4如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機型，則應(yīng)同時明確適用機型。

2.5單一包裝規(guī)格，可以不加標(biāo)點符號；

多個包裝規(guī)格，按照分隔層次分別適用頓號、逗號、分號進行區(qū)分，以句號結(jié)束。不得采用列表形式進行描述。

3.【預(yù)期用途】 3.1第一段說明試劑盒用于體外定量測定血清或血漿中的孕酮的含量。

3.2第二段應(yīng)強調(diào)臨床適應(yīng)癥（可使用不同的描述方式），參考（一）綜述資料部分。

4.【檢驗原理】 應(yīng)詳細(xì)闡明試劑的工作原理，例如采用基于磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的競爭法反應(yīng)原理為：樣本中的孕酮和磁微粒包被的孕酮抗原競爭與吖啶酯標(biāo)記的抗體結(jié)合，樣本中的孕酮越多，吖啶酯標(biāo)記的抗體與固相磁珠包被的孕酮抗原結(jié)合的越少，樣本中的孕酮含量與光量子數(shù)成反比。

5.【主要組成成分】 5.1說明試劑盒包含組分的名稱信息，如果對于正確的操作或使用者理解其用途很重要，應(yīng)詳細(xì)說明。對于多組分試劑盒，明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

5.2如注冊單元含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品也應(yīng)對主要組成成分及生物學(xué)來源進行相應(yīng)說明，校準(zhǔn)品需注明其定值及溯源性。溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級別，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號。

如：校準(zhǔn)品：校準(zhǔn)品具有批特異性，每批定值，定值見瓶簽標(biāo)示，量值可溯源至國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW09199。

質(zhì)控品需注明靶值范圍，如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值單。

6．【儲存條件及有效期】 6.1對試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等信息做詳細(xì)介紹，包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。如注冊單元含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品且其形態(tài)為干粉（包含試劑為凍干粉狀態(tài)），則應(yīng)對復(fù)溶后的儲存條件、穩(wěn)定性做詳細(xì)介紹。如試劑需要配制，則應(yīng)對配制后的試劑的儲存條件、穩(wěn)定性做詳細(xì)介紹。

6.2保存溫度不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”“室溫”，應(yīng)直接以℃為單位。小于3個月的穩(wěn)定期限應(yīng)以日或小時為單位，大于或等于3個月的穩(wěn)定期限應(yīng)以月為單位。

6.3如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應(yīng)對各組分的儲存條件和有效期分別進行描述。

6.4對于可以冷凍的試劑應(yīng)注明凍融次數(shù)限制。

6.5生產(chǎn)日期、使用期限或失效日期（可見標(biāo)簽）。

7.【適用機型】 注明所適用的儀器類型，應(yīng)細(xì)化到型號。如需要可提供與儀器有關(guān)的信息以指導(dǎo)用戶操作。

如適用儀器為酶標(biāo)儀則需給出對酶標(biāo)儀配置的要求，如適用儀器為非通用的儀器則需寫明其具體型號，避免“系列”。

8.【樣本要求】 　 應(yīng)在以下幾方面進行說明：

8.1適用的樣本類型。

8.2在樣本收集過程中的特別注意事項。

8.3為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護劑等。

8.4已知的干擾物。

8.5能夠保證樣本穩(wěn)定的儲存、處理和運輸方法。

9.【檢驗方法】 詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟，包括：

9.1試劑配制：各試劑組分的稀釋、混合及其他必要的程序。

9.2校準(zhǔn)程序（如有）：應(yīng)說明校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項、推薦的校準(zhǔn)周期，以及何種情況須重新校準(zhǔn)。

9.3質(zhì)量控制程序：應(yīng)說明質(zhì)控品的使用方法、注意事項、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。

9.4試驗結(jié)果的計算或讀取，包括對每個系數(shù)及對每個計算步驟的解釋。如果可能，應(yīng)舉例說明。

10.【參考區(qū)間】 簡要參考區(qū)間的確定方法。

建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及孕期等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間”。

應(yīng)與資料（五）參考區(qū)間確定性資料數(shù)據(jù)一致。

11．【檢驗結(jié)果的解釋】 應(yīng)根據(jù)其臨床意義對可能出現(xiàn)的結(jié)果進行合理的解釋。

說明試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查等情況綜合考慮。

說明在何種情況下應(yīng)對樣本進行重復(fù)測試，以及在重復(fù)測試時需要采取的樣本處理方式。

12.【檢驗方法的局限性】 明確常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，企業(yè)可根據(jù)自身情況對特殊干擾物進行說明，并注明可接受的最高限值，不應(yīng)使用模糊的描述方式。不建議使用存在明顯干擾物如乳糜、黃疸等樣本。

試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨作為確診或排除病例的依據(jù)，為達(dá)到診斷目的，此檢測結(jié)果要與臨床檢查、病史和其他的檢查結(jié)果結(jié)合適用。

13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 與技術(shù)要求中主要性能指標(biāo)保持一致，孕酮產(chǎn)品主要性能指標(biāo)可包含：

13.1檢出限；

13.2線性范圍；

13.3重復(fù)性；

13.4準(zhǔn)確度；

13.5特異性。

14.【注意事項】 14.1必要內(nèi)容，如：“本品僅用于體外診斷”。

14.2如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。說明不同分析系統(tǒng)間的檢測結(jié)果可能存在的差異。

說明對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待。

14.3說明檢測過程中應(yīng)嚴(yán)格按照說明書提供的操作步驟及相關(guān)實驗室規(guī)范要求進行操作，否則可能對結(jié)果造成的影響。

14.4其他需要說明的注意事項。

15.【標(biāo)識的解釋】如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。可參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)：YY/T0466.1—2016。

16.【參考文獻(xiàn)】 注明引用參考文獻(xiàn)，其書寫應(yīng)清楚、易查詢且格式規(guī)范統(tǒng)一，符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。

17.【基本信息】 17.1境內(nèi)體外診斷試劑 17.1.1注冊人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標(biāo)注基本信息：注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標(biāo)注基本信息：注冊人名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，受托企業(yè)的名稱，住所，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.2進口體外診斷試劑 按照以下格式標(biāo)注基本信息：注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，生產(chǎn)地址，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，代理人的名稱，住所，聯(lián)系方式。

18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】 應(yīng)當(dāng)寫明醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號。

19.【說明書核準(zhǔn)日期及修改日期】 應(yīng)注明該產(chǎn)品說明書的核準(zhǔn)日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應(yīng)該同時注明說明書的修改日期。

三、審查關(guān)注點 （一）關(guān)注檢驗報告中檢測結(jié)果的報告單位，孕酮的結(jié)果報告單位分為兩種：ng/mL和nmol/L兩個單位的轉(zhuǎn)換公式為。ng/mL×3.18=nmol/L。

（二）關(guān)注產(chǎn)品技術(shù)要求及說明書中性能指標(biāo)的一致性。

（三）關(guān)注臨床試驗所采用的樣本類型、樣本量及臨床研究單位的選擇、對比試劑的選擇、統(tǒng)計方法及研究結(jié)果、臨床方案及報告撰寫的格式等是否符合《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》對相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定。

（四）由于孕酮在不同時期的參考范圍不同，因此需關(guān)注臨床評價資料中是否涵蓋了不同時期的臨床數(shù)據(jù)，并重點關(guān)注參考范圍研究資料。

（五）說明書中預(yù)期用途、儲存條件及有效期、檢驗方法、參考區(qū)間、產(chǎn)品性能指標(biāo)、抗干擾能力等描述應(yīng)分別與臨床評價資料、穩(wěn)定性研究資料、主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系研究資料、參考范圍研究資料、分析性能評估資料的研究結(jié)論相一致。

四、名詞解釋 （一）化學(xué)發(fā)光免疫分析法。化學(xué)發(fā)光分析是根據(jù)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的輻射光的強度來確定物質(zhì)含量的分析方法。化學(xué)發(fā)光免疫分析是將化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用化學(xué)發(fā)光相關(guān)的物質(zhì)標(biāo)記抗體或抗原，與待測的抗原或抗體反應(yīng)后，經(jīng)過分離游離態(tài)的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物，加入化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)的其他相關(guān)物產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，進行抗原或抗體的定量或定性檢測。

（二）準(zhǔn)確度（Accuracy）。一個測量值與可接受的參考值間的一致程度。

（三）分析特異性（Analytical Specificity）。測量程序只測量被測量物的能力。分析特異性用于描述檢測程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學(xué)相關(guān)濃度值水平的分析干擾程度。

（四）線性（Linearity）。在給定測量范圍內(nèi)，給出的測量結(jié)果與樣品中實際存在的被測量物的值成比例的能力。線性是描述一個測量系統(tǒng)的測量示值或測量結(jié)果相關(guān)于樣本的賦值符合直線的屬性。

（五）精密度（Precision）。在規(guī)定條件下，相互獨立的測試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計學(xué)方法得到的測量精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。

（六）參考物質(zhì)（Reference Material）。具有一種或多種足夠均勻和很好地確定了特性，用于校準(zhǔn)測量裝置、評價測量方法或給材料賦值的一種材料或物質(zhì)。對于該項目，指國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、可溯源至IFCC糖化血紅蛋白參考方法或標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、可溯源至NGSP參考方法或標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

五、指導(dǎo)原則編寫單位和人員 吉林省食品藥品監(jiān)督管理局。

第五篇：地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年）

附件3

地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑

注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，也不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

地中海貧血（簡稱地貧）是一種常染色體隱性遺傳病，是由于珠蛋白基因發(fā)生突變（包括點突變和缺失等），致使珠蛋白肽鏈合成減少或完全不能合成而導(dǎo)致的一組單基因遺傳性溶血性疾病，輕者可無臨床表現(xiàn)，重者以進行性溶血性貧血為主要特征。根據(jù)珠蛋白肽鏈合成受到抑制的類型，地貧分為α-，β-和γ-地貧等，臨床上最常見的是α-和β-地貧。地貧主要分布在地中海沿岸、東南亞和少數(shù)非洲地區(qū)，具有明顯的種族特性和地域分布差異。地貧是我國南方地區(qū)最常見、危害最大的遺傳病之一，尤以廣西、云南、廣東、海南、四川和貴州等省份為甚，云南、海南和廣東的地貧基因人群攜帶率可達(dá)10%以上，廣西更是達(dá)到了20%以上。

α-地貧主要是由于α-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起。α-珠蛋白基因簇位于16p13.3，包括胎兒期和成人期表達(dá)的2個基因（α2和α1），基因的排列順序為5’-α2-α1-3’。根據(jù)單倍型的情況，可將α地貧分為3類：（1）缺失型α+地貧（-α/），缺失1個α基因；（2）缺失型α0地貧（--/），2個α基因同時缺失；（3）非缺失型α+地貧（αTα/或ααT/），1個α1或α2基因發(fā)生點突變或少數(shù)幾個堿基的缺失。中國現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)至少19種α-珠蛋白基因大片段缺失和38種α-珠蛋白基因點突變。其中，6

種α-珠蛋白基因的突變：--SEA/、-α3.7/、-α4.2/、αWSα/（HBA2：c.369C>G）、αQSα/（HBA2：c.377

T>C）；αCSα/（HBA2：c.427T>C）占患病人群總數(shù)的98%。

α-地貧基因型和臨床分型的關(guān)系已經(jīng)基本闡明。α-地貧的表型嚴(yán)重程度隨著功能性α-珠蛋白基因的減少而加重：（1）1個α-基因缺失或點突變（-α/αα或ααT/αα或αTα/αα），稱為靜止型α-地貧，通常不貧血，血液學(xué)表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素；（2）2個α-基因缺失或復(fù)合-α基因點突變，或點突變，其基因型為--/αα或-α/-α或-α/ααT或αTα/-α或αTα/αTα，稱為輕型α-地貧，臨床表現(xiàn)為不貧血或輕度貧血，血液學(xué)檢查有小細(xì)胞低色素特征；（3）3個α-基因缺失或復(fù)合α基因點突變，基因型為--/-α或--/αTα，稱為中間型α-地貧，又稱Hb

H病，患者有輕至重度貧血。某些基因型為αTα/αTα的病例（如αCSα/αCSα、αQSα/αQSα和αCSα/αQSα）也表現(xiàn)為Hb

H病。通常，--/αTα的非缺失型

Hb

H病較單純?nèi)笔虷b

H?。?-/-α）的臨床表現(xiàn)更為嚴(yán)重，特別是基因型為--/αCSα或--/αQSα的Hb

H病患者，貧血程度較為嚴(yán)重；（4）4個α-基因缺失，其基因型為--/--，稱為重型α-地貧，又稱Hb

Bart’s胎兒水腫綜合征，此類個體一般無法存活到出生或分娩后半小時內(nèi)死亡。

β-地貧是由于β-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起，以點突變?yōu)橹?，少?shù)為缺失型。β-珠蛋白基因簇位于11p15.3，包括2個成人期表達(dá)基因（β和δ），基因的排列順序為5’-δ-β-3’。根據(jù)β-珠蛋白鏈合成量的程度，可將β-地貧分為3類：（1）β0地貧，β-珠蛋白鏈完全不能合成，其所在的等位基因稱為β0地貧等位基因；（2）β+地貧，β-珠蛋白鏈合成減少，其所在的等位基因稱為β+地貧等位基因；（3）β++地貧，又稱沉默型β-地貧，β-珠蛋白鏈合成輕微減少。中國已至少報道84種β-珠蛋白基因點突變和11種β-珠蛋白基因缺失。其中，6種點突變：HBB：c.126_129delCTTT，HBB：c.52A>T，HBB：c.-78A>G，HBB：

c.79G>A，HBB：

c.316-197C>T和HBB：

c.216_217insA占了全部突變類型的90%以上。

β-地貧的臨床表型可分為4種：（1）靜止型β-地貧，基因型為β++/βN，血液學(xué)表型正?；蚺R界，一般只能通過分子診斷識別；（2）輕型β-地貧，基因型為β0/βN或β+/βN，臨床表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素和HbA2值升高；（3）中間型β-地貧，基因型為β+/β+或β+/β0，表型變異范圍大，可從輕度貧血到中度貧血，多于幼兒期出現(xiàn)中度貧血；（4）重型β-地貧，基因型為β+/β0或β0/β0，通常伴有嚴(yán)重貧血，需要定期輸血才能存活?；純撼錾鷷r無癥狀，常于嬰兒期（3-12月齡）發(fā)病。如不治療，患兒多于5歲前死亡。此外，中間型的分子基礎(chǔ)較為復(fù)雜，顯性β-地貧突變的雜合子（βD/βN），合并α-地貧突變的β-地貧突變純合子（β0/β0），或合并α-珠蛋白三聯(lián)體的β-地貧突變雜合子（β0/βN或β+/βN），也會顯示中間型的表型。

2018年發(fā)布的《重型β-地中海貧血的診斷和治療指南》明確規(guī)定：對于重型β-地中海貧血的診斷，有條件者均應(yīng)進行基因診斷，基因型為純合子或雙重雜合子為確診本病的指標(biāo)。2018年發(fā)布的《兒童非輸血依賴型地中海貧血的診治和管理專家共識》也明確規(guī)定：地貧基因檢測為非輸血依賴型地貧的診斷依據(jù)之一。

另外，國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的相關(guān)文件要求：為減少重型地貧患兒出生，在我國地貧高發(fā)省份實施地貧防控試點項目。主要流程包括：（1）對新婚夫婦和計劃懷孕夫婦在懷孕前或孕期進行血常規(guī)初篩；（2）對夫婦一方或雙方血常規(guī)檢查結(jié)果陽性的夫婦進行血紅蛋白分析復(fù)篩；（3）對血紅蛋白分析復(fù)篩結(jié)果均為陽性的夫婦，取其抗凝靜脈全血進行相應(yīng)的α+β地貧基因檢測；（4）綜合夫婦雙方病史詢問、地貧篩查和基因檢測結(jié)果，判定為高風(fēng)險夫婦。對高風(fēng)險夫婦進行追蹤，及時了解受檢婦女懷孕情況，指導(dǎo)女方在懷孕后適宜時期接受產(chǎn)前診斷。產(chǎn)前診斷的對象為胎兒，樣本類型為胎兒的絨毛、羊水和臍帶血，檢測項目為相應(yīng)的地貧基因檢測。

綜上，結(jié)合該類產(chǎn)品臨床使用的實際情況，本指導(dǎo)原則的預(yù)期用途可為：用于體外定性檢測人外周靜脈全血或胎兒羊水等樣本中基因組DNA的α-和/或β-地貧相關(guān)基因，用于α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風(fēng)險夫婦的評估，或胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷等。

結(jié)合該類產(chǎn)品在中國注冊的實際情況以及當(dāng)前的認(rèn)知，本指導(dǎo)原則僅對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預(yù)期用途的相關(guān)內(nèi)容進行了詳細(xì)闡述。針對其他預(yù)期用途，本指導(dǎo)原則僅對部分內(nèi)容進行了闡述，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性，對本指導(dǎo)原則未涉及的內(nèi)容進行補充并做出相應(yīng)評價。

本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于PCR探針法方法建立的，對于其他分子生物學(xué)檢測技術(shù)（如：PCR-反向點雜交法和gap-PCR法等），可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對不適用部分進行或補充其他的評價和驗證，但需闡述不適用的理由，并驗證替代方法的科學(xué)合理性。

本指導(dǎo)原則適用于進行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及國內(nèi)外同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗原理、檢測的突變類型以及臨床意義等方面詳細(xì)說明申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

綜述資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原總局令第5號，以下簡稱《辦法》）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（原總局公告2014年第44號），以下簡稱《44號公告》的要求。

（二）主要原材料的研究資料

主要原材料研究資料包括主要反應(yīng)成分、對照品（質(zhì)控品）及企業(yè)參考品的研究資料。

1.此類產(chǎn)品的主要反應(yīng)成分一般包括人基因組核酸提取/純化試劑、檢測所需引物、探針、酶、dNTPs、反應(yīng)緩沖液等。申請人應(yīng)提交相關(guān)原材料的選擇、制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料。如為申請人自制，應(yīng)提交詳細(xì)的工藝穩(wěn)定性研究資料；如為外購，還應(yīng)提交供應(yīng)商篩選資料以及供應(yīng)商提供的原材料質(zhì)量檢定報告。

1.1

核酸提取/純化試劑（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗證資料。

1.2

引物、探針

申請人應(yīng)詳述引物、探針的設(shè)計原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對應(yīng)情況。建議設(shè)計多套引物探針以供篩選，針對待測位點的特異性等進行評價，選擇最佳設(shè)計，并提交詳細(xì)的篩選研究數(shù)據(jù)。

申請人應(yīng)針對選定的引物、探針原材料進行質(zhì)量評價，一般包括：分子量、純度（HPLC等）、濃度、探針熒光標(biāo)記基團的激發(fā)波長和發(fā)射波長，以及功能性試驗等，并依據(jù)評價結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1.3酶

酶包括DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等。申請人應(yīng)針對各種酶的活性進行驗證，提交功能性試驗資料，并確定酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

DNA聚合酶應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性。UDG/UNG應(yīng)具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。

1.4脫氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）

包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP；應(yīng)提交對其純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的驗證資料，以及功能性試驗資料，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.對照品（質(zhì)控品）

試劑盒的質(zhì)控體系通過設(shè)置各種試劑盒對照品（質(zhì)控品）來實現(xiàn)。陽性對照應(yīng)至少包括代表性的突變位點和突變類型。陰性對照可以是含有野生型序列的核酸溶液。空白對照為不含核酸的溶液。

如該類產(chǎn)品所采用的方法學(xué)和檢驗原理顯示：無論檢測何種樣本（野生型、雜合突變和純合突變），其反應(yīng)體系均可報出核酸序列結(jié)果，均可對管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進行質(zhì)量控制，則無需另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)；否則，試劑盒應(yīng)另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)。

對照品可采用人基因組DNA、細(xì)胞系或質(zhì)粒等?？瞻讓φ諔?yīng)參與樣本核酸的平行提取。申請人應(yīng)提供對照品原料選擇、制備、定值過程等的詳細(xì)研究數(shù)據(jù)，并對其檢測結(jié)果做出明確的范圍要求。

3.企業(yè)參考品

企業(yè)參考品主要包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品和精密度參考品等。申請人應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料選擇、制備方法、基因序列確認(rèn)及檢驗標(biāo)準(zhǔn)的詳細(xì)研究資料等。

3.1

陽性參考品：可采用臨床樣本或其核酸溶液，如采用臨床樣本，則樣本類型應(yīng)與待測樣本一致。應(yīng)至少包含所有檢測位點的雜合型樣本，同時盡量納入純合突變型樣本。對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系或質(zhì)粒。

3.2

陰性參考品：應(yīng)包括野生型臨床樣本或其核酸溶液，以及易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的同源序列樣本，同時應(yīng)盡量包含檢測范圍外其他檢測位點的樣本等。

3.3檢測限參考品可選擇最低檢測限濃度（例如：95%檢出率水平）或接近最低檢測限濃度（例如100%檢出率水平）的臨床樣本或其核酸溶液，至少包含所有檢測位點的雜合型樣本。

3.4

精密度參考品應(yīng)至少包括低濃度雜合突變型臨床樣本或其核酸溶液，應(yīng)至少包括代表性的突變位點和突變類型，且在每一反應(yīng)體系均有分布。

目前，該類產(chǎn)品已有國家參考品，對于申報產(chǎn)品所聲稱的檢測位點，企業(yè)參考品的要求應(yīng)不低于國家參考品。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

主要生產(chǎn)工藝研究資料包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTPs濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標(biāo)記（如有）等工藝過程的描述及確定依據(jù)。生產(chǎn)過程應(yīng)對關(guān)鍵參數(shù)進行有效控制，可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝，標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

反應(yīng)體系研究指反應(yīng)條件的選擇確定過程，包括樣本采集、預(yù)處理（如有）、樣本用量、試劑用量、核酸提取純化步驟、PCR反應(yīng)條件、閾值循環(huán)數(shù)（Ct值）等的確定。

不同適用機型的反應(yīng)條件如有差異應(yīng)分別提交。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)針對下述各項分析性能提交詳細(xì)的評估資料，包括試驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、試驗方法、試驗樣本（類型、來源、數(shù)量、處理方法、基因型和濃度確認(rèn)等）、可接受標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計方法、試驗數(shù)據(jù)及結(jié)論等。分析性能評估的實驗方法可以參考國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則。

每項性能評估應(yīng)盡量采用與適用樣本類型一致的臨床樣本，對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系等。

1.核酸提取/純化性能（如有）

在進行靶核酸檢測前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂崽崛?純化步驟。該步驟應(yīng)最大量分離和純化目的核酸并盡可能去除PCR抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸提取/純化組分，申請人都應(yīng)對配套使用的核酸提取/純化方法的提取效率和提取核酸純度、濃度等做充分的驗證，并評價該方法能否滿足該類產(chǎn)品的要求。

2.檢測準(zhǔn)確性

建議采用若干份臨床樣本驗證該類產(chǎn)品的檢測準(zhǔn)確性，樣本類型與說明書聲稱的樣本類型一致。樣本應(yīng)涵蓋野生型、所有檢測位點的雜合突變型，同時盡量納入純合突變型。對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系或質(zhì)粒。

3.最低檢測限

該類產(chǎn)品的最低檢測限可定義為：在滿足一定的檢測準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠檢出目標(biāo)序列的最低人基因組DNA的濃度?？刹捎锰荻葷舛鹊娜嘶蚪MDNA樣本進行多次重復(fù)檢測，確定適當(dāng)檢出率水平（如：95%）下的最低人基因組DNA濃度。檢測限評價建議采用臨床樣本或細(xì)胞系，并至少包含所有檢測位點的雜合突變型。應(yīng)明確臨床樣本或細(xì)胞系與人基因組DNA濃度的對應(yīng)關(guān)系。

4.分析特異性

4.1

應(yīng)針對同源序列或檢測范圍外基因和位點進行交叉反應(yīng)驗證，說明交叉反應(yīng)樣本的制備方法、核酸序列確認(rèn)方法，提交詳細(xì)的驗證資料。

4.2

應(yīng)針對可能的內(nèi)源和外源性干擾物進行干擾試驗研究。內(nèi)源干擾物主要涉及血脂、膽紅素、血紅蛋白和白蛋白、母體細(xì)胞的干擾等，外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑和常用藥物等。

干擾試驗可通過在臨床樣本中人工添加干擾物質(zhì)的方式，評價干擾物質(zhì)對目標(biāo)序列檢測的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進行干擾試驗評價。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進行評價；如有干擾，應(yīng)確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。

5.精密度

精密度評價應(yīng)采用臨床樣本進行試驗，試驗操作完全按照說明書執(zhí)行，包含核酸提取/純化等步驟（如有）。應(yīng)對每一反應(yīng)體系進行精密度評價，并至少覆蓋代表性的突變位點和突變類型。

精密度評價需滿足如下要求：

5.1對可能影響檢測精密度的主要因素進行驗證，除檢測試劑本身外，還包括分析儀器、操作者、地點、時間、檢測輪次和試劑批次等。

5.2設(shè)定合理的精密度評價周期，對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進行綜合評價。如有條件，申請人應(yīng)選擇不同的實驗室進行重復(fù)實驗以對室間重復(fù)性進行評價。

5.3用于精密度評價的臨床樣本至少設(shè)置低濃度和中/高濃度水平。

5.4精密度指標(biāo)可設(shè)置為CV等（如有），申請人應(yīng)對精密度指標(biāo)評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。

（五）陽性判斷值確定資料

建議納入一定數(shù)量的臨床樣本，應(yīng)包括所有檢測位點的各種基因型（野生型、雜合突變型，同時盡量納入純合突變型），采用受試者工作特征（ROC）曲線或其他合理方法確定陽性判斷值。

如試劑判讀存在灰區(qū)，應(yīng)解釋說明灰區(qū)范圍的確定方法。

對于某些檢測方法學(xué)，陽性判斷值研究可能不適用，申請人應(yīng)說明理由。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要包括申報產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究和適用樣本的穩(wěn)定性研究兩部分。前者主要包括申報產(chǎn)品的實時穩(wěn)定性、開瓶/復(fù)溶穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制的研究等；后者則是指適用樣本的保存條件和保存時間等的研究。

實時穩(wěn)定性研究應(yīng)采用至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后，選取多個時間點進行產(chǎn)品性能評價，從而確定產(chǎn)品保存條件和有效期。

如核酸提取液可保存，還需對核酸提取液的保存條件和保存時間進行研究。

（七）臨床試驗

應(yīng)滿足《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗應(yīng)符合更新后的要求。下面僅說明該類產(chǎn)品臨床試驗中應(yīng)關(guān)注的重點問題。

1．針對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預(yù)期用途

1.1

臨床試驗機構(gòu)及人員

申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點及預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)人種和流行病學(xué)背景等因素，選擇不少于3家（含3家）符合法規(guī)要求的臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗。

1.2

臨床試驗適用人群和臨床樣本

具有地貧癥狀和/或體征，或血液學(xué)表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素的疑似地貧患者和攜帶者；需與地貧進行鑒別診斷的其他疾病患者，如：缺鐵性貧血、鐵粒細(xì)胞性貧血或先天性紅細(xì)胞生成異常性貧血等。

臨床試驗所用樣本應(yīng)為抗凝外周血樣本（基因組DNA非臨床樣本）。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)分別滿足申報產(chǎn)品說明書、對比試劑說明書（如適用）及第三方試劑說明書（如適用）的相關(guān)要求。

1.3臨床試驗方法

1.3.1已有同類產(chǎn)品上市的申報產(chǎn)品

對于已批準(zhǔn)的α-地貧突變和β-地貧突變，原則上選擇已上市同類產(chǎn)品作為對比試劑，評價申報產(chǎn)品的臨床檢測性能。

1.3.2無同類產(chǎn)品上市的申報產(chǎn)品

1.3.2.1

如新突變位點的臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可（如：國內(nèi)相關(guān)指南或?qū)＜夜沧R），且上述認(rèn)可基于充分的中國人群的臨床數(shù)據(jù)，則臨床試驗可選擇Sanger基因測序（針對新的點突變）或臨床普遍使用的其他公認(rèn)方法（針對其他類型的新突變位點，如缺失）作為對比方法，評價新突變位點的臨床檢測性能。除此之外，還應(yīng)提交新位點臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可的相關(guān)證據(jù)，該部分資料可不納入臨床方案和報告。

1.3.2.2

如新突變位點的臨床意義未獲行業(yè)認(rèn)可，則臨床試驗應(yīng)包括兩個目的，新突變位點的臨床檢測性能評價和臨床意義評價。新突變位點的臨床檢測性能評價可參考1.3.2.1；新突變位點的臨床意義評價應(yīng)提交基于中國人群的充分的臨床證據(jù)，證明基因型與表型的關(guān)系，如：隨訪或其他可證明基因型與表型關(guān)系的臨床驗證資料。

1.4最低樣本量和陽性例數(shù)

臨床試驗樣本量應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法進行估算，并詳細(xì)描述所使用統(tǒng)計方法及各參數(shù)的確定依據(jù)。

1.4.1

臨床檢測性能評價的樣本量估算

臨床檢測性能評價的樣本量估算可分為以下幾種情況。

對于常見突變位點，建議采用單組目標(biāo)值法分別估算每個突變位點臨床試驗的最低樣本量，通過陽性符合率計算所需陽性樣本的例數(shù)，通過陰性符合率計算所需陰性樣本的例數(shù)，同時考慮脫落情況，估算最低樣本總量。陽性符合率和陰性符合率的目標(biāo)值（臨床可接受的最低標(biāo)準(zhǔn)）建議均不低于95%。

對于罕見突變位點，陰性樣本的例數(shù)可根據(jù)上述方法進行估算，陽性樣本則應(yīng)保證一定的例數(shù)。

對于極其罕見的、且有確切臨床證據(jù)證明其臨床意義的突變位點，陰性樣本的例數(shù)可根據(jù)上述方法進行估算，陽性樣本的例數(shù)則應(yīng)結(jié)合臨床證據(jù)確定。

1.4.2

新位點臨床意義評價的樣本量估算

新位點臨床意義評價的樣本量估算，建議采用抽樣調(diào)查公式或其他合理方法進行估算。

2.針對“地貧高風(fēng)險夫婦的評估”和“胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷”預(yù)期用途

針對上述兩個預(yù)期用途，本指導(dǎo)原則僅對部分內(nèi)容進行了闡述，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性，充分考慮本指導(dǎo)原則未涉及的內(nèi)容，設(shè)計科學(xué)合理的臨床試驗并進行評價。

2.1臨床試驗機構(gòu)和人員

如申報產(chǎn)品的預(yù)期用途為胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷，除滿足法規(guī)要求外，臨床試驗機構(gòu)還應(yīng)取得產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)資質(zhì)。臨床試驗人員應(yīng)為經(jīng)過專門培訓(xùn)的取得資質(zhì)的人員。機構(gòu)和人員應(yīng)遵循《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》《母嬰保健專項技術(shù)服務(wù)許可及人員資格管理辦法》，機構(gòu)應(yīng)取得《母嬰保健技術(shù)服務(wù)執(zhí)業(yè)許可證》，人員應(yīng)取得《母嬰保健技術(shù)考核合格證書》。

2.2

臨床試驗適用人群和臨床樣本

如預(yù)期用途為地貧高風(fēng)險夫婦的評估，則適用人群為：地貧表型篩查陽性的育齡人群。地貧表型篩查陽性的育齡人群可根據(jù)國家衛(wèi)生健康委員會和地貧高發(fā)地區(qū)相關(guān)政策確定。

如預(yù)期用途為胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷，則適用人群為：地貧高風(fēng)險夫婦的胎兒。地貧高風(fēng)險夫婦的確定可參考國家衛(wèi)生健康委員會等相關(guān)文件。

臨床試驗所用樣本應(yīng)為胎兒羊水等臨床樣本（基因組DNA非臨床樣本）。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)符合國家衛(wèi)生健康委員會等相關(guān)文件的要求，并滿足產(chǎn)品說明書的要求。

2.3

最低樣本量和陽性例數(shù)

針對每種不同的預(yù)期用途，應(yīng)分別采用合理方法估算最低樣本量。同一預(yù)期用途的不同樣本類型（羊水和臍帶血等），也應(yīng)分別采用合理方法估算最低樣本量。

3.如有其他預(yù)期用途，也應(yīng)設(shè)計科學(xué)的臨床試驗，提供充分的證據(jù)，證明其預(yù)期用途。

4.不同預(yù)期用途的通用要求

4.1

臨床試驗方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析

4.1.1應(yīng)在臨床試驗方案或報告中明確申報產(chǎn)品、對比試劑和第三方試劑的試驗方法。

4.1.2臨床試驗病例總結(jié)表應(yīng)以列表方式表示，包括申報產(chǎn)品的結(jié)果、對比試劑的結(jié)果、第三方試劑的檢測結(jié)果（如有）、臨床診斷、年齡和性別等。

4.1.3以交叉表分別總結(jié)兩種試劑的定性檢測結(jié)果，選擇合適的統(tǒng)計方法進行統(tǒng)計分析，以驗證兩種試劑檢測結(jié)果的一致性。

4.1.4

結(jié)果差異樣本的驗證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本，采用合理方法進行復(fù)核，并對差異原因進行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)說明理由。

4.2

臨床試驗方案

各臨床試驗機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由該實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程。

試驗方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程和結(jié)果判定時，應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各臨床試驗機構(gòu)選用的對比試劑/方法應(yīng)保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，申報產(chǎn)品的樣本類型不應(yīng)超越對比試劑/方法對樣本類型的要求。

4.3臨床試驗報告

應(yīng)對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》、《44號公告》和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)要求。該類產(chǎn)品作為三類體外診斷試劑，應(yīng)將主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求等內(nèi)容作為附錄附于技術(shù)要求正文后。

目前，該類產(chǎn)品已有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

（九）產(chǎn)品檢驗報告

根據(jù)《辦法》的要求，第三類體外診斷試劑申請注冊時應(yīng)提交連續(xù)三個生產(chǎn)批次樣品的檢驗報告。目前，該產(chǎn)品已有國家參考品，產(chǎn)品檢驗應(yīng)滿足國家參考品的要求。

（十）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料的相關(guān)研究結(jié)果保持一致。下面對該類產(chǎn)品說明書的重點內(nèi)容進行闡述。

1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1本產(chǎn)品用于定性檢測人xx樣本基因組DNA中的α-和/或β-地貧xx突變，用于：α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風(fēng)險夫婦的評估，或胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷。

1.2介紹地貧相關(guān)的臨床背景信息及實驗室診斷方法等，介紹被測靶標(biāo)（突變位點）的相關(guān)情況。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱或數(shù)量等信息，說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2試劑盒中不包含但對該項檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱及其他相關(guān)信息。

2.3如果試劑盒中不包含用于核酸提取純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)過驗證后配合使用的商品化核酸提取純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱以和醫(yī)療器械備案號（如有）等詳細(xì)信息。

3.【檢驗原理】

3.1對試劑盒的被測靶標(biāo)進行詳細(xì)描述（基因位置、突變位點及相關(guān)特征等），對試劑盒所用探針、引物或突變的判定等進行詳細(xì)介紹；對不同樣本反應(yīng)管組合、對照品設(shè)置及熒光信號檢測原理等進行介紹。

3.2試劑盒技術(shù)原理的詳細(xì)介紹，建議結(jié)合適當(dāng)圖示進行說明。如反應(yīng)體系中添加了相關(guān)的防污染組分（如UNG酶），也應(yīng)對其作用機理進行適當(dāng)介紹。

4.【儲存條件及有效期】

說明試劑盒的效期穩(wěn)定性等，應(yīng)明確具體的儲存條件及有效期等信息。

5.【樣本要求】

樣本的采集、處理、運送和保存：明確樣本采集、核酸提取純化前的處理（如離心和洗滌等）、保存條件及期限以及運送條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的限制等。

6.【適用儀器】

所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

7.【檢驗方法】

詳細(xì)說明實驗操作的各個步驟，包括：

7.1實驗條件：實驗室分區(qū)、實驗環(huán)境的溫度、濕度和空調(diào)氣流方向控制等注意事項。

7.2試劑配制方法和注意事項。

7.3詳述核酸提取純化的條件、步驟及注意事項（如適用），對核酸提取純化環(huán)節(jié)進行合理質(zhì)控，明確提取核酸的濃度純度等質(zhì)量要求。

7.4擴增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。

7.5

PCR各階段的溫度、時間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置或相應(yīng)的自動化檢測程序及相關(guān)注意事項。

7.6儀器設(shè)置（如適用）：特殊參數(shù)、探針的熒光素標(biāo)記情況、對待測樣本及其他對照品的熒光通道選擇等。

8.【檢驗結(jié)果的解釋】

結(jié)合對照品、樣本管檢測結(jié)果以及檢測類型，以列表形式詳述所有可能出現(xiàn)的結(jié)果及相應(yīng)的解釋。如存在檢測灰區(qū)，應(yīng)詳述對于灰區(qū)結(jié)果的處理方式。

9.【檢驗方法的局限性】

9.1申報產(chǎn)品僅對下述檢測類型xx進行了驗證。

9.2有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析

9.2.1不合理的樣本采集、運送及處理或核酸過度降解均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

9.2.2未經(jīng)驗證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會導(dǎo)致假陰性結(jié)果（如有）。

10.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】簡述以下性能指標(biāo)：

10.1最低檢測限：簡單介紹最低檢測限的確定方法，并明確最低檢測限結(jié)果。

10.2陽性/陰性參考品符合率。

10.3精密度：簡單介紹精密度的確定方法，并明確精密度結(jié)果。

10.4分析特異性

10.4.1交叉反應(yīng)驗證：同源性序列等交叉反應(yīng)驗證。

10.4.2干擾物質(zhì)驗證：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響。

10.5對比試驗研究（如有）：簡要介紹對比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計學(xué)方法及統(tǒng)計分析結(jié)果。

11.【注意事項】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

11.1如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

11.2臨床實驗室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增實驗室管理辦法》現(xiàn)行有效版本等有關(guān)分子生物學(xué)實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。

三、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。