第一篇：促卵泡生成素檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

附件2 促卵泡生成素檢測試劑注冊技術(shù)審查 指導(dǎo)原則 本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對促卵泡生成素檢測試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門對注冊申報(bào)資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對促卵泡生成素檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍 促卵泡生成素檢測試劑用于體外定量檢測人血清、血漿、全血或其他體液樣本中促卵泡生成素（Follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）的含量。本指導(dǎo)原則適用于以酶標(biāo)記、（電）化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、（時(shí)間分辨）熒光標(biāo)記等標(biāo)記方法為捕獲抗體，以微孔板、管、磁顆粒、微珠和塑料珠等為載體包被抗體，定量檢測FSH的免疫分析試劑，不適用于以膠體金標(biāo)記的FSH定量檢測試紙條、用放射性同位素標(biāo)記的各類放射免疫或免疫放射檢測試劑。根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），促卵泡生成素檢測試劑應(yīng)按照第二類醫(yī)療器械管理，分類代號為6840。

二、注冊申報(bào)資料要求 （一）綜述資料 促卵泡生成素是由垂體前葉嗜堿性細(xì)胞合成和分泌的一種糖蛋白類促性腺激素，可通過血液循環(huán)進(jìn)入血液和尿液。像其它糖蛋白如促黃體生成素（LH）、促甲狀腺激素（TSH）和人絨毛膜促性腺激素（HCG）一樣，F(xiàn)SH由兩個(gè)以非共價(jià)鍵結(jié)合的亞單位α和β亞基組成，分子量為24 000～35 000，α-亞單位與LH、TSH和HCG結(jié)構(gòu)相似，為垂體前葉激素所共有，β-亞單位是FSH所特異的，因此，這些激素的生物學(xué)和免疫學(xué)特性的區(qū)別取決于其獨(dú)特的β亞基。對于男性，其功能是促進(jìn)睪丸曲細(xì)精管的成熟和精子的生成。對于女性，則可促進(jìn)卵泡發(fā)育和成熟，促進(jìn)顆粒細(xì)胞增殖，引起卵泡液分泌，并與LH協(xié)同調(diào)節(jié)和促使發(fā)育成熟的卵泡分泌雌激素和排卵，參與正常月經(jīng)的形成。

FSH的增高多見于原發(fā)性睪丸衰竭、睪丸精原細(xì)胞瘤、先天性睪丸發(fā)育不全、先天性卵巢發(fā)育不全、原發(fā)性閉經(jīng)、原發(fā)性性腺功能低下、更年期綜合征；

其降低常見于席漢綜合征及長期服用性激素等。

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢出限、線性范圍、準(zhǔn)確度、參考區(qū)間及臨床適用范圍等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料作為注冊申報(bào)資料的重要組分之一，其內(nèi)容應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料研究資料（如需提供）應(yīng)提供主要原材料如抗體、標(biāo)記物、固相載體、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（如適用）等的選擇、制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料。主要原材料的研究資料具體要求如下：

1.抗體的選擇及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 明確抗體的來源，如為單克隆抗體應(yīng)明確細(xì)胞株、克隆號等內(nèi)容。提供抗體靈敏度、特異性、純度、效價(jià)等基本性能的驗(yàn)證資料。

抗體如為自行生產(chǎn)，提供抗體的詳細(xì)生產(chǎn)及鑒定過程。

2.校準(zhǔn)品（如適用）和質(zhì)控品（如適用）的原料選擇、制備、定值過程及試驗(yàn)資料。

3.申請人應(yīng)根據(jù) GB/T 21415-2008/ISO 17511:2003《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》提供所用校準(zhǔn)品的來源、明確校準(zhǔn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、賦值過程和相應(yīng)指標(biāo)以及不確定度等內(nèi)容，并提供校準(zhǔn)品的溯源性文件（如適用）。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需要提供）應(yīng)包括以下內(nèi)容（以下內(nèi)容可根據(jù)具體的方法學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行編寫）：

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以流程圖方式表示，并標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.產(chǎn)品反應(yīng)原理介紹。

3.抗體包被工藝研究：申請人應(yīng)考慮如包被抗體濃度、包被緩沖液、表面活性劑等種類及添加量（如適用）、包被時(shí)間、干燥溫度及時(shí)間（如適用）等工藝參數(shù)對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最佳組合。

4.抗體標(biāo)記工藝研究：申請人應(yīng)考慮標(biāo)記抗體的濃度、標(biāo)記比例等內(nèi)容。

5.反應(yīng)條件確定：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)模式、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)（如適用）等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。

6.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

7.體系中樣本及試劑的加樣方式及添加量確定：申請人應(yīng)考慮樣本加樣方式、加樣量以及試劑添加順序、添加量對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定最佳的樣本及試劑的添加方式和添加量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過試驗(yàn)確定樣本稀釋基質(zhì)或處理方法。確定反應(yīng)所需其他試劑用量（標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)記物、底物等）的研究資料。

8.固相載體、信號放大系統(tǒng)、顯色（發(fā)光）系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹及研究資料。

（四）分析性能評估資料 申請人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制或成品驗(yàn)證階段對試劑進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，對于每項(xiàng)分析性能的評價(jià)都應(yīng)包括具體研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。建議選擇不少于3批產(chǎn)品對以下分析性能進(jìn)行研究，性能評估時(shí)最好將試劑和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個(gè)整體進(jìn)行評價(jià)，評估整個(gè)系統(tǒng)的性能是否符合要求。具體研究方法建議參照國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進(jìn)行。

性能評估應(yīng)至少包括檢出限、準(zhǔn)確度、特異性、線性、精密度等。

對于本試劑，建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究：

1.檢出限 生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)提供促卵泡生成素試劑的空白限、檢出限及參考區(qū)間等相關(guān)信息，根據(jù)生產(chǎn)企業(yè)提供信息，對5份濃度近似LOD的低值樣本進(jìn)行檢測，每份樣本檢測5次，對檢測結(jié)果按照大小進(jìn)行排序，符合如下條件，即可認(rèn)為生產(chǎn)企業(yè)提供的空白限和檢出限的設(shè)置基本合理：

1.1低于生產(chǎn)企業(yè)提供的空白限數(shù)值的檢測結(jié)果的數(shù)量應(yīng)小于或等于3個(gè)；

1.2無高于生產(chǎn)企業(yè)提供的參考區(qū)間下限的檢測結(jié)果的數(shù)值。

2.準(zhǔn)確度 對測量準(zhǔn)確度的評價(jià)依次包括：與國家標(biāo)準(zhǔn)品（和/或國際標(biāo)準(zhǔn)品）的相對偏差、方法學(xué)比對、回收試驗(yàn)等方法，申請人可根據(jù)實(shí)際情況選擇以下方法的一項(xiàng)或幾項(xiàng)進(jìn)行研究。

準(zhǔn)確度可選擇如下試驗(yàn)方法之一：

2.1將促卵泡生成素國家（或國際）標(biāo)準(zhǔn)品配制成試劑盒線性范圍內(nèi)高、低濃度的準(zhǔn)確度樣品（至少2個(gè)）進(jìn)行檢測，每個(gè)樣品測試3次，根據(jù)公式（1）計(jì)算相對偏差。如果3次結(jié)果都符合規(guī)定，即判為合格；

如果大于等于2次的結(jié)果不符合，即判為不合格；

如果有1次結(jié)果不符合規(guī)定，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，分別計(jì)算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合規(guī)定，即判為合格；

……………….........……（1）式中：

B —相對偏差；

Xi—樣本的實(shí)測濃度均值；

T —樣本的靶值。

2.2方法學(xué)比對 采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為比對方法，與擬申報(bào)試劑同時(shí)檢測一批臨床樣品（至少40例樣本），從測定結(jié)果間的差異了解擬申報(bào)試劑與參比方法間的偏倚。

用線性回歸方法對兩組結(jié)果進(jìn)行線性擬合，得到線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)（r）和斜率。計(jì)算各個(gè)樣本的待測試劑（盒）測定值與對照系統(tǒng)測定值的絕對偏差或相對偏差。

在實(shí)施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報(bào)試劑和比對試劑進(jìn)行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行方法學(xué)比對。方法學(xué)比對時(shí)應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2.3將已知濃度的促卵泡生成素樣本（A）加入到正常人血清或其他等效基質(zhì)（B）中，所加入促卵泡生成素樣本與正常人血清B之間的體積比例為1:9，根據(jù)公式（2）計(jì)算結(jié)果應(yīng)符合要求。

…………………（2）式中：

R--回收率；

V--加入A樣本的體積；

V0--血清樣品B的體積；

C--血清樣品加入A樣本后的檢測濃度；

C0--血清樣品B的檢測濃度；

Cs—A樣本的濃度。

回收試驗(yàn)應(yīng)注意在保證總濃度在方法分析測量范圍內(nèi)，盡量使加入已知濃度的促卵泡生成素樣本（A）后樣本中的被測物濃度接近醫(yī)學(xué)決定水平；

3.線性范圍 建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)與臨床實(shí)驗(yàn)樣本相似，但不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本。理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的人血清（或其他等效基質(zhì)），且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。建立一種定量測定方法的線性范圍時(shí)，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7～11個(gè)濃度水平。例如，將預(yù)期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點(diǎn)直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。驗(yàn)證線性范圍時(shí)可選擇5～7個(gè)濃度水平。所選用的濃度水平應(yīng)可覆蓋整個(gè)預(yù)期測定范圍并包括與臨床有關(guān)的重要評價(jià)濃度，如最小測定濃度或線性范圍的最低限、不同的醫(yī)學(xué)決定水平、最大測定濃度或線性范圍的高限等。

4.精密度 對測量精密度的評估至少應(yīng)包括2個(gè)濃度水平的質(zhì)控品，建議質(zhì)控品采用人源樣本或與人源樣本基質(zhì)接近的樣本進(jìn)行試驗(yàn)，質(zhì)控品濃度都應(yīng)在試劑的測量范圍內(nèi)，包括具有臨床代表意義的低濃度值和高濃度值。

一般包括批內(nèi)精密度、批間精密度的評價(jià)。

4.1批內(nèi)精密度：在試劑的劑量-反應(yīng)曲線范圍內(nèi)，設(shè)置2～3個(gè)不同濃度的質(zhì)控品，用同一批號試劑，對不同濃度的質(zhì)控品分別重復(fù)測定10次，計(jì)算測定結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s），根據(jù)公式（3）得出變異系數(shù)（CV）。

CV=s/×100% ……………………（3）4.2批間精密度：在3個(gè)不同批次試劑之間，在試劑的劑量-反應(yīng)曲線范圍內(nèi)，設(shè)置2～3個(gè)不同濃度的質(zhì)控品，對不同濃度的質(zhì)控品分別重復(fù)測定10次，計(jì)算30次測定結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s），根據(jù)公式（3）得出變異系數(shù)（CV）。

5.分析特異性 5.1交叉反應(yīng):易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他抗原、抗體等的驗(yàn)證情況，應(yīng)至少包括促黃體生成素樣本（LH）、促甲狀腺素樣本（TSH）、人絨毛膜促性腺激素樣本（HCG），交叉反應(yīng)驗(yàn)證物質(zhì)的濃度應(yīng)涵蓋人體生理及病理狀態(tài)下及臨床治療過程中可能出現(xiàn)的最高濃度值。

5.2干擾物質(zhì) 5.2.1 內(nèi)源性干擾物樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如甘油三酯、膽紅素、血紅蛋白、類風(fēng)濕因子（RF）及其干擾物質(zhì)的研究。干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。

5.2.2樣本添加劑的干擾 如果試劑（盒）適用樣本類型包括血漿（或全血）樣本，應(yīng)采用各種適用抗凝劑抗凝的血漿（或全血）樣本分別與血清樣本進(jìn)行對比實(shí)驗(yàn)研究。方法為對比線性范圍內(nèi)的同一病人的血清和血漿（或全血）樣本，以驗(yàn)證申報(bào)試劑對于血清和血漿（或全血）樣本檢測結(jié)果的一致性。

5.2.3試劑組成成分的干擾（如適用）應(yīng)考慮防腐劑對檢測結(jié)果的干擾，如氟化鈉、碘乙酸、鹽酸等。

6.HOOK效應(yīng)（如適用）目前，促卵泡生成素檢測試劑大多采用夾心法的原理檢測樣本，考慮到方法學(xué)的缺陷，有必要對鉤狀（HOOK）效應(yīng)進(jìn)行考慮。建議采用高濃度的促卵泡生成素樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開始檢測，每個(gè)梯度的抗原樣本重復(fù)3—5份，將響應(yīng)值隨濃度升高反而變小時(shí)的濃度作為出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時(shí)促卵泡生成素抗原的最低濃度，建議產(chǎn)品說明書上明示出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時(shí)促卵泡生成素的最低濃度，或濃度達(dá)到一定數(shù)值時(shí)未發(fā)生鉤狀效應(yīng)。

7.校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的性能指標(biāo)（如適用）參照GB/T 21415-2008《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)工作校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品的來源、賦值過程以及測量不確定度相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料。同時(shí)，應(yīng)對校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的瓶內(nèi)均勻性、瓶間均勻性（凍干品適用），以及其賦值結(jié)果的準(zhǔn)確度進(jìn)行評價(jià)。如校準(zhǔn)品或質(zhì)控品的基質(zhì)不同于臨床常用樣本類型，還應(yīng)提交基質(zhì)效應(yīng)的相關(guān)研究資料。凍干型校準(zhǔn)品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差。

性能指標(biāo)的評價(jià)方法并無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同的試劑特征進(jìn)行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。

8.其它需注意問題 8.1對于適用多個(gè)機(jī)型的產(chǎn)品，應(yīng)提供在所有適用型號儀器上進(jìn)行的性能驗(yàn)證資料。

8.2若產(chǎn)品涉及不同包裝規(guī)格且不同包裝規(guī)格間存在性能差異，則需要提供每個(gè)包裝規(guī)格在不同型號儀器上的評估資料；

如已驗(yàn)證不同包裝規(guī)格之間不存在性能上的差異，需要提交包裝規(guī)格間不存在性能差異的說明。

8.3不具有可比性的樣本類型（血液、尿液）應(yīng)分別進(jìn)行分析性能評估。對于血漿樣本和全血樣本，確認(rèn)最適的抗凝劑種類或明顯干擾檢測結(jié)果的抗凝劑，并在說明書樣本要求中明確。

（五）參考區(qū)間確定資料 應(yīng)提交參考區(qū)間建立或驗(yàn)證時(shí)所采用樣本來源及詳細(xì)的試驗(yàn)資料。應(yīng)明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)對性別及女性卵泡期、排卵期、黃體期、絕經(jīng)期進(jìn)行分組研究，例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，女性樣本入組時(shí)生理周期的確定依據(jù)應(yīng)科學(xué)合理。建議參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品參考區(qū)間確定的文件。

（六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

前者主要包括長期穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等研究，如組分為凍干粉，應(yīng)有復(fù)溶穩(wěn)定性研究，申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。如產(chǎn)品包含校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，應(yīng)提供相應(yīng)穩(wěn)定性試驗(yàn)研究資料。

后者主要包括冷藏和冷凍條件下的有效性驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段即對儲(chǔ)存樣本進(jìn)行穩(wěn)定性驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的保存穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行評價(jià)。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床評價(jià)資料 根據(jù)《關(guān)于公布新修訂免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)醫(yī)療器械目錄的通告》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2018年第94號），促卵泡生成素檢測試劑可免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)，申請人可依照《免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評價(jià)資料基本要求（試行）》開展評價(jià)。申請人如無法或不適于按照上述要求對產(chǎn)品進(jìn)行臨床評價(jià)，則應(yīng)按照《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求開展臨床試驗(yàn)。下面僅對臨床試驗(yàn)中的基本問題進(jìn)行闡述。

對于進(jìn)行臨床試驗(yàn)的產(chǎn)品，臨床試驗(yàn)總體要求及臨床試驗(yàn)資料的內(nèi)容應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》、《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）和《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）臨床研究資料有關(guān)的規(guī)定。

以下僅根據(jù)促卵泡生成素檢測試劑的特點(diǎn)對其臨床試驗(yàn)中應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容進(jìn)行闡述。

1.臨床試驗(yàn)研究方法 選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報(bào)產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行同步盲法對比試驗(yàn)，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。建議企業(yè)盡量選擇方法學(xué)、溯源性、參考區(qū)間、線性范圍等相同的同類試劑作為對比試劑。如方法學(xué)不同，則應(yīng)首選方法學(xué)性能較高的對比試劑進(jìn)行臨床試驗(yàn)。

2.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇 2.1第二類產(chǎn)品申請人應(yīng)當(dāng)選定不少于2家（含2家）有資質(zhì)的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。

2.2臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)有能力提供臨床試驗(yàn)所需的各類樣本，實(shí)驗(yàn)操作人員有足夠的時(shí)間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，考核試劑和對比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗(yàn)方案 臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法及樣本隨機(jī)分配以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。試驗(yàn)方案中還應(yīng)明確兩種試劑檢測結(jié)果不一致的判定依據(jù)，以及結(jié)果不一致樣本復(fù)核的方法。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對比試劑應(yīng)一致，對比試劑的適用機(jī)型應(yīng)評估一致性后選用，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。另外，考核試劑的樣本類型不應(yīng)超越對比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了對比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應(yīng)進(jìn)行不同樣本類型之間的臨床對比驗(yàn)證試驗(yàn)。

4.研究對象選擇 4.1對于不具有可比性的樣本類型，每種樣本類型臨床試驗(yàn)的總樣本數(shù)至少為200例。對于聲稱同時(shí)適用于血清、血漿、全血樣本，且樣本類型不超出對比試劑對樣本類型的檢測要求，除完成一個(gè)樣本類型不少于200例的臨床研究外，還應(yīng)進(jìn)行兩兩樣本類型相關(guān)性研究以確認(rèn)其檢測結(jié)果是否完全一致或存在某種相關(guān)性（如系數(shù)關(guān)系），其例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。建議參考《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》中增加樣本類型的變更要求。

4.2應(yīng)考慮樣本量的分布，各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)樣本量和樣本分布應(yīng)相對均衡。

4.3樣本濃度應(yīng)覆蓋考核試劑檢測范圍，盡可能均勻分布。盡可能使不少于30%樣本的測定值處于參考區(qū)間以外，但在檢測范圍內(nèi)。

4.4應(yīng)明確臨床樣本的采集要求。

4.4.1應(yīng)明確抗凝劑的要求（如適用），對檢測結(jié)果有明顯干擾作用的樣本，如高脂、溶血、黃疸的樣本盡量避免使用。建議在臨床試驗(yàn)中選擇部分易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的樣本，如早孕、甲減等相關(guān)疾病的樣本，以從臨床角度驗(yàn)證試劑的特異性。

4.4.2試驗(yàn)中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時(shí)，注明貯存條件及時(shí)間，在數(shù)據(jù)分析時(shí)應(yīng)考慮其影響。另外需要關(guān)注對比試劑說明書中對樣本的相關(guān)要求，臨床試驗(yàn)用的樣本需同時(shí)滿足考核試劑和對比試劑的相關(guān)要求。

5.倫理學(xué)要求 臨床試驗(yàn)必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則，必須獲得臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)倫理委員會(huì)的同意。研究者應(yīng)考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對受試者的風(fēng)險(xiǎn)性，應(yīng)提交倫理委員會(huì)的審查意見及受試者的知情同意書。對于例外情況，如客觀上不可能獲得受試者的知情同意或該臨床試驗(yàn)對受試者幾乎沒有風(fēng)險(xiǎn)，可經(jīng)倫理委員會(huì)審查和批準(zhǔn)后免于受試者的知情同意。

6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 對臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，對于比對試驗(yàn)的等效性研究，最常用是對考核試劑和對比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及回歸分析，用回歸分析驗(yàn)證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是對比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)，同時(shí)應(yīng)給出b的95%（或99%）置信區(qū)間，定量值結(jié)果應(yīng)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

結(jié)合臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計(jì)學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果是否存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

7.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證 在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑的檢測結(jié)果有明顯差異的樣本，應(yīng)采用“金標(biāo)準(zhǔn)”或其他合理的方法進(jìn)行復(fù)核，以便對臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)詳細(xì)說明理由。

8.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫 根據(jù)《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。

9.討論和結(jié)論 對總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡要分析試驗(yàn)結(jié)果，對本次臨床試驗(yàn)有無特別說明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料 申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品生命周期的各個(gè)環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯(cuò)誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險(xiǎn)的估計(jì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析，應(yīng)符合YY/T 0316-2016 《醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求 產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局局令第5號）和《國家食品藥品監(jiān)督管理總局關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。

1.適用的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn) 表1.產(chǎn)品適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) GB/T 191-2008 《包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志》 GB/T 21415-2008 《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》 YY/T 0316-2016 《醫(yī)療器械 風(fēng)險(xiǎn)管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》 YY/T 0466.1-2016 《醫(yī)療器械 用于醫(yī)療器械標(biāo)簽、標(biāo)記和提供信息的符號 第1部分：通用要求》 YY/T 1193-2011 促卵泡生成激素（FSH）定量測定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）YY/T 1213-2013 促卵泡生成素定量標(biāo)記免疫分析試劑盒 YY/T 1304.2-2015 時(shí)間分辨熒光免疫檢測系統(tǒng) 第2部分：時(shí)間分辨熒光免疫分析定量測定試劑（盒）GB/T 33411-2016 酶聯(lián)免疫分析試劑盒通則 YY/T 1183-2010 酶聯(lián)免疫吸附法檢測試劑（盒）注：以上標(biāo)準(zhǔn)如有修訂，以最新發(fā)布版本為準(zhǔn) 2.主要性能指標(biāo) 作為定量檢測試劑，應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：外觀、檢出限、準(zhǔn)確度、線性、精密度（批內(nèi)精密度、批間精密度）、特異性、穩(wěn)定性等。技術(shù)要求應(yīng)不低于現(xiàn)行的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)要求。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗(yàn)報(bào)告 根據(jù)《體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式》的要求，應(yīng)提供具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的產(chǎn)品注冊檢驗(yàn)報(bào)告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價(jià)意見。應(yīng)采用國家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行注冊檢驗(yàn)。如有相應(yīng)的國家法規(guī)發(fā)布或更新，按其要求執(zhí)行。

（十一）產(chǎn)品說明書 說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗(yàn)原理、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第6號）、《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

以下內(nèi)容僅對促卵泡生成素檢測試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，說明書其他內(nèi)容應(yīng)根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行編寫。

產(chǎn)品說明書內(nèi)容原則上應(yīng)全部用中文進(jìn)行表述；

如含有國際通用或行業(yè)內(nèi)普遍認(rèn)可的英文縮寫，可用括號在中文后標(biāo)明；

對于確實(shí)無適當(dāng)中文表述的詞語，可使用相應(yīng)英文或其縮寫。

1.【產(chǎn)品名稱】 1.1試劑（盒）名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。檢驗(yàn)的方法或者原理應(yīng)明確到細(xì)分的具體方法學(xué)，如：促卵泡生成素測定試劑（磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法）。

2.【包裝規(guī)格】 如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機(jī)型，應(yīng)同時(shí)明確適用機(jī)型 3.【預(yù)期用途】 3.1試劑盒用于定量檢測人×××樣本中的促卵泡生成素。其中，×××應(yīng)寫明適用的樣本類型為血清、血漿全血還是尿液，上述內(nèi)容均應(yīng)有相應(yīng)的分析性能評估資料和（或）臨床評價(jià)資料支持。

3.2與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法等。

4.【檢驗(yàn)原理】 應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分詳細(xì)說明檢驗(yàn)原理、方法，必要時(shí)可采用圖示方法描述 5.【主要組成成分】 5.1說明試劑盒包含組成、數(shù)量、濃度或含量等信息。

5.2建議對所包被抗體的相關(guān)信息進(jìn)行簡單介紹。

5.3對于校準(zhǔn)品和質(zhì)控品（如適用）：

5.3.1注明校準(zhǔn)品的定值及其溯源性，溯源性資料應(yīng)寫明溯源的最高級別（應(yīng)包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考方法的發(fā)布單位及編號）。

5.3.2應(yīng)明確說明質(zhì)控品的生物學(xué)來源、活性及其他特性，應(yīng)明確靶值范圍（如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨(dú)的靶值單）。

5.4對于多組分試劑應(yīng)明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換，如可互換，則需提供相應(yīng)的性能驗(yàn)證資料。

5.5對于產(chǎn)品中不包含，但對該試驗(yàn)必需的試劑組分，說明書中應(yīng)列出此類試劑的名稱、純度，提供稀釋或混合方法及其他相關(guān)信息。

6.【儲(chǔ)存條件及有效期】 6.1對試劑的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性（如適用）、復(fù)溶穩(wěn)定性（如適用）、凍融次數(shù)限制（如適用）等信息作詳細(xì)介紹。包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。

6.2不同組分保存條件及有效期不同時(shí)，應(yīng)分別說明，產(chǎn)品總有效期以其中效期最短的為準(zhǔn)。

注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”。

6.3生產(chǎn)日期、使用期限或失效日期 7.【適用儀器】 7.1如適用儀器為通用型的酶標(biāo)儀則需給出配置波長的要求。

7.2如適用儀器為非通用的儀器則需寫明具體適用儀器的型號，不能泛指某一系列儀器，并且與分析性能評估資料一致。

8.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：

8.1明確本產(chǎn)品適用的樣本類型，血液樣本應(yīng)當(dāng)說明對采血管及抗凝劑的要求，其他樣本應(yīng)說明樣本采集、處理及保存方式。

8.2樣本采集：采集時(shí)間點(diǎn)是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響，盡量減少由于樣本采集或處理不當(dāng)對實(shí)驗(yàn)造成的影響。

8.3樣本處理、運(yùn)送及保存：明確樣本處理方法、樣本的保存條件及期限（短期、長期）等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)的要求。

9.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟 9.1試驗(yàn)環(huán)境：溫、濕度條件及樣本復(fù)溫等要求。

9.2試劑使用方法、注意事項(xiàng)，試劑開封后注意事項(xiàng)等。

9.3待測樣本的預(yù)處理方法、步驟及注意事項(xiàng)。

9.4明確樣本檢測的操作步驟。

9.5校準(zhǔn)：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項(xiàng)、校準(zhǔn)曲線的繪制方法。對需專用儀器的產(chǎn)品，應(yīng)注明推薦的儀器校準(zhǔn)周期。

9.6質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。

9.7結(jié)果計(jì)算：對于手工/半自動(dòng)儀器，說明校準(zhǔn)曲線擬合方式及結(jié)果計(jì)算方法。

10.【參考區(qū)間】 應(yīng)按照不同性別及女性生理周期，分別說明常用樣本類型的參考區(qū)間，并簡要說明參考區(qū)間的確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考區(qū)間”。

11.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】 11.1應(yīng)對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果進(jìn)行合理的解釋。

11.2明確有可能存在引起樣本濃度升高及降低因素，并說明在何種條件下需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，以及在確認(rèn)試驗(yàn)時(shí)，對待測樣本可能采取的優(yōu)化條件等進(jìn)行詳述。

11.3如樣本濃度超出線性范圍后，若申請人聲稱樣本可可稀釋后檢測，應(yīng)明確樣本最大可稀釋倍數(shù)及稀釋液種類。

12.【檢驗(yàn)方法局限性】至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：

12.1本試劑的檢測結(jié)果僅供參考，不能單獨(dú)作為確診或排除病例的依據(jù)，對患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

12.2干擾物質(zhì)及鉤狀效應(yīng)（如適用）對檢測結(jié)果的影響。明確干擾物對測定的影響，同時(shí)列出干擾物的具體濃度，不應(yīng)使用模糊的描述方式。明示出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時(shí)促卵泡生成素的最低濃度，或濃度達(dá)到一定數(shù)值時(shí)未發(fā)生鉤狀效應(yīng)。

13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】詳述以下性能指標(biāo)：

至少應(yīng)包括：檢出限、線性、準(zhǔn)確度、精密度（批內(nèi)精密度、批間精密度）、特異性。

14.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

14.1如使用冰箱中冷藏保存的檢測試劑建議檢測前應(yīng)從冰箱內(nèi)取出，恢復(fù)至室溫再打開使用，否則會(huì)影響檢測結(jié)果。

14.2有關(guān)試驗(yàn)操作、樣本保存及處理等其他注意事項(xiàng)。

14.3采用不同廠家及不同方法學(xué)的試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報(bào)告中注明所用試劑特征（如參考區(qū)間或方法學(xué)）。

14.4有關(guān)人源組分（如有）的警告，如：試劑內(nèi)質(zhì)控品或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了HBsAg、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項(xiàng)目的檢測，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。提示對于潛在傳染源的處理方式。

14.5對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都視為傳染源進(jìn)行處理。

14.6對于動(dòng)物源性組分，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

三、審查關(guān)注點(diǎn)（一）技術(shù)要求中性能指標(biāo)的設(shè)定及檢驗(yàn)方法是否符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求；

技術(shù)要求的格式是否符合《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。

（二）FSH預(yù)期值呈現(xiàn)性別、女性不同生理周期差異，在參考區(qū)間的確立/驗(yàn)證過程中是否予以體現(xiàn)，樣本生理周期確定的依據(jù)是否科學(xué)合理。

（三）試劑（盒）的穩(wěn)定性研究方法是否合理，穩(wěn)定性結(jié)論是否和說明書聲稱一致。

（四）FSH被測物質(zhì)在體內(nèi)有同功異構(gòu)結(jié)構(gòu)，臨床試驗(yàn)對比試劑盡可能選擇與考核試劑具有相同溯源性的。臨床試驗(yàn)采用的樣本類型及病例是否滿足試劑（盒）聲稱的預(yù)期用途，樣本量及臨床研究單位的選擇、統(tǒng)計(jì)方法及研究結(jié)果、臨床方案及報(bào)告撰寫的格式等是否符合《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）對相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定。

（五）由于促卵泡生成素與促黃體生成素（LH）、促甲狀腺激素（TSH）、人絨毛膜促性腺激素（HCG）結(jié)構(gòu)類似，建議臨床試驗(yàn)過程中可適當(dāng)入組一些早孕及甲減等疾病的樣本。

（六）說明書中預(yù)期用途、儲(chǔ)存條件及有效期、檢驗(yàn)方法、參考區(qū)間、產(chǎn)品性能指標(biāo)等描述應(yīng)分別與臨床研究資料、穩(wěn)定性研究資料、參考區(qū)間研究資料、分析性能評估資料的研究結(jié)論相一致。

（七）定量熒光免疫層析的產(chǎn)品可根據(jù)產(chǎn)品方法學(xué)特點(diǎn)選取適宜的試驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)。

四、參考文獻(xiàn) （一）馮仁豐，《臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)》，第二版，上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2007年4月（二）尚紅，王毓三，申子瑜.《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》，第四版，人民衛(wèi)生出版社，2015年3月第1版（三）How to Define and Determine Reference Intervals in the Clinical Laboratory;Approved Guideline，Second Edition 2000，CLSI/NCCLS C28-A2（四）Method Comparison And Bias Estimation Using Patient Samples;Approved Guideline，Second Edition 2002，CLSI/NCCLS EP9-A2 五、編制單位 天津市醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。

第二篇：地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年）

附件3

地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑

注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門對注冊申報(bào)資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，也不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

地中海貧血（簡稱地貧）是一種常染色體隱性遺傳病，是由于珠蛋白基因發(fā)生突變（包括點(diǎn)突變和缺失等），致使珠蛋白肽鏈合成減少或完全不能合成而導(dǎo)致的一組單基因遺傳性溶血性疾病，輕者可無臨床表現(xiàn)，重者以進(jìn)行性溶血性貧血為主要特征。根據(jù)珠蛋白肽鏈合成受到抑制的類型，地貧分為α-，β-和γ-地貧等，臨床上最常見的是α-和β-地貧。地貧主要分布在地中海沿岸、東南亞和少數(shù)非洲地區(qū)，具有明顯的種族特性和地域分布差異。地貧是我國南方地區(qū)最常見、危害最大的遺傳病之一，尤以廣西、云南、廣東、海南、四川和貴州等省份為甚，云南、海南和廣東的地貧基因人群攜帶率可達(dá)10%以上，廣西更是達(dá)到了20%以上。

α-地貧主要是由于α-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起。α-珠蛋白基因簇位于16p13.3，包括胎兒期和成人期表達(dá)的2個(gè)基因（α2和α1），基因的排列順序?yàn)?’-α2-α1-3’。根據(jù)單倍型的情況，可將α地貧分為3類：（1）缺失型α+地貧（-α/），缺失1個(gè)α基因；（2）缺失型α0地貧（--/），2個(gè)α基因同時(shí)缺失；（3）非缺失型α+地貧（αTα/或ααT/），1個(gè)α1或α2基因發(fā)生點(diǎn)突變或少數(shù)幾個(gè)堿基的缺失。中國現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)至少19種α-珠蛋白基因大片段缺失和38種α-珠蛋白基因點(diǎn)突變。其中，6

種α-珠蛋白基因的突變：--SEA/、-α3.7/、-α4.2/、αWSα/（HBA2：c.369C>G）、αQSα/（HBA2：c.377

T>C）；αCSα/（HBA2：c.427T>C）占患病人群總數(shù)的98%。

α-地貧基因型和臨床分型的關(guān)系已經(jīng)基本闡明。α-地貧的表型嚴(yán)重程度隨著功能性α-珠蛋白基因的減少而加重：（1）1個(gè)α-基因缺失或點(diǎn)突變（-α/αα或ααT/αα或αTα/αα），稱為靜止型α-地貧，通常不貧血，血液學(xué)表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素；（2）2個(gè)α-基因缺失或復(fù)合-α基因點(diǎn)突變，或點(diǎn)突變，其基因型為--/αα或-α/-α或-α/ααT或αTα/-α或αTα/αTα，稱為輕型α-地貧，臨床表現(xiàn)為不貧血或輕度貧血，血液學(xué)檢查有小細(xì)胞低色素特征；（3）3個(gè)α-基因缺失或復(fù)合α基因點(diǎn)突變，基因型為--/-α或--/αTα，稱為中間型α-地貧，又稱Hb

H病，患者有輕至重度貧血。某些基因型為αTα/αTα的病例（如αCSα/αCSα、αQSα/αQSα和αCSα/αQSα）也表現(xiàn)為Hb

H病。通常，--/αTα的非缺失型

Hb

H病較單純?nèi)笔虷b

H?。?-/-α）的臨床表現(xiàn)更為嚴(yán)重，特別是基因型為--/αCSα或--/αQSα的Hb

H病患者，貧血程度較為嚴(yán)重；（4）4個(gè)α-基因缺失，其基因型為--/--，稱為重型α-地貧，又稱Hb

Bart’s胎兒水腫綜合征，此類個(gè)體一般無法存活到出生或分娩后半小時(shí)內(nèi)死亡。

β-地貧是由于β-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起，以點(diǎn)突變?yōu)橹鳎贁?shù)為缺失型。β-珠蛋白基因簇位于11p15.3，包括2個(gè)成人期表達(dá)基因（β和δ），基因的排列順序?yàn)?’-δ-β-3’。根據(jù)β-珠蛋白鏈合成量的程度，可將β-地貧分為3類：（1）β0地貧，β-珠蛋白鏈完全不能合成，其所在的等位基因稱為β0地貧等位基因；（2）β+地貧，β-珠蛋白鏈合成減少，其所在的等位基因稱為β+地貧等位基因；（3）β++地貧，又稱沉默型β-地貧，β-珠蛋白鏈合成輕微減少。中國已至少報(bào)道84種β-珠蛋白基因點(diǎn)突變和11種β-珠蛋白基因缺失。其中，6種點(diǎn)突變：HBB：c.126_129delCTTT，HBB：c.52A>T，HBB：c.-78A>G，HBB：

c.79G>A，HBB：

c.316-197C>T和HBB：

c.216_217insA占了全部突變類型的90%以上。

β-地貧的臨床表型可分為4種：（1）靜止型β-地貧，基因型為β++/βN，血液學(xué)表型正?；蚺R界，一般只能通過分子診斷識別；（2）輕型β-地貧，基因型為β0/βN或β+/βN，臨床表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素和HbA2值升高；（3）中間型β-地貧，基因型為β+/β+或β+/β0，表型變異范圍大，可從輕度貧血到中度貧血，多于幼兒期出現(xiàn)中度貧血；（4）重型β-地貧，基因型為β+/β0或β0/β0，通常伴有嚴(yán)重貧血，需要定期輸血才能存活?；純撼錾鷷r(shí)無癥狀，常于嬰兒期（3-12月齡）發(fā)病。如不治療，患兒多于5歲前死亡。此外，中間型的分子基礎(chǔ)較為復(fù)雜，顯性β-地貧突變的雜合子（βD/βN），合并α-地貧突變的β-地貧突變純合子（β0/β0），或合并α-珠蛋白三聯(lián)體的β-地貧突變雜合子（β0/βN或β+/βN），也會(huì)顯示中間型的表型。

2018年發(fā)布的《重型β-地中海貧血的診斷和治療指南》明確規(guī)定：對于重型β-地中海貧血的診斷，有條件者均應(yīng)進(jìn)行基因診斷，基因型為純合子或雙重雜合子為確診本病的指標(biāo)。2018年發(fā)布的《兒童非輸血依賴型地中海貧血的診治和管理專家共識》也明確規(guī)定：地貧基因檢測為非輸血依賴型地貧的診斷依據(jù)之一。

另外，國家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的相關(guān)文件要求：為減少重型地貧患兒出生，在我國地貧高發(fā)省份實(shí)施地貧防控試點(diǎn)項(xiàng)目。主要流程包括：（1）對新婚夫婦和計(jì)劃懷孕夫婦在懷孕前或孕期進(jìn)行血常規(guī)初篩；（2）對夫婦一方或雙方血常規(guī)檢查結(jié)果陽性的夫婦進(jìn)行血紅蛋白分析復(fù)篩；（3）對血紅蛋白分析復(fù)篩結(jié)果均為陽性的夫婦，取其抗凝靜脈全血進(jìn)行相應(yīng)的α+β地貧基因檢測；（4）綜合夫婦雙方病史詢問、地貧篩查和基因檢測結(jié)果，判定為高風(fēng)險(xiǎn)夫婦。對高風(fēng)險(xiǎn)夫婦進(jìn)行追蹤，及時(shí)了解受檢婦女懷孕情況，指導(dǎo)女方在懷孕后適宜時(shí)期接受產(chǎn)前診斷。產(chǎn)前診斷的對象為胎兒，樣本類型為胎兒的絨毛、羊水和臍帶血，檢測項(xiàng)目為相應(yīng)的地貧基因檢測。

綜上，結(jié)合該類產(chǎn)品臨床使用的實(shí)際情況，本指導(dǎo)原則的預(yù)期用途可為：用于體外定性檢測人外周靜脈全血或胎兒羊水等樣本中基因組DNA的α-和/或β-地貧相關(guān)基因，用于α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的評估，或胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷等。

結(jié)合該類產(chǎn)品在中國注冊的實(shí)際情況以及當(dāng)前的認(rèn)知，本指導(dǎo)原則僅對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預(yù)期用途的相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行了詳細(xì)闡述。針對其他預(yù)期用途，本指導(dǎo)原則僅對部分內(nèi)容進(jìn)行了闡述，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性，對本指導(dǎo)原則未涉及的內(nèi)容進(jìn)行補(bǔ)充并做出相應(yīng)評價(jià)。

本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于PCR探針法方法建立的，對于其他分子生物學(xué)檢測技術(shù)（如：PCR-反向點(diǎn)雜交法和gap-PCR法等），可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對不適用部分進(jìn)行或補(bǔ)充其他的評價(jià)和驗(yàn)證，但需闡述不適用的理由，并驗(yàn)證替代方法的科學(xué)合理性。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。

二、注冊申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價(jià)以及國內(nèi)外同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗(yàn)原理、檢測的突變類型以及臨床意義等方面詳細(xì)說明申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

綜述資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原總局令第5號，以下簡稱《辦法》）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（原總局公告2014年第44號），以下簡稱《44號公告》的要求。

（二）主要原材料的研究資料

主要原材料研究資料包括主要反應(yīng)成分、對照品（質(zhì)控品）及企業(yè)參考品的研究資料。

1.此類產(chǎn)品的主要反應(yīng)成分一般包括人基因組核酸提取/純化試劑、檢測所需引物、探針、酶、dNTPs、反應(yīng)緩沖液等。申請人應(yīng)提交相關(guān)原材料的選擇、制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料。如為申請人自制，應(yīng)提交詳細(xì)的工藝穩(wěn)定性研究資料；如為外購，還應(yīng)提交供應(yīng)商篩選資料以及供應(yīng)商提供的原材料質(zhì)量檢定報(bào)告。

1.1

核酸提取/純化試劑（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。

1.2

引物、探針

申請人應(yīng)詳述引物、探針的設(shè)計(jì)原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對應(yīng)情況。建議設(shè)計(jì)多套引物探針以供篩選，針對待測位點(diǎn)的特異性等進(jìn)行評價(jià)，選擇最佳設(shè)計(jì)，并提交詳細(xì)的篩選研究數(shù)據(jù)。

申請人應(yīng)針對選定的引物、探針原材料進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，一般包括：分子量、純度（HPLC等）、濃度、探針熒光標(biāo)記基團(tuán)的激發(fā)波長和發(fā)射波長，以及功能性試驗(yàn)等，并依據(jù)評價(jià)結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1.3酶

酶包括DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等。申請人應(yīng)針對各種酶的活性進(jìn)行驗(yàn)證，提交功能性試驗(yàn)資料，并確定酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

DNA聚合酶應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性。UDG/UNG應(yīng)具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。

1.4脫氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）

包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP；應(yīng)提交對其純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的驗(yàn)證資料，以及功能性試驗(yàn)資料，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.對照品（質(zhì)控品）

試劑盒的質(zhì)控體系通過設(shè)置各種試劑盒對照品（質(zhì)控品）來實(shí)現(xiàn)。陽性對照應(yīng)至少包括代表性的突變位點(diǎn)和突變類型。陰性對照可以是含有野生型序列的核酸溶液?？瞻讓φ諡椴缓怂岬娜芤骸?/p>

如該類產(chǎn)品所采用的方法學(xué)和檢驗(yàn)原理顯示：無論檢測何種樣本（野生型、雜合突變和純合突變），其反應(yīng)體系均可報(bào)出核酸序列結(jié)果，均可對管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，則無需另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)；否則，試劑盒應(yīng)另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)。

對照品可采用人基因組DNA、細(xì)胞系或質(zhì)粒等?？瞻讓φ諔?yīng)參與樣本核酸的平行提取。申請人應(yīng)提供對照品原料選擇、制備、定值過程等的詳細(xì)研究數(shù)據(jù)，并對其檢測結(jié)果做出明確的范圍要求。

3.企業(yè)參考品

企業(yè)參考品主要包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品和精密度參考品等。申請人應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料選擇、制備方法、基因序列確認(rèn)及檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的詳細(xì)研究資料等。

3.1

陽性參考品：可采用臨床樣本或其核酸溶液，如采用臨床樣本，則樣本類型應(yīng)與待測樣本一致。應(yīng)至少包含所有檢測位點(diǎn)的雜合型樣本，同時(shí)盡量納入純合突變型樣本。對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系或質(zhì)粒。

3.2

陰性參考品：應(yīng)包括野生型臨床樣本或其核酸溶液，以及易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的同源序列樣本，同時(shí)應(yīng)盡量包含檢測范圍外其他檢測位點(diǎn)的樣本等。

3.3檢測限參考品可選擇最低檢測限濃度（例如：95%檢出率水平）或接近最低檢測限濃度（例如100%檢出率水平）的臨床樣本或其核酸溶液，至少包含所有檢測位點(diǎn)的雜合型樣本。

3.4

精密度參考品應(yīng)至少包括低濃度雜合突變型臨床樣本或其核酸溶液，應(yīng)至少包括代表性的突變位點(diǎn)和突變類型，且在每一反應(yīng)體系均有分布。

目前，該類產(chǎn)品已有國家參考品，對于申報(bào)產(chǎn)品所聲稱的檢測位點(diǎn)，企業(yè)參考品的要求應(yīng)不低于國家參考品。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

主要生產(chǎn)工藝研究資料包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTPs濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標(biāo)記（如有）等工藝過程的描述及確定依據(jù)。生產(chǎn)過程應(yīng)對關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制，可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝，標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

反應(yīng)體系研究指反應(yīng)條件的選擇確定過程，包括樣本采集、預(yù)處理（如有）、樣本用量、試劑用量、核酸提取純化步驟、PCR反應(yīng)條件、閾值循環(huán)數(shù)（Ct值）等的確定。

不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如有差異應(yīng)分別提交。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)針對下述各項(xiàng)分析性能提交詳細(xì)的評估資料，包括試驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)樣本（類型、來源、數(shù)量、處理方法、基因型和濃度確認(rèn)等）、可接受標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)論等。分析性能評估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則。

每項(xiàng)性能評估應(yīng)盡量采用與適用樣本類型一致的臨床樣本，對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系等。

1.核酸提取/純化性能（如有）

在進(jìn)行靶核酸檢測前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂崽崛?純化步驟。該步驟應(yīng)最大量分離和純化目的核酸并盡可能去除PCR抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸提取/純化組分，申請人都應(yīng)對配套使用的核酸提取/純化方法的提取效率和提取核酸純度、濃度等做充分的驗(yàn)證，并評價(jià)該方法能否滿足該類產(chǎn)品的要求。

2.檢測準(zhǔn)確性

建議采用若干份臨床樣本驗(yàn)證該類產(chǎn)品的檢測準(zhǔn)確性，樣本類型與說明書聲稱的樣本類型一致。樣本應(yīng)涵蓋野生型、所有檢測位點(diǎn)的雜合突變型，同時(shí)盡量納入純合突變型。對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系或質(zhì)粒。

3.最低檢測限

該類產(chǎn)品的最低檢測限可定義為：在滿足一定的檢測準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠檢出目標(biāo)序列的最低人基因組DNA的濃度?？刹捎锰荻葷舛鹊娜嘶蚪MDNA樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測，確定適當(dāng)檢出率水平（如：95%）下的最低人基因組DNA濃度。檢測限評價(jià)建議采用臨床樣本或細(xì)胞系，并至少包含所有檢測位點(diǎn)的雜合突變型。應(yīng)明確臨床樣本或細(xì)胞系與人基因組DNA濃度的對應(yīng)關(guān)系。

4.分析特異性

4.1

應(yīng)針對同源序列或檢測范圍外基因和位點(diǎn)進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證，說明交叉反應(yīng)樣本的制備方法、核酸序列確認(rèn)方法，提交詳細(xì)的驗(yàn)證資料。

4.2

應(yīng)針對可能的內(nèi)源和外源性干擾物進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究。內(nèi)源干擾物主要涉及血脂、膽紅素、血紅蛋白和白蛋白、母體細(xì)胞的干擾等，外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑和常用藥物等。

干擾試驗(yàn)可通過在臨床樣本中人工添加干擾物質(zhì)的方式，評價(jià)干擾物質(zhì)對目標(biāo)序列檢測的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進(jìn)行干擾試驗(yàn)評價(jià)。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評價(jià)；如有干擾，應(yīng)確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。

5.精密度

精密度評價(jià)應(yīng)采用臨床樣本進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)操作完全按照說明書執(zhí)行，包含核酸提取/純化等步驟（如有）。應(yīng)對每一反應(yīng)體系進(jìn)行精密度評價(jià)，并至少覆蓋代表性的突變位點(diǎn)和突變類型。

精密度評價(jià)需滿足如下要求：

5.1對可能影響檢測精密度的主要因素進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測試劑本身外，還包括分析儀器、操作者、地點(diǎn)、時(shí)間、檢測輪次和試劑批次等。

5.2設(shè)定合理的精密度評價(jià)周期，對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評價(jià)。如有條件，申請人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對室間重復(fù)性進(jìn)行評價(jià)。

5.3用于精密度評價(jià)的臨床樣本至少設(shè)置低濃度和中/高濃度水平。

5.4精密度指標(biāo)可設(shè)置為CV等（如有），申請人應(yīng)對精密度指標(biāo)評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。

（五）陽性判斷值確定資料

建議納入一定數(shù)量的臨床樣本，應(yīng)包括所有檢測位點(diǎn)的各種基因型（野生型、雜合突變型，同時(shí)盡量納入純合突變型），采用受試者工作特征（ROC）曲線或其他合理方法確定陽性判斷值。

如試劑判讀存在灰區(qū)，應(yīng)解釋說明灰區(qū)范圍的確定方法。

對于某些檢測方法學(xué)，陽性判斷值研究可能不適用，申請人應(yīng)說明理由。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要包括申報(bào)產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究和適用樣本的穩(wěn)定性研究兩部分。前者主要包括申報(bào)產(chǎn)品的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開瓶/復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制的研究等；后者則是指適用樣本的保存條件和保存時(shí)間等的研究。

實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究應(yīng)采用至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后，選取多個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行產(chǎn)品性能評價(jià)，從而確定產(chǎn)品保存條件和有效期。

如核酸提取液可保存，還需對核酸提取液的保存條件和保存時(shí)間進(jìn)行研究。

（七）臨床試驗(yàn)

應(yīng)滿足《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。下面僅說明該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)中應(yīng)關(guān)注的重點(diǎn)問題。

1．針對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預(yù)期用途

1.1

臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)及人員

申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)人種和流行病學(xué)背景等因素，選擇不少于3家（含3家）符合法規(guī)要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。

1.2

臨床試驗(yàn)適用人群和臨床樣本

具有地貧癥狀和/或體征，或血液學(xué)表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素的疑似地貧患者和攜帶者；需與地貧進(jìn)行鑒別診斷的其他疾病患者，如：缺鐵性貧血、鐵粒細(xì)胞性貧血或先天性紅細(xì)胞生成異常性貧血等。

臨床試驗(yàn)所用樣本應(yīng)為抗凝外周血樣本（基因組DNA非臨床樣本）。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)分別滿足申報(bào)產(chǎn)品說明書、對比試劑說明書（如適用）及第三方試劑說明書（如適用）的相關(guān)要求。

1.3臨床試驗(yàn)方法

1.3.1已有同類產(chǎn)品上市的申報(bào)產(chǎn)品

對于已批準(zhǔn)的α-地貧突變和β-地貧突變，原則上選擇已上市同類產(chǎn)品作為對比試劑，評價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的臨床檢測性能。

1.3.2無同類產(chǎn)品上市的申報(bào)產(chǎn)品

1.3.2.1

如新突變位點(diǎn)的臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可（如：國內(nèi)相關(guān)指南或?qū)＜夜沧R），且上述認(rèn)可基于充分的中國人群的臨床數(shù)據(jù)，則臨床試驗(yàn)可選擇Sanger基因測序（針對新的點(diǎn)突變）或臨床普遍使用的其他公認(rèn)方法（針對其他類型的新突變位點(diǎn)，如缺失）作為對比方法，評價(jià)新突變位點(diǎn)的臨床檢測性能。除此之外，還應(yīng)提交新位點(diǎn)臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可的相關(guān)證據(jù)，該部分資料可不納入臨床方案和報(bào)告。

1.3.2.2

如新突變位點(diǎn)的臨床意義未獲行業(yè)認(rèn)可，則臨床試驗(yàn)應(yīng)包括兩個(gè)目的，新突變位點(diǎn)的臨床檢測性能評價(jià)和臨床意義評價(jià)。新突變位點(diǎn)的臨床檢測性能評價(jià)可參考1.3.2.1；新突變位點(diǎn)的臨床意義評價(jià)應(yīng)提交基于中國人群的充分的臨床證據(jù)，證明基因型與表型的關(guān)系，如：隨訪或其他可證明基因型與表型關(guān)系的臨床驗(yàn)證資料。

1.4最低樣本量和陽性例數(shù)

臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算，并詳細(xì)描述所使用統(tǒng)計(jì)方法及各參數(shù)的確定依據(jù)。

1.4.1

臨床檢測性能評價(jià)的樣本量估算

臨床檢測性能評價(jià)的樣本量估算可分為以下幾種情況。

對于常見突變位點(diǎn)，建議采用單組目標(biāo)值法分別估算每個(gè)突變位點(diǎn)臨床試驗(yàn)的最低樣本量，通過陽性符合率計(jì)算所需陽性樣本的例數(shù)，通過陰性符合率計(jì)算所需陰性樣本的例數(shù)，同時(shí)考慮脫落情況，估算最低樣本總量。陽性符合率和陰性符合率的目標(biāo)值（臨床可接受的最低標(biāo)準(zhǔn)）建議均不低于95%。

對于罕見突變位點(diǎn)，陰性樣本的例數(shù)可根據(jù)上述方法進(jìn)行估算，陽性樣本則應(yīng)保證一定的例數(shù)。

對于極其罕見的、且有確切臨床證據(jù)證明其臨床意義的突變位點(diǎn)，陰性樣本的例數(shù)可根據(jù)上述方法進(jìn)行估算，陽性樣本的例數(shù)則應(yīng)結(jié)合臨床證據(jù)確定。

1.4.2

新位點(diǎn)臨床意義評價(jià)的樣本量估算

新位點(diǎn)臨床意義評價(jià)的樣本量估算，建議采用抽樣調(diào)查公式或其他合理方法進(jìn)行估算。

2.針對“地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的評估”和“胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷”預(yù)期用途

針對上述兩個(gè)預(yù)期用途，本指導(dǎo)原則僅對部分內(nèi)容進(jìn)行了闡述，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性，充分考慮本指導(dǎo)原則未涉及的內(nèi)容，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)并進(jìn)行評價(jià)。

2.1臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)和人員

如申報(bào)產(chǎn)品的預(yù)期用途為胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷，除滿足法規(guī)要求外，臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)還應(yīng)取得產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)資質(zhì)。臨床試驗(yàn)人員應(yīng)為經(jīng)過專門培訓(xùn)的取得資質(zhì)的人員。機(jī)構(gòu)和人員應(yīng)遵循《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》《母嬰保健專項(xiàng)技術(shù)服務(wù)許可及人員資格管理辦法》，機(jī)構(gòu)應(yīng)取得《母嬰保健技術(shù)服務(wù)執(zhí)業(yè)許可證》，人員應(yīng)取得《母嬰保健技術(shù)考核合格證書》。

2.2

臨床試驗(yàn)適用人群和臨床樣本

如預(yù)期用途為地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的評估，則適用人群為：地貧表型篩查陽性的育齡人群。地貧表型篩查陽性的育齡人群可根據(jù)國家衛(wèi)生健康委員會(huì)和地貧高發(fā)地區(qū)相關(guān)政策確定。

如預(yù)期用途為胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷，則適用人群為：地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的胎兒。地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的確定可參考國家衛(wèi)生健康委員會(huì)等相關(guān)文件。

臨床試驗(yàn)所用樣本應(yīng)為胎兒羊水等臨床樣本（基因組DNA非臨床樣本）。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)符合國家衛(wèi)生健康委員會(huì)等相關(guān)文件的要求，并滿足產(chǎn)品說明書的要求。

2.3

最低樣本量和陽性例數(shù)

針對每種不同的預(yù)期用途，應(yīng)分別采用合理方法估算最低樣本量。同一預(yù)期用途的不同樣本類型（羊水和臍帶血等），也應(yīng)分別采用合理方法估算最低樣本量。

3.如有其他預(yù)期用途，也應(yīng)設(shè)計(jì)科學(xué)的臨床試驗(yàn)，提供充分的證據(jù)，證明其預(yù)期用途。

4.不同預(yù)期用途的通用要求

4.1

臨床試驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析

4.1.1應(yīng)在臨床試驗(yàn)方案或報(bào)告中明確申報(bào)產(chǎn)品、對比試劑和第三方試劑的試驗(yàn)方法。

4.1.2臨床試驗(yàn)病例總結(jié)表應(yīng)以列表方式表示，包括申報(bào)產(chǎn)品的結(jié)果、對比試劑的結(jié)果、第三方試劑的檢測結(jié)果（如有）、臨床診斷、年齡和性別等。

4.1.3以交叉表分別總結(jié)兩種試劑的定性檢測結(jié)果，選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以驗(yàn)證兩種試劑檢測結(jié)果的一致性。

4.1.4

結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本，采用合理方法進(jìn)行復(fù)核，并對差異原因進(jìn)行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)說明理由。

4.2

臨床試驗(yàn)方案

各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由該實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。

試驗(yàn)方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程和結(jié)果判定時(shí)，應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對比試劑/方法應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。另外，申報(bào)產(chǎn)品的樣本類型不應(yīng)超越對比試劑/方法對樣本類型的要求。

4.3臨床試驗(yàn)報(bào)告

應(yīng)對試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》、《44號公告》和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)要求。該類產(chǎn)品作為三類體外診斷試劑，應(yīng)將主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求等內(nèi)容作為附錄附于技術(shù)要求正文后。

目前，該類產(chǎn)品已有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

（九）產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告

根據(jù)《辦法》的要求，第三類體外診斷試劑申請注冊時(shí)應(yīng)提交連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的檢驗(yàn)報(bào)告。目前，該產(chǎn)品已有國家參考品，產(chǎn)品檢驗(yàn)應(yīng)滿足國家參考品的要求。

（十）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報(bào)資料的相關(guān)研究結(jié)果保持一致。下面對該類產(chǎn)品說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行闡述。

1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1本產(chǎn)品用于定性檢測人xx樣本基因組DNA中的α-和/或β-地貧xx突變，用于：α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的評估，或胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷。

1.2介紹地貧相關(guān)的臨床背景信息及實(shí)驗(yàn)室診斷方法等，介紹被測靶標(biāo)（突變位點(diǎn)）的相關(guān)情況。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱或數(shù)量等信息，說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2試劑盒中不包含但對該項(xiàng)檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱及其他相關(guān)信息。

2.3如果試劑盒中不包含用于核酸提取純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)過驗(yàn)證后配合使用的商品化核酸提取純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱以和醫(yī)療器械備案號（如有）等詳細(xì)信息。

3.【檢驗(yàn)原理】

3.1對試劑盒的被測靶標(biāo)進(jìn)行詳細(xì)描述（基因位置、突變位點(diǎn)及相關(guān)特征等），對試劑盒所用探針、引物或突變的判定等進(jìn)行詳細(xì)介紹；對不同樣本反應(yīng)管組合、對照品設(shè)置及熒光信號檢測原理等進(jìn)行介紹。

3.2試劑盒技術(shù)原理的詳細(xì)介紹，建議結(jié)合適當(dāng)圖示進(jìn)行說明。如反應(yīng)體系中添加了相關(guān)的防污染組分（如UNG酶），也應(yīng)對其作用機(jī)理進(jìn)行適當(dāng)介紹。

4.【儲(chǔ)存條件及有效期】

說明試劑盒的效期穩(wěn)定性等，應(yīng)明確具體的儲(chǔ)存條件及有效期等信息。

5.【樣本要求】

樣本的采集、處理、運(yùn)送和保存：明確樣本采集、核酸提取純化前的處理（如離心和洗滌等）、保存條件及期限以及運(yùn)送條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的限制等。

6.【適用儀器】

所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

7.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

7.1實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)室分區(qū)、實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度和空調(diào)氣流方向控制等注意事項(xiàng)。

7.2試劑配制方法和注意事項(xiàng)。

7.3詳述核酸提取純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)（如適用），對核酸提取純化環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)控，明確提取核酸的濃度純度等質(zhì)量要求。

7.4擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。

7.5

PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置或相應(yīng)的自動(dòng)化檢測程序及相關(guān)注意事項(xiàng)。

7.6儀器設(shè)置（如適用）：特殊參數(shù)、探針的熒光素標(biāo)記情況、對待測樣本及其他對照品的熒光通道選擇等。

8.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

結(jié)合對照品、樣本管檢測結(jié)果以及檢測類型，以列表形式詳述所有可能出現(xiàn)的結(jié)果及相應(yīng)的解釋。如存在檢測灰區(qū)，應(yīng)詳述對于灰區(qū)結(jié)果的處理方式。

9.【檢驗(yàn)方法的局限性】

9.1申報(bào)產(chǎn)品僅對下述檢測類型xx進(jìn)行了驗(yàn)證。

9.2有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析

9.2.1不合理的樣本采集、運(yùn)送及處理或核酸過度降解均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

9.2.2未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果（如有）。

10.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】簡述以下性能指標(biāo)：

10.1最低檢測限：簡單介紹最低檢測限的確定方法，并明確最低檢測限結(jié)果。

10.2陽性/陰性參考品符合率。

10.3精密度：簡單介紹精密度的確定方法，并明確精密度結(jié)果。

10.4分析特異性

10.4.1交叉反應(yīng)驗(yàn)證：同源性序列等交叉反應(yīng)驗(yàn)證。

10.4.2干擾物質(zhì)驗(yàn)證：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響。

10.5對比試驗(yàn)研究（如有）：簡要介紹對比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。

11.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

11.1如該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

11.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》現(xiàn)行有效版本等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

三、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。

第三篇：酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

附件1

酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

一、前言

本指導(dǎo)原則主要針對酶聯(lián)免疫類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。

本指導(dǎo)原則系對酶聯(lián)免疫法檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于有關(guān)病原微生物檢測的第三類體外診斷試劑的注冊技術(shù)審查。其他酶聯(lián)免疫法檢測試劑（如作為二類管理的體外診斷試劑）可參考本指導(dǎo)原則執(zhí)行。

三、基本要求

（一）基本原則

1.研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求?！? 2 — 2.試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時(shí)，應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行；還應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。企業(yè)應(yīng)對試劑的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。

3.診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。

4.試劑在研制、生產(chǎn)過程中所用的各種材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。

5.生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。

（二）原材料質(zhì)量控制 1.主要生物原料

與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。使用前應(yīng)按照工藝要求對這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請。

主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括：（1）外觀

肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生

— 3 — 物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。

（2）純度和分子量

主要經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳，一般每個(gè)電泳道加樣量為5μg，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位臵。

（3）蛋白濃度

蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲法或其他適宜的方法進(jìn)行檢測。

（4）效價(jià)

效價(jià)的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進(jìn)行。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。

（5）功能性實(shí)驗(yàn)

功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。

2.生物輔料

生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合2000年版的《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。建議作以下檢驗(yàn)：

（1）牛血清或羊血清

外 觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物。無菌試驗(yàn)：將血清直接37℃放臵7天，明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或— 4 — 沉淀。

總蛋白含量：用雙縮脲法測定，蛋白含量≥32mg/ml。

球蛋白含量：取待測血清1ml，采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀，沉淀溶于0.85%氯化鈉溶液，至1ml，用Lowry方法測定，蛋白含量應(yīng)≤2mg/ml。

（2）牛血清白蛋白：

外 觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。

溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，在18?26℃時(shí)，溶解時(shí)間應(yīng)≤15分鐘，pH值應(yīng)為6.5?7.1。

總蛋白含量：用雙縮脲法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95％。

總蛋白中的牛血清白蛋白（BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95%。

BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。（3）酪蛋白：

應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（4）標(biāo)記用酶

應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗(yàn)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于3.0。

對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行酶聯(lián)免疫測定，均不能出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。

生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應(yīng)商。3.化學(xué)原材料

化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘?jiān)龋鶓?yīng)符合《中國生物制品主要原輔材

— 5 — 料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》分析純級別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。

主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對固定，不得隨意發(fā)生變更?；瘜W(xué)原材料在購入時(shí)，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告。

4.其他物料（1）酶標(biāo)板 ①外觀

明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量，如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應(yīng)剔除。②吸附能力和精密性 采用合適的方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

一般用一定濃度的正常人免疫球蛋白G(IgG)包被板條，再用一定濃度的抗人IgG酶結(jié)合物吸附，通過顯色反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀讀數(shù)，計(jì)算CV值。CV值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般批內(nèi)CV≤5％，批間CV≤10％。

（2）液體試劑裝量瓶

包括陰陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等液體組分，均應(yīng)有相應(yīng)的裝量瓶，并建立相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規(guī)格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。

（3）其他材料

包括試劑瓶標(biāo)簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等，應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)?！? 6 — 5.企業(yè)質(zhì)控品

企業(yè)質(zhì)控品一般包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性、鉤狀效應(yīng)（hook效應(yīng)）等質(zhì)控樣品，對于定量檢測試劑，還包括線性質(zhì)控品樣品。如該產(chǎn)品具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）進(jìn)行標(biāo)化；若該診斷試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

企業(yè)質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)與診斷試劑的待測樣品的基質(zhì)基本一致，如待測樣品為血清/血漿，質(zhì)控品基質(zhì)也應(yīng)為血清/血漿。

（三）試劑盒各組分的生產(chǎn)

酶聯(lián)免疫法檢測試劑主要組分的生產(chǎn)包括酶標(biāo)記物的制備及滴配過程（酶工作液濃度確定）、各種工作溶液的配制、包被酶標(biāo)反應(yīng)板、分裝及包裝等步驟；并通過產(chǎn)品的半成品檢驗(yàn)和成品檢驗(yàn)兩個(gè)質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。

1.各種工作液的配制

酶聯(lián)免疫診斷試劑研制生產(chǎn)過程中所用的工作液一般包括：包被液、封閉液、陰性陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液、終止液等，對定量檢測試劑，還包括標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液。若陰性、陽性對照或其他液體組分涉及生物安全性問題，制備時(shí)應(yīng)在相應(yīng)的生物安全實(shí)驗(yàn)室完成。

各種工作液在配制過程中應(yīng)嚴(yán)格按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的配方進(jìn)行配制，充分混勻確保液體中的各種成分均勻，同時(shí)進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量檢驗(yàn)并達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，方可使用或分裝。對于定量檢測試劑，其標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液應(yīng)具有量值溯源性。

應(yīng)對配制過程及配制的液體進(jìn)行的質(zhì)量控制，主要包括酶結(jié)合物的

— 7 — 功能性實(shí)驗(yàn)及穩(wěn)定性；各種溶液的外觀、pH值等；酶作用底物應(yīng)測定在無相應(yīng)酶的情況下自身顯色的情況，并制定合理的限定指標(biāo)；終止液應(yīng)對其終止酶促反應(yīng)的能力進(jìn)行測定。

2.包被酶標(biāo)反應(yīng)板

包被前應(yīng)對酶標(biāo)反應(yīng)板進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，如尺寸、外觀、包裝、吸附性能、精密性等，并記錄酶標(biāo)反應(yīng)板的批號、數(shù)量、標(biāo)識。酶標(biāo)反應(yīng)板經(jīng)檢驗(yàn)合格后方能用于包被。不同批號的板條不能混用。

選擇經(jīng)檢驗(yàn)合格的包被原料（如抗原、抗體等），經(jīng)一定的方法確定最佳包被濃度和酶結(jié)合物工作濃度，按照診斷試劑的生產(chǎn)規(guī)程，配制包被緩沖液、封閉液，經(jīng)檢驗(yàn)合格后，包被酶標(biāo)反應(yīng)板，經(jīng)干燥后，已包被的酶標(biāo)反應(yīng)板用鋁箔紙封閉（內(nèi)臵干燥劑），保存于2?8℃。

應(yīng)對包被過程進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量控制，如包被用原料（抗原或者抗體等生物活性原料）的質(zhì)量檢驗(yàn)、包被液和封閉液的質(zhì)控（如配方、外觀、pH值）、包被過程的監(jiān)控（包括包被和封閉的體積、溫度、時(shí)間等）、包被均一性檢驗(yàn)、干燥過程的監(jiān)控等。

3.分裝和包裝

樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等溶液應(yīng)嚴(yán)格按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的量進(jìn)行過濾后再分裝，分裝量的誤差應(yīng)小于5%。

分裝及包裝均應(yīng)按照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程要求進(jìn)行。包裝前，應(yīng)嚴(yán)格檢查試劑盒的品名、批號等，核對各試劑盒各組分的數(shù)量，并在關(guān)盒前進(jìn)行復(fù)核。

（四）質(zhì)量控制 1.半成品質(zhì)量控制（1）半成品抽樣

檢驗(yàn)人員按試劑的批號，根據(jù)抽樣申請單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各— 8 — 組分，作號標(biāo)記、待檢。

（2）半成品檢驗(yàn)

根據(jù)試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行半成品的檢驗(yàn)。半成品檢驗(yàn)，一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品。若某類試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

檢驗(yàn)指標(biāo)一般包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。對于精密性，一般情況下CV不得高于15％（采用競爭抑制法的診斷試劑CV不得高于20％）。對定量檢測試劑，同時(shí)應(yīng)分析其線性相關(guān)系數(shù)和定量質(zhì)控品檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

企業(yè)應(yīng)該對每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性研究。試劑盒各組分應(yīng)留樣，2?8℃定期作穩(wěn)定性考核，同時(shí)作37℃熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.成品質(zhì)量控制

產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號、實(shí)際包裝量、抽樣申請單的要求進(jìn)行抽樣，同時(shí)填寫抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數(shù)量應(yīng)包括檢驗(yàn)用數(shù)量和留樣數(shù)量。質(zhì)檢人員同時(shí)應(yīng)檢查相關(guān)原始記錄。

每一批酶聯(lián)免疫類檢測試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗(yàn)證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗(yàn)、自測及注冊檢驗(yàn)等各階段所需樣品量的要求。

（1）成品檢驗(yàn)

成品檢驗(yàn)時(shí)，一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品，并達(dá)到相應(yīng)質(zhì)量要求。若該診斷試劑沒有國家

— 9 — 標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

（2）穩(wěn)定性試驗(yàn)

在批放行前，每一批試劑應(yīng)完成37℃熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

四、名詞解釋

酶聯(lián)免疫法：是指在酶標(biāo)板上包被特定的抗原（和/或抗體）后，利用直接或間接的方法與待測樣品中的相關(guān)抗體（和/或抗原）反應(yīng)，形成的抗原抗體復(fù)合物再與相應(yīng)的酶標(biāo)記的抗體和/或抗原進(jìn)一步反應(yīng)，經(jīng)過酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，由形成的顏色的強(qiáng)弱來判斷樣本中相應(yīng)的抗體和/或抗原的存在。

五、參考文獻(xiàn)：

1.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社

— 10 —

第四篇：抗人球蛋白檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2018年）

附件3

抗人球蛋白檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門對注冊申報(bào)資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對抗人球蛋白檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。如申請人認(rèn)為有必要增加本指導(dǎo)原則不包含的研究內(nèi)容，可自行補(bǔ)充。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、范圍

抗人球蛋白檢測試劑可進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)和間接抗人球蛋白試驗(yàn)，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細(xì)胞的檢測等。

本指導(dǎo)原則適用于抗人球蛋白檢測試劑，同時(shí)適用于不同的檢測方法，如試管法、柱凝集法等，但不適用于血源篩查用抗人球蛋白檢測試劑。

本指導(dǎo)原則僅包括對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報(bào)資料中部分項(xiàng)目的要求，適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜，應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料的撰寫應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）（以下簡稱“44號公告”）的相關(guān)要求。內(nèi)容主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價(jià)以及同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從靈敏度、特異性、效價(jià)、重復(fù)性等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的異同。

（二）主要原材料研究資料

主要原材料研究資料應(yīng)包括主要組成成分（抗體、凝膠、玻璃珠等）的選擇、制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究資料。

1.抗體的選擇及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

明確抗體的來源，如為單克隆抗體應(yīng)明確細(xì)胞株、克隆號等內(nèi)容。提供抗體靈敏度、特異性、效價(jià)等基本性能的驗(yàn)證資料。

抗體如為自行生產(chǎn)，提供抗體的詳細(xì)生產(chǎn)及鑒定過程。

1.1靈敏度：已知抗體效價(jià)的臨床有意義的血型系統(tǒng)至少7種血型抗體（IgG）的最高稀釋倍數(shù)的凝集強(qiáng)度不小于1+。

1.2特異性：臨床有意義的已知血型系統(tǒng)至少7種，每種選1個(gè)抗體（IgG），與對應(yīng)的抗原陽性細(xì)胞均應(yīng)檢測陽性。

與不規(guī)則抗體陰性樣本檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。

1.3效價(jià)：如采用倍比稀釋的方法驗(yàn)證抗人球蛋白試劑的效價(jià)，分別采用IgG和/或C3d致敏的細(xì)胞或根據(jù)廠家確立的研究方法進(jìn)行驗(yàn)證。

2.填充物的選擇：說明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如組成、粒徑及其質(zhì)量控制要求。應(yīng)提交選擇比較過程，提交驗(yàn)證試驗(yàn)資料。

3.填充緩沖液：應(yīng)說明組成成分，并對外觀、性狀、pH值等物理指標(biāo)及功能性進(jìn)行研究驗(yàn)證。

4.液體試劑稀釋液：應(yīng)說明組成成分，并對外觀、性狀、pH值等物理指標(biāo)及功能性進(jìn)行研究驗(yàn)證。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

3.主要生產(chǎn)工藝過程的研究資料、每一步生產(chǎn)工藝的確認(rèn)資料及試驗(yàn)數(shù)據(jù)。如抗體濃度的選擇確定過程、凝膠溶脹條件的確定、填充量及填充過程的研究資料，填充應(yīng)確保均勻無氣泡，以及質(zhì)量控制的要求。

4.主要反應(yīng)體系的研究資料、每一步反應(yīng)體系的確認(rèn)資料及試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

反應(yīng)體系的設(shè)置應(yīng)符合《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》等公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范、指南或標(biāo)準(zhǔn)的要求。如紅細(xì)胞懸液制備要求及紅細(xì)胞濃度的確定、用量的要求、孵育時(shí)間等；應(yīng)提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機(jī)型號固定轉(zhuǎn)數(shù)和時(shí)間的方式設(shè)置離心條件。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制或成品驗(yàn)證階段對試劑進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，對于每項(xiàng)分析性能的評價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。分析性能評估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考國內(nèi)或國際有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。

產(chǎn)品性能研究所采用的各種儀器、試劑或其他物品如可能均應(yīng)采用境內(nèi)或境外已批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品，如抗體篩查紅細(xì)胞、血型抗體等。

分析性能評估試驗(yàn)中應(yīng)明確所有試驗(yàn)每種試劑的用量、試劑紅細(xì)胞的濃度、采用的試驗(yàn)方法（試管法、柱凝集法、微孔板法等）。所有試驗(yàn)方法應(yīng)符合配合使用的血型試劑的具體操作要求。

對于抗人球蛋白檢測試劑建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究：

1.間接抗人球蛋白試驗(yàn)：

提供臨床有意義的血型系統(tǒng)至少7種不規(guī)則抗體（IgG）檢測靈敏度和特異性的驗(yàn)證資料，明確所檢出抗體的抗體效價(jià)的具體要求，可參照以下要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.1靈敏度

與已知抗體效價(jià)的血型抗體的最高稀釋倍數(shù)的凝集強(qiáng)度不小于1+，并且抗體效價(jià)不低于試管間接抗人球蛋白法測定結(jié)果。

C3d凝集強(qiáng)度≥2+。

1.2特異性

與已知抗體類型的血型抗體對應(yīng)的O型相應(yīng)抗原陽性紅細(xì)胞的反應(yīng)為陽性。

與已知抗體類型的血型抗體對應(yīng)的O型相應(yīng)抗原陰性紅細(xì)胞的反應(yīng)為陰性。

與C3d陽性或陰性樣本反應(yīng)為陽性或陰性。

1.3重復(fù)性

分別采用IgG性質(zhì)抗D抗體，IgG性質(zhì)抗Jka/Jkb抗體，IgG性質(zhì)抗Fya/Fyb抗體進(jìn)行重復(fù)性驗(yàn)證。

批內(nèi)重復(fù)性采用同一批次檢測卡重復(fù)進(jìn)行檢測，重復(fù)次數(shù)不少于10次。

日間重復(fù)性采用同一批次檢測卡每日重復(fù)進(jìn)行檢測，重復(fù)天數(shù)不少于10天。

批間重復(fù)性采用至少三批檢測卡進(jìn)行重復(fù)檢測。

批內(nèi)、日間、批間重復(fù)性檢測結(jié)果應(yīng)基本一致，檢測結(jié)果凝集強(qiáng)度差異不超過1+。

采用陰性結(jié)果的血清重復(fù)10次檢測，均應(yīng)出現(xiàn)陰性反應(yīng)。

1.4干擾

提供溶血、脂血、黃疸干擾的評估資料，應(yīng)至少采用強(qiáng)、中、弱性質(zhì)的抗體進(jìn)行評價(jià)。

1.5血清、血漿比對的評估資料。

1.6抗凝劑的適用性研究驗(yàn)證。

1.7采用部分臨床樣本進(jìn)行檢測靈敏度和特異性的評價(jià)，應(yīng)考慮涵蓋腫瘤、血液病、自身免疫病和貧血患者、老人及兒童等病例來源，應(yīng)包括陽性和陰性病例。

1.8分別進(jìn)行每個(gè)預(yù)期用途的完整的性能評估資料，應(yīng)至少包括50例陽性病例。

2.直接抗人球蛋白試驗(yàn)

使用被不規(guī)則抗體和/或C3d致敏的紅細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)，評價(jià)產(chǎn)品性能，適用的性能評價(jià)內(nèi)容可以參照間接抗人球蛋白試驗(yàn)。

（五）陽性判斷值

給出不同凝集強(qiáng)度的研究方法，并明確不同凝集強(qiáng)度代表的具體意義，并應(yīng)包含溶血、混合視野雙群等情況，明確具體的試驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)步驟，提供不同凝集強(qiáng)度的圖例或相片。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、加熱穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等研究，申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案，實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)至少包括靈敏度、特異性、重復(fù)性等內(nèi)容。

穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

應(yīng)對樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段對儲(chǔ)存樣本進(jìn)行全性能的分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行評價(jià)。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)分別在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床試驗(yàn)

臨床試驗(yàn)總體要求及臨床試驗(yàn)資料的內(nèi)容應(yīng)符合《辦法》、“44號公告”及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的規(guī)定，以下僅結(jié)合抗人球蛋白檢測試劑的具體特點(diǎn)對其臨床試驗(yàn)中應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容進(jìn)行闡述。

1.研究方法

該類試劑已有同類產(chǎn)品上市，按照法規(guī)要求應(yīng)選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗(yàn)用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

2.臨床試驗(yàn)單位的選擇

應(yīng)選擇符合相關(guān)法規(guī)要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行臨床試驗(yàn)，不得選擇血站進(jìn)行臨床試驗(yàn)。

3.病例選擇

臨床總病例數(shù)應(yīng)不少于3000例。應(yīng)采用臨床患者樣本進(jìn)行臨床研究，供血者樣本不得作為臨床病例納入。應(yīng)包括對檢測易產(chǎn)生干擾的病例，盡量選擇多種疾病患者樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者）、老人、兒童（不同年齡段）等。

4.實(shí)驗(yàn)過程

無論直接抗人球蛋白試驗(yàn)還是間接抗人球蛋白試驗(yàn)，均應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的預(yù)期用途和適用人群分別進(jìn)行臨床試驗(yàn)。

在進(jìn)行間接抗人球蛋白檢測試劑臨床試驗(yàn)的過程中除與對比試劑進(jìn)行比較外，陽性結(jié)果應(yīng)給出不規(guī)則抗體的具體鑒定結(jié)果。

產(chǎn)品如適用于不同的預(yù)期用途（如不規(guī)則抗體篩查、抗體致敏紅細(xì)胞檢測、交叉配血等），每種預(yù)期用途均應(yīng)分別進(jìn)行至少3000例的臨床試驗(yàn)，如適用于不規(guī)則抗體篩查或抗體致敏紅細(xì)胞檢測等，每種預(yù)期用途應(yīng)分別包含不少于100例陽性病例，如適用于交叉配血相關(guān)用途，應(yīng)包含不少于100例交叉配血不合病例?？贵w致敏紅細(xì)胞檢測應(yīng)根據(jù)疾病的種類，分別進(jìn)行臨床試驗(yàn)。

交叉配血使用的供血者樣本，最多只能使用兩次，交叉配血不得使用血型不合的樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

同時(shí)應(yīng)明確配合使用的試劑產(chǎn)品。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)進(jìn)行考核試劑與對比試劑檢測結(jié)果的陽性符合率、陰性符合率、總符合率的計(jì)算，并以四格表的形式進(jìn)行列表，并對定性結(jié)果進(jìn)行Kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證檢測結(jié)果的一致性。

6.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致[考核試劑與對比試劑檢測結(jié)果不一致、與對比試劑凝集強(qiáng)度差異較大（差異2個(gè)凝集強(qiáng)度及以上）]的樣本，應(yīng)采用臨床上公認(rèn)較好的第三種同類試劑進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，同時(shí)應(yīng)給出最終的抗體鑒定結(jié)果。

7.臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄表應(yīng)作為臨床試驗(yàn)報(bào)告附件提交。臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄表應(yīng)列明所有病例的具體臨床診斷信息、凝集強(qiáng)度和抗體鑒定結(jié)果，如有不符樣本應(yīng)列明第三方確認(rèn)的結(jié)果。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料

產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料應(yīng)符合“44號公告”的基本要求，并參照相應(yīng)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析。風(fēng)險(xiǎn)分析中應(yīng)充分考慮到各種可能影響檢測結(jié)果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在進(jìn)行抗人球蛋白檢測時(shí)可能存在一定的干擾、實(shí)驗(yàn)過程不規(guī)范、有些抗體較弱導(dǎo)致的檢測結(jié)果不穩(wěn)定等，申請人應(yīng)根據(jù)這些不確定的因素分析產(chǎn)品應(yīng)用可能存在的風(fēng)險(xiǎn)。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、性能評估等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》和“44號公告”的相關(guān)規(guī)定。

如果擬申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。

產(chǎn)品技術(shù)要求的性能指標(biāo)應(yīng)至少包括靈敏度、特異性、重復(fù)性等。

產(chǎn)品技術(shù)要求的附錄應(yīng)包括主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定要求。主要原材料應(yīng)明確抗體來源、克隆號、純度、效價(jià)、特異性以及功能性驗(yàn)證要求，應(yīng)明確填充物來源及主要特征、質(zhì)量控制要求，緩沖液應(yīng)明確組成、pH值等特性及質(zhì)控要求。主要生產(chǎn)工藝應(yīng)以流程圖形式描述主要生產(chǎn)工藝過程，并明確主要生產(chǎn)工藝的具體條件和質(zhì)量控制點(diǎn)。半成品檢定應(yīng)明確半成品的檢驗(yàn)要求及方法。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗(yàn)報(bào)告

根據(jù)《辦法》要求，首次申請注冊的第三類體外診斷試劑產(chǎn)品應(yīng)在國家食品藥品監(jiān)督管理部門認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊檢驗(yàn)。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗(yàn)原理、試驗(yàn)方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，境外產(chǎn)品的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

以下內(nèi)容僅對抗人球蛋白檢測試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，說明書其他內(nèi)容應(yīng)根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行編寫。

1.【預(yù)期用途】

1.1寫明本試劑用于直接抗人球蛋白試驗(yàn)和/或間接抗人球蛋白試驗(yàn)，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細(xì)胞的檢測（明確疾病類型）等，同時(shí)明確不用于血源篩查，僅用于臨床檢驗(yàn)。

1.2說明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。

2.【儲(chǔ)存條件及有效期】

說明試劑的儲(chǔ)存條件及有效期、加速穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等。

3.【適用儀器】明確具體的離心機(jī)和/或孵育器型號（如適用）。

4.【樣本要求】

明確溶血、脂血、黃疸樣本是否可以使用，或提供使用此類樣本的最低要求。依據(jù)穩(wěn)定性研究結(jié)果寫明樣本穩(wěn)定性。

明確適用的抗凝劑的要求。

明確具體的樣本采集、處理方法及過程。

明確紅細(xì)胞配制使用的LISS液的生產(chǎn)廠家、規(guī)格、貨號等內(nèi)容。

5.【陽性判斷值】

明確各種試驗(yàn)方法的結(jié)果判斷方法及標(biāo)準(zhǔn)，并通過不同凝集強(qiáng)度的圖例或照片進(jìn)行詳細(xì)解釋。

6.【檢驗(yàn)方法】

明確配合使用的抗體篩查用紅細(xì)胞的生產(chǎn)廠家、規(guī)格、貨號等內(nèi)容。

須明確具體的檢驗(yàn)步驟，反應(yīng)體系的描述應(yīng)準(zhǔn)確且應(yīng)與研究資料一致，不同的預(yù)期用途應(yīng)分別詳細(xì)描述實(shí)驗(yàn)過程。如配合其他試劑進(jìn)行試驗(yàn)，需注明試驗(yàn)方法應(yīng)完全符合配合試劑的試驗(yàn)操作要求。

7.【檢驗(yàn)方法的局限性】

未被檢出的抗IgG抗體在某些病例中可能有臨床意義。

8.【注意事項(xiàng)】

8.1上腔部分或封口處有氣泡或液滴的卡，必須在使用前離心。

8.2濃度過高或過低的紅細(xì)胞懸液會(huì)引起異常結(jié)果。

8.3在不規(guī)則抗體篩查、交叉配血試驗(yàn)中LISS液可以增強(qiáng)抗原抗體的反應(yīng)，應(yīng)嚴(yán)格按產(chǎn)品說明書規(guī)范使用低離子液。

三、參考文獻(xiàn)

1.國家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）.2014年9月

2.國家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）.2014年9月

3.中國生物制品規(guī)程（2000年版）.化學(xué)工業(yè)出版社

四、起草單位

國家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。

第五篇：核酸擴(kuò)增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則3

附件3

核酸擴(kuò)增法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

一、前言

本指導(dǎo)原則主要針對核酸擴(kuò)增類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。

本指導(dǎo)原則系對核酸擴(kuò)增法檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于核酸擴(kuò)增法檢測試劑的注冊技術(shù)審查，其他類核酸檢測試劑可參照相關(guān)內(nèi)容。

三、基本要求

（一）基本原則

1.核酸擴(kuò)增類檢測試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》。研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。

2．試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具有與其技術(shù)要求相適應(yīng)的人員、廠房、設(shè)施和

— 23 — 儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，配備滿足核酸提取和擴(kuò)增檢測以及操作人員防護(hù)所需的設(shè)備。建立專用實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格分區(qū)，人員和物品應(yīng)當(dāng)單向流動(dòng)，以最大限度地防止實(shí)驗(yàn)過程中樣品之間的污染和避免擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。生產(chǎn)用于病原微生物核酸檢測的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立符合生物安全要求的設(shè)施和措施。

3.試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求，建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，并應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。

4.核酸擴(kuò)增類檢測試劑的引物設(shè)計(jì)應(yīng)當(dāng)符合核酸檢測設(shè)計(jì)的要求，擴(kuò)增體系應(yīng)設(shè)定合理的內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)，試劑需設(shè)置抗污染的特定措施，擴(kuò)增產(chǎn)物須進(jìn)行確證研究。

5.企業(yè)使用新型原材料時(shí)，應(yīng)提供與通行原材料比對研究結(jié)果及相關(guān)資料。使用未列入上述標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)試劑，應(yīng)不低于分析純。

（二）原材料

應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品或標(biāo)準(zhǔn)品等的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定；如主要原材料來自市場（從其他單位購買），應(yīng)提供的資料包括：對物料供應(yīng)商審核的相關(guān)資料、購買合同、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。主要原材料（包括生產(chǎn)工藝）或其供應(yīng)商發(fā)生變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請。

核酸類檢測試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無脫氧核糖核酸酶（DNase）和核糖核酸酶（RNase）污染。

1.脫氧三磷酸核苷（dNTP）

核酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP。應(yīng)為高效液相色譜（HPLC）純、PCR級，無DNase和RNase污染?！?0℃保存。— 24 — 2.引物

由一定數(shù)量的dNTP構(gòu)成的特定序列，通常采用脫氧核糖核酸（DNA）合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。

凍干粉，序列正確，合成量應(yīng)達(dá)到試劑生產(chǎn)要求。純度應(yīng)達(dá)到電泳級（PAGE）或HPLC級，不含雜帶。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如PAGE電泳結(jié)果或HPLC分析圖譜。

應(yīng)作HPLC分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度計(jì)測定OD260nm/OD280nm的比值在1.6—2.0之間，可視為合格引物。-20℃保存。

3.探針

是指特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測。通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在5'-端(和/或3'-端)進(jìn)行標(biāo)記，如熒光素報(bào)告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在3'-端標(biāo)記熒光素淬滅基團(tuán)，并經(jīng)HPLC或其他適宜方法純化。

凍干粉，純度應(yīng)達(dá)到HPLC純。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如HPLC分析圖譜；應(yīng)對探針的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進(jìn)行核實(shí)，并作HPLC分析。應(yīng)以可見—紫外分光光度計(jì)進(jìn)行200—800nm掃描，在260nm處應(yīng)有吸收峰。另外，根據(jù)標(biāo)記熒光素的不同，還應(yīng)該在熒光素的激發(fā)波長處有吸收峰，如FAM熒光素在494nm、TET熒光素在521nm、TAMRA熒光素在560nm處有特異的吸收峰，雜交探針在493nm、625nm、685nm處有特異的吸收峰，檢定合格后入庫。避光、-20℃保存。

4.DNA聚合酶

如Taq DNA聚合酶。應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性，94℃保溫1小時(shí)后仍保持50%活性。-20℃保存。

5.尿嘧啶糖基化酶（UNG）

具有尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，IU UNG

— 25 — 在 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模板應(yīng)完全降解，不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。-20℃保存。

6.逆轉(zhuǎn)錄酶

具逆轉(zhuǎn)錄酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性?！?0℃保存。

（三）生產(chǎn)工藝

核酸擴(kuò)增類檢測試劑的基本生產(chǎn)工藝通常包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對電導(dǎo)率pH、等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。

工藝研究的資料應(yīng)能對反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。

（四）質(zhì)量控制 1.半成品質(zhì)量控制

（1）按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品。

（2）以參考品/對照品進(jìn)行半成品質(zhì)量控制。如果產(chǎn)品具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)以其進(jìn)行檢定。如果產(chǎn)品不具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)根據(jù)規(guī)定制備相應(yīng)的企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

（3）半成品檢定內(nèi)容包括：陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度。檢測結(jié)果應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。

（4）半成品檢定合格后，按試劑盒組成及時(shí)進(jìn)行分裝和包裝。2.成品質(zhì)量控制

（1）每一批核酸擴(kuò)增法檢測試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗(yàn)證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗(yàn)、自測及注冊檢驗(yàn)等各階段所需樣品量的要求?！? 26 —（2）產(chǎn)品完成包裝后，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)量進(jìn)行抽樣和生產(chǎn)記錄審核。（3）以參考品/對照品進(jìn)行成品質(zhì)量檢驗(yàn)。結(jié)果應(yīng)符合要求。（4）成品檢驗(yàn)的內(nèi)容應(yīng)包括：陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度、線性范圍（定量產(chǎn)品）和穩(wěn)定性。

5．試劑批放行前，應(yīng)對需要進(jìn)行穩(wěn)定性考核的試劑成分，在特定溫度或條件下進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。穩(wěn)定性試驗(yàn)可采用加速破壞試驗(yàn)。

四、名詞解釋

核酸擴(kuò)增法檢測試劑：核酸擴(kuò)增技術(shù)泛指以擴(kuò)增脫氧核糖核酸（DNA）或核糖核酸（RNA）為手段，檢測特定核酸序列或篩查特定基因的檢測技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增反應(yīng)（TMA）等。核酸擴(kuò)增法檢測試劑是基于核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)的體外診斷試劑，目前已經(jīng)用于病原體檢測、特定疾病的早期診斷和體內(nèi)物質(zhì)的型別鑒定等不同領(lǐng)域。

五、參考文獻(xiàn)

1.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社