第一篇：總膽汁酸測定試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則
附件7 總膽汁酸測定試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對總膽汁酸（Total bile acids，TBA）測定試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。
本指導(dǎo)原則是對總膽汁酸測定試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特征對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。
本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員適用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)、國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍 本指導(dǎo)原則適用于基于采用3α-羥基類固醇脫氫酶（3α-HSD）催化的酶促循環(huán)反應(yīng)（酶循環(huán)法）原理，利用全自動生化分析儀、半自動生化分析儀或分光光度計，體外定量測定人血清或血漿中總膽汁酸含量的試劑盒。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。
反應(yīng)原理如圖所示。膽汁酸被3α-HSD及β-硫代氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（Thio-NAD+）特異性地氧化，生成3α-酮類固醇（3α-KS）及β-硫代還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（Thio-NADH）。此外，生成的3α-KS在3α-HSD及還原型輔酶I（NADH）存在下，又生成膽汁酸和氧化型輔酶I（NAD+）。這樣，血清或血漿中微量的膽汁酸在多次酶循環(huán)的過程中被放大，同時可使生成的Thio-NADH擴(kuò)增，其擴(kuò)增速率與膽汁酸的含量相關(guān)。通過測定Thio-NADH在405nm波長附近吸光度的變化率，從而計算出血清或血漿中膽汁酸的含量。
Thio-NAD+ Thio-NADH 3α-HSD 膽汁酸 3α-酮類固醇 Bile acid 3α-KS NAD+ NADH 依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號，以下簡稱《辦法》）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），總膽汁酸檢測試劑盒屬于用于其他生理、生化或免疫功能指標(biāo)檢測的檢測試劑，管理類別為二類，分類代碼為6840。
二、注冊申報資料要求 （一）綜述資料 綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性方面的說明、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。相關(guān)描述應(yīng)至少包含如下內(nèi)容：
1.產(chǎn)品預(yù)期用途及相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況 1.1總膽汁酸測定試劑用于體外定量測定血清或血漿中總膽汁酸的含量。
1.2總膽汁酸的生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)與功能，在體內(nèi)正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。
1.3與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，如臨床相關(guān)疾病的發(fā)生、實驗室診斷方法等。
2.產(chǎn)品描述：包括產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，主要原材料的來源及制備方法，主要生產(chǎn)工藝過程，校準(zhǔn)品的制備方法及溯源情況（如需提供）、質(zhì)控品的制備方法及定值情況（如需提供）。
3.有關(guān)生物安全性方面的說明：由于體外診斷試劑中的主要原材料可能是由各種動物、病原體、人源的組織和體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質(zhì)制備而成，人源性材料須對有關(guān)傳染?。℉IV、HBV、HCV等）病原體檢測予以說明，并提供相關(guān)的證明文件，其他動物源及微生物來源的材料，應(yīng)當(dāng)提供相應(yīng)的說明文件。為保證產(chǎn)品在運(yùn)輸、使用過程中對使用者和環(huán)境的安全，應(yīng)提供對上述原材料所采用的滅活等試驗方法的說明。
4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價。
5.其他：包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況。相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用情況，申請注冊產(chǎn)品與國內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。
（二）主要原材料的研究資料（如需提供）包括主要反應(yīng)成分、質(zhì)控品（如適用）、校準(zhǔn)品（如適用）等的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)確定的方法及研究資料；
校準(zhǔn)品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等；
質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的定值資料。
（三）主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）主要工藝包括：配制、分裝、凍干等描述及確定依據(jù)，應(yīng)包含產(chǎn)品的工藝流程圖和關(guān)鍵控制點；
反應(yīng)體系包括樣本采集及處理、樣本要求、試劑用量、反應(yīng)條件（溫度、時間等）等。不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。
（四）分析性能評估資料 申請人應(yīng)當(dāng)提交不少于3批產(chǎn)品的全部分析性能評估資料，對于每項分析性能的評估都應(yīng)包括具體的研究項目、實驗設(shè)計、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結(jié)論等詳細(xì)資料。性能評估時應(yīng)將試劑和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個整體進(jìn)行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗時間、地點、檢驗人員、適用儀器、試劑規(guī)格和批號、所選用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品（品牌、規(guī)格、批號等）、臨床樣本來源等。
對于TBA定量測定試劑，分析性能評估應(yīng)至少包括試劑空白吸光度、試劑空白吸光度變化率、準(zhǔn)確度、精密度、線性區(qū)間、分析靈敏度、分析特異性等性能指標(biāo)。干粉或凍干試劑還應(yīng)包括批內(nèi)瓶間差。
1.空白吸光度 用指定空白樣本測試試劑盒，在405nm 波長附近、1cm光徑條件下，記錄測試啟動時的吸光度（A1），扣除反應(yīng)的非線性段或約5 分鐘（T）后的吸光度（A2），A2測試結(jié)果即為試劑空白吸光度測定值，結(jié)果均值應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標(biāo)的要求。
2.試劑空白吸光度變化率 記錄測試啟動時的吸光度（A1），扣除反應(yīng)的非線性段或約5分鐘（T）后的吸光度（A2），計算出吸光度變化值（），即為試劑空白吸光度變化率（（A/min），結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標(biāo)的要求。
3.準(zhǔn)確度 對測量準(zhǔn)確度的評價依次包括：與國家參考物（和/或國際參考物）的偏差分析、回收試驗、方法學(xué)比對等方法，申請人可根據(jù)實際情況選擇合理方法進(jìn)行研究。
3.1與國家參考物（和/或國際參考物）的偏差分析 用有證參考物質(zhì)（CRM）或其他公認(rèn)的參考物質(zhì)或由參考方法定值的高、低2個濃度的人源樣品，對試劑盒進(jìn)行測試，重復(fù)測定3次，取測試結(jié)果均值（M），根據(jù)公式（1）計算相對偏差。如果3次結(jié)果都符合規(guī)定，即判為合格；
如果大于等于2次的結(jié)果不符合，即判為不合格；
如果有1次結(jié)果不符合規(guī)定，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，分別計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合規(guī)定，即判為合格。
………………………（1）式中：
B—相對偏差；
M—測試結(jié)果均值；
T—有證參考物質(zhì)標(biāo)示值，或各濃度人源樣品定值。
3.2回收試驗 在人源樣品中加入一定體積標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)品或純品溶液，每個濃度重復(fù)測定3次，計算回收率。
回收試驗注意事項：
3.2.1加入的標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)品或純品溶液體積與人源樣品體積比應(yīng)不大于1:19或其體積比不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化。
3.2.2加入標(biāo)準(zhǔn)溶液或校準(zhǔn)品溶液或純品溶液后，樣品總濃度應(yīng)在試劑盒測定線性范圍內(nèi)。
3.2.3標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)品或純品溶液應(yīng)有溯源性。
3.3比對試驗 采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比試劑，與擬申報試劑同時檢測一批臨床樣品（至少40例樣本），從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。
在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和參比試劑進(jìn)行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對試驗。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。
方法學(xué)比對注意事項：
3.3.1樣本貯存時間及條件由被測組分的穩(wěn)定性而定，盡可能避免使用貯存的樣品；
3.3.2應(yīng)采用人源樣品，并且此樣本對于被測組成的影響應(yīng)明確，盡量不使用含有干擾此方法的組分或條件；
3.3.3分析濃度盡可能在報告的濃度范圍內(nèi)均勻分布；
3.3.4商品質(zhì)控物或者校準(zhǔn)物可能存在基質(zhì)效應(yīng)，應(yīng)避免使用。
4.精密度 4.1批內(nèi)精密度 批內(nèi)精密度評估應(yīng)至少選擇高、低兩個濃度水平的樣本（或質(zhì)控品）進(jìn)行，兩個濃度都應(yīng)在試劑盒的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標(biāo)的正常參考值附近和異常值樣本，建議采用人源樣品或與人源樣品基質(zhì)接近的樣本進(jìn)行試驗。批內(nèi)精密度（變異系數(shù)CV）應(yīng)不大于5.0%，批內(nèi)瓶間差（干粉或凍干試劑適用）應(yīng)不大于5.0%。
4.2批間精密度 用同一質(zhì)控品分別測試3個不同批號的試劑，每個批號測定3次，分別計算每批3次測定的均值。相對極差應(yīng)不大于10.0%。
5.線性區(qū)間 建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)與臨床實驗樣本相似，但不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本。理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清（或其他人源樣品），且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。
建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7—11個濃度水平。例如，將預(yù)期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，確定線性范圍。
也可以采用高濃度樣本稀釋的方法驗證線性，將接近線性區(qū)間上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5種濃度，其中低值濃度的樣本須接近線性區(qū)間的下限。按試劑盒說明書操作，對每一濃度的樣本均重復(fù)檢測2次，計算其平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進(jìn)行直線擬合，計算線性相關(guān)系數(shù)r，應(yīng)不低于0.9900。
6.分析靈敏度 試劑盒測試給定濃度的被測物時，在試劑盒規(guī)定參數(shù)下所得的單位濃度吸光度變化率（ΔA/min）應(yīng)符合申請人規(guī)定范圍。
7.分析特異性 對樣本中常見的干擾物質(zhì)進(jìn)行檢測，干擾物濃度的分布需覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度，如膽紅素、甘油三酯、總膽固醇、維生素C、血紅蛋白等，方法為對模擬添加樣本分別進(jìn)行驗證，說明樣本的制備方法及干擾實驗的評價標(biāo)準(zhǔn)，確定可接受的干擾物質(zhì)濃度（結(jié)果應(yīng)量化表示，避免使用輕度、嚴(yán)重等模糊表述）。
藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進(jìn)行或選擇何種藥物及其濃度進(jìn)行。
8.校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品賦值（如產(chǎn)品中包含）在注冊單元包括質(zhì)控品和校準(zhǔn)品時，校準(zhǔn)品應(yīng)當(dāng)提交完整的溯源性文件，包括賦值試驗資料和溯源SOP文件等。應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品定值及不確定度計算相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料。同時，應(yīng)對校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的賦值結(jié)果的瓶內(nèi)均勻性、瓶間均勻性，以及其賦值結(jié)果的準(zhǔn)確度進(jìn)行評價。如校準(zhǔn)品或質(zhì)控品的基質(zhì)不同于臨床常用樣本類型，還應(yīng)提交校準(zhǔn)物質(zhì)互換性的相關(guān)研究資料。
9.其他需注意的問題 應(yīng)當(dāng)對不少于3批產(chǎn)品進(jìn)行性能評估，對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。不同適用機(jī)型、不同包裝規(guī)格，應(yīng)分別提交分析性能評估報告。如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進(jìn)行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進(jìn)行的上述項目評估的試驗資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。如注冊申請中包括不同適用機(jī)型，需要提交在不同機(jī)型上進(jìn)行上述項目評估的試驗資料及總結(jié)。
試劑盒的樣本類型如包括血清和血漿樣本，則應(yīng)對二者進(jìn)行相關(guān)性研究以確認(rèn)二者檢測結(jié)果是否完全一致或存在某種相關(guān)性（如系數(shù)關(guān)系）。對于血漿樣本，申請人應(yīng)對不同的抗凝劑進(jìn)行研究以確認(rèn)最適的抗凝條件以及是否會干擾檢測結(jié)果。
性能指標(biāo)的評價方法并無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同的試劑特征進(jìn)行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。具體研究方法建議參考相關(guān)的國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進(jìn)行。
（五）參考區(qū)間確定資料 應(yīng)提交建立參考區(qū)間所采用樣本來源及詳細(xì)的試驗資料。應(yīng)明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn)，研究各組（如性別、年齡等）例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求。
若引用針對中國人群參考區(qū)間研究的相關(guān)權(quán)威指南，應(yīng)明確說明出處，提交文獻(xiàn)資料并說明引用依據(jù)，應(yīng)采用一定數(shù)量的臨床樣本對該參考區(qū)間進(jìn)行驗證。參考區(qū)間研究結(jié)論應(yīng)與說明書【參考區(qū)間】的相應(yīng)描述保持一致。
（六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。
試劑的穩(wěn)定性包括實時穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶（待機(jī)）穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制（如適用）等。對于實時穩(wěn)定性研究，申請人應(yīng)提供不少于3個生產(chǎn)批次在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料，并提供至少1個生產(chǎn)批次的開瓶穩(wěn)定性和運(yùn)輸穩(wěn)定性研究資料，包括研究目的、材料和方法、研究結(jié)論等。如產(chǎn)品包含校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，還應(yīng)提供相應(yīng)穩(wěn)定性試驗研究資料。試劑的穩(wěn)定性研究應(yīng)注意選取代表性包裝規(guī)格進(jìn)行研究。適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏或冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本的穩(wěn)定性進(jìn)行分析驗證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行評價。
試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進(jìn)行詳細(xì)說明。
（七）臨床評價資料 根據(jù)《關(guān)于公布新修訂免于進(jìn)行臨床試驗醫(yī)療器械目錄的通告》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2018年第94號），總膽汁酸檢測試劑可免于進(jìn)行臨床試驗，申請人可依照《免于進(jìn)行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》開展評價。申請人如無法或不適于按照上述要求對產(chǎn)品進(jìn)行臨床評價，則應(yīng)按照《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求開展臨床試驗。下面僅對臨床試驗中的基本問題進(jìn)行闡述。
1.研究方法 采用國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，采用擬申報產(chǎn)品與之進(jìn)行對比試驗研究，證明擬申報產(chǎn)品與已上市產(chǎn)品等效。
對比試驗結(jié)果不一致（檢測值差異較大）的樣本應(yīng)采用參考方法進(jìn)行驗證。
2.臨床研究單位的選擇 應(yīng)在至少兩家經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局備案的臨床試驗機(jī)構(gòu)開展臨床試驗。臨床試驗機(jī)構(gòu)實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，待評試劑和對照試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。
3.倫理要求 臨床試驗必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則，必須獲得臨床試驗機(jī)構(gòu)倫理委員會的同意，如該臨床試驗對受試者幾乎沒有風(fēng)險，可經(jīng)倫理委員會審查和批準(zhǔn)后免于受試者的知情同意。
4.臨床試驗方案 臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。建議臨床前開展預(yù)試驗工作，最大限度地控制試驗誤差。各臨床試驗機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機(jī)構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室承擔(dān)本實驗的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。
試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各臨床試驗機(jī)構(gòu)選用的參比試劑應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，待評試劑的樣本類型應(yīng)不超越參比試劑的樣本類型。
臨床試驗方案必須獲得臨床試驗機(jī)構(gòu)倫理委員會的同意。
5.研究對象選擇 臨床試驗應(yīng)選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。注冊申請人在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析?？傮w樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本比例應(yīng)不低于試驗總量的30%。樣本中待測物濃度應(yīng)覆蓋待評試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。
應(yīng)明確樣本存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應(yīng)考慮其影響。
如果待評試劑同時適用于血清和血漿樣本類型，可完成一個樣本類型不少于200例的臨床研究，同時驗證其中至少100例受試者的自身血清、血漿樣本測試結(jié)果間的一致性（采用待評試劑檢測），其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應(yīng)一致。也可以分別對同時適用的多個樣本類型按照《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）中試驗樣本量一般要求規(guī)定的200例進(jìn)行試驗，異常值參照上述規(guī)定。
涉及產(chǎn)品檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床試驗采用變更后產(chǎn)品與變更前產(chǎn)品或者已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比對試驗，在至少2家（含2家）臨床試驗機(jī)構(gòu)開展臨床試驗，總樣本數(shù)不少于100例，異常值樣本數(shù)不少于30%。陽性判斷值或參考區(qū)間的變化及增加臨床適應(yīng)癥等變更事項，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。
6.統(tǒng)計學(xué)分析 對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布等情況，建議統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行分析，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。如相關(guān)分析、線性回歸、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析、配對t檢驗等?？己嗽噭┖蛯Ρ仍噭﹥山M檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標(biāo)。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計的檢驗水準(zhǔn)及檢驗的假設(shè)，即評價考核試劑與對比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。
如試劑盒同時適用于血清和血漿樣本，可采用如相關(guān)分析、線性回歸、配對t檢驗等統(tǒng)計學(xué)方法來評價血漿和血清樣本測試結(jié)果間的一致性。
7.臨床試驗總結(jié)報告撰寫 根據(jù)《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。
7.1臨床試驗總體設(shè)計及方案描述 7.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機(jī)構(gòu)選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。
7.1.2納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。
7.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。
7.1.4統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。
7.2具體的臨床試驗情況 7.2.1待評試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機(jī)型等信息。
7.2.2對各研究單位的病例數(shù)、人群分布情況進(jìn)行總合。
7.2.3質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估。
7.2.4具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存等。
7.3統(tǒng)計學(xué)分析 7.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。
7.3.2定量值相關(guān)性和一致性分析 用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和r、R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是對比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，r是相關(guān)系數(shù)（要求r＞0.975），如r＜0.975，應(yīng)適當(dāng)擴(kuò)大樣本量以擴(kuò)大數(shù)據(jù)范圍，R2是判定系數(shù)（通常要求R2≥0.95），計算回歸系數(shù)及截距的95%可信區(qū)間。
分別計算醫(yī)學(xué)決定水平處（或正常參考區(qū)間上限）相對偏倚/偏差及95%置信區(qū)間。醫(yī)學(xué)決定水平處（或正常參考區(qū)間上限）相對偏倚應(yīng)不大于允許誤差（建議參照1/2CLIA’88、1/2室間質(zhì)評可接受范圍、1/2來源于生物變異的總允許誤差、衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)要求設(shè)定允許誤差）。
應(yīng)給出考核試劑與對比試劑之間的差值（絕對偏倚/偏差）或比值（相對偏倚/偏差）散點圖，觀察并分析各點的偏倚分布情況。
通過相關(guān)性分析、配對t檢驗等統(tǒng)計分析方法綜合評價考核試劑與對比試劑等效性。
7.4討論和結(jié)論 對總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。
（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料 對體外診斷試劑產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從產(chǎn)品設(shè)計開發(fā)、原材料的采購控制、生產(chǎn)、預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知和可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進(jìn)行風(fēng)險分析、風(fēng)險評價和相應(yīng)的風(fēng)險控制基礎(chǔ)上，形成風(fēng)險管理報告。應(yīng)當(dāng)符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
風(fēng)險分析應(yīng)包含但不僅限于以下方面的內(nèi)容：
預(yù)期用途錯誤包括：設(shè)計開始時未設(shè)定預(yù)期分析物、未作適用機(jī)型驗證、未針對特定的樣本類型驗證。性能特征失效包括：精密度失效、準(zhǔn)確度失效、非特異性、穩(wěn)定性失效、測量范圍失效、定量失效、量值溯源失效、校準(zhǔn)失效。不正確的結(jié)果包括：配方錯誤、采購的原料未能達(dá)到設(shè)計要求的性能、原材料儲存條件不正確、使用了過期的原材料、反應(yīng)體系不正確、試劑與包裝材料不相容?？赡艿氖褂缅e誤包括：生產(chǎn)者未按照生產(chǎn)流程操作，檢驗者未按照原料、半成品、成品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作，裝配過程組分、標(biāo)簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲存或運(yùn)輸不當(dāng)，客戶未參照產(chǎn)品說明書設(shè)置參數(shù)或使用。與安全性有關(guān)的特征包括：有毒化學(xué)試劑的化學(xué)污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環(huán)境污染。
（九）產(chǎn)品技術(shù)要求 申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、前期臨床評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求，內(nèi)容主要包含產(chǎn)品性能指標(biāo)和檢驗方法。
下面就產(chǎn)品技術(shù)要求中涉及的產(chǎn)品適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和主要性能指標(biāo)等相關(guān)內(nèi)容作簡要敘述。
1.產(chǎn)品適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》 GB/T 29791.1—2013《體外診斷醫(yī)療器械 制造商提供的信息 標(biāo)示 第1部分：術(shù)語定義和通用要求》 GB/T 29791.2—2013《體外診斷醫(yī)療器械 制造商提供的信息 標(biāo)示 第2部分：專業(yè)用體外診斷試劑》 GB/T 26124—2011《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）》 YY/T 1204—2013《總膽汁酸測定試劑盒（酶循環(huán)法）》 YY/T 1227—2014《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）命名》 2.主要性能指標(biāo) 2.1外觀 符合制造商規(guī)定的正常外觀要求。
2.2裝量 液體試劑的裝量應(yīng)不少于標(biāo)示量。
2.3試劑空白吸光度 2.3.1空白吸光度 在405nm波長附近，測定指定空白樣品的吸光度值，重復(fù)兩次，均值即為空白吸光度，試劑空白吸光度應(yīng)不大于0.8（光徑1.0cm）。
2.3.2試劑空白吸光度變化率 在405nm波長附近、光徑1.0cm下，空白吸光度的變化率應(yīng)不大于0.04/min。
2.4線性區(qū)間 線性區(qū)間上限至少達(dá)到150μmol/L，在線性區(qū)間內(nèi)，理論濃度與實測濃度的線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.9900。
2.5準(zhǔn)確度 2.5.1提供參考物質(zhì)或用參考方法定值的人源樣品測定，實測值與標(biāo)示值的偏差在±15.0%內(nèi)。
2.5.2以標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)品或純品溶液測定，試劑盒回收率在90%～110%內(nèi)。
2.5.3無具有溯源性的標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)品或純品溶液，以比對方法測定，相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.9900。
2.6分析靈敏度 試劑盒測試被測物時，單位濃度吸光度變化率應(yīng)符合制造商給定區(qū)間。
2.7精密度 2.7.1批內(nèi)精密度 在重復(fù)性條件下，用高、低值質(zhì)控品測試同一批號試劑盒，重復(fù)測試至少10次，計算批內(nèi)變異系數(shù)（CV），應(yīng)不大于5.0%。
用高、低值質(zhì)控品分別測試同一批號的20個待檢試劑盒，并計算20個測量值的平均值（1）和標(biāo)準(zhǔn)差（s1）。
用高、低質(zhì)控品對該批號的1個待檢測試劑盒重復(fù)測試20次，計算結(jié)果的均值（2）和標(biāo)準(zhǔn)差（s2）。按公式（2）、（3）計算瓶間差的變異系數(shù)（CV），批內(nèi)瓶間差（干粉或凍干試劑適用）均應(yīng)不大于5%。
……………………………（2）……………………………（3）當(dāng)s1＜s2時，令CV=0 2.7.2批間精密度 用同一質(zhì)控品分別測試3個不同批號的試劑盒，每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值。相對極差應(yīng)不大于10.0%。
2.8穩(wěn)定性 取到效期后一定時間內(nèi)或制造商規(guī)定的加速實驗條件下的試劑盒測試，產(chǎn)品性能應(yīng)符合外觀、試劑空白、線性區(qū)間、準(zhǔn)確度、分析靈敏度、批內(nèi)精密度要求。干粉或凍干試劑還應(yīng)同時進(jìn)行復(fù)溶穩(wěn)定性試驗，產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑空白、線性區(qū)間、準(zhǔn)確度、分析靈敏度、批內(nèi)精密度要求。注：加速穩(wěn)定性不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導(dǎo)公式。
如注冊單元中包含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，其性能指標(biāo)的檢驗方法應(yīng)在技術(shù)要求中予以描述。應(yīng)當(dāng)包括準(zhǔn)確度、均勻性、開瓶/復(fù)溶穩(wěn)定性的檢驗方法的詳細(xì)描述。如有新版強(qiáng)制性國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布實施，應(yīng)參照執(zhí)行。
（十）注冊檢驗報告 根據(jù)《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式》的要求，應(yīng)提供具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機(jī)構(gòu)出具的產(chǎn)品注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價意見。總膽汁酸如有國家標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)采用國家標(biāo)準(zhǔn)品。如有相應(yīng)的國家法規(guī)發(fā)布或更新，按其要求執(zhí)行。
（十一）產(chǎn)品說明書 說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗原理、檢驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。
結(jié)合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，下面對總膽汁酸測定試劑盒說明書的重點內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明。
1.【產(chǎn)品名稱】 通用名稱，試劑名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：總膽汁酸測定試劑盒（酶循環(huán)法）。通用名稱應(yīng)當(dāng)按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）規(guī)定的命名原則進(jìn)行命名，可適當(dāng)參考相關(guān)“分類目錄”和/或國家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。
2.【包裝規(guī)格】 注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××人份/盒、××mL，除國際通用計量單位外，其余內(nèi)容均應(yīng)采用中文進(jìn)行表述。
2.1包裝規(guī)格應(yīng)明確單、雙試劑類型。
2.2不得多于產(chǎn)品技術(shù)要求中所列的包裝規(guī)格。
2.3如不同包裝規(guī)格有對應(yīng)不同的機(jī)型，應(yīng)分別明確適用機(jī)型。
3.【預(yù)期用途】 應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：
3.1說明試劑盒用于體外定量測定血清/血漿中總膽汁酸的含量；
同時應(yīng)明確與目的檢測物相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。
如：血清TBA測定可反映肝細(xì)胞的合成、攝取和排泌功能。TBA增加是肝細(xì)胞損害的敏感指標(biāo)，并有助于估計其預(yù)后和提示病情復(fù)發(fā)。
3.3作為支持性資料，申請人應(yīng)提供有關(guān)臨床適應(yīng)癥背景的文獻(xiàn)資料。
4.【檢驗原理】 應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分詳細(xì)說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示。
5.【主要組成成分】 應(yīng)明確以下內(nèi)容：
試劑盒提供的試劑組分的名稱、數(shù)量、每個組成成分在反應(yīng)體系中的比例或濃度。明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。
試劑內(nèi)如包含校準(zhǔn)品和/或質(zhì)控品，除明確組成成分及生物學(xué)來源外，還應(yīng)明確其定值及溯源性，溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級別，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號，質(zhì)控品應(yīng)明確靶值范圍。
6.【儲存條件及有效期】 6.1對試劑的效期穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等信息作詳細(xì)介紹。包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。
6.2不同組分保存條件及有效期不同時，應(yīng)分別說明，產(chǎn)品總有效期以其中效期最短的為準(zhǔn)。
6.3 生產(chǎn)日期，使用期限或者失效日期。
注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“室溫”，應(yīng)明確貯存溫度，如2℃~8℃，有效期12個月。穩(wěn)定期限應(yīng)以月或日或小時為單位。
7.【適用儀器】 7.1說明可適用的儀器，并提供與儀器有關(guān)的必要信息以便用戶能夠作出最好的選擇。
7.2應(yīng)寫明具體適用儀器的型號，不能泛指某一系列儀器。
8.【樣本要求】 重點明確以下內(nèi)容：
8.1樣本采集：說明采集方法及樣本類型，如有血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。
8.2樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件及期限、運(yùn)輸條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)。對儲存樣本的添加劑要求等。
8.3應(yīng)與樣本穩(wěn)定性的研究一致。
9.【檢驗方法】 詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟，包括：
9.1試劑配制方法、注意事項。
9.2試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向、反應(yīng)時間等以及試驗過程中的注意事項。
9.3校準(zhǔn)程序：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項、校準(zhǔn)曲線的繪制。
9.4質(zhì)量控制程序：質(zhì)控品的使用方法、質(zhì)量控制方法。
9.5試驗結(jié)果的計算或讀取：應(yīng)明確檢驗結(jié)果的計算方法。
10.【參考區(qū)間】 應(yīng)注明常用樣本類型的正常參考區(qū)間，并說明參考值確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間”。
11.【檢驗結(jié)果的解釋】 說明可能對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素；
說明在何種情況下需要進(jìn)行確認(rèn)試驗。
若超過線性范圍上限的高濃度樣本可稀釋后測定，則應(yīng)說明樣本的最大可稀釋倍數(shù)、稀釋溶液等信息。
12.【檢驗方法的局限性】至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：
說明該檢驗方法由于哪些原因會使測量結(jié)果產(chǎn)生偏離，或測量結(jié)果還不能完全滿足臨床需要。如：干擾（膽紅素、甘油三酯、總膽固醇、維生素C、血紅蛋白）等。
13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 至少應(yīng)詳述以下性能指標(biāo)：
13.1試劑空白 13.2分析靈敏度 13.3準(zhǔn)確度 13.4精密度（批內(nèi)精密度和批間精密度）13.5線性區(qū)間（線性相關(guān)系數(shù)）14.【注意事項】 應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：
14.1本試劑的檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。
14.2使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本進(jìn)行檢測可能會存在差異。
14.3如無確切的證據(jù)證明其安全性，對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待，提示操作者采取必要的防護(hù)措施。
14.4試劑中含有的化學(xué)成分如接觸人體后會產(chǎn)生不良的影響，應(yīng)明確給予提示。
14.5其他有關(guān)總膽汁酸測定的注意事項。
15.【標(biāo)識的解釋】 如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。
16.【參考文獻(xiàn)】 注明引用參考文獻(xiàn)，其書寫應(yīng)清楚且格式規(guī)范統(tǒng)一。
17.【基本信息】 17.1境內(nèi)體外診斷試劑 17.1.1注冊人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標(biāo)注基本信息：
注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。
17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標(biāo)注基本信息：
注冊人名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，受托企業(yè)的名稱，住所，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。
17.2進(jìn)口體外診斷試劑 按照以下格式標(biāo)注基本信息：
注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，生產(chǎn)地址，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，代理人的名稱，住所，聯(lián)系方式。
18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】 應(yīng)當(dāng)寫明醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號 19.【說明書核準(zhǔn)日期及修改日期】 應(yīng)注明該產(chǎn)品說明書的核準(zhǔn)日期。如曾進(jìn)行過說明書的變更申請，還應(yīng)該同時注明說明書的修改日期。
三、審查關(guān)注點 （一）產(chǎn)品技術(shù)要求中性能指標(biāo)的設(shè)定及檢驗方法是否符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求；
技術(shù)要求的格式是否符合《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。
（二）產(chǎn)品說明書的編寫內(nèi)容及格式是否符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，相關(guān)內(nèi)容是否符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）中對說明書的要求。
（三）分析性能評估指標(biāo)及結(jié)果是否支持產(chǎn)品技術(shù)要求的確定；
是否滿足本指導(dǎo)原則中各指標(biāo)驗證的要求。
（四）參考區(qū)間確定使用的方法是否合理，數(shù)據(jù)統(tǒng)計是否符合統(tǒng)計學(xué)的相關(guān)要求，結(jié)論是否和說明書聲稱一致。
（五）試劑的穩(wěn)定性研究方法是否合理，穩(wěn)定性結(jié)論是否和說明書聲稱一致。
（六）臨床試驗采用的樣本類型及病例是否滿足試劑盒聲稱的預(yù)期用途，樣本量及臨床研究單位的選擇、對比試劑的選擇、統(tǒng)計方法及研究結(jié)果、臨床方案及報告撰寫的格式等是否符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）對相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定。
（七）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料的撰寫是否符合YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。
四、編寫單位 江西省醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。
第二篇：甘油三酯測定試劑盒注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則
附件5
甘油三酯測定試劑盒注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原
則
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對甘油三酯（Triglyceride，TG）測定試劑盒注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。
本指導(dǎo)原則是對甘油三酯測定試劑盒的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。
本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍
甘油三酯測定試劑盒是指利用酶法對人血清、血漿或其他體液中的甘油三酯含量進(jìn)行體外定量測定的試劑。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。
脂肪酶分解血清中甘油三酯為甘油和脂肪酸。在ATP存在下，甘油激酶將甘油磷酸化成3-磷酸甘油。后者被磷酸甘油氧化酶氧化生成磷酸二羥丙酮和過氧化氫。過氧化氫與過氧化物酶、4-氨基比林進(jìn)行顯色反應(yīng)，生成有色苯醌亞胺，在500nm（480nm—550nm）處吸光度值與甘油三酯含量成正比。本文不適用于干化學(xué)類測定試劑。
依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），甘油三酯檢測試劑屬于酯類檢測試劑，管理類別為Ⅱ類，分類代號為6840。
二、注冊申報資料要求
（一）綜述資料
甘油三酯（Triglyceride，TG）是3分子長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子。甘油三酯是人體內(nèi)含量最多的脂類，大部分組織均可以利用甘油三酯分解產(chǎn)物供給能量，同時肝臟、脂肪等組織還可以進(jìn)行甘油三酯的合成，在脂肪組織中貯存。人血清中甘油三酯水平呈明顯正偏態(tài)分布。病理性升高：原發(fā)性見于家族性高甘油三酯血癥與家族性混合型高脂（蛋白）血癥等。繼發(fā)性見于糖尿病、糖尿累積病，甲狀腺功能衰退、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥、酗酒等。病理性降低：原發(fā)性見于無β-脂蛋白血癥和低β-脂蛋白血癥。繼發(fā)性見于繼發(fā)性脂質(zhì)代謝異常，如消化道疾?。ǜ渭不?、吸收不良綜合征）、內(nèi)分泌疾患（甲狀腺功能亢進(jìn)癥、慢性腎上腺皮質(zhì)不全）及肝素等藥物的應(yīng)用。綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、方法學(xué)特征、生物安全性評價、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。
（二）主要原材料的研究資料（如需提供）
包括主要反應(yīng)成分、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品等的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)確定的方法及研究資料；校準(zhǔn)品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等；質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的定值資料。
（三）主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并說明主要生產(chǎn)工藝過程的研究資料、每一步生產(chǎn)工藝的確認(rèn)資料及試驗數(shù)據(jù)。包括：工作液的配制和分裝，顯色系統(tǒng)的描述和確定依據(jù)等。
2.主要反應(yīng)體系的研究資料，包括：樣本采集及處理、樣本要求，確定反應(yīng)溫度、時間、緩沖體系比較等條件的確認(rèn)資料及試驗數(shù)據(jù)，確定樣本和試劑盒組分加樣量的確認(rèn)資料及試驗數(shù)據(jù)，校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法等。
（四）分析性能評估資料
申請人應(yīng)當(dāng)提交產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑盒進(jìn)行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應(yīng)包括具體的研究項目、實驗設(shè)計、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結(jié)論等詳細(xì)資料。性能評估時應(yīng)將試劑和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個整體進(jìn)行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格和批號、所選用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品、臨床樣本來源等。
性能評估應(yīng)至少包括準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍、最低檢測限、分析靈敏度、分析特異性、其他影響檢測的因素等。
1.準(zhǔn)確度
對測量準(zhǔn)確度的評價方法依次包括：相對偏差、回收試驗、比對試驗等方法，甘油三酯項目目前有國家標(biāo)準(zhǔn)品和國際參考物質(zhì)，建議申請人優(yōu)先采用相對偏差的方法，申請人也可根據(jù)實際情況選擇其他合理方法進(jìn)行研究。
1.1相對偏差
使用國家標(biāo)準(zhǔn)品或國際參考物質(zhì)作為樣本進(jìn)行測試，重復(fù)測定3次，計算平均值與標(biāo)示值的相對偏差。
或用由參考方法定值的高、低2個濃度的人血清對試劑盒進(jìn)行測試，每個濃度樣品重復(fù)測定3次，分別取測試結(jié)果均值，計算相對偏差。
1.2回收試驗
在人血清樣品中加入一定體積標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)品溶液或純品，每個濃度重復(fù)測定3次，計算回收率。
回收試驗注意事項：
1.2.1加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積與血清體積比應(yīng)不大于1:20或其體積比不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化；
1.2.2加入標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)品溶液后樣品總濃度應(yīng)在試劑盒測定線性范圍內(nèi)；
1.2.3標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)品應(yīng)有溯源性； 1.3比對試驗
采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品（至少40例樣本），從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。
在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和參比試劑進(jìn)行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對試驗。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。
2.精密度
測量精密度的評估應(yīng)至少包括兩個濃度水平的樣本進(jìn)行，兩個濃度都應(yīng)在試劑盒的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標(biāo)的臨界值附近樣本和異常高值樣本。
3.線性范圍
建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。
超出線性范圍的樣本如需稀釋后測定，應(yīng)做相關(guān)研究，明確稀釋液類型及最大可稀釋倍數(shù)，研究過程應(yīng)注意基質(zhì)效應(yīng)影響，必要時應(yīng)提供基質(zhì)效應(yīng)研究有關(guān)的資料。
4.最低檢測限
最低檢測限的確定常使用同批號試劑對零濃度校準(zhǔn)品（或樣品稀釋液）進(jìn)行至少20次重復(fù)檢測，平均值加2倍SD（≥95%臵信區(qū)間）即試劑的最低檢測限。
5.分析靈敏度
試劑盒測試給定濃度的被測物時，吸光度差值（ΔA）應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)給定范圍。6.分析特異性
應(yīng)明確已知干擾因素對測定結(jié)果的影響：可采用回收實驗對不同濃度的溶血、黃疸對檢測結(jié)果的影響進(jìn)行評價，干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。待評價的甘油三酯樣本濃度至少應(yīng)為高、中、低三個水平，選取線性范圍內(nèi)有臨床代表性意義的濃度。
藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進(jìn)行或選擇何種藥物及其濃度進(jìn)行。
7.校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品賦值（如產(chǎn)品中包含）校準(zhǔn)品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等；質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的定值資料。應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品定值及不確定度計算記錄，提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。
8.其他需注意問題
不同適用機(jī)型、不同包裝規(guī)格，應(yīng)分別提交分析性能評估報告。如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進(jìn)行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進(jìn)行的上述項目評估的試驗資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。
（五）參考區(qū)間確定資料
應(yīng)明確研究采用的樣本來源、詳細(xì)的試驗資料、統(tǒng)計方法等，參考區(qū)間可參考文獻(xiàn)資料，但應(yīng)當(dāng)對至少120例的健康個體進(jìn)行驗證。研究結(jié)論應(yīng)與產(chǎn)品說明書【參考區(qū)間】的相應(yīng)描述保持一致。
（六）穩(wěn)定性研究資料
穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。
試劑的穩(wěn)定性包括實時穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶（待機(jī)）穩(wěn)定性等，申請人應(yīng)至少提供3個生產(chǎn)批次的實時穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性和運(yùn)輸穩(wěn)定性研究資料，包括研究目的、材料和方法、研究結(jié)論等。試劑的穩(wěn)定性研究應(yīng)注意選取代表性包裝規(guī)格進(jìn)行研究（例如：校準(zhǔn)品穩(wěn)定性應(yīng)選取最易受影響的最小裝量）。
適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進(jìn)行性能的分析驗證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行評價。
試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進(jìn)行詳細(xì)說明。
（七）臨床評價資料
臨床試驗資料應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，同時研究資料的形式應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）臨床研究資料有關(guān)的規(guī)定。下面僅對臨床實驗中的基本問題進(jìn)行闡述。
1.研究方法
選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的性能不低于試驗用體外診斷試劑的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱待評試劑）與之進(jìn)行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。
2.臨床試驗機(jī)構(gòu)的選擇
應(yīng)選擇至少兩家經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局資質(zhì)認(rèn)可的臨床試驗機(jī)構(gòu)，臨床試驗機(jī)構(gòu)實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，待評試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。
3.臨床試驗方案
臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。建議臨床前開展預(yù)試驗工作，最大限度地控制試驗誤差。各臨床試驗機(jī)構(gòu)的方案設(shè)臵應(yīng)保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機(jī)構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。
試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各臨床試驗機(jī)構(gòu)選用的參比試劑應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，待評試劑的樣本類型應(yīng)不超越參比試劑的樣本類型。
臨床試驗方案必須獲得臨床試驗機(jī)構(gòu)倫理委員會的同意。
4.研究對象選擇
臨床試驗應(yīng)選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。企業(yè)在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。總體樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本數(shù)不少于80例。樣本中待測物濃度應(yīng)覆蓋待評試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。
應(yīng)明確樣本存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應(yīng)考慮其影響。
如果聲稱待評試劑同時適用于血清或血漿樣本類型，可完成一個樣本類型（血清或血漿）不少于200例的臨床研究，同時可選至少100例血清或血漿同源樣本進(jìn)行比對研究，異常值樣本不少于40例進(jìn)行臨床研究，其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應(yīng)一致。也可以分別對同時適用的多個樣本類型按照《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）中試驗樣本量一般要求規(guī)定的200例進(jìn)行試驗，異常值樣本數(shù)不少于80例。
涉及產(chǎn)品檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床試驗采用變更后產(chǎn)品與變更前產(chǎn)品或者已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比對試驗，在至少2家（含2家）臨床試驗機(jī)構(gòu)開展臨床試驗，總樣本數(shù)不少于100例，異常值樣本數(shù)不少于40例。
5.統(tǒng)計學(xué)分析
對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析、線性回歸、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對待評試劑和參比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標(biāo)。結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行分析，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價待評試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。
6.臨床試驗總結(jié)報告撰寫
根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。
6.1臨床試驗總體設(shè)計及方案描述
6.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機(jī)構(gòu)選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。
6.1.2納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。6.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。6.1.4統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。6.2具體的臨床試驗情況
6.2.1待評試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機(jī)型等信息。
6.2.2對各研究單位的病例數(shù)、人群分布情況進(jìn)行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。
6.2.3質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估。
6.2.4具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存等。
6.3統(tǒng)計學(xué)分析
6.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。
6.3.2定量值相關(guān)性和一致性分析
用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是待評試劑結(jié)果，x是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)（通常要求R2≥0.95）。
6.4討論和結(jié)論
對總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。
（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料
對體外診斷試劑產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié),從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知和可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進(jìn)行風(fēng)險分析、風(fēng)險評價和相應(yīng)的風(fēng)險控制基礎(chǔ)上，形成風(fēng)險管理報告。應(yīng)當(dāng)符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
風(fēng)險分析應(yīng)包含但不僅限于以下方面的內(nèi)容：預(yù)期用途錯誤包括：設(shè)計開始時未設(shè)定預(yù)期分析物、未作適用機(jī)型驗證、未針對特定的樣本類型驗證。性能特征失效包括：精密度失效、準(zhǔn)確度失效、非特異性、穩(wěn)定性失效、測量范圍失效、定性/定量失效、量值溯源失效、校準(zhǔn)失效。不正確的結(jié)果包括：配方錯誤、采購的原料未能達(dá)到設(shè)計要求的性能、原材料儲存條件不正確、使用了過期的原材料、反應(yīng)體系不正確、試劑與包裝材料不相容?？赡艿氖褂缅e誤包括：生產(chǎn)者未按照生產(chǎn)流程操作，檢驗者未按照原料、半成品、成品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作，裝配過程組份、標(biāo)簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲存或運(yùn)輸不當(dāng)，客戶未參照產(chǎn)品說明書設(shè)臵參數(shù)或使用。與安全性有關(guān)的特征包括：有毒化學(xué)試劑的化學(xué)污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環(huán)境污染。
（九）產(chǎn)品技術(shù)要求
申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、前期臨床評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求，內(nèi)容主要包含產(chǎn)品性能指標(biāo)和檢驗方法。
進(jìn)口產(chǎn)品的產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)當(dāng)包括英文版和中文版，英文版應(yīng)當(dāng)由申請人簽章，中文版由申請人或其代理人簽章。
下面就產(chǎn)品技術(shù)要求中涉及的產(chǎn)品適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和主要性能指標(biāo)等相關(guān)內(nèi)容作簡要敘述。
1.產(chǎn)品適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)：（1）GB/T 21415—2008體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性
（2）GB/T 26124—2011臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）（3）YY/T 1199—2013甘油三酯測定試劑盒（酶法）2.主要性能指標(biāo)： 2.1外觀
應(yīng)與申請人聲稱試劑外觀一致。這里可以包括試劑盒包裝外觀、試劑內(nèi)包裝外觀、試劑的外觀。
2.2裝量
試劑裝量應(yīng)不少于標(biāo)示裝量。2.3試劑空白吸光度
用蒸餾水、去離子水或其他指定溶液作為空白加入工作試劑作為樣品測試時，試劑空白吸光度A(申請人指定的波長，37℃，1.0 cm)≤0.2。
2.4分析靈敏度
試劑盒測試給定濃度的被測物時，吸光度差值（ΔA）應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)給定范圍。
2.5線性范圍
線性范圍應(yīng)至少達(dá)到1.13 mmol/L—9.04 mmol/L。2.5.1相關(guān)系數(shù)（r）
線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.990（線性范圍下限應(yīng)不低于產(chǎn)品的最低檢測線，不高于參考區(qū)間下限）。
2.5.2線性偏差
線性偏差應(yīng)不超過申請人給定值。線性偏差可分段描述或連續(xù)描述，若分段描述，應(yīng)注意分段點的確定。
2.6精密度 2.6.1重復(fù)性
用同一樣本或質(zhì)控品重復(fù)測試至少10次，所得結(jié)果的精密度（變異系數(shù)CV）應(yīng)≤5.0%。
測定樣本應(yīng)至少包含兩個濃度點，一般應(yīng)按醫(yī)學(xué)決定水平取甘油三酯臨界值和異常高值濃度點。
2.6.2批間差
試劑（盒）批間相對極差應(yīng)≤10.0%。樣本選取同前。2.7準(zhǔn)確度
2.7.1相對偏差 提供參考物質(zhì)或用參考方法定值的血清測定，實測值與標(biāo)示值偏差應(yīng)在±15.0%范圍內(nèi)。
2.7.2回收試驗 在臨床樣本中加入一定體積標(biāo)準(zhǔn)溶液（標(biāo)準(zhǔn)溶液體積與臨床樣本體積應(yīng)不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化，加入標(biāo)準(zhǔn)溶液后樣品總濃度必須在試劑（盒）測定線性范圍內(nèi)）或純品，回收試驗一般選取兩個或兩個以上濃度進(jìn)行，回收率應(yīng)在90%—110%之間。
2.7.3比對試驗 用待測試劑盒與申請人選定分析系統(tǒng)（已在國內(nèi)上市）分別檢測不少于40個在檢測范圍內(nèi)的人源樣品，用線性回歸方法計算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)r≥0.990以及每個濃度點的偏差，偏差應(yīng)不超過申請人給定值。偏差可分段描述或連續(xù)描述，若分段描述，應(yīng)注意分段點的確定。
建議按上述優(yōu)先順序，采用上述方法之一測試試劑盒的準(zhǔn)確度。
2.8穩(wěn)定性
檢測申請人聲稱已到期試劑，產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑空白吸光度、分析靈敏度、線性范圍、精密度、準(zhǔn)確度要求。凍干品應(yīng)同時進(jìn)行復(fù)溶穩(wěn)定性試驗，復(fù)溶后放臵到有效期末，產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑空白吸光度、分析靈敏度、線性、測量精密度、準(zhǔn)確度要求。
2.9校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的性能指標(biāo)（如產(chǎn)品中包含）應(yīng)至少包含外觀、裝量（干粉試劑可不做）、準(zhǔn)確性、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準(zhǔn)品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差和復(fù)溶穩(wěn)定性。
（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告
具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機(jī)構(gòu)出具的注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價意見。甘油三酯項目目前有國家標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)當(dāng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行注冊檢驗，并符合相關(guān)要求。
（十一）產(chǎn)品說明書
說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗方法、對檢驗結(jié)果的解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。
結(jié)合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，下面對甘油三酯測定試劑盒說明書的重點內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明。
1.【產(chǎn)品名稱】
根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》中的命名原則，產(chǎn)品名稱通常由被測物質(zhì)的名稱、用途、方法或原理三部分組成，方法或原理部分應(yīng)能體現(xiàn)具體反應(yīng)原理，建議參考分類目錄或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。2.【包裝規(guī)格】
包裝規(guī)格應(yīng)明確單、雙或其他多試劑類型；如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機(jī)型，則應(yīng)同時明確適用機(jī)型。如有貨號，可增加貨號信息。
如:試劑1:1×40 mL,試劑2: 1×20 mL 日立7170生化分析儀
3.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容： 3.1說明試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿或其他體液中甘油三酯的含量。
3.2明確與甘油三酯檢測相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況。如：病理性升高：原發(fā)性見于家族性高甘油三酯血癥與家族性混合型高脂（蛋白）血癥等。繼發(fā)性見于糖尿病、糖尿累積病，甲狀腺功能衰退、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥、酗酒等。病理性降低：原發(fā)性見于無β-脂蛋白血癥和低β-脂蛋白血癥。繼發(fā)性見于繼發(fā)性脂質(zhì)代謝異常，如消化道疾病（肝疾患、吸收不良綜合征）、內(nèi)分泌疾患（甲狀腺功能亢進(jìn)癥、慢性腎上腺皮質(zhì)不全）及肝素等藥物的應(yīng)用。
4.【檢驗原理】應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示，檢驗原理的描述應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要組成成分、被測物和產(chǎn)物的關(guān)系進(jìn)行描述：
如：用脂蛋白酯酶（LPL）使血清中的甘油三酯（TG）水解成甘油與脂肪酸，將生成的甘油用甘油激酶（GK）及三磷酸腺苷（ATP）磷酸化。以磷酸甘油氧化酶（GPO）氧化3-磷酸甘油（G-3-P），然后以過氧化物酶（POD），4-氨基安替比林（4-AAP）與4-氯酚（三者合稱PAP）反應(yīng)顯色，在特定波長處監(jiān)測吸光度值，可計算甘油三酯含量。
反應(yīng)式如下：
5.【主要組成成分】應(yīng)明確以下內(nèi)容：
試劑盒提供的試劑組分的名稱、比例或濃度，各組分是否可以互換；如含有校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，除明確組成成份及生物學(xué)來源外，還應(yīng)明確其定值及溯源性，溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級別，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號，質(zhì)控品應(yīng)明確靶值范圍。
例如：
本試劑盒由試劑1、2和校準(zhǔn)品組成：
試劑1：三羥甲基氨基甲烷緩沖液100 mmol/L、三磷酸腺苷（ATP）0.20 mmol/L、甘油激酶（GK）1200 U/L、甘油磷酸氧化酶4000 U/L、氯化鎂23 mmol/L、過氧化物酶5 KU/L；
試劑2：三羥甲基氨基甲烷緩沖液100 mmol/L、4-氨基安替比林1.0 mmol/L、脂蛋白脂酶2500 U/L、三磷酸腺苷0.20 mmol/L、3，5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉2.0 mmol/L； 校準(zhǔn)品：為甘油三酯溶液，校準(zhǔn)品具有批特異性，每批定值，定值見瓶簽標(biāo)示，量值可溯源至GBW09148或國際參考物質(zhì)SRM1595。
6.【儲存條件及有效期】應(yīng)明確未開封的試劑實際儲存條件及有效期，開封后在生化分析儀上待機(jī)穩(wěn)定期。干粉校準(zhǔn)品（如適用）應(yīng)明確復(fù)溶穩(wěn)定性。
注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“室溫”、“常溫”。7.【適用儀器】應(yīng)明確可適用的具體品牌、型號的儀器。8.【樣本要求】重點明確以下內(nèi)容：樣本類型、處理、保存期限及保存條件（短期、長期），運(yùn)輸條件等。如有血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求（如果草酸鹽、檸檬酸鹽、EDTA鈉鹽等對甘油三酯濃度造成干擾，應(yīng)明確避免使用的提示）。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫，可凍融次數(shù)。特殊體液標(biāo)本還應(yīng)詳細(xì)描述對采集條件、保存液、容器要求等可能影響檢測結(jié)果的要求。應(yīng)對已知的干擾物進(jìn)行說明，如：存在的干擾因素，明確黃疸、溶血、藥物等干擾物對測定的影響，同時列出干擾物的具體濃度。
9.【檢驗方法】詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟，包括： 9.1試劑配制方法、注意事項。
9.2試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向、反應(yīng)時間等以及試驗過程中的注意事項。
9.3校準(zhǔn)：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項、校準(zhǔn)曲線的繪制。
9.4質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，提示檢測結(jié)果不可靠，不應(yīng)出具檢測報告。
9.5檢驗結(jié)果的計算：應(yīng)明確檢驗結(jié)果的計算方法。超出線性范圍的樣本如進(jìn)行稀釋，應(yīng)結(jié)合可檢測范圍研究結(jié)果明確稀釋液類型和最大可稀釋比例。
10.【參考區(qū)間】應(yīng)注明常用樣本類型的參考區(qū)間，并簡要說明其確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間”。
11.【檢驗結(jié)果的解釋】說明可能對檢驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素，在何種情況下需要進(jìn)行確認(rèn)試驗。
12.【檢驗方法的局限性】說明該檢驗方法的局限性。
13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 至少應(yīng)詳述以下性能指標(biāo)，性能指標(biāo)應(yīng)與產(chǎn)品技術(shù)要求中相關(guān)技術(shù)指標(biāo)保持一致。
13.1試劑空白吸光度； 13.2分析靈敏度； 13.3準(zhǔn)確度；
13.4精密度（重復(fù)性和批間差）； 13.5線性范圍； 13.6特異性。
14.【注意事項】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：
14.1本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。
14.2本試劑盒僅供體外診斷用，試劑中含有的化學(xué)成分接觸人體后是否會產(chǎn)生不良的影響后果。
14.3采用不同方法學(xué)的試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋；建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告注明所用試劑特征。
14.4有關(guān)人源組分的警告，如：試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組份作為潛在傳染源對待。
14.5樣本：（1）采集時間要求、與用藥的先后順序或用藥后時間間隔等；（2）對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待。
14.6其他有關(guān)甘油三酯測定的注意事項。
15.【標(biāo)識的解釋】如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。
16.【參考文獻(xiàn)】應(yīng)當(dāng)注明在編制說明書時所引用的參考文獻(xiàn)。
17.【基本信息】 17.1境內(nèi)體外診斷試劑
17.1.1注冊人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標(biāo)注基本信息：
注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號
17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標(biāo)注基本信息： 注冊人名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，受托企業(yè)的名稱，住所，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號
17.2進(jìn)口體外診斷試劑 按照以下格式標(biāo)注基本信息： 注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，生產(chǎn)地址，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，代理人的名稱，住所，聯(lián)系方式
18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】應(yīng)當(dāng)寫明醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號。
19.【說明書核準(zhǔn)日期及修改日期】應(yīng)注明該產(chǎn)品說明書的核準(zhǔn)日期。如曾進(jìn)行過說明書的變更申請，還應(yīng)該同時注明說明書的修改日期。
三、參考文獻(xiàn)
（一）《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）
（二）《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）
（三）《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）
（四）《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的那廣告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）
（五）《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）
（六）《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）
（七）《關(guān)于含有牛、羊源性材料醫(yī)療器械注冊有關(guān)事宜的公告》（國食藥監(jiān)械〔2006〕407號）
（八）國家食品藥品監(jiān)督管理部門發(fā)布的其他規(guī)范性文件
（九）GB/T 21415—2008體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性
（十）GB/T 26124-2011臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）
（十一）YY/T 0316—2008醫(yī)療器械 風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用
（十二）YY/T 1199—2013甘油三酯測定試劑盒（酶法）
甘油三酯測定試劑盒注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原
則編寫說明
一、指導(dǎo)原則編寫目的
編制本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)和規(guī)范注冊申請人對甘油三酯（Triglyceride，TG）測定試劑盒注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫工作，同時幫助審查人員理解和掌握該類產(chǎn)品原理、組成、性能、預(yù)期用途等內(nèi)容，把握技術(shù)審評工作基本要求和尺度，對產(chǎn)品安全性、有效性作出系統(tǒng)評價。
由于甘油三酯測定試劑盒產(chǎn)品仍在不斷發(fā)展，審查人員仍需從風(fēng)險分析的角度認(rèn)真確定申報產(chǎn)品的預(yù)期用途與風(fēng)險管理是否相當(dāng)；由于我國醫(yī)療器械法規(guī)框架仍在構(gòu)建中，審查人員仍需密切關(guān)注相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)及最新進(jìn)展，關(guān)注審評產(chǎn)品實際組成、原理、預(yù)期用途等方面的個性特征，以保證產(chǎn)品審評符合現(xiàn)行法規(guī)安全、有效的要求。
二、指導(dǎo)原則部分內(nèi)容說明
（一）指導(dǎo)原則主要根據(jù)體外診斷試劑產(chǎn)品注冊申報資料的要求，借鑒國家食品藥品監(jiān)督管理部門已發(fā)布的相關(guān)產(chǎn)品注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則的體例進(jìn)行編寫，以便于注冊技術(shù)審評人員理解。
（二）產(chǎn)品應(yīng)適用相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中給出了現(xiàn)行有效的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（包括產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)、基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)）。
（三）產(chǎn)品的主要性能指標(biāo)中給出了產(chǎn)品需要考慮的各個方面，主要提出共性要求，具體量化指標(biāo)需要參照相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和生產(chǎn)商技術(shù)能力予以確定。
（四）關(guān)于線性偏差以及準(zhǔn)確度偏差說明：考慮到，如技術(shù)要求中線性偏差以及準(zhǔn)確度（比對試驗）偏差均采用相對偏差進(jìn)行表述，當(dāng)對線性范圍中某一極低值樣本進(jìn)行線性范圍以及準(zhǔn)確度（比對試驗）試驗時，其試驗結(jié)果采用絕對偏差符合申請人的規(guī)定更為合理。因此，本指導(dǎo)原則建議企業(yè)可對產(chǎn)品線性偏差以及準(zhǔn)確度（比對試驗）偏差進(jìn)行分段要求，分別采用絕對偏差和相對偏差進(jìn)行表述。
（五）關(guān)于產(chǎn)品技術(shù)要求中分析靈敏度描述的說明：行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 1199—2013中分析靈敏度指的是產(chǎn)品功能靈敏度，而國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 26124—2011中分析靈敏度，指的是產(chǎn)品校準(zhǔn)曲線斜率。鑒于甘油三酯測定試劑盒功能靈敏度指標(biāo)目前并沒有實際臨床意義，本指導(dǎo)原則中分析靈敏度要求采用國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 26124—2011中校準(zhǔn)曲線斜率的描述。
（六）關(guān)于參考區(qū)間的驗證資料中對健康個體至少120例的說明：此例數(shù)的規(guī)定，結(jié)合已發(fā)布產(chǎn)品技術(shù)審查指導(dǎo)原則，并參考《WS/T 402—2012臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定》以及《C28-A2 如何確定臨床檢驗的參考區(qū)間：批準(zhǔn)指南（2000）》。
（七）關(guān)于臨床試驗“總體樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本數(shù)不少于80例”的說明：參照國家局已發(fā)布實施的缺血修飾白蛋白、肌酸激酶、堿性磷酸酶產(chǎn)品注冊技術(shù)指導(dǎo)原則。
（八）關(guān)于綜述資料、產(chǎn)品說明書中有關(guān)與甘油三酯檢測相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景的說明：臨床意義的描述參考自《全國臨床檢驗操作規(guī)程（第4版）》。
三、指導(dǎo)原則編寫單位和人員
本指導(dǎo)原則編寫人員由浙江省醫(yī)療器械技術(shù)審評人員、行政審批人員、檢驗和臨床專家、產(chǎn)品專業(yè)廠家代表等共同組成。
第三篇：地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年）
附件3
地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑
注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。
本指導(dǎo)原則是對地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。
本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，也不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍
地中海貧血（簡稱地貧）是一種常染色體隱性遺傳病，是由于珠蛋白基因發(fā)生突變（包括點突變和缺失等），致使珠蛋白肽鏈合成減少或完全不能合成而導(dǎo)致的一組單基因遺傳性溶血性疾病，輕者可無臨床表現(xiàn)，重者以進(jìn)行性溶血性貧血為主要特征。根據(jù)珠蛋白肽鏈合成受到抑制的類型，地貧分為α-，β-和γ-地貧等，臨床上最常見的是α-和β-地貧。地貧主要分布在地中海沿岸、東南亞和少數(shù)非洲地區(qū)，具有明顯的種族特性和地域分布差異。地貧是我國南方地區(qū)最常見、危害最大的遺傳病之一，尤以廣西、云南、廣東、海南、四川和貴州等省份為甚，云南、海南和廣東的地貧基因人群攜帶率可達(dá)10%以上，廣西更是達(dá)到了20%以上。
α-地貧主要是由于α-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起。α-珠蛋白基因簇位于16p13.3，包括胎兒期和成人期表達(dá)的2個基因（α2和α1），基因的排列順序為5’-α2-α1-3’。根據(jù)單倍型的情況，可將α地貧分為3類：（1）缺失型α+地貧（-α/），缺失1個α基因；（2）缺失型α0地貧（--/），2個α基因同時缺失；（3）非缺失型α+地貧（αTα/或ααT/），1個α1或α2基因發(fā)生點突變或少數(shù)幾個堿基的缺失。中國現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)至少19種α-珠蛋白基因大片段缺失和38種α-珠蛋白基因點突變。其中，6
種α-珠蛋白基因的突變：--SEA/、-α3.7/、-α4.2/、αWSα/（HBA2：c.369C>G）、αQSα/（HBA2：c.377
T>C）；αCSα/（HBA2：c.427T>C）占患病人群總數(shù)的98%。
α-地貧基因型和臨床分型的關(guān)系已經(jīng)基本闡明。α-地貧的表型嚴(yán)重程度隨著功能性α-珠蛋白基因的減少而加重：（1）1個α-基因缺失或點突變（-α/αα或ααT/αα或αTα/αα），稱為靜止型α-地貧，通常不貧血，血液學(xué)表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素；（2）2個α-基因缺失或復(fù)合-α基因點突變，或點突變，其基因型為--/αα或-α/-α或-α/ααT或αTα/-α或αTα/αTα，稱為輕型α-地貧，臨床表現(xiàn)為不貧血或輕度貧血，血液學(xué)檢查有小細(xì)胞低色素特征；（3）3個α-基因缺失或復(fù)合α基因點突變，基因型為--/-α或--/αTα，稱為中間型α-地貧，又稱Hb
H病，患者有輕至重度貧血。某些基因型為αTα/αTα的病例（如αCSα/αCSα、αQSα/αQSα和αCSα/αQSα）也表現(xiàn)為Hb
H病。通常，--/αTα的非缺失型
Hb
H病較單純?nèi)笔虷b
H?。?-/-α）的臨床表現(xiàn)更為嚴(yán)重，特別是基因型為--/αCSα或--/αQSα的Hb
H病患者，貧血程度較為嚴(yán)重；（4）4個α-基因缺失，其基因型為--/--，稱為重型α-地貧，又稱Hb
Bart’s胎兒水腫綜合征，此類個體一般無法存活到出生或分娩后半小時內(nèi)死亡。
β-地貧是由于β-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起，以點突變?yōu)橹?，少?shù)為缺失型。β-珠蛋白基因簇位于11p15.3，包括2個成人期表達(dá)基因（β和δ），基因的排列順序為5’-δ-β-3’。根據(jù)β-珠蛋白鏈合成量的程度，可將β-地貧分為3類：（1）β0地貧，β-珠蛋白鏈完全不能合成，其所在的等位基因稱為β0地貧等位基因；（2）β+地貧，β-珠蛋白鏈合成減少，其所在的等位基因稱為β+地貧等位基因；（3）β++地貧，又稱沉默型β-地貧，β-珠蛋白鏈合成輕微減少。中國已至少報道84種β-珠蛋白基因點突變和11種β-珠蛋白基因缺失。其中，6種點突變：HBB：c.126_129delCTTT，HBB：c.52A>T，HBB：c.-78A>G，HBB：
c.79G>A，HBB：
c.316-197C>T和HBB：
c.216_217insA占了全部突變類型的90%以上。
β-地貧的臨床表型可分為4種：（1）靜止型β-地貧，基因型為β++/βN，血液學(xué)表型正常或臨界，一般只能通過分子診斷識別；（2）輕型β-地貧，基因型為β0/βN或β+/βN，臨床表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素和HbA2值升高；（3）中間型β-地貧，基因型為β+/β+或β+/β0，表型變異范圍大，可從輕度貧血到中度貧血，多于幼兒期出現(xiàn)中度貧血；（4）重型β-地貧，基因型為β+/β0或β0/β0，通常伴有嚴(yán)重貧血，需要定期輸血才能存活?；純撼錾鷷r無癥狀，常于嬰兒期（3-12月齡）發(fā)病。如不治療，患兒多于5歲前死亡。此外，中間型的分子基礎(chǔ)較為復(fù)雜，顯性β-地貧突變的雜合子（βD/βN），合并α-地貧突變的β-地貧突變純合子（β0/β0），或合并α-珠蛋白三聯(lián)體的β-地貧突變雜合子（β0/βN或β+/βN），也會顯示中間型的表型。
2018年發(fā)布的《重型β-地中海貧血的診斷和治療指南》明確規(guī)定：對于重型β-地中海貧血的診斷，有條件者均應(yīng)進(jìn)行基因診斷，基因型為純合子或雙重雜合子為確診本病的指標(biāo)。2018年發(fā)布的《兒童非輸血依賴型地中海貧血的診治和管理專家共識》也明確規(guī)定：地貧基因檢測為非輸血依賴型地貧的診斷依據(jù)之一。
另外，國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的相關(guān)文件要求：為減少重型地貧患兒出生，在我國地貧高發(fā)省份實施地貧防控試點項目。主要流程包括：（1）對新婚夫婦和計劃懷孕夫婦在懷孕前或孕期進(jìn)行血常規(guī)初篩；（2）對夫婦一方或雙方血常規(guī)檢查結(jié)果陽性的夫婦進(jìn)行血紅蛋白分析復(fù)篩；（3）對血紅蛋白分析復(fù)篩結(jié)果均為陽性的夫婦，取其抗凝靜脈全血進(jìn)行相應(yīng)的α+β地貧基因檢測；（4）綜合夫婦雙方病史詢問、地貧篩查和基因檢測結(jié)果，判定為高風(fēng)險夫婦。對高風(fēng)險夫婦進(jìn)行追蹤，及時了解受檢婦女懷孕情況，指導(dǎo)女方在懷孕后適宜時期接受產(chǎn)前診斷。產(chǎn)前診斷的對象為胎兒，樣本類型為胎兒的絨毛、羊水和臍帶血，檢測項目為相應(yīng)的地貧基因檢測。
綜上，結(jié)合該類產(chǎn)品臨床使用的實際情況，本指導(dǎo)原則的預(yù)期用途可為：用于體外定性檢測人外周靜脈全血或胎兒羊水等樣本中基因組DNA的α-和/或β-地貧相關(guān)基因，用于α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風(fēng)險夫婦的評估，或胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷等。
結(jié)合該類產(chǎn)品在中國注冊的實際情況以及當(dāng)前的認(rèn)知，本指導(dǎo)原則僅對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預(yù)期用途的相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行了詳細(xì)闡述。針對其他預(yù)期用途，本指導(dǎo)原則僅對部分內(nèi)容進(jìn)行了闡述，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性，對本指導(dǎo)原則未涉及的內(nèi)容進(jìn)行補(bǔ)充并做出相應(yīng)評價。
本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于PCR探針法方法建立的，對于其他分子生物學(xué)檢測技術(shù)（如：PCR-反向點雜交法和gap-PCR法等），可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對不適用部分進(jìn)行或補(bǔ)充其他的評價和驗證，但需闡述不適用的理由，并驗證替代方法的科學(xué)合理性。
本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。
二、注冊申報資料要求
（一）綜述資料
綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及國內(nèi)外同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗原理、檢測的突變類型以及臨床意義等方面詳細(xì)說明申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。
綜述資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原總局令第5號，以下簡稱《辦法》）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（原總局公告2014年第44號），以下簡稱《44號公告》的要求。
（二）主要原材料的研究資料
主要原材料研究資料包括主要反應(yīng)成分、對照品（質(zhì)控品）及企業(yè)參考品的研究資料。
1.此類產(chǎn)品的主要反應(yīng)成分一般包括人基因組核酸提取/純化試劑、檢測所需引物、探針、酶、dNTPs、反應(yīng)緩沖液等。申請人應(yīng)提交相關(guān)原材料的選擇、制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料。如為申請人自制，應(yīng)提交詳細(xì)的工藝穩(wěn)定性研究資料；如為外購，還應(yīng)提交供應(yīng)商篩選資料以及供應(yīng)商提供的原材料質(zhì)量檢定報告。
1.1
核酸提取/純化試劑（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗證資料。
1.2
引物、探針
申請人應(yīng)詳述引物、探針的設(shè)計原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對應(yīng)情況。建議設(shè)計多套引物探針以供篩選，針對待測位點的特異性等進(jìn)行評價，選擇最佳設(shè)計，并提交詳細(xì)的篩選研究數(shù)據(jù)。
申請人應(yīng)針對選定的引物、探針原材料進(jìn)行質(zhì)量評價，一般包括：分子量、純度（HPLC等）、濃度、探針熒光標(biāo)記基團(tuán)的激發(fā)波長和發(fā)射波長，以及功能性試驗等，并依據(jù)評價結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
1.3酶
酶包括DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等。申請人應(yīng)針對各種酶的活性進(jìn)行驗證，提交功能性試驗資料，并確定酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
DNA聚合酶應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性。UDG/UNG應(yīng)具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。
1.4脫氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）
包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP；應(yīng)提交對其純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的驗證資料，以及功能性試驗資料，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
2.對照品（質(zhì)控品）
試劑盒的質(zhì)控體系通過設(shè)置各種試劑盒對照品（質(zhì)控品）來實現(xiàn)。陽性對照應(yīng)至少包括代表性的突變位點和突變類型。陰性對照可以是含有野生型序列的核酸溶液?？瞻讓φ諡椴缓怂岬娜芤?。
如該類產(chǎn)品所采用的方法學(xué)和檢驗原理顯示：無論檢測何種樣本（野生型、雜合突變和純合突變），其反應(yīng)體系均可報出核酸序列結(jié)果，均可對管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，則無需另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)；否則，試劑盒應(yīng)另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)。
對照品可采用人基因組DNA、細(xì)胞系或質(zhì)粒等。空白對照應(yīng)參與樣本核酸的平行提取。申請人應(yīng)提供對照品原料選擇、制備、定值過程等的詳細(xì)研究數(shù)據(jù)，并對其檢測結(jié)果做出明確的范圍要求。
3.企業(yè)參考品
企業(yè)參考品主要包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品和精密度參考品等。申請人應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料選擇、制備方法、基因序列確認(rèn)及檢驗標(biāo)準(zhǔn)的詳細(xì)研究資料等。
3.1
陽性參考品：可采用臨床樣本或其核酸溶液，如采用臨床樣本，則樣本類型應(yīng)與待測樣本一致。應(yīng)至少包含所有檢測位點的雜合型樣本，同時盡量納入純合突變型樣本。對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系或質(zhì)粒。
3.2
陰性參考品：應(yīng)包括野生型臨床樣本或其核酸溶液，以及易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的同源序列樣本，同時應(yīng)盡量包含檢測范圍外其他檢測位點的樣本等。
3.3檢測限參考品可選擇最低檢測限濃度（例如：95%檢出率水平）或接近最低檢測限濃度（例如100%檢出率水平）的臨床樣本或其核酸溶液，至少包含所有檢測位點的雜合型樣本。
3.4
精密度參考品應(yīng)至少包括低濃度雜合突變型臨床樣本或其核酸溶液，應(yīng)至少包括代表性的突變位點和突變類型，且在每一反應(yīng)體系均有分布。
目前，該類產(chǎn)品已有國家參考品，對于申報產(chǎn)品所聲稱的檢測位點，企業(yè)參考品的要求應(yīng)不低于國家參考品。
（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料
主要生產(chǎn)工藝研究資料包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTPs濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標(biāo)記（如有）等工藝過程的描述及確定依據(jù)。生產(chǎn)過程應(yīng)對關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制，可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝，標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。
反應(yīng)體系研究指反應(yīng)條件的選擇確定過程，包括樣本采集、預(yù)處理（如有）、樣本用量、試劑用量、核酸提取純化步驟、PCR反應(yīng)條件、閾值循環(huán)數(shù)（Ct值）等的確定。
不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如有差異應(yīng)分別提交。
（四）分析性能評估資料
申請人應(yīng)針對下述各項分析性能提交詳細(xì)的評估資料，包括試驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、試驗方法、試驗樣本（類型、來源、數(shù)量、處理方法、基因型和濃度確認(rèn)等）、可接受標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計方法、試驗數(shù)據(jù)及結(jié)論等。分析性能評估的實驗方法可以參考國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則。
每項性能評估應(yīng)盡量采用與適用樣本類型一致的臨床樣本，對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系等。
1.核酸提取/純化性能（如有）
在進(jìn)行靶核酸檢測前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂崽崛?純化步驟。該步驟應(yīng)最大量分離和純化目的核酸并盡可能去除PCR抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸提取/純化組分，申請人都應(yīng)對配套使用的核酸提取/純化方法的提取效率和提取核酸純度、濃度等做充分的驗證，并評價該方法能否滿足該類產(chǎn)品的要求。
2.檢測準(zhǔn)確性
建議采用若干份臨床樣本驗證該類產(chǎn)品的檢測準(zhǔn)確性，樣本類型與說明書聲稱的樣本類型一致。樣本應(yīng)涵蓋野生型、所有檢測位點的雜合突變型，同時盡量納入純合突變型。對于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系或質(zhì)粒。
3.最低檢測限
該類產(chǎn)品的最低檢測限可定義為：在滿足一定的檢測準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠檢出目標(biāo)序列的最低人基因組DNA的濃度?？刹捎锰荻葷舛鹊娜嘶蚪MDNA樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測，確定適當(dāng)檢出率水平（如：95%）下的最低人基因組DNA濃度。檢測限評價建議采用臨床樣本或細(xì)胞系，并至少包含所有檢測位點的雜合突變型。應(yīng)明確臨床樣本或細(xì)胞系與人基因組DNA濃度的對應(yīng)關(guān)系。
4.分析特異性
4.1
應(yīng)針對同源序列或檢測范圍外基因和位點進(jìn)行交叉反應(yīng)驗證，說明交叉反應(yīng)樣本的制備方法、核酸序列確認(rèn)方法，提交詳細(xì)的驗證資料。
4.2
應(yīng)針對可能的內(nèi)源和外源性干擾物進(jìn)行干擾試驗研究。內(nèi)源干擾物主要涉及血脂、膽紅素、血紅蛋白和白蛋白、母體細(xì)胞的干擾等，外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑和常用藥物等。
干擾試驗可通過在臨床樣本中人工添加干擾物質(zhì)的方式，評價干擾物質(zhì)對目標(biāo)序列檢測的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進(jìn)行干擾試驗評價。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評價；如有干擾，應(yīng)確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。
5.精密度
精密度評價應(yīng)采用臨床樣本進(jìn)行試驗，試驗操作完全按照說明書執(zhí)行，包含核酸提取/純化等步驟（如有）。應(yīng)對每一反應(yīng)體系進(jìn)行精密度評價，并至少覆蓋代表性的突變位點和突變類型。
精密度評價需滿足如下要求：
5.1對可能影響檢測精密度的主要因素進(jìn)行驗證，除檢測試劑本身外，還包括分析儀器、操作者、地點、時間、檢測輪次和試劑批次等。
5.2設(shè)定合理的精密度評價周期，對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評價。如有條件，申請人應(yīng)選擇不同的實驗室進(jìn)行重復(fù)實驗以對室間重復(fù)性進(jìn)行評價。
5.3用于精密度評價的臨床樣本至少設(shè)置低濃度和中/高濃度水平。
5.4精密度指標(biāo)可設(shè)置為CV等（如有），申請人應(yīng)對精密度指標(biāo)評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。
（五）陽性判斷值確定資料
建議納入一定數(shù)量的臨床樣本，應(yīng)包括所有檢測位點的各種基因型（野生型、雜合突變型，同時盡量納入純合突變型），采用受試者工作特征（ROC）曲線或其他合理方法確定陽性判斷值。
如試劑判讀存在灰區(qū)，應(yīng)解釋說明灰區(qū)范圍的確定方法。
對于某些檢測方法學(xué)，陽性判斷值研究可能不適用，申請人應(yīng)說明理由。
（六）穩(wěn)定性研究資料
穩(wěn)定性研究資料主要包括申報產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究和適用樣本的穩(wěn)定性研究兩部分。前者主要包括申報產(chǎn)品的實時穩(wěn)定性、開瓶/復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制的研究等；后者則是指適用樣本的保存條件和保存時間等的研究。
實時穩(wěn)定性研究應(yīng)采用至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后，選取多個時間點進(jìn)行產(chǎn)品性能評價，從而確定產(chǎn)品保存條件和有效期。
如核酸提取液可保存，還需對核酸提取液的保存條件和保存時間進(jìn)行研究。
（七）臨床試驗
應(yīng)滿足《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗應(yīng)符合更新后的要求。下面僅說明該類產(chǎn)品臨床試驗中應(yīng)關(guān)注的重點問題。
1．針對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預(yù)期用途
1.1
臨床試驗機(jī)構(gòu)及人員
申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點及預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)人種和流行病學(xué)背景等因素，選擇不少于3家（含3家）符合法規(guī)要求的臨床試驗機(jī)構(gòu)開展臨床試驗。
1.2
臨床試驗適用人群和臨床樣本
具有地貧癥狀和/或體征，或血液學(xué)表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素的疑似地貧患者和攜帶者；需與地貧進(jìn)行鑒別診斷的其他疾病患者，如：缺鐵性貧血、鐵粒細(xì)胞性貧血或先天性紅細(xì)胞生成異常性貧血等。
臨床試驗所用樣本應(yīng)為抗凝外周血樣本（基因組DNA非臨床樣本）。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)分別滿足申報產(chǎn)品說明書、對比試劑說明書（如適用）及第三方試劑說明書（如適用）的相關(guān)要求。
1.3臨床試驗方法
1.3.1已有同類產(chǎn)品上市的申報產(chǎn)品
對于已批準(zhǔn)的α-地貧突變和β-地貧突變，原則上選擇已上市同類產(chǎn)品作為對比試劑，評價申報產(chǎn)品的臨床檢測性能。
1.3.2無同類產(chǎn)品上市的申報產(chǎn)品
1.3.2.1
如新突變位點的臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可（如：國內(nèi)相關(guān)指南或?qū)＜夜沧R），且上述認(rèn)可基于充分的中國人群的臨床數(shù)據(jù)，則臨床試驗可選擇Sanger基因測序（針對新的點突變）或臨床普遍使用的其他公認(rèn)方法（針對其他類型的新突變位點，如缺失）作為對比方法，評價新突變位點的臨床檢測性能。除此之外，還應(yīng)提交新位點臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可的相關(guān)證據(jù)，該部分資料可不納入臨床方案和報告。
1.3.2.2
如新突變位點的臨床意義未獲行業(yè)認(rèn)可，則臨床試驗應(yīng)包括兩個目的，新突變位點的臨床檢測性能評價和臨床意義評價。新突變位點的臨床檢測性能評價可參考1.3.2.1；新突變位點的臨床意義評價應(yīng)提交基于中國人群的充分的臨床證據(jù)，證明基因型與表型的關(guān)系，如：隨訪或其他可證明基因型與表型關(guān)系的臨床驗證資料。
1.4最低樣本量和陽性例數(shù)
臨床試驗樣本量應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行估算，并詳細(xì)描述所使用統(tǒng)計方法及各參數(shù)的確定依據(jù)。
1.4.1
臨床檢測性能評價的樣本量估算
臨床檢測性能評價的樣本量估算可分為以下幾種情況。
對于常見突變位點，建議采用單組目標(biāo)值法分別估算每個突變位點臨床試驗的最低樣本量，通過陽性符合率計算所需陽性樣本的例數(shù)，通過陰性符合率計算所需陰性樣本的例數(shù)，同時考慮脫落情況，估算最低樣本總量。陽性符合率和陰性符合率的目標(biāo)值（臨床可接受的最低標(biāo)準(zhǔn)）建議均不低于95%。
對于罕見突變位點，陰性樣本的例數(shù)可根據(jù)上述方法進(jìn)行估算，陽性樣本則應(yīng)保證一定的例數(shù)。
對于極其罕見的、且有確切臨床證據(jù)證明其臨床意義的突變位點，陰性樣本的例數(shù)可根據(jù)上述方法進(jìn)行估算，陽性樣本的例數(shù)則應(yīng)結(jié)合臨床證據(jù)確定。
1.4.2
新位點臨床意義評價的樣本量估算
新位點臨床意義評價的樣本量估算，建議采用抽樣調(diào)查公式或其他合理方法進(jìn)行估算。
2.針對“地貧高風(fēng)險夫婦的評估”和“胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷”預(yù)期用途
針對上述兩個預(yù)期用途，本指導(dǎo)原則僅對部分內(nèi)容進(jìn)行了闡述，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性，充分考慮本指導(dǎo)原則未涉及的內(nèi)容，設(shè)計科學(xué)合理的臨床試驗并進(jìn)行評價。
2.1臨床試驗機(jī)構(gòu)和人員
如申報產(chǎn)品的預(yù)期用途為胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷，除滿足法規(guī)要求外，臨床試驗機(jī)構(gòu)還應(yīng)取得產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)資質(zhì)。臨床試驗人員應(yīng)為經(jīng)過專門培訓(xùn)的取得資質(zhì)的人員。機(jī)構(gòu)和人員應(yīng)遵循《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》《母嬰保健專項技術(shù)服務(wù)許可及人員資格管理辦法》，機(jī)構(gòu)應(yīng)取得《母嬰保健技術(shù)服務(wù)執(zhí)業(yè)許可證》，人員應(yīng)取得《母嬰保健技術(shù)考核合格證書》。
2.2
臨床試驗適用人群和臨床樣本
如預(yù)期用途為地貧高風(fēng)險夫婦的評估，則適用人群為：地貧表型篩查陽性的育齡人群。地貧表型篩查陽性的育齡人群可根據(jù)國家衛(wèi)生健康委員會和地貧高發(fā)地區(qū)相關(guān)政策確定。
如預(yù)期用途為胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷，則適用人群為：地貧高風(fēng)險夫婦的胎兒。地貧高風(fēng)險夫婦的確定可參考國家衛(wèi)生健康委員會等相關(guān)文件。
臨床試驗所用樣本應(yīng)為胎兒羊水等臨床樣本（基因組DNA非臨床樣本）。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)符合國家衛(wèi)生健康委員會等相關(guān)文件的要求，并滿足產(chǎn)品說明書的要求。
2.3
最低樣本量和陽性例數(shù)
針對每種不同的預(yù)期用途，應(yīng)分別采用合理方法估算最低樣本量。同一預(yù)期用途的不同樣本類型（羊水和臍帶血等），也應(yīng)分別采用合理方法估算最低樣本量。
3.如有其他預(yù)期用途，也應(yīng)設(shè)計科學(xué)的臨床試驗，提供充分的證據(jù)，證明其預(yù)期用途。
4.不同預(yù)期用途的通用要求
4.1
臨床試驗方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析
4.1.1應(yīng)在臨床試驗方案或報告中明確申報產(chǎn)品、對比試劑和第三方試劑的試驗方法。
4.1.2臨床試驗病例總結(jié)表應(yīng)以列表方式表示，包括申報產(chǎn)品的結(jié)果、對比試劑的結(jié)果、第三方試劑的檢測結(jié)果（如有）、臨床診斷、年齡和性別等。
4.1.3以交叉表分別總結(jié)兩種試劑的定性檢測結(jié)果，選擇合適的統(tǒng)計方法進(jìn)行統(tǒng)計分析，以驗證兩種試劑檢測結(jié)果的一致性。
4.1.4
結(jié)果差異樣本的驗證
在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本，采用合理方法進(jìn)行復(fù)核，并對差異原因進(jìn)行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)說明理由。
4.2
臨床試驗方案
各臨床試驗機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機(jī)構(gòu)的實驗室內(nèi)并由該實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進(jìn)程。
試驗方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程和結(jié)果判定時，應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各臨床試驗機(jī)構(gòu)選用的對比試劑/方法應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，申報產(chǎn)品的樣本類型不應(yīng)超越對比試劑/方法對樣本類型的要求。
4.3臨床試驗報告
應(yīng)對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。
（八）產(chǎn)品技術(shù)要求
產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》、《44號公告》和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)要求。該類產(chǎn)品作為三類體外診斷試劑，應(yīng)將主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求等內(nèi)容作為附錄附于技術(shù)要求正文后。
目前，該類產(chǎn)品已有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
（九）產(chǎn)品檢驗報告
根據(jù)《辦法》的要求，第三類體外診斷試劑申請注冊時應(yīng)提交連續(xù)三個生產(chǎn)批次樣品的檢驗報告。目前，該產(chǎn)品已有國家參考品，產(chǎn)品檢驗應(yīng)滿足國家參考品的要求。
（十）產(chǎn)品說明書
產(chǎn)品說明書應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料的相關(guān)研究結(jié)果保持一致。下面對該類產(chǎn)品說明書的重點內(nèi)容進(jìn)行闡述。
1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：
1.1本產(chǎn)品用于定性檢測人xx樣本基因組DNA中的α-和/或β-地貧xx突變，用于：α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風(fēng)險夫婦的評估，或胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷。
1.2介紹地貧相關(guān)的臨床背景信息及實驗室診斷方法等，介紹被測靶標(biāo)（突變位點）的相關(guān)情況。
2.【主要組成成分】
2.1說明試劑盒包含組分的名稱或數(shù)量等信息，說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。
2.2試劑盒中不包含但對該項檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱及其他相關(guān)信息。
2.3如果試劑盒中不包含用于核酸提取純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)過驗證后配合使用的商品化核酸提取純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱以和醫(yī)療器械備案號（如有）等詳細(xì)信息。
3.【檢驗原理】
3.1對試劑盒的被測靶標(biāo)進(jìn)行詳細(xì)描述（基因位置、突變位點及相關(guān)特征等），對試劑盒所用探針、引物或突變的判定等進(jìn)行詳細(xì)介紹；對不同樣本反應(yīng)管組合、對照品設(shè)置及熒光信號檢測原理等進(jìn)行介紹。
3.2試劑盒技術(shù)原理的詳細(xì)介紹，建議結(jié)合適當(dāng)圖示進(jìn)行說明。如反應(yīng)體系中添加了相關(guān)的防污染組分（如UNG酶），也應(yīng)對其作用機(jī)理進(jìn)行適當(dāng)介紹。
4.【儲存條件及有效期】
說明試劑盒的效期穩(wěn)定性等，應(yīng)明確具體的儲存條件及有效期等信息。
5.【樣本要求】
樣本的采集、處理、運(yùn)送和保存：明確樣本采集、核酸提取純化前的處理（如離心和洗滌等）、保存條件及期限以及運(yùn)送條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的限制等。
6.【適用儀器】
所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。
7.【檢驗方法】
詳細(xì)說明實驗操作的各個步驟，包括：
7.1實驗條件：實驗室分區(qū)、實驗環(huán)境的溫度、濕度和空調(diào)氣流方向控制等注意事項。
7.2試劑配制方法和注意事項。
7.3詳述核酸提取純化的條件、步驟及注意事項（如適用），對核酸提取純化環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)控，明確提取核酸的濃度純度等質(zhì)量要求。
7.4擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。
7.5
PCR各階段的溫度、時間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置或相應(yīng)的自動化檢測程序及相關(guān)注意事項。
7.6儀器設(shè)置（如適用）：特殊參數(shù)、探針的熒光素標(biāo)記情況、對待測樣本及其他對照品的熒光通道選擇等。
8.【檢驗結(jié)果的解釋】
結(jié)合對照品、樣本管檢測結(jié)果以及檢測類型，以列表形式詳述所有可能出現(xiàn)的結(jié)果及相應(yīng)的解釋。如存在檢測灰區(qū)，應(yīng)詳述對于灰區(qū)結(jié)果的處理方式。
9.【檢驗方法的局限性】
9.1申報產(chǎn)品僅對下述檢測類型xx進(jìn)行了驗證。
9.2有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析
9.2.1不合理的樣本采集、運(yùn)送及處理或核酸過度降解均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。
9.2.2未經(jīng)驗證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會導(dǎo)致假陰性結(jié)果（如有）。
10.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】簡述以下性能指標(biāo)：
10.1最低檢測限：簡單介紹最低檢測限的確定方法，并明確最低檢測限結(jié)果。
10.2陽性/陰性參考品符合率。
10.3精密度：簡單介紹精密度的確定方法，并明確精密度結(jié)果。
10.4分析特異性
10.4.1交叉反應(yīng)驗證：同源性序列等交叉反應(yīng)驗證。
10.4.2干擾物質(zhì)驗證：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響。
10.5對比試驗研究（如有）：簡要介紹對比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計學(xué)方法及統(tǒng)計分析結(jié)果。
11.【注意事項】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：
11.1如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。
11.2臨床實驗室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實驗室管理辦法》現(xiàn)行有效版本等有關(guān)分子生物學(xué)實驗室、臨床基因擴(kuò)增實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。
三、起草單位
國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。
第四篇：酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則
附件1
酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則
一、前言
本指導(dǎo)原則主要針對酶聯(lián)免疫類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。
本指導(dǎo)原則系對酶聯(lián)免疫法檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。
本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時的調(diào)整。
二、適用范圍
本指導(dǎo)原則適用于有關(guān)病原微生物檢測的第三類體外診斷試劑的注冊技術(shù)審查。其他酶聯(lián)免疫法檢測試劑（如作為二類管理的體外診斷試劑）可參考本指導(dǎo)原則執(zhí)行。
三、基本要求
（一）基本原則
1.研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求?！? 2 — 2.試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時，應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運(yùn)行；還應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。企業(yè)應(yīng)對試劑的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。
3.診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。
4.試劑在研制、生產(chǎn)過程中所用的各種材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。
5.生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo)：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。
（二）原材料質(zhì)量控制 1.主要生物原料
與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。使用前應(yīng)按照工藝要求對這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請。
主要生物原料的常規(guī)檢驗項目一般包括：（1）外觀
肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生
— 3 — 物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。
（2）純度和分子量
主要經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳，一般每個電泳道加樣量為5μg，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位臵。
（3）蛋白濃度
蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲法或其他適宜的方法進(jìn)行檢測。
（4）效價
效價的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進(jìn)行。效價應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。
（5）功能性實驗
功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。
2.生物輔料
生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合2000年版的《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。建議作以下檢驗：
（1）牛血清或羊血清
外 觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物。無菌試驗：將血清直接37℃放臵7天，明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或— 4 — 沉淀。
總蛋白含量：用雙縮脲法測定，蛋白含量≥32mg/ml。
球蛋白含量：取待測血清1ml，采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀，沉淀溶于0.85%氯化鈉溶液，至1ml，用Lowry方法測定，蛋白含量應(yīng)≤2mg/ml。
（2）牛血清白蛋白：
外 觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。
溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，在18?26℃時，溶解時間應(yīng)≤15分鐘，pH值應(yīng)為6.5?7.1。
總蛋白含量：用雙縮脲法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95％。
總蛋白中的牛血清白蛋白（BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95%。
BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。（3）酪蛋白：
應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（4）標(biāo)記用酶
應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于3.0。
對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實驗，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行酶聯(lián)免疫測定，均不能出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。
生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應(yīng)商。3.化學(xué)原材料
化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等，均應(yīng)符合《中國生物制品主要原輔材
— 5 — 料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》分析純級別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。
主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對固定，不得隨意發(fā)生變更。化學(xué)原材料在購入時，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告。
4.其他物料（1）酶標(biāo)板 ①外觀
明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量，如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應(yīng)剔除。②吸附能力和精密性 采用合適的方法進(jìn)行檢驗。
一般用一定濃度的正常人免疫球蛋白G(IgG)包被板條，再用一定濃度的抗人IgG酶結(jié)合物吸附，通過顯色反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀讀數(shù)，計算CV值。CV值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般批內(nèi)CV≤5％，批間CV≤10％。
（2）液體試劑裝量瓶
包括陰陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等液體組分，均應(yīng)有相應(yīng)的裝量瓶，并建立相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規(guī)格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。
（3）其他材料
包括試劑瓶標(biāo)簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等，應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)?！? 6 — 5.企業(yè)質(zhì)控品
企業(yè)質(zhì)控品一般包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性、鉤狀效應(yīng)（hook效應(yīng)）等質(zhì)控樣品，對于定量檢測試劑，還包括線性質(zhì)控品樣品。如該產(chǎn)品具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）進(jìn)行標(biāo)化；若該診斷試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。
企業(yè)質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)與診斷試劑的待測樣品的基質(zhì)基本一致，如待測樣品為血清/血漿，質(zhì)控品基質(zhì)也應(yīng)為血清/血漿。
（三）試劑盒各組分的生產(chǎn)
酶聯(lián)免疫法檢測試劑主要組分的生產(chǎn)包括酶標(biāo)記物的制備及滴配過程（酶工作液濃度確定）、各種工作溶液的配制、包被酶標(biāo)反應(yīng)板、分裝及包裝等步驟；并通過產(chǎn)品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。
1.各種工作液的配制
酶聯(lián)免疫診斷試劑研制生產(chǎn)過程中所用的工作液一般包括：包被液、封閉液、陰性陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液、終止液等，對定量檢測試劑，還包括標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液。若陰性、陽性對照或其他液體組分涉及生物安全性問題，制備時應(yīng)在相應(yīng)的生物安全實驗室完成。
各種工作液在配制過程中應(yīng)嚴(yán)格按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的配方進(jìn)行配制，充分混勻確保液體中的各種成分均勻，同時進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量檢驗并達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，方可使用或分裝。對于定量檢測試劑，其標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液應(yīng)具有量值溯源性。
應(yīng)對配制過程及配制的液體進(jìn)行的質(zhì)量控制，主要包括酶結(jié)合物的
— 7 — 功能性實驗及穩(wěn)定性；各種溶液的外觀、pH值等；酶作用底物應(yīng)測定在無相應(yīng)酶的情況下自身顯色的情況，并制定合理的限定指標(biāo)；終止液應(yīng)對其終止酶促反應(yīng)的能力進(jìn)行測定。
2.包被酶標(biāo)反應(yīng)板
包被前應(yīng)對酶標(biāo)反應(yīng)板進(jìn)行質(zhì)量檢驗，如尺寸、外觀、包裝、吸附性能、精密性等，并記錄酶標(biāo)反應(yīng)板的批號、數(shù)量、標(biāo)識。酶標(biāo)反應(yīng)板經(jīng)檢驗合格后方能用于包被。不同批號的板條不能混用。
選擇經(jīng)檢驗合格的包被原料（如抗原、抗體等），經(jīng)一定的方法確定最佳包被濃度和酶結(jié)合物工作濃度，按照診斷試劑的生產(chǎn)規(guī)程，配制包被緩沖液、封閉液，經(jīng)檢驗合格后，包被酶標(biāo)反應(yīng)板，經(jīng)干燥后，已包被的酶標(biāo)反應(yīng)板用鋁箔紙封閉（內(nèi)臵干燥劑），保存于2?8℃。
應(yīng)對包被過程進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量控制，如包被用原料（抗原或者抗體等生物活性原料）的質(zhì)量檢驗、包被液和封閉液的質(zhì)控（如配方、外觀、pH值）、包被過程的監(jiān)控（包括包被和封閉的體積、溫度、時間等）、包被均一性檢驗、干燥過程的監(jiān)控等。
3.分裝和包裝
樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等溶液應(yīng)嚴(yán)格按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的量進(jìn)行過濾后再分裝，分裝量的誤差應(yīng)小于5%。
分裝及包裝均應(yīng)按照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程要求進(jìn)行。包裝前，應(yīng)嚴(yán)格檢查試劑盒的品名、批號等，核對各試劑盒各組分的數(shù)量，并在關(guān)盒前進(jìn)行復(fù)核。
（四）質(zhì)量控制 1.半成品質(zhì)量控制（1）半成品抽樣
檢驗人員按試劑的批號，根據(jù)抽樣申請單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各— 8 — 組分，作號標(biāo)記、待檢。
（2）半成品檢驗
根據(jù)試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行半成品的檢驗。半成品檢驗，一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品。若某類試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。
檢驗指標(biāo)一般包括陰/陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。對于精密性，一般情況下CV不得高于15％（采用競爭抑制法的診斷試劑CV不得高于20％）。對定量檢測試劑，同時應(yīng)分析其線性相關(guān)系數(shù)和定量質(zhì)控品檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
企業(yè)應(yīng)該對每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性研究。試劑盒各組分應(yīng)留樣，2?8℃定期作穩(wěn)定性考核，同時作37℃熱穩(wěn)定性試驗，試驗結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
2.成品質(zhì)量控制
產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號、實際包裝量、抽樣申請單的要求進(jìn)行抽樣，同時填寫抽樣數(shù)量和抽樣日期，并且由抽樣人簽名。抽樣數(shù)量應(yīng)包括檢驗用數(shù)量和留樣數(shù)量。質(zhì)檢人員同時應(yīng)檢查相關(guān)原始記錄。
每一批酶聯(lián)免疫類檢測試劑的試生產(chǎn)量應(yīng)滿足工藝研究、分析性能驗證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。
（1）成品檢驗
成品檢驗時，一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品，并達(dá)到相應(yīng)質(zhì)量要求。若該診斷試劑沒有國家
— 9 — 標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。
（2）穩(wěn)定性試驗
在批放行前，每一批試劑應(yīng)完成37℃熱穩(wěn)定性試驗，試驗結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
四、名詞解釋
酶聯(lián)免疫法：是指在酶標(biāo)板上包被特定的抗原（和/或抗體）后，利用直接或間接的方法與待測樣品中的相關(guān)抗體（和/或抗原）反應(yīng)，形成的抗原抗體復(fù)合物再與相應(yīng)的酶標(biāo)記的抗體和/或抗原進(jìn)一步反應(yīng)，經(jīng)過酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，由形成的顏色的強(qiáng)弱來判斷樣本中相應(yīng)的抗體和/或抗原的存在。
五、參考文獻(xiàn)：
1.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社
— 10 —
第五篇：抗人球蛋白檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2018年）
附件3
抗人球蛋白檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。
本指導(dǎo)原則是對抗人球蛋白檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。如申請人認(rèn)為有必要增加本指導(dǎo)原則不包含的研究內(nèi)容，可自行補(bǔ)充。
本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。
一、范圍
抗人球蛋白檢測試劑可進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗和間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細(xì)胞的檢測等。
本指導(dǎo)原則適用于抗人球蛋白檢測試劑，同時適用于不同的檢測方法，如試管法、柱凝集法等，但不適用于血源篩查用抗人球蛋白檢測試劑。
本指導(dǎo)原則僅包括對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報資料中部分項目的要求，適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜，應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）等相關(guān)法規(guī)要求。
二、注冊申報資料要求
（一）綜述資料
綜述資料的撰寫應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）（以下簡稱“44號公告”）的相關(guān)要求。內(nèi)容主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價以及同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從靈敏度、特異性、效價、重復(fù)性等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的異同。
（二）主要原材料研究資料
主要原材料研究資料應(yīng)包括主要組成成分（抗體、凝膠、玻璃珠等）的選擇、制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究資料。
1.抗體的選擇及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
明確抗體的來源，如為單克隆抗體應(yīng)明確細(xì)胞株、克隆號等內(nèi)容。提供抗體靈敏度、特異性、效價等基本性能的驗證資料。
抗體如為自行生產(chǎn)，提供抗體的詳細(xì)生產(chǎn)及鑒定過程。
1.1靈敏度：已知抗體效價的臨床有意義的血型系統(tǒng)至少7種血型抗體（IgG）的最高稀釋倍數(shù)的凝集強(qiáng)度不小于1+。
1.2特異性：臨床有意義的已知血型系統(tǒng)至少7種，每種選1個抗體（IgG），與對應(yīng)的抗原陽性細(xì)胞均應(yīng)檢測陽性。
與不規(guī)則抗體陰性樣本檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。
1.3效價：如采用倍比稀釋的方法驗證抗人球蛋白試劑的效價，分別采用IgG和/或C3d致敏的細(xì)胞或根據(jù)廠家確立的研究方法進(jìn)行驗證。
2.填充物的選擇：說明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如組成、粒徑及其質(zhì)量控制要求。應(yīng)提交選擇比較過程，提交驗證試驗資料。
3.填充緩沖液：應(yīng)說明組成成分，并對外觀、性狀、pH值等物理指標(biāo)及功能性進(jìn)行研究驗證。
4.液體試劑稀釋液：應(yīng)說明組成成分，并對外觀、性狀、pH值等物理指標(biāo)及功能性進(jìn)行研究驗證。
（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料
1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。
2.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。
3.主要生產(chǎn)工藝過程的研究資料、每一步生產(chǎn)工藝的確認(rèn)資料及試驗數(shù)據(jù)。如抗體濃度的選擇確定過程、凝膠溶脹條件的確定、填充量及填充過程的研究資料，填充應(yīng)確保均勻無氣泡，以及質(zhì)量控制的要求。
4.主要反應(yīng)體系的研究資料、每一步反應(yīng)體系的確認(rèn)資料及試驗數(shù)據(jù)。
反應(yīng)體系的設(shè)置應(yīng)符合《全國臨床檢驗操作規(guī)程》等公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范、指南或標(biāo)準(zhǔn)的要求。如紅細(xì)胞懸液制備要求及紅細(xì)胞濃度的確定、用量的要求、孵育時間等；應(yīng)提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機(jī)型號固定轉(zhuǎn)數(shù)和時間的方式設(shè)置離心條件。
（四）分析性能評估資料
申請人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑進(jìn)行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應(yīng)包括具體研究目的、實驗設(shè)計、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。分析性能評估的實驗方法可以參考國內(nèi)或國際有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。
產(chǎn)品性能研究所采用的各種儀器、試劑或其他物品如可能均應(yīng)采用境內(nèi)或境外已批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品，如抗體篩查紅細(xì)胞、血型抗體等。
分析性能評估試驗中應(yīng)明確所有試驗每種試劑的用量、試劑紅細(xì)胞的濃度、采用的試驗方法（試管法、柱凝集法、微孔板法等）。所有試驗方法應(yīng)符合配合使用的血型試劑的具體操作要求。
對于抗人球蛋白檢測試劑建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究：
1.間接抗人球蛋白試驗：
提供臨床有意義的血型系統(tǒng)至少7種不規(guī)則抗體（IgG）檢測靈敏度和特異性的驗證資料，明確所檢出抗體的抗體效價的具體要求，可參照以下要求進(jìn)行實驗。
1.1靈敏度
與已知抗體效價的血型抗體的最高稀釋倍數(shù)的凝集強(qiáng)度不小于1+，并且抗體效價不低于試管間接抗人球蛋白法測定結(jié)果。
C3d凝集強(qiáng)度≥2+。
1.2特異性
與已知抗體類型的血型抗體對應(yīng)的O型相應(yīng)抗原陽性紅細(xì)胞的反應(yīng)為陽性。
與已知抗體類型的血型抗體對應(yīng)的O型相應(yīng)抗原陰性紅細(xì)胞的反應(yīng)為陰性。
與C3d陽性或陰性樣本反應(yīng)為陽性或陰性。
1.3重復(fù)性
分別采用IgG性質(zhì)抗D抗體，IgG性質(zhì)抗Jka/Jkb抗體，IgG性質(zhì)抗Fya/Fyb抗體進(jìn)行重復(fù)性驗證。
批內(nèi)重復(fù)性采用同一批次檢測卡重復(fù)進(jìn)行檢測，重復(fù)次數(shù)不少于10次。
日間重復(fù)性采用同一批次檢測卡每日重復(fù)進(jìn)行檢測，重復(fù)天數(shù)不少于10天。
批間重復(fù)性采用至少三批檢測卡進(jìn)行重復(fù)檢測。
批內(nèi)、日間、批間重復(fù)性檢測結(jié)果應(yīng)基本一致，檢測結(jié)果凝集強(qiáng)度差異不超過1+。
采用陰性結(jié)果的血清重復(fù)10次檢測，均應(yīng)出現(xiàn)陰性反應(yīng)。
1.4干擾
提供溶血、脂血、黃疸干擾的評估資料，應(yīng)至少采用強(qiáng)、中、弱性質(zhì)的抗體進(jìn)行評價。
1.5血清、血漿比對的評估資料。
1.6抗凝劑的適用性研究驗證。
1.7采用部分臨床樣本進(jìn)行檢測靈敏度和特異性的評價，應(yīng)考慮涵蓋腫瘤、血液病、自身免疫病和貧血患者、老人及兒童等病例來源，應(yīng)包括陽性和陰性病例。
1.8分別進(jìn)行每個預(yù)期用途的完整的性能評估資料，應(yīng)至少包括50例陽性病例。
2.直接抗人球蛋白試驗
使用被不規(guī)則抗體和/或C3d致敏的紅細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)，評價產(chǎn)品性能，適用的性能評價內(nèi)容可以參照間接抗人球蛋白試驗。
（五）陽性判斷值
給出不同凝集強(qiáng)度的研究方法，并明確不同凝集強(qiáng)度代表的具體意義，并應(yīng)包含溶血、混合視野雙群等情況，明確具體的試驗方法、實驗步驟，提供不同凝集強(qiáng)度的圖例或相片。
（六）穩(wěn)定性研究資料
穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、加熱穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案，實驗項目應(yīng)至少包括靈敏度、特異性、重復(fù)性等內(nèi)容。
穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。
應(yīng)對樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段對儲存樣本進(jìn)行全性能的分析驗證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行評價。
試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)分別在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進(jìn)行詳細(xì)說明。
（七）臨床試驗
臨床試驗總體要求及臨床試驗資料的內(nèi)容應(yīng)符合《辦法》、“44號公告”及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的規(guī)定，以下僅結(jié)合抗人球蛋白檢測試劑的具體特點對其臨床試驗中應(yīng)重點關(guān)注的內(nèi)容進(jìn)行闡述。
1.研究方法
該類試劑已有同類產(chǎn)品上市，按照法規(guī)要求應(yīng)選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行比較研究試驗，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。
2.臨床試驗單位的選擇
應(yīng)選擇符合相關(guān)法規(guī)要求的臨床試驗機(jī)構(gòu)進(jìn)行臨床試驗，不得選擇血站進(jìn)行臨床試驗。
3.病例選擇
臨床總病例數(shù)應(yīng)不少于3000例。應(yīng)采用臨床患者樣本進(jìn)行臨床研究，供血者樣本不得作為臨床病例納入。應(yīng)包括對檢測易產(chǎn)生干擾的病例，盡量選擇多種疾病患者樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者）、老人、兒童（不同年齡段）等。
4.實驗過程
無論直接抗人球蛋白試驗還是間接抗人球蛋白試驗，均應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的預(yù)期用途和適用人群分別進(jìn)行臨床試驗。
在進(jìn)行間接抗人球蛋白檢測試劑臨床試驗的過程中除與對比試劑進(jìn)行比較外，陽性結(jié)果應(yīng)給出不規(guī)則抗體的具體鑒定結(jié)果。
產(chǎn)品如適用于不同的預(yù)期用途（如不規(guī)則抗體篩查、抗體致敏紅細(xì)胞檢測、交叉配血等），每種預(yù)期用途均應(yīng)分別進(jìn)行至少3000例的臨床試驗，如適用于不規(guī)則抗體篩查或抗體致敏紅細(xì)胞檢測等，每種預(yù)期用途應(yīng)分別包含不少于100例陽性病例，如適用于交叉配血相關(guān)用途，應(yīng)包含不少于100例交叉配血不合病例?？贵w致敏紅細(xì)胞檢測應(yīng)根據(jù)疾病的種類，分別進(jìn)行臨床試驗。
交叉配血使用的供血者樣本，最多只能使用兩次，交叉配血不得使用血型不合的樣本進(jìn)行實驗。
同時應(yīng)明確配合使用的試劑產(chǎn)品。
5.統(tǒng)計學(xué)分析
應(yīng)進(jìn)行考核試劑與對比試劑檢測結(jié)果的陽性符合率、陰性符合率、總符合率的計算，并以四格表的形式進(jìn)行列表，并對定性結(jié)果進(jìn)行Kappa檢驗以驗證檢測結(jié)果的一致性。
6.結(jié)果差異樣本的驗證
對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致[考核試劑與對比試劑檢測結(jié)果不一致、與對比試劑凝集強(qiáng)度差異較大（差異2個凝集強(qiáng)度及以上）]的樣本，應(yīng)采用臨床上公認(rèn)較好的第三種同類試劑進(jìn)行確認(rèn)試驗，同時應(yīng)給出最終的抗體鑒定結(jié)果。
7.臨床試驗數(shù)據(jù)記錄表應(yīng)作為臨床試驗報告附件提交。臨床試驗數(shù)據(jù)記錄表應(yīng)列明所有病例的具體臨床診斷信息、凝集強(qiáng)度和抗體鑒定結(jié)果，如有不符樣本應(yīng)列明第三方確認(rèn)的結(jié)果。
（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料
產(chǎn)品風(fēng)險分析資料應(yīng)符合“44號公告”的基本要求，并參照相應(yīng)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行風(fēng)險分析。風(fēng)險分析中應(yīng)充分考慮到各種可能影響檢測結(jié)果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在進(jìn)行抗人球蛋白檢測時可能存在一定的干擾、實驗過程不規(guī)范、有些抗體較弱導(dǎo)致的檢測結(jié)果不穩(wěn)定等，申請人應(yīng)根據(jù)這些不確定的因素分析產(chǎn)品應(yīng)用可能存在的風(fēng)險。
（九）產(chǎn)品技術(shù)要求
申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、性能評估等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》和“44號公告”的相關(guān)規(guī)定。
如果擬申報試劑已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。
產(chǎn)品技術(shù)要求的性能指標(biāo)應(yīng)至少包括靈敏度、特異性、重復(fù)性等。
產(chǎn)品技術(shù)要求的附錄應(yīng)包括主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定要求。主要原材料應(yīng)明確抗體來源、克隆號、純度、效價、特異性以及功能性驗證要求，應(yīng)明確填充物來源及主要特征、質(zhì)量控制要求，緩沖液應(yīng)明確組成、pH值等特性及質(zhì)控要求。主要生產(chǎn)工藝應(yīng)以流程圖形式描述主要生產(chǎn)工藝過程，并明確主要生產(chǎn)工藝的具體條件和質(zhì)量控制點。半成品檢定應(yīng)明確半成品的檢驗要求及方法。
（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告
根據(jù)《辦法》要求，首次申請注冊的第三類體外診斷試劑產(chǎn)品應(yīng)在國家食品藥品監(jiān)督管理部門認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)三個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢驗。
（十一）產(chǎn)品說明書
說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗原理、試驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，境外產(chǎn)品的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。
以下內(nèi)容僅對抗人球蛋白檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，說明書其他內(nèi)容應(yīng)根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行編寫。
1.【預(yù)期用途】
1.1寫明本試劑用于直接抗人球蛋白試驗和/或間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細(xì)胞的檢測（明確疾病類型）等，同時明確不用于血源篩查，僅用于臨床檢驗。
1.2說明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法。
2.【儲存條件及有效期】
說明試劑的儲存條件及有效期、加速穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等。
3.【適用儀器】明確具體的離心機(jī)和/或孵育器型號（如適用）。
4.【樣本要求】
明確溶血、脂血、黃疸樣本是否可以使用，或提供使用此類樣本的最低要求。依據(jù)穩(wěn)定性研究結(jié)果寫明樣本穩(wěn)定性。
明確適用的抗凝劑的要求。
明確具體的樣本采集、處理方法及過程。
明確紅細(xì)胞配制使用的LISS液的生產(chǎn)廠家、規(guī)格、貨號等內(nèi)容。
5.【陽性判斷值】
明確各種試驗方法的結(jié)果判斷方法及標(biāo)準(zhǔn)，并通過不同凝集強(qiáng)度的圖例或照片進(jìn)行詳細(xì)解釋。
6.【檢驗方法】
明確配合使用的抗體篩查用紅細(xì)胞的生產(chǎn)廠家、規(guī)格、貨號等內(nèi)容。
須明確具體的檢驗步驟，反應(yīng)體系的描述應(yīng)準(zhǔn)確且應(yīng)與研究資料一致，不同的預(yù)期用途應(yīng)分別詳細(xì)描述實驗過程。如配合其他試劑進(jìn)行試驗，需注明試驗方法應(yīng)完全符合配合試劑的試驗操作要求。
7.【檢驗方法的局限性】
未被檢出的抗IgG抗體在某些病例中可能有臨床意義。
8.【注意事項】
8.1上腔部分或封口處有氣泡或液滴的卡，必須在使用前離心。
8.2濃度過高或過低的紅細(xì)胞懸液會引起異常結(jié)果。
8.3在不規(guī)則抗體篩查、交叉配血試驗中LISS液可以增強(qiáng)抗原抗體的反應(yīng)，應(yīng)嚴(yán)格按產(chǎn)品說明書規(guī)范使用低離子液。
三、參考文獻(xiàn)
1.國家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）.2014年9月
2.國家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）.2014年9月
3.中國生物制品規(guī)程（2000年版）.化學(xué)工業(yè)出版社
四、起草單位
國家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。
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