第一篇：3.霉菌、放線菌的形態(tài)觀察 4學時

實驗三

一、實驗?zāi)康?/p>

霉菌、放線菌的形態(tài)觀察

1.學習并掌握觀察放線菌、霉菌形態(tài)的基本方法。2.初步了解放線菌和四類常見霉菌的基本形態(tài)特征。

二、實驗原理

1.霉菌（真核微生物）：

霉菌是一類可產(chǎn)生菌絲體的真核微生物的統(tǒng)稱。霉菌的菌落形態(tài)較大，質(zhì)地疏松，外觀干燥，不透明，菌落與培養(yǎng)基間連接緊密，不易挑取，菌落正反面，邊緣與中心的顏色、構(gòu)造通常不一致，有霉味。霉菌的菌絲體分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體（尤其是繁殖菌絲）及包子的形態(tài)特征是識別不同種類霉菌的重要依據(jù)。

菌絲的孢子較大，在低倍鏡下即可清晰觀察到有隔或無隔菌絲和孢子及巨大的孢子囊。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比放線菌粗的多，常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍。霉菌菌絲較粗大，細胞易收縮變形，而且孢子很容易飛散，所以制標本時常用乳酸石炭酸棉藍染色液。此染色液制成的霉菌標本片特點是：（a）細胞不變形；(b)具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長時間；（c）溶液本身呈藍色，有一定染色效果。霉菌的菌絲、分生孢子梗和分生孢子的形態(tài)常作為分類的重要依據(jù)。

曲霉形態(tài)特征：表面灰綠色，菌體有許多復(fù)雜的分枝菌絲構(gòu)成。營養(yǎng)菌絲具有分隔；氣生菌絲的一部分形成長而粗糙的分生孢子梗，頂端產(chǎn)生燒瓶形或近球形頂囊，表面產(chǎn)生許多小梗，小梗上著生成串的表面粗糙的球形分生孢子。

根霉形態(tài)特征：匍匐菌絲弧形，無色，向四周蔓延。

放線菌形態(tài)特征：呈菌絲狀生長，以孢子繁殖。顯微鏡下呈紫紅色。青霉形態(tài)特征：菌絲初期白色，顏色逐漸由白轉(zhuǎn)變?yōu)榫G或藍，菌絲有隔膜。氣生菌絲特化成子實體，子實體類型為分生孢子頭。

霉菌的培養(yǎng)和觀察方法：

（1）載玻片培養(yǎng)觀察法：無菌操作將培養(yǎng)基薄層置于載玻片上，接種后蓋上蓋玻片培養(yǎng)，霉菌即在載玻片和蓋玻片之間有限的空間內(nèi)沿蓋玻片橫向生長。培養(yǎng)一定時間后，將載玻片上的培養(yǎng)物置于顯微鏡下觀察，這種方法既可以保持霉菌自然生長狀態(tài)，還便于觀察不同發(fā)育期的培養(yǎng)物。

（2）玻璃紙培養(yǎng)觀察法：與放線菌的玻璃紙培養(yǎng)觀察方法相似，這種方法用于觀察不同生長階段霉菌的形態(tài)，也可獲得良好的效果。

（3）直接制片觀察法：用解剖針挑取少量培養(yǎng)物置于預(yù)先滴加乳酸石炭酸棉藍染色液中，制成霉菌制片鏡檢。2.放線菌（原核微生物）

放線菌是由不同長短、纖細的菌絲所形成的單細胞菌絲體。菌絲體分為兩部分，即潛入培養(yǎng)基中的營養(yǎng)菌絲（或稱基內(nèi)菌絲，簡稱基絲）和生長在培養(yǎng)基以上的氣生菌絲（簡稱氣絲）。有些氣生菌絲分化成孢子絲，呈螺旋形、波浪形或分枝狀等，孢子常呈圓形、橢圓形或桿狀。能否產(chǎn)生氣生菌絲及孢子的形狀和顏色常作為放線菌分類鑒定的重要依據(jù)。

放線菌的菌落形態(tài)特征為：形成干燥、不透明、表面呈致密絲絨狀，上有一層彩色“干粉”的菌落。菌落與培養(yǎng)基連接緊密，難以挑取，菌落正反面顏色不一致，在菌落邊緣的瓊脂平板上有變形的現(xiàn)象，有泥腥味。

放線菌只產(chǎn)生基絲而無氣絲。放線菌的培養(yǎng)和觀察方法：

放線菌在顯微鏡下一般氣絲在上，基絲在下，氣絲色暗，基絲較透明。有的（1）扦片法：在放線菌平板上扦上蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻片上。觀察時用鑷子拔出蓋玻片，擦去背面培養(yǎng)物，將有菌的一面朝上置于載玻片上，直接鏡檢。

宜用略暗光線觀察，低倍鏡—高倍鏡；染色后觀察效果更好。

（2）玻璃紙法：玻璃紙是一種透明的半透膜，將滅菌的玻璃紙覆蓋在平板表面，接種放線菌，經(jīng)培養(yǎng)，放線菌在玻璃紙上形成菌苔。觀察時先在載玻片上滴一小滴水，取下玻璃紙，使菌面朝上，使玻璃紙平貼于載玻片上。

優(yōu)點：可觀察到放線菌自然生長狀態(tài)下的特征和不同生長期的形態(tài)。注意：整過程勿觸動菌面培養(yǎng)物。

（3）印片法：將要觀察的放線菌的菌落或菌苔直接印在載玻片上，經(jīng)染色后觀察。該方法主要用于觀察孢子絲的形態(tài)，孢子的排列及其形狀等，但形態(tài)特征可能有所改變。

用接種鏟或解剖刀將平板上的菌苔連同培養(yǎng)基一起切下，菌面朝上。另取一載玻片，微熱后，輕輕按壓菌苔，固定，染色后鏡檢。

三、實驗器材

1.菌種

放線菌劃線平板28℃，3~5天后培養(yǎng)物；曲霉（Aspergillus sp.）、根霉(Rhizopus sp.)和青霉(Penicillium sp.)劃線平板28℃，2~3天后培養(yǎng)物。

2.儀器

顯微鏡、培養(yǎng)皿、載玻片、牙簽、擦鏡紙、吸水紙、染色缸等。3.試劑

乳酸石炭酸棉藍染色液，石炭酸復(fù)紅染液，生理鹽水。

四、實驗步驟(一)霉菌觀察：

1.霉菌自然生長狀態(tài)下的觀察：將培養(yǎng)3—4天的霉菌培養(yǎng)皿打開，放在顯微鏡低倍鏡下尋找菌落的邊緣，直接觀察菌絲，分生孢子梗和分生孢子。

2.直接制片染色觀察：于潔凈載玻片上，加一滴乳酸石炭酸棉藍染色液，用牙簽從霉菌菌落的邊緣外（培養(yǎng)基平面下方一點兒）取少量帶有孢子的菌絲置染色液中，再細心地將菌絲挑散開，然后小心地蓋上蓋玻片，注意不要產(chǎn)生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察，必要時再換高倍鏡。

注：挑菌和制片時要細心，盡可能保持霉菌自然生長狀態(tài)；加蓋玻片時勿壓入氣泡，以免影響觀察。

可先將挑取的菌絲置于50%乙醇中浸一下以洗去脫落的孢子，然后置于染液中。(二)放線菌觀察：

1.放線菌自然生長狀態(tài)下的觀察

將培養(yǎng)3—4天的放線菌培養(yǎng)皿打開，放在顯微鏡低倍鏡下尋找菌落的邊緣，直接觀察菌絲，孢子絲和孢子。

2.印片法染色觀察

（1）用接種鏟或解剖刀（或牙簽）將平板上的菌苔連同培養(yǎng)基切下一小塊，菌面朝上放在載玻片中央。

（2）用另一潔凈載玻片置火焰上微熱后，蓋在菌苔上，輕輕垂直按壓，將其壓碎，使培養(yǎng)物（氣絲、孢絲或孢子）粘附在后一塊載玻片中央，棄去培養(yǎng)基，制成涂片，將有印跡的一面朝上，通過火焰2～3次固定。

注：不能壓碎培養(yǎng)基，也不能將孢子或菌絲壓入培養(yǎng)基。

（3）用石炭酸復(fù)紅染液或呂氏堿性美藍染液覆蓋印跡，染色0.5~1分鐘后水洗。

（4）干燥后，用油鏡觀察營養(yǎng)菌絲,孢子絲及孢子的形態(tài)。

五、實驗結(jié)果

繪圖說明所觀察到的青霉和放線菌主要形態(tài)特征。六 思考題

1.鏡檢時，如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲？

2.顯微鏡下，細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的主要區(qū)別是什么？ 補充材料：

1.霉菌對人類生活和生產(chǎn)能產(chǎn)生哪些積極作用和消極作用？

答：霉菌分布極其廣泛，只要存在有機物就有它們的蹤跡。它們在自然界扮演者最重要的有機物分解者的角色，從而把其他生物難分解利用的數(shù)量巨大的復(fù)雜有機物如纖維素和木質(zhì)素徹底分解轉(zhuǎn)化，稱為綠色植物可以重新利用的養(yǎng)料，促進了整個地球上生物圈的繁榮發(fā)展。

積極作用：（1）工業(yè)上的檸檬酸、葡萄糖酸、淀粉酶、蛋白酶等酶制劑，青霉素、頭孢霉素等抗生素，核黃素等維生素，麥角堿等生物堿，真菌多糖、赤霉素等產(chǎn)物的發(fā)酵生產(chǎn)；利用Absidia(犁頭霉)等對茲體化合物的生物轉(zhuǎn)化以生產(chǎn)茲體激素類藥物；以及利用霉菌在生物防治、污水處理和生物測定等方面的應(yīng)用；（2）在食品制造方面，如醬油的釀造和干酪的制造等（3）在基礎(chǔ)理論研究方面，霉菌是良好的實驗材料

消極作用：（1）大量真菌可引起工農(nóng)業(yè)產(chǎn)品霉變（2）是植物最主要的病原菌，引起各種植物的傳染性病害，如馬鈴薯晚疫病，稻瘟病和小麥銹病等（3）引起動物和人體傳染病，如皮膚廯病癥等；另有少部分霉菌可產(chǎn)生毒性很強的真菌毒素，如黃曲霉毒素。

2.在自然界和實際應(yīng)用中放線菌有什么作用？

答：實際應(yīng)用：（1）產(chǎn)生抗生素；

（2）近年來篩選到的許多新的生化藥物多數(shù)是放線菌的次生代謝產(chǎn)物，包括抗癌劑、酶抑制劑、抗寄生蟲劑和農(nóng)藥殺蟲劑等；

（3）放線菌還是許多酶、維生素的產(chǎn)生菌；

自然界：放線菌在茲體轉(zhuǎn)化、石油脫蠟和污水處理中也有重要作用。由于很多放線菌有極強的分解纖維素、石蠟、角蛋白、瓊脂和橡膠等的能力，故它們在環(huán)境保護、提高土壤活力和自然界物質(zhì)循環(huán)中起著重大作用。

第二篇：放線菌霉菌的制片觀察

實驗三 放線菌霉菌的制片觀察

實驗?zāi)康模?/p>

1.學會用印片法制作臨時裝片

2.掌握用顯微鏡觀察放線菌個體形態(tài)特征的方法 3.掌握霉菌的觀察方法和觀察霉菌的形態(tài)特征 實驗原理：

1.放線菌是產(chǎn)生抗生素的重要微生物種類之一，其形態(tài)特征含有3個部分，基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲。基內(nèi)菌絲：升展于培養(yǎng)基的表面和內(nèi)部，菌絲色淡、較細。氣生菌絲：在基內(nèi)菌絲上，升展于空間，顏色較深，菌絲較粗。孢子絲：菌絲成熟時，大部分氣生菌絲分化成孢子絲，孢子絲形態(tài)多樣，由成串分生孢子組成。

2.霉菌是真核生物主要有基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和繁殖菌絲。基內(nèi)菌絲：升展于培養(yǎng)基的表面和內(nèi)部。氣生菌絲：在基內(nèi)菌絲上，升展于空間。繁殖菌絲：產(chǎn)生孢子。材料和儀器：

1． 菌種：細菌鏈霉菌、霉菌 2． 培養(yǎng)基：高氏一號瓊脂培養(yǎng)基

3． 器皿：培養(yǎng)皿、蓋玻片、載玻片、鑷子、顯微鏡等 4． 染液：呂氏美蘭染液、乳酸石碳酸棉蘭染液 實驗步驟：

1.配制培養(yǎng)基滅菌后倒平板，待起冷卻后劃線接種，在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5-7天

2.取蓋玻片印于放線菌菌體處，輕輕敲打后取出置于有呂氏美蘭染液的載玻片上，無菌操作

3.用鑷子夾取少量霉菌菌體于有乳酸石碳酸棉蘭染液的載玻片上，用大頭針打散菌體，蓋上蓋玻片吸取多余的染液，無菌操作

4.取制作好的臨時裝片于顯微鏡下，鏡檢，觀察放線菌和霉菌的形態(tài)特征 實驗結(jié)果：

1.放線菌所獲臨時裝片材料較少，只有幾個視野可以觀察的到菌體，菌體疏松。因為放線菌長勢不好，只有少數(shù)生長于培養(yǎng)基上，故取材時只取到少部分，但不影響觀察，可以清晰的看到菌絲體和孢子絲，說明放線菌有菌絲體和孢子絲組成，孢子絲呈串珠狀。2.霉菌制作了兩塊臨時裝片，第一個觀察到的都是圓形小顆粒的孢子，說明取材時，僅僅只取了培養(yǎng)基表面的一層菌體，沒有深入培養(yǎng)基中取菌體，操作有誤。第二塊可以清晰的看見霉菌菌體，其中有分生孢子梗、頂囊、小梗、分生孢子，說明霉菌由這幾部分組成，孢子著生于小梗上，呈串珠狀。霉菌菌體比放線菌菌體大很多。

第三篇：實驗三 放線菌形態(tài)及菌落特征的觀察

實驗三 放線菌形態(tài)及菌落特征的觀察

一、目的要求

掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法，并觀察放線菌的形態(tài)特征。

二、基本原理

和細菌的單染色一樣，放線菌也可用石炭酸復(fù)紅或堿性美藍等染料著色后，在顯微鏡下觀察其形態(tài)。放線菌的孢子絲形狀和孢子排列情況是放線菌分類的重要依據(jù)，為了不打亂孢子的排列情況，常用印片染色法和膠帶紙粘菌染色法進行制片觀察。

放線菌是由不同長短的纖細的菌絲所形成的單細胞菌絲體。菌絲體分為兩部分，即潛入培養(yǎng)基中的營養(yǎng)菌絲（或稱基內(nèi)菌絲）和生長在培養(yǎng)基表面的氣生菌絲。有些氣生菌絲分化成各種孢子絲，呈螺旋形、波浪形或分枝狀等。孢子常呈圓形、橢圓形或桿形。氣生菌絲及孢子的形狀和顏色常作為分類的重要依據(jù)。

三、器材

1.活材料：放線菌培養(yǎng)物，酵母菌斜面培養(yǎng)物；

2.染色液：復(fù)紅染色液（或結(jié)晶紫，美蘭）；

3.器材：載玻片，膠帶紙，小刀，接種環(huán)，吸水紙，擦鏡紙，酒精燈，香柏油，乙醚-乙醇混合液，顯微鏡。

四、操作步驟

1．印片法：放線菌自然生長狀態(tài)的觀察

印片：取干凈載玻片一塊，用小刀切取放線菌培養(yǎng)體一塊，放在載玻片上，用另一塊載玻片對準菌塊的氣生菌絲輕輕按壓，然后將載玻片垂直拿起。注意不要使培養(yǎng)體在玻片上滑動，否則會打亂孢子絲的自然形態(tài)；

微熱固定：將印有放線菌的涂面朝上，通過酒精燈火焰2-3次加熱固定； 染色:石炭酸復(fù)紅染色1min； 水洗：水洗后晾干；

鏡檢：先用低倍鏡后用高倍鏡，最后用油鏡觀察孢子絲、孢子的形態(tài)及孢子排列情況。

2．膠帶紙法

粘菌：用膠帶紙在放線菌培養(yǎng)體上粘取菌體，注意，壓取時從菌落邊順著菌體生長方向，避免從菌落上面壓取，以免取得的全是孢子。

染色：將粘有菌體的膠帶紙壓在事先準備好的滴油染液的載玻片上。將多余染色液用濾紙吸掉。

鏡檢：同上。

五、實驗報告

繪圖說明你所觀察到的放線菌的形態(tài)特征。

第四篇：觀察酵母菌與霉菌實驗教案

《觀察酵母菌與霉菌》實驗教案

一.實驗?zāi)康?/p>

1.觀察酵母菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)并掌握其特征。

2.觀察霉菌的菌落特征，學會霉菌的一般制作方法。3.觀察并掌握各種霉菌的個體形態(tài)及生長繁殖方式。4.進一步熟悉顯微鏡的使用。二.實驗原理

酵母菌是一類單細胞真菌，一般呈圓形、橢圓形，無性繁殖以芽孢為主，也有少數(shù)是裂殖，有些酵母菌能產(chǎn)生囊孢子，有的能形成假菌絲。酵母菌的菌落似細菌菌落，但較大且厚，多呈白色，少數(shù)為紅色。酵母菌在液體中生長可形成菌膜、菌環(huán)、沉淀和渾濁。酵母菌的細菌結(jié)構(gòu)較完善，即有壁、膜、質(zhì)、核等結(jié)構(gòu)。酵母菌的細胞形態(tài)、繁殖方式和培養(yǎng)特征均為菌種鑒定的依據(jù)。

酵母活細胞新陳代謝旺盛，活力強，還原力也強，若無毒的染料進入細胞，既被還原脫色，但死細胞及代謝作用緩慢的老弱細胞無此還原力。美蘭是無毒染料，且能被活細胞還原成無色，故可用來區(qū)別細胞的死活。

霉菌是一些小型絲狀真菌、單細胞（根霉、毛霉）或多細胞（曲霉、青霉），其細胞結(jié)構(gòu)與酵母類似，同屬真核細胞。

霉菌形態(tài)較復(fù)雜，個體較大，具有分枝的菌絲體和分化的繁殖器官。其菌絲分為氣生菌絲與營養(yǎng)菌絲（菌絲比放線菌粗得多）觀察時請注意菌絲是否具有橫膈膜、有無假根、無性繁殖時形成何種孢子，孢子著生方式以及孢子頭的構(gòu)造等，以區(qū)別各種不同霉菌的形態(tài)。

霉菌菌落由分枝狀菌絲組成，較疏松，呈毛狀、棉絮狀、絨毛狀或氈狀。由于不同霉菌形成的孢子均有不同顏色、構(gòu)造、性狀，故菌落表面呈現(xiàn)出不同的結(jié)構(gòu)和色澤特征。菌絲一般呈白色或灰白色，菌落中心的菌絲較老，先產(chǎn)生孢子，故常形成同心圓。三.實驗器材

1.菌種：面包酵母、根霉、曲霉、青霉。2.儀器：顯微鏡。

3.其它：生理鹽水、乳酸酚棉蘭染液、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、酒精燈、美蘭、鑷子、大頭針。四.步驟與方法

1.酵母菌細胞形態(tài)觀察

（1）制片：用接種環(huán)挑取一環(huán)面包酵母菌種于載玻片上的一滴美蘭染液中混勻，蓋上蓋玻片靜置4~5分鐘。蓋時先將蓋玻片的一邊與液滴接觸，然后慢慢放下，避免產(chǎn)生氣泡。

（2）鏡檢：用高倍鏡觀察，光線弱些，繪圖表示個體細胞的大小、形狀、芽孢或裂殖情況，并觀察死活酵母情況。2.霉菌的形態(tài)觀察（1）制片方法：在潔凈的載玻片加一滴乳酸酚棉蘭染液，用大頭針或鑷子從菌落的不同部位菌絲體少許（連同培養(yǎng)基），放入載玻片上的乳酸酚棉蘭染液中，使菌絲在染液中展開，加上蓋玻片。（2）載片培養(yǎng)法制作霉菌標本片。（3）鏡檢。

（4）觀察毛霉、根霉、曲霉、青霉的菌落。五.結(jié)果記錄

1.酵母菌的形態(tài)觀察

繪圖表示個體細胞的大小、形狀、芽孢或裂殖情況。2.霉菌的形態(tài)觀察

繪制鏡檢圖并描繪霉菌菌落特征。六.思考題

1.試比較酵母和細菌的形態(tài)。

2.為什么在觀察霉菌個體形態(tài)時要連同培養(yǎng)基一起挑起？

第五篇：實驗五 細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的制片和簡單染色

實驗五

細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的制片和簡單染色

一．實驗器材 1.菌種

枯草芽孢桿菌12—18h。金黃色葡萄球菌24h牛肉膏蛋白胨瓊脂泄密安培養(yǎng)物等。1.溶液和試劑

草酸銨結(jié)晶紫染液，齊氏碳酸復(fù)紅染液，呂氏堿性美藍染液，革蘭氏染色用典液，乳酸碳酸棉藍染液。

2.儀器和其他用品

酒精燈，載玻片，蓋玻片，顯微鏡，雙層瓶，擦鏡紙，接種環(huán)，接種鏟，接種針，鑷子，載玻片夾子，載玻片支架，玻璃紙，平皿v型玻璃棒，滴管，解剖針，解剖刀，生理鹽水，50%乙醇，20%甘油，高氏1號培養(yǎng)基平板。二．目的要求

1.學習并掌握微生物的制片及簡單染色的基本技術(shù) 2.初步了解細菌，放線菌，酵母菌及霉菌的形態(tài)特征 3.鞏固顯微鏡操作技術(shù)及無菌操作技術(shù) 三．基本原理

放線菌菌體由基內(nèi)菌絲，氣生菌絲和孢子絲組成，制片時不采用涂片法以免破壞細胞及菌絲體形態(tài)。通常采用插片法或玻璃紙法并結(jié)合菌絲體簡單染色進行觀察，在插片中首先將滅菌蓋玻片插入接種有放線菌的平板，使放線菌沿蓋玻片和培養(yǎng)基接觸生長而附著在蓋玻片上，取除蓋玻片上，取出蓋玻片可直接在顯微鏡下觀察放線菌在自然生長狀態(tài)下的形態(tài)特征，而且有利于對不同生長時期的放線菌形態(tài)進行觀察。利用單一染料對菌體進行染色的方法稱為簡單染色。用于染色的染料是一類苯環(huán)上帶有發(fā)色基因的有機化合物。常采用堿性染料進行簡單染色，原因在于微生物細胞在堿性、中性及弱酸性溶液中通常帶負電荷，而染料電離后染料部分帶正電荷，很容易與細胞結(jié)合使其著色；當細胞處于酸性條件下，所帶正電荷增加時，可采用酸性染料染色。

四、操作步驟

（一）細菌制片及簡單染色。

1、涂片。

2、干燥。

3、固定。

4、染色。

5、水洗。

6、干燥。

7、鏡檢。

（二）酵母菌制片及簡單染色。

水—碘液浸片法。將革蘭氏染色用碘液用水稀釋4倍后，滴加一滴于載破片中央，無菌操作取少許菌體置于染色中混勻，蓋上破片后鏡劍。

五、思考題。