第一篇：微生物檢測技術(shù)復(fù)習(xí)資料

名詞解釋

1病原微生物：感染人、動(dòng)植物，導(dǎo)致疾病發(fā)生的有害微生物。

2無菌操作：用于防止微生物進(jìn)入人體組織或其它無菌范圍的操作技術(shù)稱為無菌操作 3滅菌：用物理和化學(xué)方法殺滅或清除傳播媒介上一切微生物的方法

4菌落總數(shù)：指食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1g或1mL檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。

5大腸菌群：寄居于人及溫血?jiǎng)游锬c道內(nèi)的腸居菌，隨大便排出體外。食品中大腸菌群數(shù)越多，說明食品受糞便污染的程度越大。微生物：一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱。包括病毒、細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物和某些藻類。

7微生物檢測：基于微生物學(xué)的基本理論，利用微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)，根據(jù)各類產(chǎn)品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的要求，研究產(chǎn)品中微生物的種類、性質(zhì)、活動(dòng)規(guī)律等，用以判斷環(huán)境、產(chǎn)品等衛(wèi)生質(zhì)量的一門應(yīng)用技術(shù)。菌落：將細(xì)菌接種在固體培養(yǎng)基上經(jīng)18∽24小時(shí)培養(yǎng)，長出肉眼可見的來源于一個(gè)細(xì)胞的細(xì)菌集團(tuán)。莢膜：在某些細(xì)菌細(xì)胞外壁外存在著一層松散透明、厚度不定的膠狀物質(zhì)叫莢膜。10消毒：殺滅或清除傳播媒介上病原微生物,使其達(dá)到無害化的FF。

填空簡答

1飲用水的微生物檢測

大腸菌群是指示水質(zhì)受糞便污染的指示菌，細(xì)菌總數(shù)指示水體受污染物污染的情況。我國GB5749-85《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) 生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定生活飲用水細(xì)菌總數(shù)每毫升不得超過100個(gè)，大腸菌群每升不得超過3個(gè)。培養(yǎng)基的分類（按物理性質(zhì)）：液體、固體、半固體、脫水培養(yǎng)基

3病毒的組成：核酸和蛋白質(zhì)革蘭氏染色：陰紅陽紫 5 細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)的功能：

鞭毛：是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官，鞭毛菌在液體環(huán)境下可自由移動(dòng)，速度迅速，抗原性 1化學(xué)趨向性運(yùn)動(dòng)，有助于細(xì)菌向營養(yǎng)物質(zhì)處前進(jìn)，而逃離有害物質(zhì).2.與細(xì)菌致病性相關(guān)

3.可用以細(xì)菌的鑒定和分類

菌毛：菌毛是在某些細(xì)菌表面存在著一種比鞭毛更細(xì)、更短而直硬的絲狀物，須用電鏡觀察。特點(diǎn)是：細(xì)、短、直、硬、多，菌毛與細(xì)菌運(yùn)動(dòng)無關(guān)，根據(jù)形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能，可分為普通菌毛和性菌毛兩類。前者與細(xì)菌吸附和侵染宿主有關(guān)，后者為中空管子，與傳遞遺傳物質(zhì)有關(guān)。

芽孢：芽孢是細(xì)菌的休眠體，對(duì)不良環(huán)境有較強(qiáng)的抵抗能力。耐熱性、抗逆性強(qiáng)（抗熱、抗輻射、抗化學(xué)物質(zhì)和抗靜水壓等能力）

莢膜：①抗吞噬作用②黏附作用③抗有害物質(zhì)的損傷作用④抗干燥作用⑤當(dāng)缺乏營養(yǎng)時(shí)，莢膜可被利用作碳源和能源，有的莢膜還可作氮源。肺炎雙球菌：光滑型(簡稱S型)產(chǎn)生莢膜，有毒；粗糙型(簡稱R型)不產(chǎn)生莢膜，無毒。7 芽孢：抗逆性強(qiáng)

8瘋牛病

牛海綿狀腦?。˙ovine spongiform encephalopathy, BSE），又稱瘋牛病，是一種侵犯牛中樞神經(jīng)系統(tǒng)的慢性的致命性疾病，由一種非常規(guī)的病毒——朊病毒（Prion）引起的一種亞

急性海綿狀腦病，這類病還包括綿羊的搔癢病、人的克-雅氏?。–reutzfeldt-Jakob Syndrome , CJD）（又稱早老癡呆癥）、庫魯病以及最近發(fā)現(xiàn)的致死性家庭性失眠癥等等。

朊病毒是一類非正常的病毒，它不含有通常病毒所含有的核酸，而是一種不含核酸僅有蛋白質(zhì)的蛋白感染因子。

朊病毒屬于亞病毒，亞病毒包括：類、擬、朊病毒三類。人類三大流行病原：線蟲（原生、無脊椎動(dòng)物動(dòng)物）分類：包括自由生活線蟲（海洋、淡水和土壤中）和危害植物的病原線蟲人類病原真菌的分類：

1）淺部真菌：侵犯皮膚、毛發(fā)、指甲，為慢性，頑固性，但影響身體較??；

2）深部真菌：可侵犯全身內(nèi)臟，嚴(yán)重的可引起死亡。

3）此外，有些真菌寄生于糧食、飼料、食品中，能產(chǎn)生毒素引起中毒性真菌病。12原核微生物常見類群

1）真細(xì)菌：細(xì)菌、放線菌、藍(lán)細(xì)菌、支原體、立克次氏體和衣原體

2）古生菌 13真菌類群

鞭毛菌亞門、接合菌亞門、子囊菌亞門、擔(dān)子菌亞門、半知菌亞門細(xì)菌的基本形態(tài)

細(xì)菌的種類雖然很多，但其基本形態(tài)只有三種：球菌（葡萄球菌、雙球菌、鏈球菌、四聯(lián)球菌、八疊球菌）、桿菌、螺旋菌（弧菌和螺菌）。15 病毒的分類

1）按感染的對(duì)象分

動(dòng)物病毒、植物病毒、細(xì)菌病毒、昆蟲病毒及真菌病毒，另外尚有亞病毒——類病毒(Viroids)擬病毒(Virusoid)和朊病毒(Prion)。

2）按遺傳物質(zhì)分類分

DNA病毒和RNA病毒兩大類

（噬菌體寄生于細(xì)菌中病毒的總稱。）高壓蒸汽滅菌指標(biāo)： 0.10MPa，121℃，20min左右純種分離的技術(shù)方法

1）固體培養(yǎng)基純種分離技術(shù):① 稀釋倒平板法；② 涂布平板法 ③平板劃線分離法；④稀釋搖管法——厭氧微生物的分離

2）液體培養(yǎng)基純種分離技術(shù)——稀釋法（不可靠）

3）單細(xì)胞（孢子）分離——顯微分離

4）選擇培養(yǎng): ① 選擇平板培養(yǎng)② 富集培養(yǎng)

問答題

1、微生物有益方面

1）微生物與糧食增產(chǎn)

固氮、解磷、解鉀、生長激素、分解大分子碳源等促生產(chǎn)功能，抗病蟲害。

2）微生物與能源供應(yīng)

產(chǎn)乙醇、產(chǎn)甲烷、分解長鏈烴或脂肪酸為短鏈燃料，微生物電池、微生物采油。

3）微生物與資源開發(fā)

發(fā)酵產(chǎn)乙醇、丙酮、水楊酸等化工產(chǎn)品。

4）微生物與環(huán)境保護(hù)

微生物修復(fù):重金屬、降解塑膠廢品、凈化污水、監(jiān)測環(huán)境污染等。

5）微生物與人類健康

生物制品：菌苗、疫苗、類毒素等；

代謝產(chǎn)物：胰島素、白細(xì)胞介素、干擾素、鏈激酶及青霉素等抗生素。

2、微生物有害方面

1）人類疾病

1347年，鼠疫造成歐洲約2500萬人死亡。

2）動(dòng)植物疾病，降低食物產(chǎn)量及品質(zhì)

1843-1847年，歐洲馬鈴薯晚疫病，餓死100萬人，164萬逃往北美。

3）污染水源、加工食品、醫(yī)藥

完達(dá)山刺五加致死事件、太湖藍(lán)藻污染等。

4）破壞人類生活用品

家具、化妝品等損害、污染

3樣品采集的原則

1）根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康?、樣品特點(diǎn)、批量、檢驗(yàn)方法、微生物的危害程度等確定采樣方案。

2）采樣、保存、運(yùn)輸、接收過程應(yīng)遵循無菌操作程序，采取必要的措施保持樣品的原有狀態(tài)，防止樣品中原有微生物的種類、數(shù)量變化(避免采樣引入新的污染或者對(duì)微生物的殺滅因子)。

3)采樣要講究方法、有代表性，不同的樣品有不同的要求，特別是某些特殊樣品。

4)注意采樣時(shí)間和種類：一般原則是根據(jù)不同疾病的特點(diǎn)和臨床表現(xiàn)，確定采樣時(shí)間和標(biāo)本種類。

5)注意生物安全：采樣中避免造成人員感染、標(biāo)本和環(huán)境的污染。采用防護(hù)裝備，注意安全操作和安全包裝樣品。

6)樣品的包裝、密封標(biāo)志要明確，以備查詢。（用于衛(wèi)生質(zhì)量評(píng)價(jià)的樣品，應(yīng)標(biāo)明樣品名稱、編號(hào)、采樣時(shí)間、采樣量、采樣者、檢測項(xiàng)目等。）

利用某一特定微生物特有的基因序列，設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。若有條帶，則說明待測樣品中含有目的菌，且目的菌的含量與條帶的亮度呈正相關(guān)；若無條帶，則說明待測樣品中無目的菌。微生物檢驗(yàn)的任務(wù)

1）研究各類產(chǎn)品的樣品采集、運(yùn)送、保存以及預(yù)處理方法，提高檢出率。

2）根據(jù)各類產(chǎn)品的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求，選擇適合不同產(chǎn)品、針對(duì)不同檢測目標(biāo)的最佳檢測方法，探討影響產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量的有關(guān)微生物的檢測、鑒定程序以及相關(guān)質(zhì)量控制措施；利用微生物檢驗(yàn)技術(shù)，正確進(jìn)行各類樣品的檢驗(yàn)。

3）正確進(jìn)行影響產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量的有關(guān)微生物的快速檢測方法、自動(dòng)化儀器的使用，并認(rèn)真進(jìn)行檢驗(yàn)結(jié)果的分析和試驗(yàn)方法的評(píng)價(jià)。

4）及時(shí)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)、分析、處理，并及時(shí)準(zhǔn)確地進(jìn)行結(jié)果報(bào)告。

5）對(duì)影響產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量及人類健康的相關(guān)環(huán)境的微生物進(jìn)行調(diào)查、分析與質(zhì)量控制。微生物的特點(diǎn)：個(gè)體小、比表面大；分布廣、種類多；代謝強(qiáng)、繁殖快；易變異、抗性強(qiáng) 7 科赫法則:①分離、純化單菌落;②分別接種寄主;③從致病寄主分離出相應(yīng)菌株 8 微生物檢測的意義

1）衡量動(dòng)植物性產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)，也是判定被檢產(chǎn)品能否食用的科學(xué)依據(jù)。

2）可以判斷產(chǎn)品加工環(huán)境衛(wèi)生狀況，對(duì)產(chǎn)品被微生物污染的程度作出正確的評(píng)價(jià)，為各項(xiàng)

衛(wèi)生管理工作提供科學(xué)依據(jù)，提供傳染病和人類、動(dòng)物和食物中毒的防治措施。

3）“預(yù)防為主”：可以有效地防止或者減少食物中毒、人畜共患病的發(fā)生，保障人民的身

體健康。

4）對(duì)提高產(chǎn)品質(zhì)量、避免經(jīng)濟(jì)損失、保證出口等方面具有政治上和經(jīng)濟(jì)上的重要意義。*微生物檢測與植物檢疫

植物檢疫目的：發(fā)現(xiàn)、檢出和鑒定有害微生物、昆蟲、雜草等，作為出證或檢疫處理的依據(jù)。外來有害生物爆發(fā)的因素：天敵、環(huán)境、寄主、潛在危害的認(rèn)識(shí)（人為因素）。

關(guān)系：植物檢疫的一部分，主要負(fù)責(zé)檢測引起植物病害的微生物，防治病原物的進(jìn)入或流出，保證農(nóng)林園藝業(yè)安全。

設(shè)計(jì)題

病原微生物采集、分離、鑒定方案

第二篇：安全檢測技術(shù)復(fù)習(xí)資料

安全檢測技術(shù)復(fù)習(xí)資料生產(chǎn)安全關(guān)鍵技術(shù)包括：災(zāi)前抑制、前兆檢測、早期監(jiān)測、災(zāi)前撲救。檢測包括檢驗(yàn)和測量兩方面的含義。檢驗(yàn)是分辨出被測量值所歸屬的某一范圍帶，以此來判別被測參數(shù)是否合格或現(xiàn)象是否存在。測量時(shí)把被測未知量與同性質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，確體、控制爆炸范圍、控制引爆源。檢測系統(tǒng)的干擾類型有電磁干擾、機(jī)械干擾、光干擾、熱干擾、溫度干擾、化學(xué)干擾、射線輻射干擾。抑制電磁干擾的措施有屏蔽技術(shù)（靜電屏蔽、電磁屏蔽、低頻磁屏蔽、驅(qū)動(dòng)屏蔽）、接地技術(shù)、浮置、濾波、平衡電路。

漏方法、超聲波流量測定檢漏方法、蒸汽測定檢漏方法、遙感檢漏方法）；基于軟件的方法和技術(shù)（質(zhì)量體積平衡檢漏方法、實(shí)時(shí)瞬變模型檢漏方法、壓力點(diǎn)分析檢漏方法、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)泄漏檢測技術(shù)）。

火災(zāi)探測方法空氣離化探測法、熱檢測法、光電探測方法、光輻射或火焰輻射探測方法、定被測量標(biāo)準(zhǔn)的倍數(shù)，并用數(shù)字表示這個(gè)倍數(shù)的過程。傳感器是將非電量轉(zhuǎn)換為與之有確定對(duì)應(yīng)關(guān)系的電量輸出的器件或裝置，它本質(zhì)上是非電量系統(tǒng)與電量系統(tǒng)之間的接口。傳感器按能力轉(zhuǎn)換分為能量控制型傳感器（稱為無源傳感器），能量轉(zhuǎn)換型傳感器（稱為有源傳感器）。按輸入量分為物理傳感器和化學(xué)傳感器。按轉(zhuǎn)換原理分為結(jié)構(gòu)型和物性型傳感器。安全檢測監(jiān)控系統(tǒng)是由傳感器、信號(hào)調(diào)整器、輸出環(huán)節(jié)三部分組成。安全監(jiān)測的目的為職業(yè)健康安全現(xiàn)狀進(jìn)行評(píng)價(jià)、安全技術(shù)和設(shè)備監(jiān)督、安全技術(shù)措施效果進(jìn)行分析評(píng)價(jià)等提供可靠而準(zhǔn)確的依據(jù)，從而達(dá)到改善勞動(dòng)作業(yè)條件、改進(jìn)生產(chǎn)工藝流程，避免和減少系統(tǒng)和設(shè)備的故障發(fā)生，總的來說就是確保設(shè)備的安全運(yùn)行，預(yù)防和消除事故隱患，避免事故發(fā)生。安全檢測的意義：全面開展安全檢測，提高我國安全檢測的整體科研水平，對(duì)有效減少事故隱患，預(yù)防和消除重、特大安全事故的發(fā)生，遏制群死群傷、重大經(jīng)濟(jì)損失和保障我國經(jīng)濟(jì)和社會(huì)的可持續(xù)發(fā)展有重大意義。設(shè)備的狀態(tài)分為正常狀態(tài)、異常狀態(tài)、故障狀態(tài)。誤差的表示方法分為絕對(duì)誤差、相對(duì)誤差、引用誤差、容許誤差。誤差按規(guī)律分為系統(tǒng)誤差、隨即誤差、粗大誤差；按來源分為儀器誤差、人員誤差、理論和方法誤差、環(huán)境誤差；隨機(jī)誤差符合正態(tài)函數(shù)分布，具有對(duì)稱性，單豐性、有界性、抵償性。數(shù)據(jù)處理方法分為表格法，圖示法，經(jīng)驗(yàn)公式法。信息革命的兩大重要支柱是信息采集和信息處理，信息處理分為時(shí)域處理和頻域處理。14 動(dòng)態(tài)數(shù)學(xué)模型包括微分方程和傳遞函數(shù)。15 精確度包括準(zhǔn)確度、精密度、精確度。準(zhǔn)確度表征系統(tǒng)誤差的大小，精密度表征隨機(jī)誤差的大小。儀表中三種常見的防爆措施是控制易爆氣電容式傳感器工作原理。當(dāng)被測非電量引起式中A，d 變化時(shí)，電容 也會(huì)隨之變化。如果保持其中兩個(gè)參數(shù)不變而僅僅改變另一個(gè)變量，就可以把非電量的變化轉(zhuǎn)化成電容的變化。因此電容變化的大小與被測參數(shù)的大小成比例。壓電傳感器串聯(lián)時(shí)輸出電容C1,輸出電壓U1，電荷量Q1與單片間的關(guān)系是：Q1=Q，U1=2U，C1=C/2；并聯(lián)時(shí)Q1=2Q，U1=U，C1=2C。21 半導(dǎo)體熱敏電阻按半導(dǎo)體電阻隨溫度的典型特征分為負(fù)電阻系數(shù)熱敏電阻（NTC）、正電阻系數(shù)熱敏電阻（PTC）、臨界溫度熱敏電阻（CTR）。半導(dǎo)體的導(dǎo)電能力完全取決于半導(dǎo)體導(dǎo)帶內(nèi)載流子數(shù)目的多少。光敏二級(jí)管載電路中一般處于反向工作狀態(tài)。赫爾效應(yīng)：當(dāng)電流方向與磁場方向垂直時(shí)，在與電流和磁場都垂直的金屬板的兩表面間出現(xiàn)電勢差。常用經(jīng)驗(yàn)溫標(biāo)有攝氏溫標(biāo)、華氏溫標(biāo)、列氏溫標(biāo)。熱電偶的冷端溫度補(bǔ)償方法溫度修正法、水浴法、補(bǔ)償電橋法、補(bǔ)償導(dǎo)線法。27 壓力儀表按敏感元件和轉(zhuǎn)換原理的特性分為液柱式壓力儀表、彈性式壓力儀表、負(fù)荷式壓力儀表、電測式壓力儀表。壓力儀表量程選擇，穩(wěn)壓時(shí)不超過量程的3/4，測脈動(dòng)壓力時(shí)不超過量程的2/3，測高壓時(shí)不超過量程的3/5。流量指單位時(shí)間流內(nèi)流過管道某截面流體的體積或質(zhì)量。感煙探測器有透射式感煙探測器、散射事感煙探測器、離子式感煙探測器。

容器構(gòu)件破壞引起危險(xiǎn)物質(zhì)泄漏的原因有三個(gè)，容器內(nèi)壓力異常上升、容器構(gòu)件受到異常外部載荷、容器或管道構(gòu)件材料強(qiáng)度降低（物料腐蝕或摩擦、材料的低溫脆性、反復(fù)應(yīng)力或靜載荷作用、材料暴露于高溫）。32 管道泄漏檢測技術(shù)，基于硬件的方法和技術(shù)（聲發(fā)射技術(shù)管道檢漏方法、電纜傳感器管道檢測方法、光纖管道檢漏方法、土壤檢測檢

可燃?xì)怏w探測法。

超聲波檢測方法有脈沖反射法，共振法、穿透法、接觸法、液浸法。

磁粉檢測的三個(gè)步驟是被檢測的工件必須得到磁化、必須在磁化的工件上添加合適的磁粉、對(duì)任何磁粉的堆積必須加以觀察和解釋。36 紅外線檢測的特點(diǎn)非接觸性、安全性極強(qiáng)、檢測準(zhǔn)確、檢測效率高。

紅外線檢測方法有被動(dòng)式紅外線檢測、主動(dòng)性紅外檢測。

結(jié)構(gòu)防爆儀表的防爆結(jié)構(gòu)有隔爆型、防爆型通風(fēng)充氣型、防爆充油型、防爆安全型、特殊防爆型。

實(shí)現(xiàn)安全檢測儀表本質(zhì)安全的基本措施有：合理選擇元件的額定功率、降低電源的容量、機(jī)械隔離與電氣隔離、關(guān)鍵部位采用不出故障元件設(shè)計(jì)。

隔離式安全柵分為檢測端安全柵、執(zhí)行端安全柵。

超聲波檢測的優(yōu)點(diǎn)，適應(yīng)范圍廣、不會(huì)對(duì)工件造成破壞、僅需從一側(cè)接近被檢工件，便于復(fù)雜形狀工件的檢測、穿透能力強(qiáng)、靈敏度高、對(duì)確定內(nèi)部缺陷的大小，位置，取向，深埋、性質(zhì)等參量較之其他無損檢測方法有綜合優(yōu)勢、檢驗(yàn)成本低，速度快，能快速自動(dòng)檢測、檢測儀器體積小，質(zhì)量輕，現(xiàn)場使用方便、對(duì)人體及環(huán)境無害。

常用紅外診斷方法有五種；表面溫度判斷法、相對(duì)溫度差判斷法、同類比較法、熱譜圖分析法、檔案分析法。

第三篇：微生物工程考試復(fù)習(xí)資料

篩選抗生素產(chǎn)生菌的方法？關(guān)鍵是？與哪些要求有關(guān)？

篩選抗生素產(chǎn)生茵的方法包括抑菌圈法、稀釋法、擴(kuò)散法、生物自顯影法等。在這些方法中，試驗(yàn)茵的選擇是成功的關(guān)鍵，它直接與檢出的靈敏性、抗茵素的活性的抗茵譜有關(guān)。除使用高靈敏度的試驗(yàn)茵外，采用專一性很強(qiáng)的篩選技術(shù)也可檢出新的抗生素。主要是利用與生長素作用機(jī)制相關(guān)的酶、酶抑制劑、激活劑、抗體等建立起來的高靈敏度、專一的篩選技術(shù)。

含微生物材料的標(biāo)本采集的要求

采集菌種標(biāo)本遵循的原則是材料的來源要廣泛，標(biāo)本預(yù)處理的目的？

提高菌種分離的效率

自然選育的定義、原理？誘變育種的原理、方法理論基礎(chǔ)。

定義：不經(jīng)人工處理，利用微生物的自然突變進(jìn)行菌種選育的過程叫自然選育。原理：多因素低劑量的誘變效應(yīng)和互變異構(gòu)效應(yīng)。多因素低劑量誘變效應(yīng)，是指在自然環(huán)境中存在著低劑量的宇宙射線、各種短波輻射、低劑量的誘變物質(zhì)和微生物自身代謝產(chǎn)生和誘變物質(zhì)等作用引起的突變。互變異構(gòu)效應(yīng)是指四種堿基第六位的酮基或氨基的瞬間變構(gòu)，會(huì)引起堿基的錯(cuò)配。自然突變可能會(huì)產(chǎn)生兩種截然不同的結(jié)果，一種是菌種退化面導(dǎo)致目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)量或質(zhì)量下降；另一種是對(duì)生產(chǎn)有益的突變。為了保證生產(chǎn)水平的穩(wěn)定和提高。應(yīng)經(jīng)常地進(jìn)行生產(chǎn)菌種的自然選育，以淘汰退化的，選出優(yōu)良菌種。誘變育種的理論基礎(chǔ)是基因突變，突變主要包括染色體畸變和基因突變兩在類。誘變育種就是利用各種被稱為誘變劑的物理因素和化學(xué)試劑處理微生物細(xì)胞，提高基因突變的頻率，再通過適當(dāng)?shù)暮Y選方法獲得所需要的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)菌種的育種方法。誘變育種一般包括誘變和篩選兩部分，誘變成功的關(guān)鍵包括出發(fā)菌株的選擇、誘變劑種類和劑量的選擇，經(jīng)及合理的使用方法。篩選部分包括初篩和復(fù)篩來測定菌種的生產(chǎn)能力。誘變育種是誘變和篩選過程的不斷重復(fù)，進(jìn)到獲得高產(chǎn)菌株。

基因工程的穩(wěn)定性（提高穩(wěn)定性的方法，質(zhì)粒不穩(wěn)定產(chǎn)生的原因）

基因工程茵在傳代中常出現(xiàn)質(zhì)粒不穩(wěn)定現(xiàn)象。質(zhì)粒不穩(wěn)定分為分裂不穩(wěn)定和結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定兩種情況。質(zhì)粒不穩(wěn)定常見的是分裂不穩(wěn)定，它主要與兩個(gè)因素有關(guān)：一是含質(zhì)粒茵產(chǎn)生不含質(zhì)粒子代的頻率；二是這兩種茵的生長速率差異的大小。工程菌的培養(yǎng)一般采用分成兩階段培養(yǎng)法來提高質(zhì)粒的穩(wěn)定性。第一階段以增加菌體的生長達(dá)到一定密度為目的個(gè)源基因不表達(dá)；第二階段再誘導(dǎo)外源基因表達(dá)。

突變菌株的篩選方法？

篩選營養(yǎng)缺陷型突變菌株是通過解除協(xié)同反饋調(diào)節(jié)，可使另一分支代謝途徑中的末端產(chǎn)物積累。而是遺傳障礙不完全突變是一種酶活性下降的突變，不是完全喪失活性，因此不會(huì)過量積累末端產(chǎn)物，可避免反饋調(diào)節(jié)作用，大量積累中間產(chǎn)物，這種突變菌株在不添加相應(yīng)物質(zhì)的萊西培養(yǎng)基上長成很小的菌落?？狗答?zhàn)瓒艉涂?反饋抑制突變菌株是通過抗 結(jié)構(gòu)類似物突變的方法篩選出來的。也可從營養(yǎng)缺陷型的回復(fù)突變菌株獲得抗反饋突變株。通過改變菌種的遺傳特性篩選組成型突變株。

微生物代謝類型和自我調(diào)節(jié)部位？許多化合物代謝的部位是受抑制的有哪些方法？

微生物生長繁殖主要依賴兩種代謝途徑：分解代謝和合成代謝。分解代謝是從環(huán)境中吸收各種春風(fēng)碳源、氮源等物質(zhì)降解，為細(xì)胞的生命活動(dòng)提供能源和小分子中間體。合成代謝是利用分解代謝的能量和中間估合成氨基酸、核酸等單體物質(zhì)，及蛋白質(zhì)、核酸、多糖等多聚物。微生物小分子物質(zhì)的合成和降解是由其自我調(diào)節(jié)的。許多化合物的代謝部位是受到控制的，有三種控制方式。首先，細(xì)胞膜對(duì)大多數(shù)親水分子起一種屏障作用，但 又存在著某些輸送系統(tǒng)即通道。這些通道是輸送某些化合物的系統(tǒng)，其中有些是需能的。它們受ATP的影響，并受透性酶的調(diào)節(jié)。其次，在原核生物有兩種 控制通量的方法，即調(diào)節(jié)現(xiàn)有酶量和改變酶分子的活性。對(duì)酶量的調(diào)節(jié)可以通過增加或減少關(guān)鍵酶的合成或降解速率進(jìn)行。其三，限制基質(zhì)的有形接近。

酶激活作用與抑制作用（概念）

酶的激活作用和抑制作用是機(jī)體內(nèi)存在的兩個(gè)矛盾著的過程，并且普遍存在于微生物生物的代謝中。酶的激活作用是指在某個(gè)酶促反應(yīng)系統(tǒng)中，某種低分子質(zhì)量的物質(zhì)加入后，導(dǎo)致原來無活性或活性很低的酶轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚曰蚧钚蕴岣?，使酶促反?yīng)速率提高的過程。酶的抑制作用是指在某個(gè)酶促反應(yīng)系統(tǒng)中，某種低分子量的物質(zhì)加入后，導(dǎo)致酶活力降低的過程。酶活性調(diào)節(jié)的機(jī)制

酶活性調(diào)節(jié)的機(jī)制研究得最清楚的是酶的變構(gòu)理論和酶分子的化學(xué)修飾調(diào)節(jié)理論。某些物質(zhì)能與酶分子上的非催化部位特異地結(jié)合，引起酶蛋白的分子構(gòu)象發(fā)生改變，從而改變酶的活性，這種現(xiàn)象稱為酶的變構(gòu)調(diào)節(jié)或稱別位調(diào)節(jié)。受這種調(diào)節(jié)作用的酶稱為別構(gòu)酶或變構(gòu)酶，能使酶發(fā)生變構(gòu)效應(yīng)的物質(zhì)稱為變構(gòu)效應(yīng)劑;如變構(gòu)后引起酶活性的增強(qiáng)，則此效應(yīng)劑稱為激活變構(gòu)劑或正效應(yīng)物；反之則稱為抑制變構(gòu)劑或負(fù)效應(yīng)物。變構(gòu)調(diào)節(jié)在生物界普遍存在，它是人體內(nèi)快速調(diào)節(jié)酶活性的一種重要方式。

酶分子肽鏈上的某些基團(tuán)可在另一種酶的催化下發(fā)生可逆的共價(jià)修飾，從而引起酶活性的改變，這個(gè)過程稱為酶的酶促化學(xué)修飾(chemical modification)。如磷酸化和脫磷酸，乙?；腿ヒ阴；佘栈腿ハ佘栈?，甲基化和去甲基化以及-sh基和－s－s－基互變等，其中磷酸化和脫磷酸作用在物質(zhì)代謝調(diào)節(jié)中最為常見。

酶活性調(diào)節(jié)和酶量調(diào)節(jié)的概念和區(qū)別

酶量調(diào)節(jié)與酶活性調(diào)節(jié)在調(diào)節(jié)方式上是不同的。酶活性調(diào)節(jié)不涉及酶量的變化。酶量調(diào)節(jié)中不涉及酶活性的變化，主要通過影響酶合成或酶合成的速率控制酶量的變化，最終達(dá)到控制代謝過程的目的。酶活性調(diào)節(jié)的效果是即時(shí)而又迅速的；而酶量調(diào)節(jié)涉及到酶蛋白合成，所以調(diào)節(jié)效果較慢。分支生物合成途徑的調(diào)節(jié)。

同工酶調(diào)節(jié)、順序反饋調(diào)節(jié)、協(xié)同反饋調(diào)節(jié)、累加反饋調(diào)節(jié)、激活和抑制聯(lián)合調(diào)節(jié)和酶的共價(jià)調(diào)節(jié)等。

溫度對(duì)發(fā)酵的影響主要表現(xiàn)在哪些方面？溫度對(duì)發(fā)酵的影響是多方面而復(fù)雜的，主要表現(xiàn)在對(duì)細(xì)胞生長，產(chǎn)物形成，發(fā)酵液的物理性質(zhì)和生物合成方向等方面。發(fā)酵熱的概念，微生物產(chǎn)熱的特點(diǎn)

發(fā)酵熱是微生物發(fā)酵過程中釋放出來的凈熱量，以J/(m3*h)為單位。

生物熱產(chǎn)生的大小有明顯的階段性，在孢子發(fā)芽和生長初期，生物熱的產(chǎn)生是有限的，當(dāng)進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期后，生物熱就就大量產(chǎn)生，成為發(fā)酵過程熱平衡的主要因素。此后生物熱的產(chǎn)生開始減少，隨著菌體的逐漸衰老、自溶，愈趨低落。

PH對(duì)發(fā)酵的影響，不同微生物生物最適PH和產(chǎn)物形成最適PH的情況及控制

影響細(xì)菌體的形態(tài)；產(chǎn)物穩(wěn)定性；某些生物合成途徑等。

最適發(fā)酵溫度選擇根據(jù)

選擇最適發(fā)酵溫度應(yīng)該考慮兩個(gè)方面：微生物生長的最適溫度和產(chǎn)物合成的最適溫度。當(dāng)二者處于同步時(shí)應(yīng)以敏感最強(qiáng)的一方面控制溫度。

耗氧速率、攝氧率、溶解濃度的概念及影響因素

耗氧速率：單位質(zhì)量的細(xì)胞（干重）在單位時(shí)間內(nèi)消耗氧的量。攝氧率：單位體積培養(yǎng)液在單位時(shí)間內(nèi)消耗的氧量。細(xì)胞濃度直接影響培養(yǎng)液的攝氧率，培養(yǎng)基的成分和濃度顯著影響微生物的攝氧率。PH 溫度等也有影響。

空氣除菌設(shè)備？

空氣的除菌必須配備一定量的空氣壓縮機(jī)和空氣除菌設(shè)備。空氣除菌設(shè)備流程。包括粗過濾器，空壓機(jī)，空氣貯罐，空氣冷卻器，空氣分離器，空氣加熱器，空氣過濾器。標(biāo)準(zhǔn)發(fā)酵罐的結(jié)構(gòu)？

標(biāo)準(zhǔn)發(fā)酵罐是既有機(jī)械攪拌又有壓縮空氣分布裝置的發(fā)酵罐，主要部件包括罐身，攪拌器，擋板，冷卻裝置，空氣分布裝置，軸封等。

高溫快速滅菌設(shè)備。答：加熱器中，培養(yǎng)基與蒸汽混合，迅速上升到130—140度。連消

塔式連續(xù)滅菌設(shè)備有套管式和氣液混合式兩種。

不同發(fā)酵動(dòng)力學(xué)類型特征？

發(fā)酵類型即動(dòng)力學(xué)模型是為了描述菌體生長，碳原利用與代謝產(chǎn)物形成速度變化，以及它們相互之間的動(dòng)力學(xué)關(guān)系。第一型特點(diǎn)：菌體生長，碳源利用和產(chǎn)物形成幾乎都在相同的時(shí)間出現(xiàn)高峰，即表現(xiàn)出產(chǎn)物直接與碳源利用有關(guān)。第二型特點(diǎn)：在發(fā)酵的第一時(shí)期菌體迅速增長，而產(chǎn)物的形成很少或全無；在第二時(shí)期產(chǎn)物以高速度形成，生長也可能出現(xiàn)第二高峰，碳源利用在這兩個(gè)時(shí)期都很高。第三型特點(diǎn)是：產(chǎn)物形成一般在菌體生長接近或達(dá)到最高生長時(shí)期，產(chǎn)物形成與碳源利用無準(zhǔn)量關(guān)系，產(chǎn)量遠(yuǎn)低于碳源的消耗量。

空氣溶膠過濾除菌的原理？

微生物并非一種簡單的幾何形狀，介質(zhì)空間隙往往遠(yuǎn)大于顆粒直徑。微粒隨氣體通過過濾層時(shí)，濾層纖維所形成的網(wǎng)格阻礙氣流前進(jìn)，使氣流無數(shù)次改變運(yùn)動(dòng)速度和運(yùn)動(dòng)方向，饒過纖維前進(jìn)，這些改變引起微粒對(duì)過濾層纖維產(chǎn)生慣性沖擊，阻力，重力沉降，布朗擴(kuò)散，靜電吸引等作用，而將微粒攔截。高溫短時(shí)間滅菌原理？

溫度超過微生物最適生長溫度上限時(shí)，微生物細(xì)胞中的蛋白質(zhì)會(huì)發(fā)生不可逆的凝固變性變化，在很短時(shí)間引起微生物的死亡。吸附作用力？

它是范德華力，它是一組分子引力的總稱，包括三種力，即定向力，誘導(dǎo)力，和色散力。

吸附過程基礎(chǔ)理論？

固體表面的分子或原子與液體表面分子一樣，處于特殊的狀態(tài)，具有不飽和的剩余力，即存在著表面力，所以它們能夠吸附外界物質(zhì)如分子，原子或離子使這些物質(zhì)在吸附劑表面附近形成多分子層或單分子層，而降低表面能，使自身達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。分配常數(shù)，分離因素？

K為分配常數(shù)，在常溫下C為常數(shù)，單位為MOL/L。條件是必須是稀溶液；溶質(zhì)對(duì)兩溶劑的互溶度沒影響；必須是同一種分子類型，即不發(fā)生締結(jié)和解離。

泡沫產(chǎn)生的原因，泡沫穩(wěn)定性因素及對(duì)發(fā)酵的影響 ？

原因但是由于幾方面造成的，包括外力，微生物代謝及培養(yǎng)基的成分等。泡漠的穩(wěn)定性主要與液體的表面性質(zhì)對(duì)如表面張力，表面黏度和飽漠的機(jī)械強(qiáng)度有密切的關(guān)系。影響有泡漠生成過多，會(huì)引起“逃液”，使得發(fā)酵體積的減少，直接影響了收率。泡沫升到罐頂，頂?shù)捷S封或逃液，都增加了雜菌污染的機(jī)會(huì)。

發(fā)酵液處理的目的？

目的是改變發(fā)酵液的物理性質(zhì)，加快懸浮液中固形物沉降的速度；盡可能使產(chǎn)物轉(zhuǎn)入便于以后處理的相中，能夠除去部分雜質(zhì)。COHN方程是？

log(S/S0)=-Ks*I式中S—離子強(qiáng)度為I時(shí)的蛋白質(zhì)的溶解度；S0表示純?nèi)軇既I=0]時(shí)，蛋白質(zhì)的溶解度；KS——鹽析常數(shù)，與溫度和PH無關(guān)；I——離子強(qiáng)度

有機(jī)溶劑沉淀法，溶劑萃取原理，有機(jī)溶劑的選擇？答：是利用與水可以互溶的有機(jī)溶劑使產(chǎn)物沉淀的方法。原理是這種沉淀作用是多種效應(yīng)的結(jié)果，但其主要作用是降低水溶液的介電常數(shù)。當(dāng)有機(jī)溶液濃度曾大時(shí)，水對(duì)蛋白質(zhì)等分子表面上荷電基團(tuán)或親水基團(tuán)的水化程度降低，或者是說溶液的介電常數(shù)降低，因而靜電吸引力增大。最好的的是乙醇和丙酮。

12．酶合成調(diào)節(jié)的誘導(dǎo)作用、阻遏、機(jī)制

13.末端產(chǎn)物阻遏和分解代謝產(chǎn)物阻礙

第四篇：藥品微生物檢測技術(shù)部分知識(shí)點(diǎn)梳理A

A（僅供中藥制藥技術(shù)專業(yè)參考)藥品微生物檢測技術(shù)部分知識(shí)點(diǎn)梳理□

一、微生物的概念

微生物是指那些形體微小、結(jié)構(gòu)簡單、必須借助顯微鏡才能看見的微小生物類群的總稱。（μm →光學(xué)顯微鏡 or nm →電子顯微鏡 1μm=10-6m 1nm=10-9m）

二、微生物的分類

1、按結(jié)構(gòu)分為三大類：非細(xì)胞型（病毒virus）、原核細(xì)胞型（“三菌”和“三體”細(xì)菌、藍(lán)細(xì)菌、放線菌；支原體、衣原體、立克次體）、真核細(xì)胞型（真菌、原生動(dòng)物、顯微藻類）。

2、按生物學(xué)特性分類：病毒、細(xì)菌、藍(lán)細(xì)菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次體、真菌。

三、微生物的特點(diǎn)

1、類群：種類多、分布廣、繁殖快、易培養(yǎng)、易變異、代謝能力強(qiáng)。

2、個(gè)體：?。▊€(gè)體微小）、簡（結(jié)構(gòu)簡單）、低（進(jìn)化地位低）。

四、藥品無菌檢測的概念及意義

1、概念：無菌檢測法系用于檢測藥典要求無菌檢測的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種方法（若供試品符合無菌檢測法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢測條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染）。

2、意義：凡是直接進(jìn)入人體血液循環(huán)系統(tǒng)、皮下組織、肌肉或者作用于燒（燙）傷、潰瘍等部位的樣品，如果含有活菌，進(jìn)入人體后往往會(huì)產(chǎn)生劇烈的反應(yīng)，引起一系列并發(fā)癥，對(duì)患者的安全都可能構(gòu)成威脅。因此，無菌檢測在藥品監(jiān)督和監(jiān)控有著十分重要的意義。

五、藥品無菌檢測概況

1、基本原理：無菌檢測是利用無菌操作的方法，將被檢測的藥品分別加入適合需氧菌、厭氧菌和真菌生長的液體培養(yǎng)基中，置于適宜溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間后，觀察有無微生物生長，來判斷藥品是否合格的方法。

2、檢測數(shù)量：一次試驗(yàn)所用供試品最小包裝容器的數(shù)量。

3、檢測量：一次試驗(yàn)所用供試品的總量（g或ml）.4、培養(yǎng)基及其用量：每個(gè)容器內(nèi)培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得小于培養(yǎng)基體積的10%。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不小于15ml，改良馬丁培養(yǎng)基不小于10ml。

5、無菌檢測范圍：各種注射劑、眼用及外傷用制劑、植入劑、可吸收的止血?jiǎng)?/p>

六、藥品無菌檢測方法

1、直接接種法（培養(yǎng)14d）

特點(diǎn)：操作簡單

適用范圍：無抑菌作用和無防腐作用藥品

1接種陽性對(duì)照目的：○

2檢測陽性菌在加入供試品的培養(yǎng)基中能否生長○

3驗(yàn)證供試品有無抑菌活性物質(zhì)○

2○3○1的試驗(yàn)。接種陽性對(duì)照試驗(yàn)定義：是○

1無抑菌作用及抗革蘭陽性菌→金黃色葡萄球菌根據(jù)供試品的特性選取陽性對(duì)照菌：○

2抗革蘭陰性菌為主→大腸埃希菌○

3抗厭氧菌→生孢梭菌——（以上3者）硫乙醇酸○

鹽流體培養(yǎng)基

4抗真菌→白色念珠菌——改良馬丁培養(yǎng)基○

接種陰性對(duì)照目的：檢測稀釋劑或相應(yīng)溶劑是否含有微生物

接種陰性對(duì)照試驗(yàn)定義：藥品檢測的同時(shí)取稀釋劑或相應(yīng)溶劑作為陰性對(duì)照品，按照藥品無菌檢測的方法進(jìn)行檢測的試驗(yàn)。

2、薄膜過濾法（優(yōu)先用）

特點(diǎn)：實(shí)用性廣、準(zhǔn)確性高

適應(yīng)范圍：任何類型藥品

濾器分為：封閉式薄膜過濾器（優(yōu)先用 孔徑小于0.45um，直徑47mm）、傳統(tǒng)開放式薄膜過濾器

檢測原理：供試品通過集菌儀的定向蠕動(dòng)加壓作用，實(shí)施正壓過濾并在濾器內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，用以檢測供試品是否含菌。（詳P135）

說明：由于本人的水平和能力有限，難免有疏漏和不足之處，懇請(qǐng)?zhí)岢鰧氋F意見，以便改正。

2013年5月

第五篇：表面微生物檢測方法

空氣、食品接觸面微生物檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn) 目的：

檢測生產(chǎn)車間空氣、操作人員手部、與食品有直接接觸面的機(jī)械設(shè)備的微生物指標(biāo)，生產(chǎn)區(qū)域環(huán)境當(dāng)中病原微生物的監(jiān)控，達(dá)到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，以控制食品成品的質(zhì)量。參照標(biāo)準(zhǔn)：

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB15979－1995、《HACCP原理與實(shí)施》、中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《公共場所空氣微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測定》GB/T 18204.1－2000、中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境檢驗(yàn)檢疫局二000四年《出入食品微生物檢驗(yàn)培訓(xùn)教材》中《出入食品生產(chǎn)廠衛(wèi)生細(xì)菌檢驗(yàn)方法》、日本東京冷凍食品檢驗(yàn)方法。采樣與檢測方法：

3.1空氣的采樣與測試方法 3.1.1樣品采集：(1)取樣頻率：

a)車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時(shí)，在加工前進(jìn)行采樣，以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。b)全廠統(tǒng)一放長假后，車間生產(chǎn)前，進(jìn)行采樣。

c)產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)及時(shí)對(duì)車間進(jìn)行采樣，如有檢驗(yàn)不合格點(diǎn)，整改后再進(jìn)行采樣檢驗(yàn)。

d)實(shí)驗(yàn)性新產(chǎn)品，按客戶規(guī)定頻率采樣檢驗(yàn)。e)正常生產(chǎn)狀態(tài)的采樣，每周一次。（2）采樣方法

在動(dòng)態(tài)下進(jìn)行，室內(nèi)面積不超過30 m2，在對(duì)角線上設(shè)里、中、外三點(diǎn)，里、外點(diǎn)位置距墻1 m；室內(nèi)面積超過30 m2，設(shè)東、西、南、北、中五點(diǎn)，周圍4點(diǎn)距墻1 m。采樣時(shí)，將含平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的平板(直徑9 cm)置采樣點(diǎn)(約桌面高度)，并避開空調(diào)、門窗等空氣流通處，打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露5 min。采樣后必須盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測，送檢時(shí)間不得超過6h，若樣品保存于0～4℃條件時(shí)，送檢時(shí)間不得超過24h。3.1.2菌落培養(yǎng)：

（1）在采樣前將準(zhǔn)備好的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基平板置37℃±1℃培養(yǎng)24 h，取出檢查有無污染，將污染培養(yǎng)基剔除。（2）將已采集樣品的培養(yǎng)基在6 h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室，細(xì)菌總數(shù)于37℃±1℃培養(yǎng)48h觀察結(jié)果，計(jì)數(shù)平板上細(xì)菌菌落數(shù)。（3）菌落計(jì)算：

a)記錄平均菌落數(shù)，用“個(gè)/皿”來報(bào)告結(jié)果。用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5～10倍放大鏡檢查，不可遺漏。

b)若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2 個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。3.2工作臺(tái)（機(jī)械器具）表面與工人手表面采樣與測試方法： 3.2.1樣品采集：(1)取樣頻率：

a)車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時(shí)，在加工前進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)，以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。

b)全廠統(tǒng)一放長假后，車間生產(chǎn)前，進(jìn)行全面擦拭檢驗(yàn)。

c)產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)及時(shí)對(duì)車間可疑處進(jìn)行擦拭，如有檢驗(yàn)不合格點(diǎn)，整改后再進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)。

d)實(shí)驗(yàn)新產(chǎn)品，按客戶規(guī)定擦拭頻率擦拭檢驗(yàn)。e)對(duì)工作表面消毒產(chǎn)生懷疑時(shí)，進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)。f)正常生產(chǎn)狀態(tài)的擦拭，每周一次。（2）采樣方法：

a)工作臺(tái)（機(jī)械器具）：用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面（取與食品直接接觸或有一定影響的表面）取25cm2 的面積，在其內(nèi)涂抹10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。

b)工人手：被檢人五指并攏，用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。（3）采樣注意事項(xiàng)： 擦拭時(shí)棉簽要隨時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)，保證擦拭的準(zhǔn)確性。對(duì)每個(gè)擦拭點(diǎn)應(yīng)詳細(xì)記錄所在分場的具體位置、擦拭時(shí)間及所擦拭環(huán)節(jié)的消毒時(shí)間 3.2.2 細(xì)菌·大腸菌群的檢測培養(yǎng): 樣液稀釋：將放有棉棒的試管充分振搖。此液為1：10稀釋液。如污染嚴(yán)重，可十倍遞增稀釋，吸取1ml 1：10樣液加9ml無菌生理鹽水中，混勻，此液為1：100稀釋液。3.2.2.1 細(xì)菌總數(shù)：

（1）以無菌操作，選擇1～2個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿（平行樣），將已融化冷至45℃左右的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15ml，充分混合。

（2）待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，置36℃±1℃培養(yǎng)48 h后計(jì)數(shù)。（3）結(jié)果報(bào)告：報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù) 3.2.2.2大腸菌群：（1）平板法: a)以無菌操作，選擇1～2個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿（平行樣），將已融化冷至45℃左右的去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15ml，充分混合。待瓊脂凝固后,再覆蓋一層培養(yǎng)基，約3-5 ml。

b)待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，置36℃±1℃培養(yǎng)24h后計(jì)數(shù)。c)結(jié)果計(jì)算：以平板上出現(xiàn)紫紅色菌落的個(gè)數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出。d)結(jié)果報(bào)告：報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)（2）試管法: a)以無菌操作，選擇3個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別接種到BGLB肉湯培養(yǎng)基中，每個(gè)稀釋度接種三管。

b)置BGLB肉湯管于36℃±1℃培養(yǎng)48±2h。記錄所有BGLB肉湯管的產(chǎn)氣管數(shù)。

c)結(jié)果報(bào)告：按BGLB肉湯管產(chǎn)氣管數(shù)，查MPN表報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的大腸菌群值。

3.2.3 金黃色葡萄球菌檢測（1）定性檢測

a)取1ml 稀釋液注入滅菌的平皿內(nèi)，傾注15-20ml的B-P培養(yǎng)基，（或是吸取0.1稀釋液，用L棒涂布于表面干燥的B-P瓊脂平板），放進(jìn)36±1℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2小時(shí)。b)從每個(gè)平板上至少挑取1個(gè)可疑金黃色葡萄球菌的菌落作血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)。

c)結(jié)果報(bào)告：B-P瓊脂平板的可疑菌落作血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)為陽性，即報(bào)告手（工器具）上有金黃色葡萄球菌存在。（2）定量檢測 a)以無菌操作，選擇3個(gè)稀釋度各取1ml樣液分別接種到含10﹪氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，每個(gè)稀釋度接種三管。

b)置肉湯管于36±1℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48小時(shí)。劃線接種于表面干燥的B-P瓊脂平板，置36℃±1℃培養(yǎng)45～48小時(shí)。

c)從B-P瓊脂平板上，挑取典型或可疑金黃色葡萄球菌菌落接種肉湯培養(yǎng)基，36℃±1℃培養(yǎng)20～24小時(shí)。

d)取肉湯培養(yǎng)物做血漿凝固酶試驗(yàn)，記錄試驗(yàn)結(jié)果。

e)報(bào)告結(jié)果：根據(jù)凝固酶試驗(yàn)結(jié)果，查MPN表報(bào)告每25 cm2食品接觸面中或每只手的金黃色葡萄球菌值。

3.3工廠環(huán)境中病原體的檢測計(jì)劃與方法

檢測計(jì)劃：為了保證食品安全，工廠應(yīng)該對(duì)生產(chǎn)環(huán)境中的病原微生物進(jìn)行檢測和評(píng)估，檢測項(xiàng)目包括李斯特菌，沙門氏菌等病原體微生物，化驗(yàn)室應(yīng)該按照一定的計(jì)劃對(duì)生產(chǎn)場所環(huán)境中的病原體進(jìn)行檢測，其中包括地面、下水道、排水溝、墻壁、天花板、設(shè)備框架、運(yùn)輸?shù)闹Ъ?，冷藏裝置、速凍機(jī)、傳送帶、設(shè)備的螺絲、維修工具等部位。當(dāng)某個(gè)點(diǎn)檢測到病員微生物時(shí)，應(yīng)該對(duì)環(huán)境中的相似點(diǎn)加大檢測頻率；在把所有的預(yù)定點(diǎn)檢測完后，應(yīng)該對(duì)環(huán)境中的病原微生物的存在狀況進(jìn)行全面評(píng)估，在下一次環(huán)境檢測循環(huán)過程中加強(qiáng)檢測容易出現(xiàn)病原體的環(huán)境點(diǎn)，達(dá)到持續(xù)改進(jìn)的目的。

檢測頻率: 每月兩次,每次每個(gè)區(qū)域至少選取5個(gè)檢測點(diǎn),分別進(jìn)行檢測。

3.3.1 環(huán)境李斯特菌的檢測方法（3MTM PetrifilmTM 環(huán)境李斯特菌的測試片）3.3.1.1 用涂抹棒，海綿或者其他采樣設(shè)備收集環(huán)境樣本。

3.3.1.2 將收集的樣本添加10毫升滅菌的緩沖蛋白胨水，將樣本與緩沖蛋白胨混合1分鐘，將樣品置于室溫（20-30℃）1小時(shí)，最久不超過1.5小時(shí)，以修復(fù)損傷的李斯特菌。3.3.1.3 將測試片放在平坦處，掀起上層膜。

3.3.1.4 用移液器垂直滴加3毫升樣品到下層膜中央，將上層膜緩慢蓋下，以免產(chǎn)生氣泡。3.3.1.5 輕輕將塑料壓板放在位于接種區(qū)上層膜上，不要壓，扭轉(zhuǎn)或者滑動(dòng)壓板。提起壓板等至少十分鐘，以使膠體凝固。

3.3.1.6 將測試片透明面朝上，可疊放至十片，在37℃±1℃培養(yǎng)26-30小時(shí)，可以用標(biāo)準(zhǔn)菌落記數(shù)器或者其他光學(xué)放大器判讀，不要記數(shù)圓形輪廓上的菌落，因?yàn)樗麄儾皇苓x擇性培養(yǎng)基的影響。

3.3.1.7 對(duì)于定性檢測，根據(jù)紫紅色菌落是否存在，結(jié)果記為檢出或者未檢出。3.3.2 環(huán)境中沙門氏菌的檢測方法

3.3.2.1采樣地點(diǎn): 選取采樣點(diǎn)時(shí)因盡量選取微生物容易滋生的地方 冷凍車間

FD車間

東區(qū)初加工

傳遞窗口表面、排水溝、排水溝出口、墻壁、地面

卸料間 墻壁、墻角、地面、天花板、物料車表面

東區(qū)精加工

地面、墻壁、墻角、排水溝、排水溝出口、速動(dòng)機(jī)鏈條、天花板

暫存間

墻壁、地面、天花板、墻角、墻縫

西區(qū)初加工

傳遞窗口表面、地面、墻壁、排水溝、排水溝出口

挑選間

墻壁、地面、天花板、墻角、墊板

西區(qū)精加工

地面、墻壁、墻角、排水溝、排水溝出口、速動(dòng)機(jī)鏈條、天花板

包裝室

墻壁、地面、天花板、金探傳送帶表面、落地料存放處

3.3.2.2 操作步驟

3.3.2.2.1采樣應(yīng)在生產(chǎn)開始后進(jìn)行，用已浸潤過的棉拭在選定的被測表面旋轉(zhuǎn)涂抹約100cm2的面積，然后將棉拭放回涂抹試管并蓋緊。3.3.2.2.2將樣品帶回實(shí)驗(yàn)室，每5個(gè)點(diǎn)混合成一個(gè)樣品, 登記編號(hào),按照SN0170-92標(biāo)準(zhǔn)及時(shí)檢測，若有陽性結(jié)果出現(xiàn)，應(yīng)逐步對(duì)所混合的每個(gè)點(diǎn)分別檢測。

物體表面涂抹菌落總數(shù)計(jì)算方式：物體表面細(xì)菌總數(shù)（cfu/c㎡）=平皿上菌落的平均數(shù)*采樣液稀釋倍數(shù)/采樣面積（cm2）

根椐GB15979－2002《一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》的標(biāo)準(zhǔn),生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生指標(biāo) 1 裝配與包裝車間空氣中細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤2 500 cfu/m3。2 工作臺(tái)表面細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20 cfu/cm2。

3.工人手表面細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤300 cfu/只手，并不得檢出致病菌。人員和環(huán)境衛(wèi)生檢測方法

一、空氣采樣及檢驗(yàn)方法

1培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)瓊脂平板，按GB4789.28中3.7條配制 2采樣（空氣沉降法）

2.1布點(diǎn)：面積小于30平方米的車間，設(shè)一對(duì)角線，在線上取3點(diǎn)，即中心一點(diǎn)，兩端在距墻1米處各取一點(diǎn)；面積大于30平方米的車間，設(shè)東、西、南、北、中5個(gè)點(diǎn)，其中東、西、南、北點(diǎn)均距墻1米。

2.2采樣高度：與地面垂直高度80-150厘米。

2.3采樣方法；用直徑為9厘米的普通營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)上暴露20分鐘蓋上送檢培養(yǎng)。3培養(yǎng)：于37℃培養(yǎng)24小時(shí)。4檢測頻率：每周 空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：

生車間、熟車間、成品車間：低于100個(gè) 半成品庫、成品庫：低于10個(gè)

二、設(shè)備的采樣與檢驗(yàn)方法

根據(jù)生產(chǎn)過程所要求的重點(diǎn)衛(wèi)生部位，實(shí)驗(yàn)室對(duì)其進(jìn)行涂抹采樣，進(jìn)行細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)。1采樣方法

1.1涂抹法（適用于表面平坦的設(shè)備和工器具產(chǎn)品接觸面）

取經(jīng)過滅菌的鋁片框（框內(nèi)面積為50平方厘米）放在需檢查的部位上，用無菌棉球蘸上無菌生理鹽水擦拭鋁片中間方框部分，擦完后立即將棉球投入盛有10毫升無菌生理鹽水的試管中，此液每毫升代表5平方厘米。

1.2貼紙法（適用于表面不平坦的設(shè)備和工器具接處面）

將無菌規(guī)格紙（5×5厘米，紙質(zhì)要薄而軟）用無菌生理鹽水泡濕后，于需測部分分別貼上兩張，兩張紙面積共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升無菌生理鹽水的試管中，此液每毫升代表5平方厘米。2檢驗(yàn)方法

2.1細(xì)菌總數(shù)的檢驗(yàn)

將上述樣液充分振搖，根據(jù)衛(wèi)生情況，相應(yīng)地做10倍遞增稀釋，選擇其中2-3個(gè)合適的稀釋度作平皿傾注培養(yǎng)，培養(yǎng)基用普通營養(yǎng)瓊脂，每個(gè)稀釋度作2個(gè)平皿，每個(gè)平皿注入1毫升樣液，于37℃培養(yǎng)24小時(shí)后計(jì)菌落數(shù)。結(jié)果計(jì)算

表面細(xì)菌總數(shù)（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均數(shù)×樣液稀釋倍數(shù)/30×2 2.2致病菌的檢驗(yàn)

沙門氏菌，參照GB4789.4進(jìn)行 金黃色葡球菌，參照GB7918.5進(jìn)行

4.檢驗(yàn)合格標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌總數(shù)10－100個(gè)∕cm2，5.關(guān)鍵點(diǎn)：細(xì)菌總數(shù)≤10個(gè)∕cm2 一般區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤100個(gè)∕cm2

三、人員手表面細(xì)菌污染情況的檢驗(yàn)

1.采樣方法：用一支蘸有無菌生理鹽水的棉拭子涂擦被檢對(duì)象手的全部，反復(fù)兩次，涂擦的時(shí)候棉拭子要相應(yīng)地轉(zhuǎn)動(dòng)，擦完后，將手接觸部分剪去，將棉拭子放入裝有10毫升無菌生理鹽水的試管內(nèi)送檢培養(yǎng)。

2.檢驗(yàn)方法：同工器具表面細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法。

3.結(jié)果計(jì)算：每只手表面的細(xì)菌總數(shù)（cfu/只手）=平皿上菌落的平均數(shù)×樣液稀釋倍數(shù)

四、消毒液藥效的微生物學(xué)鑒定法

1采樣對(duì)象：正常使用的消毒液，和已知配制好備用的消毒液 2采樣及檢驗(yàn)方法

在無菌條件下，用無菌吸管吸取1毫升樣液，加入9毫升稀釋液中混勻，對(duì)于醇類與酚類消毒劑，稀釋液用普通營養(yǎng)肉湯即可；對(duì)于含氯消毒劑、含碘消毒劑，需在肉湯中加入0.1%硫代硫酸鈉，對(duì)洗必泰、季銨鹽類消毒劑，需在肉湯中加入3%（W/V）土溫80和0.3%卵磷脂；對(duì)醛類消毒劑，需在肉湯中加入0.3%甘氨酸；對(duì)于含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑，需在肉湯中加入（W/V）土溫80，以中和被檢樣液中的殘效作用，將注入了樣液的稀釋液充分搖勻，取1毫升注入平皿，隨之倒入普通營養(yǎng)瓊脂，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，將平皿于37℃條件下培養(yǎng)24小時(shí)后計(jì)平板上生長的菌落數(shù)。3結(jié)果分析

平板上有菌生長，表明被檢樣液中有殘存活菌，若每個(gè)平板菌落數(shù)在10個(gè)以下，仍可用于消毒，若每個(gè)平板菌落數(shù)超過10個(gè)，說明每毫升被檢樣液含菌量已超過100個(gè)，即不宜在用于消毒。

該公式是一個(gè)經(jīng)驗(yàn)公式.它的理論模式依據(jù)是:100CM2的面積上10MIN降落的菌落數(shù), 等于1升空氣中所含的細(xì)菌總數(shù).系數(shù)50000基于上述假說和單位換算而來.細(xì)菌總數(shù)(CFU/M3)=5/10T*100/A*1000*N=50000*N/AT

5/10T:實(shí)際放置了5MIN;

100/A:A單一培養(yǎng)皿面積;

1000:1M3=1000L啊,換算成m3

1、空氣細(xì)菌落菌數(shù)單位既然是cfu/m3，那采樣時(shí)應(yīng)該還要記錄放置平皿的高度。

2、食品安全管理體系中罐頭行業(yè)有個(gè)標(biāo)準(zhǔn)如下：

落下菌數(shù)

空氣污染程度

評(píng)價(jià)

30以下

清潔

安全

30～50

中等清潔

50～70

低等清潔

應(yīng)加注意

70～100

高度污染

對(duì)空氣要進(jìn)行消毒

100以上

嚴(yán)重污染

禁止加工

3、是否可根據(jù)企業(yè)相應(yīng)的加工產(chǎn)品微生物指標(biāo)進(jìn)行自行制定？