第一篇：1091例手術(shù)中冰凍切片病理診斷準確性分析

內(nèi)容摘要： 作者：張劍虹 成日青 林媛媛 趙秀芳 張凡 劉軍超 張九鴻

作者：張劍虹 成日青 林媛媛 趙秀芳 張凡 劉軍超 張九鴻

【關(guān)鍵詞】 冰凍切片;病理診斷;準確性

隨著臨床醫(yī)學手術(shù)水平的不斷提高，手術(shù)中要求送檢冰凍病理切片快速診斷的病例日益增多，臨床手術(shù)醫(yī)師對病理報告的依賴性也逐漸增加，快速病理冰凍診斷已成為指導臨床手術(shù)醫(yī)師確診和制訂合理手術(shù)方案的必需手段之一。然而手術(shù)中冰凍切片病理診斷受到很多因素的制約，準確性很難達到與常規(guī)石蠟切片相一致的效果。為此我們收集我院病理科近兩年的冰凍切片資料1091例，分析探討冰凍切片診斷價值和準確性及其影響因素，旨在不斷提高手術(shù)中病理診斷質(zhì)量，從而降低醫(yī)療事故隱患。1 材料與方法

選取我院2003.1～2005.12月的冰凍切片資料1091例，為防止制成的冰凍切片鏡下組織形態(tài)發(fā)生改變，送檢標本要求用干紗布包裹或置于不加任何液體的潔凈容器內(nèi)及時送達病理科，病理醫(yī)師詳細檢查大體標本后取肉眼確認病變最明顯區(qū)域1～2塊組織，迅速置全自動恒冷切片機（英國產(chǎn)shandn as 620e型）上制作切片。每個組織塊切取兩張切片，厚4μm，經(jīng)酒精固定，he染色，普通光鏡（olympus bx51）下觀察，并經(jīng)2～3名醫(yī)師閱片后集體討論確診；如送檢組織不合格（凝血塊、壞死滲出物等），立即請手術(shù)醫(yī)師第二次取材送檢，冰凍殘余組織做常規(guī)石蠟切片，并與另外多處取材石蠟切片對照分析。2 結(jié)果

1091例冰凍組織分布在12個系統(tǒng)及組織，如女性生殖系統(tǒng)485例，占總例數(shù)44.4%，乳腺病變364例，占33.3%，甲狀腺58例，占5.3%，消化系統(tǒng)52例，占4.7%等。送檢最活躍的科室為婦科、產(chǎn)科，其次為普外科等，見表1。表1 1091例冰凍標本在各系統(tǒng)分布情況石蠟證實良性病變775例，其中771例冰凍符合，冰凍準確率96.9%；石蠟證實惡性病變286例，冰凍報告惡性281例，冰凍準確率97.6%；石蠟證實交界性病變29例，冰凍報告交界性24例，冰凍準確率82.8%。1091例冰凍標本中，與石蠟切片報告相符的為1056例，冰凍切片總的診斷準確率為96.8%，誤診14例，誤診率為0.13%，見表2。表2 1091例冰凍與石蠟切片診斷結(jié)果比較

討論

3.1 冰凍切片病理診斷病變的價值 冰凍在外科手術(shù)中應用廣泛，術(shù)中冰凍可使外科醫(yī)生在手術(shù)中知曉病變性質(zhì)（良性、交界性、惡性），從而決定適當?shù)氖中g(shù)方案。自1960年cryostat冷凍切片機在臨床病理應用以來，隨著病理技術(shù)人員素質(zhì)的提高和切片設(shè)備的更新?lián)Q代，冷凍切片質(zhì)量與石蠟切片已相差無幾，使病理醫(yī)師對手術(shù)中冰凍切片診斷準確率不斷提高。我院近年內(nèi)投資進口大型衡冷柜式切片機，為冰凍切片的準確性提供了必要的保障。所以目前冰凍切片為臨床快速確定診斷和決定手術(shù)范圍的一個重要依據(jù)，主要應用價值體現(xiàn)在：1.決定病變的性質(zhì)，要求病理醫(yī)師在最短的時間內(nèi)確定送檢組織是腫瘤或是非腫瘤性病變，如為腫瘤則需再確定良性或惡性，因病變不典型而不能確定良性、惡性病變時，則提一個考慮性或傾向性意見供臨床考慮，或待石蠟切片再定。2.確定切除腫瘤的邊緣是否殘留腫瘤組織。我們遇到最多的是乳腺癌手術(shù)實施保乳治療時的上、下、左、右及基底五個切緣，如切緣發(fā)現(xiàn)癌組織，則需擴大切除范圍，此時冰凍切片結(jié)果對臨床手術(shù)范圍起到了決定性作用。3.辨認組織，如先天性巨結(jié)腸須證實手術(shù)切緣的腸壁內(nèi)是否有肌間神經(jīng)節(jié)細胞存在，如未見神經(jīng)節(jié)細胞則須再切腸管,直至查見肌間神經(jīng)節(jié)細胞為止。4.確定淋巴結(jié)有無癌轉(zhuǎn)移，手術(shù)醫(yī)師取局部淋巴結(jié)確定有無癌轉(zhuǎn)移以決定手術(shù)方案，對于存在淋巴結(jié)隱性癌轉(zhuǎn)移的病理尤其必要。5.頭面部惡性腫瘤手術(shù)確定切緣有無腫瘤組織殘留對于清掃范圍和擴大切除的方向關(guān)系重大，因為頭面部血管、神經(jīng)豐富，微小的損傷都會使面容受到影響，因此手術(shù)中需要多個方向取組織，確定有無腫瘤殘留。冰凍切片診斷可預防手術(shù)切除過度或不足，有的也可避免不必要的二次手術(shù)。有報道冰凍切片準確率為94%～97%[1,2]，本組資料為96.8%，與 文獻 報道基本相符合。

第二篇：手術(shù)中冰凍切片病理檢查志愿書

接受手術(shù)中冰凍切片病理檢查志愿書

門診、住院科 室ID號住院號

姓名年齡性別職別單位

手術(shù)中冰凍切片病理檢查是將切下的病變組織在冰凍切片機中迅速冷凍后制成病理切片，由病理醫(yī)師即刻在顯微鏡下檢查，做出病現(xiàn)診斷，主要目的是：（1）幫助判斷病變的性質(zhì)。如：炎癥、腫瘤或其它性質(zhì)的病變；如果是腫瘤，則需進一步判斷是良性還是惡性腫瘤。（2）幫助判斷切除腫瘤組織的邊緣是否有殘留的癌組織。（3）幫助辨認手術(shù)切除組織。

（4）判斷手術(shù)切除的淋巴結(jié)中有無轉(zhuǎn)移的癌細胞。冰凍切片病理診斷結(jié)果作為術(shù)中會診意見提供給臨床醫(yī)生，臨床醫(yī)生將其作為重要的參考依據(jù)決定進一步手術(shù)的方式和范圍。與常規(guī)石蠟包埋切片相比，冰凍切片診斷的局限性是：（1）冰凍切片質(zhì)量較差，診斷準確率低于常規(guī)石蠟切片。（2）在做冰凍切片采取活檢組織時，有造成腫瘤種植的可能，特別是在甲狀腺和肺等實質(zhì)器官。（3）術(shù)中冰凍切片技術(shù)不適用于脂肪組織和骨組織。（4）某些疑難病例和交界性病例有時在石蠟切片診斷都很困難，需要做免疫組化和電鏡觀察，僅憑冰凍切片難以確定診斷，因而要延緩病理診斷。（5）冰凍切片取材局限，有時局部的組織不能代表整個標本。因此，有的病例冰凍切片組織象和手術(shù)切除大標本的石蠟切片組織象相差很遠，甚至造成假陰性診斷。（6）病變組織在冷凍過程中不可避免地形成冰晶，以及組織處理和診斷時間緊迫等技術(shù)因素所限，“冰凍”診斷的準確率有一定的局限性，有可能與最終的“常規(guī)”病理切片診斷不相符合，最后病理診斷應以“常規(guī)病理診斷為準”。

醫(yī)師簽名：年月日

我已仔細閱讀并了解上述關(guān)于“冰凍”切片病理診斷的作用及其局限性，同意對實施手術(shù)中切除的病變組織進行冰凍切片快速病理檢查。

患者本人簽字：

代表簽字：（與患者關(guān)系：）

年月日

注：本志愿書除不能明辨是非、不能正確表達的傷病員可由法定代理人簽字外，均由傷病員本人簽字

第三篇：卵巢腫瘤術(shù)中快速冰凍切片病理診斷分析

卵巢腫瘤術(shù)中快速冰凍切片病理診斷分析

【摘要】 目的 探討卵巢腫瘤術(shù)中快速冰凍切片的診斷價值，總結(jié)經(jīng)驗。方法 本次收集85例卵巢腫瘤患者作為研究對象，均為本院2009年3月～2013年9月收治，術(shù)中進行快速冰凍切片病理診斷，并與術(shù)后常規(guī)石蠟切片進行對照。結(jié)果 本組85例患者快速冰凍切片與術(shù)后石蠟切片對照，總確診率為95.3%（81/85）。其中良性腫瘤確診率為100%（58/58），交界性腫瘤確診率為80%（8/10），惡性腫瘤確診率為88%（15/17）。誤診4例，誤診率為4.7%。結(jié)論 病理醫(yī)生與臨床醫(yī)生在術(shù)前及術(shù)中密切溝通，從實驗室檢查結(jié)果、病史、手術(shù)觀察等多方面分析，最終做出診斷，為臨床醫(yī)師提供卵巢腫瘤性質(zhì)，有助于臨床醫(yī)師選擇適宜的手術(shù)方式，應用快速冰凍切片病理診斷的方法是確定手術(shù)方式和切除范圍的最佳手段。

【關(guān)鍵詞】 卵巢腫瘤；快速冰凍切片；病理診斷；準確性

卵巢腫瘤種類繁多，可分為良性、惡性、交界性腫瘤，在婦科常見疾病類型占較高病發(fā)率，術(shù)前不易確診，婦產(chǎn)科醫(yī)生在手術(shù)中如僅憑肉眼觀察，難以確定腫瘤性質(zhì)。因腫瘤性質(zhì)不同，在治療方案的選擇上也存在較大差異。所以手術(shù)過程中確定腫瘤性質(zhì)及制定合理的手術(shù)治療方案所進行的行快速冰凍切片病理診斷是完全必要的，更是對生育機能是否保留對側(cè)卵巢及手術(shù)范圍的選擇具有決定性作用[1]。作者就本院病理科2009年3月～2013年9月卵巢病變術(shù)中快速冰凍切片病理診斷進行回顧性分析，旨在提高卵巢腫瘤冰凍切片病理診斷的準確性。資料與方法

1.1 一般資料 本次共選擇研究對象85例，年齡16～77歲，平均年齡（38.4±3.1）歲。均與WHO卵巢腫瘤組織學制定的相關(guān)分類標準符合，其中良性58例，交界性10例，惡性17例。術(shù)后均行常規(guī)石蠟切片病理診斷，與術(shù)中快速冰凍切片病理診斷對照。

1.2 方法 標本均為術(shù)中送檢新鮮組織，由經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師取材，術(shù)中仔細觀察腫物表面并逐層切開腫物，選代表性的部位取材，腫塊病變直徑2.5 cm的腫塊根據(jù)腫瘤情況酌取2～3塊，置標本于涂有OCT包埋劑的凍頭上，恒溫冷凍切片機內(nèi)冰凍切片，HE染色、光鏡診斷。20 min發(fā)出冰凍報告，報告分為惡性腫瘤、良性腫瘤、交界性腫瘤及延遲診斷。冰凍報告發(fā)出后，將原冰凍剩余組織做石蠟切片，復習原冰凍切片及石蠟切片，將診斷分為三類：①確診：指冰凍切片診斷與石蠟切片診斷完全相同或良惡性原則一致。②描述性診斷（延遲診斷）：指冰凍切片不能明確診斷，需待石蠟切片最后診斷。③誤診：腫瘤良惡性診斷錯誤。分假陽性和假陰性（假陽性指良性誤診為惡性，假陰性指惡性誤診為良性）。結(jié)果

本組85例患者快速冰凍切片與術(shù)后石蠟切片診斷結(jié)果對照，總確診率為95.3%（81/85）。其中良性腫瘤確診率為100%（58/58）；交界性腫瘤確診率為80%（8/10），惡性腫瘤確診率為88%（15/17）。誤診4例，誤診率4.7%，85例冰凍切片確診81例，診斷符合率95.3%，見表1。2例交界性腫瘤的誤診原因，1例由于為取材不當，另1例由于制片不良，加上讀片經(jīng)驗不足，未考慮由于制片不良導致的假象及干擾因素；而2例惡性腫瘤的誤診原因，1例由于取材的局限性，送檢標本的體積大，取材不夠準確及不夠全面，局部癌變的區(qū)域未被發(fā)現(xiàn)；另1例為送檢組織過少，加上患者年齡年輕，診斷時過于保守。討論

從臨床治療的角度，術(shù)中冰凍切片病理診斷解決了手術(shù)過程中難以診斷其疾病良、惡性的問題。近年來，經(jīng)濟體制改革的迅猛發(fā)展顯著帶動了醫(yī)療科技水平，公眾對診療服務要求不斷提高，婦科卵巢腫瘤患者在臨床具有一定特殊性，及時明確診斷，并制定有效治療方案是保障預后，提高患者生存質(zhì)量，維護家庭和諧和社會安寧的關(guān)鍵。卵巢腫瘤種類繁多，臨床無法確診。卵巢腫瘤患者的治療中，手術(shù)治療是最常用的也是最重要的治療方法。而即使輔以B超，CT等檢查，卵巢腫瘤在術(shù)前不易確診，手術(shù)醫(yī)生憑其肉眼也無法判定腫瘤性質(zhì)。而術(shù)中快速冰凍切片作為一項快速組織學診斷手段，在臨床已普遍應用。術(shù)中冰凍可以為婦科醫(yī)生在手術(shù)中提供病變性質(zhì)（良性、交界性、惡性），從而決定適當?shù)氖中g(shù)方案。冰凍切片診斷可預防手術(shù)切除過度或不足，有的也可避免不必要的二次手術(shù)。

本次研究以快速冰凍切片在卵巢腫瘤臨床診斷中的應用價值為重點，選取相關(guān)病例展開探討，結(jié)合本次選取患者年齡結(jié)構(gòu)示，平均年齡（38.4±3.1）歲，提示處于生育期、有活躍且旺盛生育功能的女性為卵巢腫瘤高發(fā)人群，與相關(guān)研究[3，4]結(jié)論一致。分析實驗結(jié)果，得出卵巢腫瘤采用快速冰凍切片診斷準確性居較高水平，確診率為95.3%，與文獻報道冰凍切片診斷腫瘤的準確率為94%～97%[2]接近。熟練掌握WHO卵巢腫瘤分類是具備開展快速冰凍切片診斷的病理醫(yī)生的基本要求。較高的確診率是臨床制定恰當?shù)闹委煼桨傅目煽勘ＷC。

提高快速冰凍切片診斷卵巢腫瘤的準確率在于以下幾個方面：①在手術(shù)前對卵巢腫瘤患者的CT、B超等常規(guī)檢查結(jié)果和各種臨床表現(xiàn)等方面病史及腫瘤分布情況進行詳細掌握，并且在手術(shù)過程中及時和臨床醫(yī)師進行溝通；②對送檢的冰凍標本要認真仔細的檢查確定病變部位和器官，要查看標本的完整性，有無包膜，包膜破損否，與周圍組織有無粘連，切面為囊性、實性，還是囊實性，囊性區(qū)囊壁局部是否有乳頭，都要仔細查看，卵巢腫瘤往往體積大，較大的漿液性和粘液性腫瘤大體標本特征常有明顯局部差異，盡可能知道最可能存在何種腫瘤或病變，做到心中有數(shù)；③冰凍切片的取材是非常重要的環(huán)節(jié)，取材局限是造成延遲診斷的主要原因，取材時應仔細觀察標本的切面，選取腫塊的實性區(qū)、囊壁增厚處及襯有豐富的乳頭狀突起的囊壁等處。實性區(qū)應取灰白色魚肉區(qū)域及不同質(zhì)地和不同顏色區(qū)域，易發(fā)現(xiàn)上皮增生改變和癌變的區(qū)域；④優(yōu)良的冰凍切片是保證冰凍切片診斷正確的關(guān)鍵，必須要制作優(yōu)質(zhì)的冰凍切片，要防止冰晶的發(fā)生，把握最佳切片溫度，在冰凍組織的在速凍板上出現(xiàn)冰凍包埋劑周邊開始變白，最后中央透明消失，這時就得及時從速凍板上取下冷凍頭，固定切片機夾頭上并開始修組織塊，為最佳的切片溫度（-25～-23℃）和切片時間。冰凍切片中出現(xiàn)的空泡，大都是取材時標本接觸到水的原因，應盡量避免，若不小心接觸到水后，制片過程中要多用無水酒精沖洗即可。切片要做到組織平整、厚薄均勻一致，細胞染色清晰，對比染色好。⑤病理醫(yī)師要客觀、冷靜，充分了解患者病史、體征及各項術(shù)前檢查，診斷時要嚴格把握惡性腫瘤的診斷標準，嚴防假陽性診斷，以免造成過度手術(shù)，引起醫(yī)療糾紛或致殘等嚴重后果。但對部分特殊病例，特別是交界性腫瘤，并且年齡年輕的，有生育要求的患者，又確實難以明確診斷的，應及時與臨床醫(yī)師溝通并講明情況，臨床醫(yī)師根據(jù)患者的具體情況決定手術(shù)方式。

總之，快速冰凍切片作為手術(shù)中病理診斷，在明確腫瘤的良、惡性、明確邊緣組織有無腫瘤組織、淋巴結(jié)是否有轉(zhuǎn)移，具有重大幫助和指導意義。病理科醫(yī)師只有緊密與臨床聯(lián)系，不斷更新專業(yè)知識，認真總結(jié)經(jīng)驗，才能提高冰凍切片診斷的準確性，減少誤診，為臨床提供快速準確的診斷，滿足廣大患者的需要。

參考文獻

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第四篇：冰凍切片快速病理診斷30年總結(jié)

冰凍切片快速病理診斷30年總結(jié)

秦皇島市腫瘤醫(yī)院病理科

康文喜 謝芳芳 王小聰 李英 郵編：066001

術(shù)中冰凍切片快速病理診斷是1818年由Pieter de Riemer首先創(chuàng)造發(fā)明的，1891年Halsted和Accarty將冰凍切片技術(shù)列為正式診斷方法。目前國內(nèi)外已將此項技術(shù)普遍應用于臨床，解決手術(shù)中的病理診斷問題。并日益受到外科醫(yī)生和患者的歡迎和肯定。隨著冰凍切片技術(shù)和臨床外科手術(shù)的發(fā)展，要求做冰凍的病例逐年增多，截止到2012年10月份，本院病理科開展快速冰凍病理診斷30余年，共完成冰凍快速病理診斷1476例，積累了一定的經(jīng)驗和教訓，為了更進一步提高冰凍快速病理診斷水平，提高冰凍診斷準確率，降低誤診率，作者將30年來所有冰凍切片快速病理診斷病例進行總結(jié)分析如下。1 材料和方法

1.1 一般資料

本組1476例大部分來自本院住院病人，小部分來自其他醫(yī)院。其中男897例，女579例，年齡最大81歲，最小5個月。1.2 病變部位

乳腺1052例，軟組織42例，胃33例，淋巴結(jié)33例，骨12例，腹膜9例，睪丸及附睪8例，甲狀腺47例，小腸15例，大腸25例，膀胱5例，脊椎5例，闌尾10例，膽道14例，陰莖19例，卵巢53例，腦及腦膜3例，前列腺3例，肝12例，腎26例，脊髓2例，喉2例，子宮42例，精索1例，縱隔1例，腹膜后1例，眼1例。

1.3 方法

本組1476例均采用德國進口萊卡冰凍切片機切片，HE染色，普通光學顯微鏡觀察。

1.4 結(jié)果

1476例中，惡性腫瘤687例，良性腫瘤388例，瘤樣病變170例，炎癥202例，結(jié)核29例，確診1457例，未能確診15例，誤診4例。2.討

論

冰凍切片質(zhì)量差，最初很多著名的病理學家如Ewing、Brewer、Simpson等曾經(jīng)懷疑冰凍切片的準確性，1960年Cryostat冰凍切片機正式應用于臨床后，冰凍切片質(zhì)量有了很大提高，但和石蠟切片相比仍很遜色，對準確的冰凍病理診斷帶來一定困難，尤其對年輕的病理科醫(yī)生來說難度較大，缺乏經(jīng)驗的病理科醫(yī)生難以勝任此項工作，下面根據(jù)自己個人的經(jīng)驗發(fā)表一點看法。

2.1 冰凍切片快速病理診斷的優(yōu)缺點：冰凍切片快速病理診斷的優(yōu)點是在手術(shù)過程中隨時取材，迅速做出準確可靠的病理診斷，同時也減少了病人二次手術(shù)的痛苦。缺點是切片厚，細胞大，層次多，易造成錯覺。另外冰凍切片診斷要求報告快，沒有更多思考討論余地，一旦報錯，將造成嚴重的無法彌補的后果。

2.2 準確率：本文對1476例冰凍切片進行了統(tǒng)計分析，結(jié)果準確率為98.7%，未能確診率為1.02%，誤診率為0.3%，與國內(nèi)報道相比準確率相仿，而誤診率低于各家報道。

2.3 未能確診和誤診的原因：⑴

取材不當：恰當準確的取材是正確診斷的必備條件，取材不當就不可能得出正確的病理診斷。當臨床切取腫物困難時，所送檢的腫物標本不一定是腫物中心組織，很可能是腫物邊緣組織，這種組織大部分是腫物周圍的正常成分，或僅帶有少量腫物，此時應多切幾個切面進行觀察，在把握不足的情況下可多取幾塊組織做切片，以防漏診。⑵

切片質(zhì)量不佳：切片過厚，組織未能展平出現(xiàn)折疊，組織缺損，染色深淺不均等都直接影響診斷結(jié)果。因此，一張高質(zhì)量的冰凍切片要求厚度不得超過10微米，而且要平整，無折疊無破損，染色深淺適中。

圖1：乳腺冰凍切片

圖2：同一病例常規(guī)石蠟切片

⑶

病理醫(yī)師經(jīng)驗不足：醫(yī)生經(jīng)驗不足是誤診的重要原因，從事冰凍快速病理診斷的醫(yī)生，必須要經(jīng)過相當長的時間訓練和有足夠的石蠟切片診斷經(jīng)驗方能勝任此項工作。2.4 冰凍切片快速病理診斷應注意的幾個問題：⑴

甲狀腺腫物冰凍切片

濾泡性甲狀腺癌、胚胎型甲狀腺瘤和 Hurhle 氏細胞腺瘤的良惡性鑒別診斷在常規(guī)石蠟切片上均有一定難度，在冰凍切片上若想準確的進行鑒別則更加困難，為了防止誤診，有些知名的老專家主張在基層單位的病理科不宜開展甲狀腺腫物的冰凍切片快速病理診斷。我們認為，當冰凍切片較難做出良惡性判斷時應等石蠟切片確診，不要冒然發(fā)出良性或惡性的報告。另外在許多甲狀腺疾病中常常出現(xiàn)一種多形性大細胞，易與惡性腫瘤細胞相混淆，在冰凍切片診斷時應特別注意。這種細胞與惡性腫瘤細胞不同之處是染色質(zhì)分布均勻，胞漿豐富，不見核分裂像。⑵

淋巴結(jié)

術(shù)中送淋巴結(jié)做冰凍快速病理檢查多用于確定有無癌轉(zhuǎn)移，以便手術(shù)醫(yī)生選擇手術(shù)方式和手術(shù)范圍。原發(fā)于淋巴結(jié)的惡性淋巴瘤一般不用冰凍切片方法進行診斷，因為正常未脫水的淋巴細胞膨脹，體積大，加之切片厚，很難與惡性淋巴瘤瘤細胞進行區(qū)別，在冰凍切片診斷淋巴結(jié)原發(fā)性惡性淋巴瘤時要格外慎重。⑶

骨：骨腫瘤冰凍切片快速病理診斷因涉及到截肢，病理科醫(yī)生的責任十分重大，應慎之又慎。在診斷中一定要密切結(jié)合臨床及X線，特別是鏡下觀察，必須結(jié)合大體標本的形態(tài)特點、取材部位認真分析作出判斷。因骨腫瘤病理形態(tài)變化多端，送檢組織塊小常不能代表腫瘤病變?nèi)玻o良惡性判斷帶來非常大的困難，在確實無法肯定良惡性時，應縫合切口，待石蠟切片確診后再做處理。

第五篇：冰凍切片中常見問題分析

冰凍切片中常見問題分析

鄭則欽

龐瑾昱

陳斌

【摘要】 目的 探討冰凍切片技術(shù)在臨床病理診斷中的應用。方法 收集外科手術(shù)中冰凍診斷病例，應用快速冰凍切片法、快速冰凍染色法等對冰凍診斷病例進行分析。結(jié)論 冰凍切片技術(shù)中常見的問題及改進；影響冰凍切片質(zhì)量的因素；冰凍切片在病理診斷中的作用。

【關(guān)鍵詞】 冰凍切片； 病理診斷

冰凍切片是借助低溫使組織凍結(jié)達到一定的硬度進行切片的一種方法，是手術(shù)過程中采取活體標本，進行快速的組織學診斷的方法，其便捷的優(yōu)點，利于術(shù)中確診病變性質(zhì)，決定手術(shù)范圍，但由于各種原因，影響冰凍切片的質(zhì)量，拖延病理報告發(fā)出的時間，直接影響著病理診斷的及時性、準確性，間接影響病人的預后。

材料與方法

1.材料：收集外科手術(shù)中冰凍診斷病例

2.方法：應用快速冰凍切片法、快速冰凍染色法等

結(jié)

果 組織取材大小要適宜，約為1.5×1.5㎝,厚2㎜。2 壞死組織影響冰凍切片的完整性。3 冰凍時間根據(jù)組織的大小及性質(zhì)所決定。4 冰凍溫度一般設(shè)置在－18～－20℃。5 染液的酸堿度要適宜。1 組織取材對制片的影響 組織取材大小：組織塊大小要適宜，冷凍切片機內(nèi)切片刀移動的范圍有一定的限制，超出其范圍時，易致切片不全。一般情況下，冰凍切片的組織大小為1.5×1.5㎝,厚2㎜。但卵巢腫瘤及脂肪組織可稍微大些。組織塊過大，切片時阻力過大，易產(chǎn)生皺折，刀痕，組織易崩碎，增加制片難度，影響診斷。如需在同一標本托上放大于兩塊組織時，應盡量凍成一個平面，與刀鋒平齊，以防切片不完整，發(fā)生漏診。若送檢組織過小，請預先速凍一冷臺面，再行包埋，利于制片。另外，包埋時，應將組織平放在凍頭的中央。組織內(nèi)含過多的脂肪或壞死組織：脂肪或壞死組織較一般的組織冷凍的溫度要低些，當活組織達到所需的溫度時，其還比較軟，從而影響切片的完整性和拖延冷凍報告發(fā)出的時間。組織塊過冷：組織冷凍過度易致切片破碎或呈粉沫狀，不能制作一張完整的切片。組織塊冷凍不均勻：在配合使用液氮時，組織塊放入液氮時不能保持水平狀態(tài)且液氮量不足的情況下，可產(chǎn)生此現(xiàn)象。凍頭的溫度不足：冷凍切片時要求凍頭的溫度保持在－25℃～－30℃左右，凍頭的溫度達不到要求時，組織很快回軟，也不能保證切片的完整。冷凍時間對制片的影響：根據(jù)組織塊的大小、性質(zhì)，確定冷凍時間，一般13～17s（使用液氮者），若組織較大或脂肪組織時間可適當長些，而甲狀腺、腦組織和淋巴組織等冷凍的時間相對要短些。冷凍時間要嚴格掌握，時間過長，切片易脆碎，其處理方法是：切出完整平面后用戴乳膠手套的拇指按壓回溫，直到切片完整為止，反之，時間過短，則需繼續(xù)冷凍，直到組織不粘刀片出現(xiàn)完整切片為基準。冷凍箱體工作溫度對制片的影響：一般組織設(shè)定為－18～－20℃。但對一些較特殊的組織標本，溫度應適當調(diào)整，如脂肪成分較多的組織以－30～－35℃為宜，纖維腺瘤，子宮等為－20℃，淋巴結(jié)，甲狀腺為－18℃，切片時，表面玻璃機器蓋子不要打開過大，以免箱體回溫過快，影響制片。保持凍箱的溫度，做到每次做完冷凍切片應關(guān)好冷凍箱的蓋子。染色對制片的影響：尤以細胞核的染色最為關(guān)鍵，在寒冷的冬季，室溫過低時，影響核的著色，可適當加溫，用以增色，蘇木素的酸堿度應適宜，經(jīng)常觀察其染液的ph值，過堿時應及時更換，鹽酸酒精分化適度，時間控制到位，否則易造成核著色不佳，染色質(zhì)不清晰，影響診斷的準確性。冰晶的形成對制片的影響：此原因主要取決于組織含水量的大小，尤以組織細胞水腫，淋巴結(jié)，縱隔腫瘤，卵巢腫瘤為甚，送檢取材過程中接觸水源，速凍過程中使用的液氮時間尚未控制好，同是造成冰晶形成的原因，其解決方法為，使用液氮時間上控制到位，保證一次凍透標本，組織送檢取材時，盡量避開水源，如遇含水量高的標本時，應盡量用干紗布吸干水分后再行冷凍，避免由于冰晶形成出現(xiàn)診斷上的失誤。操作者的動作應迅速。6 切片皺縮或卷縮：這也是影響切片質(zhì)量的重要因素之一。常見的原因有：①刀鋒變鈍。② 防卷板粘有異物，防卷板的作用是防止切片卷縮，但若粘有異物，切片時組織會被擠壓而縮在一起。③ 防卷板與刀鋒的位置不平行、不協(xié)調(diào)。④ 組織塊包埋不完全，缺乏支撐作用。

預防與處理的方法：① 注意檢查刀具，及時更換刀口，定期磨刀。② 保持防卷板的清潔，每做一例冷凍切片，均應將刀口及防卷板拭擦干凈，防止切片的污染和切片皺縮。③ 調(diào)整刀、防卷板的位置，保證兩者平行，且防卷板比刀鋒前0.2㎜左右。④ 包埋組織應完全，沒法切片者再滴加包埋膠。7 切片脫落：冷凍切片是利用溫度差（即玻片與組織切片的溫度差）將切片粘貼在玻片上，然后進行固定、染色。下面幾種情況下可影響切片粘貼的牢固程度，而導致切片脫落：① 組織內(nèi)含過多的壞死組織。組織細胞壞死崩解后，局部的滲透壓升高，吸收水分，切片一經(jīng)固定，水分逸出，壞死組織失去支撐作用，染色時組織容易脫落。② 固定液濃度過低，這是最常見的原因。③ 載玻片不干凈。④ 切片太厚。

預防及處理方法：避免組織內(nèi)帶有壞死組織，條件允許者重新取材；若沒有組織可代替，切片固定時間長些，經(jīng)95％乙醇雙重固定后，用電吹風將切片吹干（溫度不能過高，以防破壞組織結(jié)構(gòu)）然后再進行染色且動作應輕柔。② 定期更換固定液。一般每周更換一次，例數(shù)較多者，適當增加次數(shù)；另外，每次做完冷凍，應及時將盛固定液的瓶蓋蓋好，以防固定液揮發(fā)而降低其濃度。③ 保持載玻片干凈，平時應將玻片蓋好，防止灰塵或其它異物的污染。若新購買的玻片較臟，洗滌過后才使用。④ 調(diào)好切片的厚度，切片厚度以5～7um較為合適（脂肪組織可稍為厚些）。組織塊脫落：冷凍切片一般要求在30min內(nèi)發(fā)出病理報告，以便手術(shù)醫(yī)生能盡快選擇手術(shù)方式。但若組織塊脫落，會拖延病理報告發(fā)出的時間，而耽誤病人的手術(shù)時間。常見原因有：① 凍頭在冷凍機內(nèi)放置時間過長，致使包埋膠還來不及滲到凍頭的底部便凝固了，導致包埋膠與凍頭粘連不緊，稍受外力的作用便脫落；② 凍頭上的包埋膠沖洗不干凈。

總之，對于冰凍切片的質(zhì)量因素主要有以上幾點。如果能正確對待以上幾方面的問題，冰凍切片的質(zhì)量方可得到保證，且能制備出一張質(zhì)量優(yōu)秀的切片，為明確病理診斷提供較為便利的客觀條件。