第一篇:微生物實(shí)驗(yàn)室一般狀況總結(jié)
微生物實(shí)驗(yàn)室及設(shè)備
一、選址:
1.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇在清潔安靜的場(chǎng)所,遠(yuǎn)離生活區(qū),鍋爐房與交通要道;
2.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇在光線充足,通風(fēng)良好的場(chǎng)所,要與生產(chǎn)加工車間有一定距離;
3.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇在方便選樣與檢驗(yàn),距離車間較近的工作場(chǎng)所.
二、結(jié)構(gòu)和布局:
根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)際需要,主要包括以下三大部分:細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室、理化實(shí)驗(yàn)室、辦公室.
1.辦公室 2.理化分析實(shí)驗(yàn)室:(或者和細(xì)菌檢驗(yàn)操作室合并)①理化分析室(物理化學(xué)分析,可兼作感觀檢驗(yàn)室)②儀器室(兼放細(xì)菌室顯微鏡等少量?jī)x器)3.細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室: ①細(xì)菌檢驗(yàn)操作室; ②無菌室(微生物的擴(kuò)培、接種制細(xì)胞培養(yǎng)液,滅菌后培養(yǎng)基的分裝); ③培養(yǎng)基制作室(培養(yǎng)基的配制,但滅菌后的培養(yǎng)基接種需在無菌室操作);
一般布局要求如下:
1.辦公室:辦公室是化驗(yàn)人員進(jìn)行原始記錄等各項(xiàng)工作的場(chǎng)所,是與非化驗(yàn)室人員交往較多的場(chǎng)所,只需有桌、椅等簡(jiǎn)單設(shè)施即可.
2.細(xì)菌檢驗(yàn)操作室(常規(guī)操作)細(xì)菌檢驗(yàn)操作室是細(xì)菌檢驗(yàn)主要操作室,主要設(shè)施是實(shí)驗(yàn)臺(tái).實(shí)驗(yàn)臺(tái)的要求:a.實(shí)驗(yàn)臺(tái)面積一般不小于2.4×1.3m; b.實(shí)驗(yàn)臺(tái)位置應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室中心位置,要有充足光線. c.實(shí)驗(yàn)臺(tái)兩側(cè)安裝小盆與水龍頭; d.實(shí)驗(yàn)臺(tái)中間設(shè)置試劑架,架上裝有日光燈與插座; e.實(shí)驗(yàn)臺(tái)材料要以耐熱、耐酸堿為宜.
3.無菌室:無菌室通過空氣的凈化和空間的消毒為微生物實(shí)驗(yàn)提供一個(gè)相對(duì)無菌的工作環(huán)境,無菌室是處理樣品和接種培養(yǎng)的主要工作間,應(yīng)與細(xì)菌檢驗(yàn)操作室緊密相連.為滿足無菌室無菌要求,無菌間應(yīng)滿足以下布局:a.入口避開走廊,設(shè)在細(xì)菌檢驗(yàn)操作室內(nèi); b.與操作室用兩道緩沖間隔開; c.無菌室與緩沖間均裝有紫外燈,要求每3平米安裝30w紫外燈一盞; d.無菌室內(nèi)設(shè)有實(shí)驗(yàn)臺(tái)(實(shí)驗(yàn)臺(tái)與邊臺(tái)皆可),紫外燈距實(shí)驗(yàn)臺(tái)面要小于1.5m; e.無菌室與操作室之間設(shè)有雙層窗構(gòu)成小通道.
4.培養(yǎng)基制作室:培養(yǎng)基室是制作、配制微生物培養(yǎng)所需培養(yǎng)基及檢驗(yàn)用試劑的場(chǎng)所,其主要設(shè)備應(yīng)為邊臺(tái)與藥品柜.
a.邊臺(tái)上要放置電爐,以滿足熔化煮沸培養(yǎng)基時(shí)用; b.邊臺(tái)材料要耐高熱、耐酸堿; c.藥品柜分門別類存放一些一般藥品及試劑; d.危險(xiǎn)、易腐易燃有毒有害藥品單獨(dú)設(shè)保險(xiǎn)柜存放; e.邊臺(tái)上要放天平,以稱取藥品用.
5.洗滌消毒室:洗滌消毒室用以消毒洗滌待用與已用之玻璃器皿,培養(yǎng)基及污物,其面積應(yīng)大于10m2(此區(qū)域的部分職能可在理化分析室完成).
為滿足洗滌消毒的功能,洗滌消毒室應(yīng)設(shè)有:
a.1-2個(gè)洗滌池,洗滌池上下水網(wǎng)要暢通;b.器皿柜或?qū)嶒?yàn)臺(tái),以放置洗滌好器皿;
c.高壓滅菌鍋,其所用電源應(yīng)滿足用電負(fù)荷;d.室內(nèi)安有通風(fēng)裝置(通風(fēng)柜)或換氣扇; e.有條件的單位還可在該室內(nèi),設(shè)供日常檢驗(yàn)用水蒸餾水器裝置.
6.理化分析室(如果沒有條件,這個(gè)可以和微生物常規(guī)實(shí)驗(yàn)室合并)理化分析室是物理化學(xué)分析的主要操作室a.實(shí)驗(yàn)臺(tái)與細(xì)菌操作室要求相同b.設(shè)置通風(fēng)柜以滿足加熱、消化、干燥、燒灼和化學(xué)處理等工作需要;c.洗滌池.
7.儀器室:如果沒有條件,這個(gè)可以和微生物常規(guī)實(shí)驗(yàn)室合并,用以放置顯微鏡、電子天平及理化分析用小型儀器;a.要求清潔干燥、防潮防蟲、避光; b.儀器臺(tái)要穩(wěn)固、牢靠.
從上述資料可以總結(jié)出簡(jiǎn)單微生物實(shí)驗(yàn)室須具備以下幾點(diǎn):1.辦公室即實(shí)驗(yàn)紀(jì)錄整理和相關(guān)資料文獻(xiàn)存放區(qū)2.常規(guī)操作區(qū)包括(1)微生物試驗(yàn)結(jié)果的顯微和理化檢測(cè)(2)試劑、檢驗(yàn)用儀器存放;藥品需分門別類存放;危險(xiǎn)、易腐易燃有毒有害藥品單獨(dú)設(shè)保險(xiǎn)柜存放(3)培養(yǎng)基的一般配制;但培養(yǎng)基滅菌后的分裝與接種必須在無菌條件下操作3.無菌操
作區(qū)此區(qū)域?yàn)闈崈魠^(qū),作為微生物接種擴(kuò)培和微生物發(fā)酵產(chǎn)物后處理工作區(qū);超凈工作臺(tái)可代替無菌室,提供相對(duì)無菌的工作平臺(tái).其構(gòu)造主要有電器部分、送風(fēng)機(jī)、三級(jí)過濾器(初、中、高)及紫外燈等。
特別注意:高壓滅菌器材設(shè)備要獨(dú)處放置。
三、一般儀器設(shè)備
1.恒溫培養(yǎng)箱:主要用于實(shí)驗(yàn)室微生物的培養(yǎng),一般有(1)普通培養(yǎng)箱:一般控制的溫度范圍為:室溫+5~65度,又分為電熱恒溫培養(yǎng)箱和隔水式恒溫培養(yǎng)箱.(2)生化培養(yǎng)箱:一般控制的溫度范圍為:5~50度.(3)恒溫恒濕箱:一般控制的溫度范圍為:5~50度,控制的濕度范圍為:50~90%.可作為霉菌培養(yǎng)箱.4)厭氧培養(yǎng)箱:適用于厭氧微生物的培養(yǎng).可根據(jù)實(shí)際需要選用.
2.電熱恒溫干燥箱:用于吸管,平皿類玻璃器皿的干熱、滅菌和烘烤.
3.高壓蒸汽滅菌鍋(又叫高壓滅菌鍋):培養(yǎng)基、試驗(yàn)用培養(yǎng)皿等用品的滅菌.
4.冰箱:做暫時(shí)保藏菌種用.5.電子天平:一般要求具備精度達(dá)到萬分之一的分析天平.
6.顯微鏡:觀察微生物形態(tài)的必備儀器.
7.均質(zhì)器:用于均質(zhì)樣品,有旋轉(zhuǎn)刀片式和拍擊式可以選擇;例如旋轉(zhuǎn)振蕩器.
8.蒸餾水器:提供蒸餾水;根據(jù)現(xiàn)實(shí)情況,非必需.9.水浴鍋:部分培養(yǎng)溫度需要水?。ㄈ绱竽c桿菌檢驗(yàn))
10.超凈工作臺(tái):超凈工作臺(tái)作為代替無菌室的一種設(shè)備,使用簡(jiǎn)單方便,為實(shí)驗(yàn)的開展提供一個(gè)相對(duì)無菌的操作臺(tái).超凈工作臺(tái)根據(jù)風(fēng)向分為水平式和垂直式.
11.搖床培養(yǎng)機(jī):,制備細(xì)胞培養(yǎng)液時(shí),用以搖勻接種微生物、細(xì)菌和細(xì)胞等.其它可能用到的設(shè)備:恒溫水浴箱、菌落計(jì)數(shù)器、電位 pH計(jì)、高速離心機(jī)、冷凍離心機(jī)、紫外-分光光度儀等設(shè)備.
四、常規(guī)玻璃器皿
1.移液管:用于移取少量液體,常用的吸管有0.1刻度1mL及1.0刻度的10mL吸管等.
2.培養(yǎng)皿:為硬質(zhì)玻璃雙碟,常用于分離培養(yǎng),蓋與底大小應(yīng)合適,常用規(guī)格為90mm.
3.三角燒瓶與廣口瓶:多用于盛培養(yǎng)基及配制溶液,常用的規(guī)格有250mL、500mL、1000mL.
4.燒杯:供盛液或煮沸用,常用的規(guī)格為100mL、250mL、500mL、1000mL .
5.量筒:用于液體測(cè)量,常用規(guī)格為100mL、250mL、1000mL .
6.試管:用于菌種培養(yǎng),有多種規(guī)格.
7.載玻片蓋玻片:菌種涂片觀察用.
8.微量移液管:移取微量液體,一般有1000~5000μl,100~1000μl,10~200μl,1~20μl,0.1~2μl等多種規(guī)格.其它,如試管架、毛刷、酒精燈、接種針、接種環(huán)、牛皮紙、脫脂棉等.
五、化學(xué)試劑和培養(yǎng)基
參照所需購(gòu)買試劑和培養(yǎng)基原材料以及消毒液.
第二篇:微生物實(shí)驗(yàn)室守則
微生物實(shí)驗(yàn)室守則
1.須著長(zhǎng)及膝蓋之實(shí)驗(yàn)衣,並穿著長(zhǎng)褲,若有長(zhǎng)髮應(yīng)予以適當(dāng)束結(jié),嚴(yán)禁穿著拖鞋或涼鞋。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)嚴(yán)禁喧嘩嬉鬧、追逐、抽煙及吃食等行為。
2.非必要物品勿置於實(shí)驗(yàn)室之桌面,實(shí)驗(yàn)結(jié)束後,需加以清理,物品並應(yīng)歸於原位。
3.實(shí)驗(yàn)前後消毒桌面及手部,實(shí)驗(yàn)時(shí)操作桌面應(yīng)隨時(shí)保持乾淨(jìng)。
4.應(yīng)熟悉實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有設(shè)備,配置及正確操作方法。
5.顯微鏡使用後應(yīng)清理乾淨(jìng),並清點(diǎn)附件是否齊備,關(guān)閉電源後再拔掉插頭,並歸定位,發(fā)現(xiàn)有任何異狀,即報(bào)告指導(dǎo)老師處理,任何配件或裝置避免任意交換或拆卸。
6.不可於點(diǎn)燃酒精燈時(shí)噴酒精,並隨時(shí)注意自己及他人之安全,酒精燈不用時(shí)應(yīng)即熄滅。
7.實(shí)驗(yàn)所用之菌體有些為致病菌,故須以無菌操作且避免用手及口的動(dòng)作,如咬手指或用舌頭舔濕標(biāo)籤。
8.實(shí)驗(yàn)用之所有菌體或器具未經(jīng)許可嚴(yán)禁攜出室外。9.接種針(環(huán))於接菌前後務(wù)必以酒精燈滅菌。
10.含菌體之容器,應(yīng)妥予加蓋,非必要時(shí)切勿任意打開。
11.實(shí)驗(yàn)後待丟棄物品應(yīng)妥善包裹或予殺菌處理再丟棄;固體培養(yǎng)基則不得倒入水槽中。
12.實(shí)驗(yàn)結(jié)束後,應(yīng)確實(shí)關(guān)閉所有不用之電源。
13.任何意外事件,應(yīng)即報(bào)告助教及指導(dǎo)老師,亦應(yīng)熟知其應(yīng)變措施。
14.實(shí)驗(yàn)操作過程中必須隨時(shí)注意自身及他人之安全,若有危及自身及他人安全之事件或違反實(shí)驗(yàn)守則者,本實(shí)驗(yàn)課成績(jī)一律以零分計(jì)。
微生物實(shí)驗(yàn)室守則
1.須著長(zhǎng)及膝蓋之實(shí)驗(yàn)衣,並穿著長(zhǎng)褲,若有長(zhǎng)髮應(yīng)予以適當(dāng)束結(jié),嚴(yán)禁穿著拖鞋或涼鞋。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)嚴(yán)禁喧嘩嬉鬧、追逐、抽煙及吃食等行為。
2.非必要物品勿置於實(shí)驗(yàn)室之桌面,實(shí)驗(yàn)結(jié)束後,需加以清理,物品並應(yīng)歸於原位。3.實(shí)驗(yàn)前後消毒桌面及手部,實(shí)驗(yàn)時(shí)操作桌面應(yīng)隨時(shí)保持乾淨(jìng)。
4.應(yīng)熟悉實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有設(shè)備,配置及正確操作方法。
5.顯微鏡使用後應(yīng)清理乾淨(jìng),並清點(diǎn)附件是否齊備,關(guān)閉電源後再拔掉插頭,並歸定位,發(fā)現(xiàn)有任何異狀,即報(bào)告指導(dǎo)老師處理,任何配件或裝置避免任意交換或拆卸。
6.於點(diǎn)燃酒精燈時(shí)噴酒精,並隨時(shí)注意自己及他人之安全,酒精燈不用時(shí)應(yīng)即熄滅。
7.實(shí)驗(yàn)所用之菌體有些為致病菌,故須以無菌操作且避免用手及口的動(dòng)作,如咬手指或用舌頭舔濕標(biāo)籤。
8.實(shí)驗(yàn)用之所有菌體或器具未經(jīng)許可嚴(yán)禁攜出室外。
9.接種針(環(huán))於接菌前後務(wù)必以酒精燈滅菌。
10.含菌體之容器,應(yīng)妥予加蓋,非必要時(shí)切勿任意打開。
11.實(shí)驗(yàn)後待丟棄物品應(yīng)妥善包裹或予殺菌處理再丟棄;固體培養(yǎng)基則不得倒入水槽中。
12.實(shí)驗(yàn)結(jié)束後,應(yīng)確實(shí)關(guān)閉所有不用之電源。13.任何意外事件,應(yīng)即報(bào)告助教及指導(dǎo)老師,亦應(yīng)熟知其應(yīng)變措施。
14.實(shí)驗(yàn)操作過程中必須隨時(shí)注意自身及他人之安全,若有危及自身及他人安全之事件或違反實(shí)驗(yàn)守則者,本實(shí)驗(yàn)課成績(jī)一律以零分計(jì)。
第三篇:微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)則
微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)則
1、進(jìn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿工作服,離室時(shí)脫去放在指定處所,工作服應(yīng)定期消毒洗滌。
2、非必要物品勿帶入實(shí)驗(yàn)室。
3、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保持肅靜;不得高聲談笑;不準(zhǔn)吸煙和進(jìn)食;無菌室在工作前、工作后均須全面清掃、消毒。
4、如帶有細(xì)菌的增菌液污染桌面或地面,應(yīng)立即用消毒溶液傾覆其上,半小時(shí)后方可抹去;如有污染物污染工作服,應(yīng)立即將工作服脫去以高壓蒸汽法滅菌。
5、如有污染物污染手部,應(yīng)立即將手浸泡消毒液內(nèi),經(jīng)5分鐘后,再用肥皂和水刷洗干凈。如有污染物吸入口內(nèi),應(yīng)立即吐出,并以大量清水漱口,根據(jù)需要亦可服用有關(guān)藥物以防發(fā)生感染染。
6、接種環(huán)用后應(yīng)立即在酒精燈火焰上燒灼滅菌;沾菌的吸管、玻片等用后應(yīng)分別浸泡在盛有消毒液的玻璃缸內(nèi),其他已污染的試管、平皿等亦必須置于專用容器內(nèi),經(jīng)滅菌后再進(jìn)行洗滌。
7、用于消毒的酒精應(yīng)放在加蓋搪瓷缸內(nèi),如不慎著火,應(yīng)立即用搪瓷蓋蓋上與空氣隔絕即可滅掉火焰。
8、工作完畢時(shí)工作臺(tái)用沾有消毒液的抹布擦拭干凈,地面應(yīng)用墩布擦拭干凈。
9、檢驗(yàn)人員應(yīng)具備高度責(zé)任感,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度從事檢驗(yàn)工作。
第四篇:微生物實(shí)驗(yàn)室管理制度
目 的:規(guī)范微生物室管理規(guī)范,以保證微生物實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。范 圍:適用于微生物實(shí)驗(yàn)室
依 據(jù):GB/T 19489-2008《實(shí)驗(yàn)室 生物安全通用要求》; 執(zhí)行部門:化驗(yàn)室微生物檢驗(yàn)室
職 責(zé):1.微生物檢驗(yàn)員負(fù)責(zé)微生物實(shí)驗(yàn)室的管理。2.實(shí)驗(yàn)室主管負(fù)責(zé)對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室管理情況進(jìn)行檢查。內(nèi) 容:
本中心微生物實(shí)驗(yàn)室管理制度包括微生物實(shí)驗(yàn)室人員管理制度、微生物室出入管理 制度、微生物室環(huán)境管理制度、微生物室的使用管理制度。微生物實(shí)驗(yàn)室藥品管理制度。
1.微生物實(shí)驗(yàn)室的人員管理
1.1 微生物實(shí)驗(yàn)室由微生物檢驗(yàn)員管理及使用,其他人員須經(jīng)主管人員批準(zhǔn)后方可進(jìn)入和使 用。
1.2 微生物實(shí)驗(yàn)室的人員需經(jīng)過相關(guān)的培訓(xùn)。2.微生物實(shí)驗(yàn)室出入管理 2.1 人員出入管理:
2.1.1 人員進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室潔凈區(qū)前,需要洗手消毒;在一級(jí)緩沖室換實(shí)驗(yàn)服、戴帽子、換鞋后,進(jìn)入風(fēng)淋室,風(fēng)淋后,進(jìn)入二級(jí)緩沖室準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)。2.1.2 實(shí)驗(yàn)操作前須帶上無菌手套和口罩。2.2 物料出入管理:
2.2.1 物料進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室以前,脫去外包裝或者用酒精棉球擦拭后,放置于傳遞窗中。2.2.2 物料放置于傳遞窗后,開啟紫外0.5小時(shí),同時(shí)將微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的凈化系統(tǒng)、紫外 燈打開。
2.2.3 紫外開啟0.5小時(shí)以后,關(guān)閉紫外,并將物品轉(zhuǎn)移于實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)上。
2.2.4 實(shí)驗(yàn)完畢后,微生物實(shí)驗(yàn)室物品經(jīng)傳遞窗傳出后,經(jīng)高溫滅菌后廢液、廢物倒入廢液桶處理。
3.微生物實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境管理 3.1 微生物實(shí)驗(yàn)室的清潔管理
微生物實(shí)驗(yàn)室的清潔分為一般清潔及徹底清潔,其具體的清潔部位、方式方法、頻率見下表所示:
3.2 微生物實(shí)驗(yàn)室常用消毒劑及其配制
4.微生物實(shí)驗(yàn)室的使用管理
4.1 微生物實(shí)驗(yàn)室使用之前,應(yīng)先開啟微生物實(shí)驗(yàn)室自凈系統(tǒng)30分鐘。每次使用前應(yīng)用消毒 液擦拭超凈工作臺(tái)及其他一切可能引起污染的死角,然后開紫外燈滅菌30分鐘,同時(shí)開啟超凈工作臺(tái)。操作完畢后,用消毒液擦拭臺(tái)面,做好衛(wèi)生,開紫外燈30分鐘,并記錄紫外燈照射時(shí)間。注:當(dāng)紫外燈使用1000小時(shí)應(yīng)更換。
4.2 微生物實(shí)驗(yàn)室使用時(shí),應(yīng)同時(shí)進(jìn)行沉降菌監(jiān)測(cè),將含有營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)皿在各監(jiān)測(cè)點(diǎn)正向放置,打開蓋子,暴露30分鐘,然后蓋上,將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基放入30~35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí),觀察結(jié)果,每皿菌落數(shù)應(yīng)≤1個(gè),否則應(yīng)加強(qiáng)清潔消毒工作,必要時(shí)驗(yàn)證生物安全柜的性能。5.微生物實(shí)驗(yàn)室藥品及培養(yǎng)基管理制度
藥品及培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ),直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。5.1 藥品及培養(yǎng)基的采購(gòu)及接收
微生物實(shí)驗(yàn)室所用的藥品及培養(yǎng)基必須是符合國(guó)家相關(guān)資質(zhì)的公司所出產(chǎn)的。實(shí)驗(yàn)室根據(jù)檢驗(yàn)需要申購(gòu)所需的培養(yǎng)基并做好相應(yīng)的接收記錄。5.1培養(yǎng)基的接收
微生物檢驗(yàn)室應(yīng)指定專人負(fù)責(zé)培養(yǎng)基的管理,在接收培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)核對(duì)培養(yǎng)基的品名、來源、批號(hào)、生產(chǎn)日期、有效期、數(shù)量,脫水培養(yǎng)基應(yīng)附有處方和使用說明,并做好接收記錄。5.2培養(yǎng)基的制備
培養(yǎng)基可按處方配制,也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。在制備培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)選擇質(zhì)量符合要求的脫水培養(yǎng)基或單獨(dú)配方組分進(jìn)行配制。脫水 培養(yǎng)基應(yīng)附有處方和使用說明,配制時(shí)應(yīng)按使用說明上的要求操作以確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求,不得使用結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基。脫水培養(yǎng)基或單獨(dú)配方組分應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下貯藏,如低溫、干燥和避光,所有的容器應(yīng)密封,尤其是盛放脫水培養(yǎng)基的容器。商品化的成品培養(yǎng)基除了應(yīng)附有處方和使用說明外,還應(yīng)注明有效期、貯藏條件、適用性檢查試驗(yàn)的質(zhì)控菌和用途。
為保證培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定可靠,各脫水培養(yǎng)基或各配方組分應(yīng)準(zhǔn)確稱量,并要求有一定的精確度。配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水,特殊情況下,可能需要用去離子水和蒸餾水。應(yīng)記錄各稱量物的重量和水的使用量。配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具應(yīng)潔凈,可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質(zhì)的殘留,對(duì)熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應(yīng)預(yù)先進(jìn)行滅菌,以保證培養(yǎng)基的無菌性。
脫水培養(yǎng)基應(yīng)完全溶解于水中,再行分裝與滅菌。配制時(shí)若需要加熱助溶,應(yīng)注意不要過度加熱,以避免培養(yǎng)基顏色變深。如需要添加其他組分時(shí),加入后應(yīng)充分混勻。應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗(yàn)證的參數(shù)進(jìn)行培養(yǎng)基的滅菌。商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù),特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌。
培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件,有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或pH 的改變。因此,培養(yǎng)基應(yīng)采用驗(yàn)證的滅菌程序滅菌,培養(yǎng)基滅菌方法和條件,應(yīng)通過無菌性試驗(yàn)和促生長(zhǎng)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。此外,對(duì)高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗(yàn)證,以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過熱,過度滅菌可能會(huì)破壞絕大多數(shù)的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基促生長(zhǎng)的質(zhì)量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此,應(yīng)根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性,進(jìn)行全面的滅菌程序驗(yàn)證。應(yīng)確定每批培養(yǎng)基滅菌后的pH值(冷卻至室溫25 ℃ 測(cè)定)。若培養(yǎng)基處方中未列出pH 值的范圍,除非經(jīng)驗(yàn)證表明培養(yǎng)基的pH 值允許的變化范圍很寬,否則,pH值的范圍不能超過規(guī)定值士0.2。
制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行下列檢查:容器和蓋子不得破裂,裝量應(yīng)相同,盡量避免形成氣泡,固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪,在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶,不得污染微生物等。應(yīng)檢查和記錄批數(shù)量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查。5.3 培養(yǎng)基的貯藏
自配的培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱、批號(hào)、配制日期等信息,并在已驗(yàn)證的條件下貯藏。商品化的成品培養(yǎng)基標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有名稱、批號(hào)、生產(chǎn)日期、失效期及培養(yǎng)基的有關(guān)特性,生產(chǎn)商和使用者應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書上的要求進(jìn)行貯藏,所采用的貯藏和運(yùn)輸條件應(yīng)使成品培養(yǎng)基最低限度的失去水分并提供機(jī)械保護(hù)。
培養(yǎng)基滅菌后若貯藏在高壓滅菌器中,質(zhì)量可能會(huì)受影響,一般不提倡這種存放法。瓊脂培養(yǎng)基不得在O ℃ 或O ℃ 以下存放,因?yàn)槔鋬隹赡芷茐哪z特性。
培養(yǎng)基應(yīng)避光保存,若要長(zhǎng)期保存,應(yīng)置于密閉容器中以防止水分流失。瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用,如置冰箱保存,一般不超過1周,且應(yīng)密閉包裝,若延長(zhǎng)保存期限,保存期需經(jīng)驗(yàn)證確定。固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許1 次,以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用水浴或流通蒸汽加熱。若使用微波爐,應(yīng)避免培養(yǎng)基過度受熱及水分的蒸發(fā),更要注意安全。融化的培養(yǎng)基應(yīng)置于45 ~50 ℃ 的水浴中,不得超過8 小時(shí)。傾注培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分,避免容器外壁的水滴進(jìn)人培養(yǎng)基中造成污染。使用過的培養(yǎng)基(包括失效的培養(yǎng)基)應(yīng)按照國(guó)家污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。5.4 質(zhì)量控制試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)試驗(yàn)用培養(yǎng)基建立質(zhì)量控制程序,以確保所用培養(yǎng)基質(zhì)量符合相關(guān)檢測(cè)的需要。實(shí)驗(yàn)室配制或商品化的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量依賴于其制備過程,采用不適宜方法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長(zhǎng)或復(fù)蘇,從而影響試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。所有配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項(xiàng)目是pH、適用性檢查試驗(yàn),定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期。
培養(yǎng)基在有效期內(nèi)應(yīng)依據(jù)適用性檢查試驗(yàn)確定培養(yǎng)基質(zhì)量是否符合要求。有效期的長(zhǎng)短將取決于在一定存放條件下(包括容器特性及密封性)的培養(yǎng)基其組成成分的穩(wěn)定性。
除藥典附錄另有規(guī)定外,在實(shí)驗(yàn)室中,若采用已驗(yàn)證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控,那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗(yàn)可只進(jìn)行1 次。
如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗(yàn)證,那么每一批培養(yǎng)基均要進(jìn)行適用性檢查試驗(yàn),試驗(yàn)的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關(guān)附錄中進(jìn)行選擇,也可增加從生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株。培養(yǎng)基的質(zhì)屋控制試驗(yàn)若不符合規(guī)定,應(yīng)尋找不合格的原因,以防止問題重復(fù)出現(xiàn)。任何不符合要求的培養(yǎng)基均不能使用。
用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù),最好要雙層包裝和終端滅菌,如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基,那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100 %的預(yù)培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
第五篇:微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)備
無菌室(接種室)或接種箱
要培養(yǎng)微生物,首先就需要接種,而接種必須在無菌條件下進(jìn)行。這就需要建造無菌室或接種箱,為接種創(chuàng)造必要的條件。
無菌室可以建在實(shí)驗(yàn)室內(nèi),作為實(shí)驗(yàn)室的一個(gè)小套間。面積為4~5平方米,高2.5米左右。無菌室外應(yīng)連接一個(gè)小緩沖間,面積為2平方米左右。緩沖間和無菌室的門不要建在同一條直線上,以減少空氣中雜菌進(jìn)入無菌室。
無菌室和緩沖間應(yīng)作到清潔、密閉性好,室內(nèi)最好有換氣設(shè)備,以便在工作結(jié)束后更換室內(nèi)空氣。兩個(gè)房間中應(yīng)各安裝l盞30瓦紫外線燈管和照明用的日光燈,無菌室的紫外線燈應(yīng)懸吊在工作臺(tái)的正上方,距臺(tái)面1米,以發(fā)揮最大的消毒功能。無菌室內(nèi)的工作臺(tái)等用具用品,應(yīng)經(jīng)常保持清潔,避免雜菌污染。
如果沒有條件建造無菌室,可以用木制的接種箱代替。接種箱結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,容易制作,其正面安裝玻璃,便于觀察。箱前方開兩個(gè)圓洞各接連1只套袖,操作時(shí)將兩臂從套袖伸入箱內(nèi)進(jìn)行操作。箱內(nèi)也應(yīng)懸吊一盞紫外線殺菌燈和一盞日光燈。接種箱的尺寸規(guī)格見圖9-1。
恒溫箱
用于恒溫條件下培養(yǎng)微生物。恒溫箱的調(diào)溫范圍一般為20~45℃之間。培養(yǎng)酵母菌和霉菌時(shí),一般可調(diào)至28℃,培養(yǎng)細(xì)菌和放線菌時(shí),可根據(jù)菌種的生長(zhǎng)溫度進(jìn)行調(diào)溫,一般為30~37℃。
電烘箱(干燥箱)
用于玻璃器皿等物的烤干和滅菌。電烘箱的調(diào)溫的范圍一般為40~180℃,對(duì)玻璃器皿等物進(jìn)行滅菌時(shí),可將溫度調(diào)至160℃,滅菌4小時(shí),即可將器皿上的微生物全部殺死。滅菌完畢后,在電烘箱溫度還沒有降到50~70℃以前,不要打開電烘箱,以免器皿破裂。
冰箱
用于保藏菌種和需要低溫保存的藥品。
高壓蒸汽滅菌鍋
是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中最重要的滅菌工具,用于一般培養(yǎng)基和玻璃器皿等物的滅菌。在15磅/英寸2壓力下(121.6℃),滅菌15~30分鐘,可以殺死包括芽孢在內(nèi)的全部微生物。
離心機(jī)
用它使菌體和液體培養(yǎng)基分開。一般多使用普通小型“蘑菇”式離心機(jī),最高轉(zhuǎn)數(shù)為4000轉(zhuǎn)/分,用電力啟動(dòng)。如果沒有條件置備電動(dòng)離心機(jī),可用手搖離心器代替。
接種針
用于接種和分離微生物。根據(jù)不同用途做成針狀、環(huán)狀、鉤狀、刀狀和鏟狀等。接種針由針頭和針柄兩部分組成。針頭由白金或鉻鎳合金(細(xì)電爐絲)制成,長(zhǎng)約7厘米。針柄可用玻璃棒或鋁管制成,長(zhǎng)約20厘米。將針頭燒結(jié)在針柄上即成。
天平
用于稱量各種試劑。托盤天平或扭力天平均可,感量應(yīng)為0.01克。
酒精燈
用于接種時(shí)對(duì)接種工具進(jìn)行滅菌。酒精燈火焰上部熱度最高,應(yīng)利用這一最高溫度區(qū)燒灼接種針或試管口。
顯微鏡
用于觀察微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu),顯微鏡應(yīng)配備油鏡頭,以便能看清細(xì)菌的形態(tài)。
常用玻璃器皿
(1)培養(yǎng)皿(平皿):用于盛放固體培養(yǎng)基,是培養(yǎng)微生物和觀察微生物的主要器皿。一般直徑為9厘米。可根據(jù)活動(dòng)規(guī)模準(zhǔn)備若干個(gè)。
(2)試管:用于盛放斜面培養(yǎng)基(固體),是接種微生物的主要器皿。常用的有兩種。較大的長(zhǎng)220毫米,直徑20毫米;較小的長(zhǎng)150毫米,直徑15毫米。可根據(jù)需要選用其中一種,并準(zhǔn)備若干個(gè)。
(3)錐形瓶:用于盛放液體培養(yǎng)基。是用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物的主要器皿。一般容量為50、100、250、300、500、1000毫升。可根據(jù)活動(dòng)需要選擇和準(zhǔn)備。
(4)量筒、量杯:用于定量量取各種液體。
(5)移液管(吸管):一般容量為0.5、1、5、10毫升等,可根據(jù)需要選擇和準(zhǔn)備。
(6)其它:燒杯、漏斗等。