第一篇：攤鋪機(jī)自動(dòng)找平研究的論文

一：絕對(duì)基準(zhǔn)的找平方法。

絕對(duì)基準(zhǔn)就是鋼絲繩基準(zhǔn)。通過(guò)測(cè)量人員放樣，測(cè)量，調(diào)整鋼絲繩的高程變化來(lái)改變攤鋪時(shí)的厚度變化。假設(shè)鋼絲繩的高程是絕對(duì)的準(zhǔn)確的情況下，攤鋪機(jī)按鋼絲繩的高程找平不出現(xiàn)什么失誤和故障，其他的工作流程也細(xì)致無(wú)誤，那么修筑出的路面就肯定是條非常平整的路面。攤鋪后的路面實(shí)際高程與設(shè)計(jì)高程一致。

鋼絲繩基準(zhǔn)的找平方法。剛絲繩找平方法大致可分為兩種—滑竿和聲納傳感器。

1滑竿：滑竿的找平是利用滑竿與鋼絲繩的角度變化來(lái)改變攤鋪厚度的。

1）調(diào)整初始仰角。初始仰角的調(diào)整可以控制仰角油缸的升降范圍，攤鋪厚度越厚就要求越大的初始仰角，調(diào)整范圍隨各機(jī)型而定?；团c鋼絲繩的角度呈45度。

2）起步。墊木方，木方的厚度最好與所要攤鋪的厚度一樣厚。一般木方墊好之后熨平板的地板前方與后方的高差在0.5—1cm之間。這樣標(biāo)尺仰角的位置就大致確定了。

3）攤鋪工作。攤鋪工作時(shí)把控制器調(diào)整到自動(dòng)狀態(tài)，起步后攤鋪的厚度可能和設(shè)計(jì)高程有一定的差距。旋轉(zhuǎn)仰角提升裝置把厚度調(diào)整到工作所需厚度。攤鋪工作時(shí)確保滑竿在鋼絲繩上行走，無(wú)雜物將滑竿托起。

4）路過(guò)橋面，舊路面的處理方法。一般在鋪筑水泥穩(wěn)定土路面的時(shí)候要求攤鋪厚度不能比橋面或者舊路面高。在找平自動(dòng)的情況下滑竿還搭在鋼絲繩上，看控制器的紅燈向上還是向下閃爍，這時(shí)需要手動(dòng)調(diào)整標(biāo)尺仰角向上或是向下直至燈滅為止，實(shí)現(xiàn)快速找平。有時(shí)即使仰角降到最低而攤鋪厚度還是厚，這時(shí)需要抬起熨平板使用人工順橋面或路面。這時(shí)需要把控制器調(diào)到手動(dòng)檔（有數(shù)字控制盒的也可以按動(dòng)數(shù)字控制盒上的手動(dòng)鍵，但切記不要?dú)w零重設(shè)）。

5）重新起步。重新起步時(shí)就不需要再重調(diào)或者刻意記標(biāo)尺仰角的位置了，滑竿直接搭在鋼絲繩上，墊上木方控制器打到自動(dòng)擋就可以了。起步后會(huì)自動(dòng)檢測(cè)到原先的攤鋪厚度。在橫接縫處使用這種方法很方便。前提是檢測(cè)厚度和調(diào)平升降裝置沒(méi)有變動(dòng)，手動(dòng)控制盒沒(méi)有歸零重設(shè)的情況下。

2聲納傳感器：聲納傳感器是利用檢測(cè)傳感器探頭與鋼絲繩之間的距離來(lái)控制攤鋪厚度的。以moba為例；其傳感器與傳統(tǒng)的滑竿相比，它不會(huì)壓彎鋼絲繩而導(dǎo)致出現(xiàn)攤鋪厚度的誤差也不用擔(dān)心有雜物將滑竿托起導(dǎo)致攤鋪厚度變厚。但是需要經(jīng)常左右搬動(dòng)傳感器的方向使其位置在工作范圍內(nèi)。

利用聲納傳感器檢測(cè)鋼絲繩基準(zhǔn)的使用方法基本與滑竿一致。所不同的是聲納傳感器是平衡梁基準(zhǔn)（相對(duì)基準(zhǔn)）的一部分，使用平衡梁基準(zhǔn)中四個(gè)探頭中的一個(gè)作為找平工具。使用的時(shí)候應(yīng)把工作模式調(diào)整到鋼絲繩基準(zhǔn)。同時(shí)適當(dāng)?shù)恼{(diào)整靈敏度有助于攤鋪厚度的準(zhǔn)確、平整。靈敏度越高攤鋪厚度越接近理想高程，靈敏度越低平整度越好。所以應(yīng)該視鋪層遍數(shù)、路基路面的平整度來(lái)調(diào)整靈敏度。它們之間呈正比！調(diào)整工作窗口的范圍可以使攤鋪機(jī)在自動(dòng)找平工作的情況下，按規(guī)定的范圍調(diào)整所檢測(cè)的厚度變化。超出范圍的自動(dòng)找平不工作。例如窗口調(diào)到20。攤鋪機(jī)工作所檢測(cè)的厚度變化在±2cm之間正常工作，厚度變化超過(guò)2cm時(shí)自動(dòng)找平不做處理。出現(xiàn)盲區(qū)顯現(xiàn)，這時(shí)需要檢查原因。極有可能是找平基準(zhǔn)出現(xiàn)了誤差所致。也可能是路面不平導(dǎo)致攤鋪機(jī)在行駛的過(guò)程中過(guò)于顛簸所致。

二：使用橫坡儀的找平方法

1：橫坡儀找平屬于相對(duì)基準(zhǔn)范疇。攤鋪機(jī)分左右兩側(cè)來(lái)進(jìn)行找平，一側(cè)利用橫坡儀時(shí)必須保證另一側(cè)的攤鋪厚度、平整度非常準(zhǔn)確，最起碼得在工程質(zhì)量允許的范圍內(nèi)。因?yàn)闄M坡儀是根據(jù)相對(duì)另一側(cè)的攤鋪厚度，再通過(guò)自身檢測(cè)路面的坡度從而得出橫坡儀所在這側(cè)的攤鋪厚度的。橫坡儀基準(zhǔn)通常在鋪筑水泥穩(wěn)定土路面時(shí)使用。

2：橫坡儀的特點(diǎn)，一般使用橫坡儀的時(shí)候另一側(cè)都要使用鋼絲繩基準(zhǔn)來(lái)確保攤鋪出路面的準(zhǔn)確平整的。使用橫坡儀的好處的有：（1）：因?yàn)闄M坡儀是配合鋼絲繩基準(zhǔn)使用的，所以利用橫坡儀可以少放一側(cè)鋼絲繩，大大的減少了測(cè)量人員的勞力。（2）：如果是梯形攤鋪，在路的兩側(cè)使用鋼絲繩基準(zhǔn)，在前面工作的攤鋪機(jī)中縫處使用橫坡儀，后面的攤鋪機(jī)中縫處使用滑靴或聲納探頭接縫。這樣，不光節(jié)省了一條鋼絲繩基準(zhǔn)，又防止了道路縱向接縫處釘鋼絲繩后照成的人員、車輛的無(wú)意刮碰而帶來(lái)的傷害和對(duì)施工進(jìn)度的影響。（3）：提高工作效率。如果中縫處使用鋼絲繩基準(zhǔn)，那么前面的攤鋪機(jī)工作時(shí)必須與后面的攤鋪機(jī)差開一大段距離，這段距離用來(lái)撤掉前面攤鋪后留下的鋼絲繩、鐵樁。這樣才能保證后面攤鋪中縫處無(wú)障礙。

3：橫坡儀的具體使用方法：（1）：安裝。橫坡儀檢測(cè)盒底座安裝在攤鋪機(jī)熨平板帶有減震塊的衡量上，螺栓固定。檢測(cè)盒一側(cè)線路連接攤鋪機(jī)插口，另一側(cè)連接控制手柄。撥動(dòng)檢測(cè)盒的撥桿與工作所在方向一致。（2）：調(diào)試。安裝完畢后控制盒調(diào)到手動(dòng)狀態(tài)，攤鋪機(jī)墊上木方起步工作，待鋼絲繩基準(zhǔn)那側(cè)攤鋪厚度達(dá)到設(shè)計(jì)標(biāo)高時(shí)打開自動(dòng)。調(diào)整控制手柄。（3）測(cè)量。起步后測(cè)量人員需要根據(jù)攤鋪后的左右兩側(cè)高差算出坡度，再根據(jù)坡度大小調(diào)整橫坡儀這一側(cè)的厚度，直到攤鋪厚度與設(shè)計(jì)坡度一致為止。這時(shí)控制手柄上顯示的坡度與實(shí)際坡度不一致，但實(shí)際坡度已經(jīng)達(dá)到了設(shè)計(jì)要求。（4）在不變化攤鋪厚度的情況下，調(diào)整控制手柄的坡度顯示值與實(shí)際坡度一致。這樣在攤鋪機(jī)進(jìn)入彎道的時(shí)候，可以根據(jù)漸變率的均勻變化調(diào)整坡度的大小，用來(lái)改變攤鋪厚度的高低在設(shè)計(jì)高程范圍內(nèi)。（5）：參照。當(dāng)橫坡儀正常工作后，可以根據(jù)攤鋪機(jī)熨平板上所配帶的水準(zhǔn)氣泡的位置來(lái)觀察坡度的變化。可以了解橫坡儀是否正常工作。（6）橫接縫處的使用方法。因?yàn)榭刂坪幸话愣季哂袛?shù)據(jù)記錄功能，所以橫接縫處不需要數(shù)據(jù)重設(shè)，只需把控制盒調(diào)回到自動(dòng)狀態(tài)即可。但要保證控制盒安裝的地方?jīng)]有受外力作用產(chǎn)生角度或位置的變化。

三：相對(duì)基準(zhǔn)的以及縱向接縫的找平方法

相對(duì)基準(zhǔn)就是以地面作為參考，根據(jù)地面平整度的變化來(lái)改變攤鋪層的厚度的。也稱為平衡梁基準(zhǔn)。利用平衡梁基準(zhǔn)攤鋪時(shí)大大的節(jié)省了人力、物力的同時(shí)也提高了工作效率。但使用平衡梁時(shí)需要所參照的路面平整度要達(dá)到一定的要求，保證攤鋪機(jī)在工作時(shí)車履帶下方?jīng)]有雜物將攤鋪機(jī)機(jī)體托起。否則會(huì)導(dǎo)致攤鋪出的路面不平整。如果參考路面的平整度稍差，這情況下需要適當(dāng)?shù)慕档推胶饬嚎刂破鞯撵`敏度。靈敏度低攤鋪機(jī)自動(dòng)找平時(shí)就檢測(cè)不到參考路面的小的厚度變化，攤鋪的厚度也就不變化。起到濾波作用。平衡梁基準(zhǔn)普遍在鋪筑瀝青路面時(shí)使用。

1：平衡梁基準(zhǔn)的找平方法：（1）安裝：連接各導(dǎo)線，控制盒以及聲納傳感器。安裝后各聲納傳感器縱向位置成一條直線。（2）調(diào)試：墊木方，手動(dòng)調(diào)整標(biāo)尺仰角的大致位置。調(diào)整控制盒的找平模式、靈敏度以及窗口范圍。（3）起步：起步后攤鋪厚度與設(shè)計(jì)厚度差距不大的情況下控制盒歸零、調(diào)到自動(dòng)，再通過(guò)自動(dòng)調(diào)整使攤鋪厚度達(dá)到設(shè)計(jì)厚度。起步后如果攤鋪厚度與設(shè)計(jì)厚度差距很大的情況下，通過(guò)手動(dòng)調(diào)整標(biāo)尺仰角的位置，使攤鋪厚度接近設(shè)計(jì)厚度再進(jìn)行自動(dòng)操作。（4）測(cè)量：利用平衡梁找平時(shí)需要利用針尺或螺絲刀之類的東西插入已攤鋪的、未壓實(shí)的路面來(lái)檢測(cè)厚度。但有時(shí)受下面層平整度的影響，所檢測(cè)的厚度不一定就是攤鋪的實(shí)際厚度，所以需要多檢測(cè)幾點(diǎn)，取平均值作為參考。（5）彎道檢測(cè)：在保證攤鋪厚度的情況下過(guò)彎道時(shí)，攤鋪厚度可能慢慢會(huì)變薄或變厚，所以彎道時(shí)需要勤檢測(cè)、多調(diào)整。使攤鋪厚度達(dá)到設(shè)計(jì)厚度。

2：縱向接縫的找平方法

縱向接縫找平方法有兩種——滑靴和聲納傳感器。聲納傳感器用起來(lái)比較簡(jiǎn)便、靈敏。因?yàn)樗ぷ鲿r(shí)不接觸地面，所以不用像使用滑靴那樣擔(dān)心傳感器掉進(jìn)馬葫蘆，只需看住手動(dòng)、自動(dòng)即可?？v向接縫的找平方法與鋼絲繩基準(zhǔn)找平方發(fā)基本一致，不做敘述。因?yàn)槭苈访鏅M坡的影響，如果傳感器的行駛方向不在一個(gè)縱斷面內(nèi)則找平厚度會(huì)發(fā)生變化。所以使用時(shí)應(yīng)該注意傳感器走過(guò)的方向在一個(gè)縱斷面內(nèi)。

四：結(jié)束語(yǔ)

其實(shí)影響道路平整度的因素有很多。例如：攤鋪基準(zhǔn)的影響，熱拌瀝青混合料的影響，瀝青混合料攤鋪過(guò)程中的影響，碾壓工藝的影響，基成平整度對(duì)瀝青面層的影響還有其他的影響。優(yōu)質(zhì)的混合料，良好的施工機(jī)械，良好的基層平整度，合理的施工工藝，充分的技術(shù)準(zhǔn)備，嚴(yán)格科學(xué)的管理，是確保和提高瀝青路面平整度的必要條件。所以，要想修一條平整度較高的路面離不開施工各部門認(rèn)真的完成工作以及各部門間得密切配合。

論文關(guān)鍵詞：攤鋪機(jī)自動(dòng)找平基準(zhǔn)橫坡儀平衡梁

論文摘要：本文通過(guò)對(duì)瀝青混凝土攤鋪機(jī)自動(dòng)找平系統(tǒng)的分析?？偨Y(jié)了一些應(yīng)用技術(shù)技巧。為廣大施工工作人員提供一個(gè)技術(shù)參考。

第二篇：自動(dòng)情感文本分類研究綜述

自動(dòng)情感文本分類研究綜述

夏火松/彭柳艷/余夢(mèng)麟

2012-10-26 14:07:35 來(lái)源：《情報(bào)學(xué)報(bào)》(京)2011年5期

【英文標(biāo)題】Review on Automatic Sentiment Text Classification

【作者簡(jiǎn)介】夏火松，男，1964年生，武漢科技學(xué)院經(jīng)濟(jì)管理學(xué)院院長(zhǎng)，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，主要研究方向：知識(shí)管理、文本挖掘、信息管理和電子商務(wù)，武漢430073；彭柳艷，女，1984年生，武漢科技學(xué)院研究生，主要研究方向：情感分類，信息管理，E-mail：gogoply@yahoo.cn，武漢430073；余夢(mèng)麟，女，1985年生，武漢科技學(xué)院研究生，主要研究方向：知識(shí)管理，信息管理，武漢430073

【內(nèi)容提要】情感分類及其應(yīng)用是目前研究的一個(gè)熱點(diǎn)，是自然語(yǔ)言處理，機(jī)器學(xué)習(xí)和心理學(xué)等多學(xué)科交叉的研究課題，在很多領(lǐng)域都有實(shí)際的應(yīng)用，如產(chǎn)品的聲譽(yù)分析，輿情跟蹤，博客興趣分析等。論文對(duì)情感分類目前國(guó)內(nèi)外的研究概貌進(jìn)行了分析，將現(xiàn)有文獻(xiàn)中的研究方向分為四個(gè)類別，并對(duì)這四個(gè)類別分別進(jìn)行了描述，對(duì)情感分類中的關(guān)鍵問(wèn)題進(jìn)行了研究，提出了情感分類的一般框架，最后對(duì)目前研究中存在的不足進(jìn)行了討論，對(duì)情感分類研究的發(fā)展方向進(jìn)行了展望。

Sentiment classification and its applications have been witnessed a booming interest in nowadays research, it is a cross research of natural language processing, machine learning and psychology, and has practical applications in many fields, such as product reputation analysis, public opinion tracking, blogger interests analysis, and so on.This paper gives an overview of the current study on sentiment classification of domestic and international, divides research directions of existing literature into four categories, then describe these four categories in detail, and analyzes the key issues in this field, then proposes a general framework for sentiment classification, finally, discuss the shortcomings of current study, and predicts the development trend.【關(guān) 鍵 詞】情感語(yǔ)義詞典/主觀識(shí)別/情感分類/輿情跟蹤/聲譽(yù)分析/研究綜述Sentiment semantic lexicon/Subjectivity identification/Sentiment classification/Public opinion track/Reputation analysis/Review 引言

隨著互聯(lián)網(wǎng)技術(shù)的發(fā)展和用戶的增多，網(wǎng)絡(luò)逐漸成為人們溝通和信息交流的主要載體，人們?cè)诰W(wǎng)絡(luò)站點(diǎn)發(fā)表意見(jiàn)和觀點(diǎn)也變得很便捷。對(duì)產(chǎn)品的評(píng)論信息以各種不同的形式存在于不同的網(wǎng)站上面，很典型的有：電子商務(wù)網(wǎng)站(淘寶，亞馬遜)、專業(yè)的評(píng)論網(wǎng)站、博客和論壇等?，F(xiàn)在大部分人在購(gòu)買商品和服務(wù)之前，都會(huì)在網(wǎng)上瀏覽評(píng)論信息獲取先驗(yàn)知識(shí)。企業(yè)通過(guò)關(guān)注網(wǎng)上的評(píng)論信息，可以追蹤用戶的反饋信息，及時(shí)調(diào)整產(chǎn)品和銷售問(wèn)題。在某種程度上這些評(píng)論信息主導(dǎo)了潛在用戶的購(gòu)買意愿。因此，對(duì)這些評(píng)論進(jìn)行深入分析，無(wú)論是對(duì)于企業(yè)還是個(gè)人都有很大幫助。而近年來(lái)，“人肉搜索”現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，網(wǎng)絡(luò)熱點(diǎn)層出不窮，“某門”(王石捐款門等)事件在網(wǎng)上傳得沸沸揚(yáng)揚(yáng)，很大程度上影響了人們的行為，引起了人們對(duì)網(wǎng)絡(luò)輿情的極大關(guān)注。情感分類和觀點(diǎn)挖掘技術(shù)能夠更加科學(xué)地描述這些現(xiàn)象的本質(zhì)，引起了研究者們對(duì)這類課題的極大關(guān)注。

論文對(duì)這一課題的相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行了研究，研究過(guò)程中獲取參考文獻(xiàn)和相關(guān)資料的步驟如下：以“sentiment classification”或“opinion Mining”或“sentiment analysis”為關(guān)鍵詞，在SpringerLink，EBSCO，Elsevier，SCI，EI等外文數(shù)據(jù)庫(kù)中下載了2007-2009年的最新相關(guān)外文文獻(xiàn)，剔除重復(fù)下載和無(wú)關(guān)文獻(xiàn)，共得到42篇相關(guān)文章。同時(shí)采用參考文獻(xiàn)追溯法，對(duì)2007年以前的文章進(jìn)行了追溯，最早可以追溯到1996年，在Google Scholar里面下載了相關(guān)引用頻次較高的文獻(xiàn)101篇，即共得到143篇外文文獻(xiàn)；在中國(guó)期刊網(wǎng)和維普數(shù)據(jù)庫(kù)里面以“情感分類”或者“情感分析”或者“觀點(diǎn)挖掘”為主題作為檢索條件，通過(guò)篩選，剔除，下載了相關(guān)中文文獻(xiàn)70篇。通過(guò)對(duì)這些文章的閱讀和分析，得到了后面的分析結(jié)論。

論文采用如下的組織結(jié)構(gòu)：在第二部分，對(duì)情感分類的國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀進(jìn)行了總體概括；第三部分對(duì)該領(lǐng)域的相關(guān)研究進(jìn)行了一個(gè)分類描述；第四部分對(duì)情感文本分類中的幾個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題進(jìn)行了探討，并提出了網(wǎng)絡(luò)評(píng)論情感分類的基本研究框架；最后對(duì)目前存在的問(wèn)題和以后的研究方向給出了建議。情感分類研究的總體概貌

自動(dòng)文本分類是信息檢索領(lǐng)域的一個(gè)重要的研究方向。大多數(shù)對(duì)于自動(dòng)文本分類的研究都集中在基于主題的文本分類上。除了文本的主題之外，文本還有很多其他重要的特征對(duì)信息檢索起到很關(guān)鍵的作用。例如，對(duì)于文本的風(fēng)格或者流派(文章是一篇社論還是通知，是促銷性還是資訊性的，作者歸屬等)進(jìn)行分類，和對(duì)文本所表達(dá)的情感(文章表達(dá)的是正面的還是負(fù)面的情感及情感表達(dá)強(qiáng)弱)進(jìn)行分類。基于主題的分類與基于情感的分類有一個(gè)相同點(diǎn)就是，為了能夠正確地分類，需要找出能夠表示文檔的特征項(xiàng)，這也是所有文本分類的基本任務(wù)。對(duì)于基于主題的分類而言，找出主題詞是主要目標(biāo)，而對(duì)于情感分類而言，評(píng)論者對(duì)于某一主題的情感詞匯是主要目標(biāo)。鑒于文章的關(guān)鍵詞比較充足，有利于文章的主題分類，而對(duì)于情感的分類而言，復(fù)雜性在于要識(shí)別情感目標(biāo)，檢測(cè)混合和交疊的情感，要找出文章的情感特征就比較困難。

在現(xiàn)有的文獻(xiàn)中，不同的作者對(duì)于情感分類的任務(wù)有幾種不同的提法，除了情感分類以外，歸納起來(lái)還有以下幾種：觀點(diǎn)挖掘[1]，情感分析(檢測(cè))[2]，傾向性分析[3]，意見(jiàn)挖掘[4]等。為了不造成理解上的歧義，在這篇論文中，我們用情感分類來(lái)進(jìn)行描述。自動(dòng)情感分類被應(yīng)用到了很多有意義的領(lǐng)域，如評(píng)論的分類，產(chǎn)品聲譽(yù)的分析，輿情跟蹤，將自動(dòng)情感分類整合到問(wèn)答系統(tǒng)[5]和多文檔摘要系統(tǒng)中，博客情緒，政治觀點(diǎn)分析[6,7]及關(guān)注熱點(diǎn)分析[8,9]等。雖然有一些國(guó)際會(huì)議對(duì)情感檢測(cè)的問(wèn)題進(jìn)行了專門的探討，如ACL、AAAI、/c_index.html.[35]Li D, Ma Y T, Guo J L.Words semantic orientation classification based on HowNet[J].The Journal of China Universities of Posts and Telecommunications, 2009,16(1): 106-110.[36]徐琳宏，林鴻飛，潘宇，等.情感詞匯本體的構(gòu)造[J].情報(bào)學(xué)報(bào)，2008，27(2)：180-185.[37]南瑞賢，李德玉，王素格，等.基于旅游評(píng)論文本的情感分類實(shí)驗(yàn)研究[J].山西大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2008，31：50-52.[38]Zhang Z Q, Li Y J, Ye Q, et al.Sentiment Classification for Chinese Product Reviews Using an Unsupervised Internet-based Method[C]//2008 International Conference on Management Science & Engineering, USA, 2008: 3-9.[39]Rauber A, Muller-Kogler A.Integrating automatic genre analysis into digital libraries[C]//First ACM-IEEE joint conference on digital libraries, 2001.[40]Dimitrova M, Finn A, Kushmerick N, et al.Web genre visualization[C]//Conference on human factors in computing systems, 2002.[41]Taboada M, Gillies M A, McFetridge P.Sentiment classification techniques for tracking literary reputation[C]//Proceedings of LREC 2006 workshop “Towards Computational Models of Literary Analysis”, 2006:36-43.[42]Gamon M.Linguistic correlates of style: authorship classification with deep linguistic analysis features[C]//Proceedings of the 20th international conference on Computational Linguistics, 2004.[43]Shlomo A, Whitelaw C, Chase P, et al.Stylistic Text Classification Using Functional Lexical Features[J].Journal of the American Society for Information Science and Technology, 2007,58(6): 802-822.[44]Efron M.Cultural orientation: Classifying subjective documents by cociation analysis[C]//Proceedings of the AAAI fall symposium on style and meaning in language, 2004: 41-48.[45]Riloff E, Wiebe J.Learning extraction patterns for subjective expressions[C]//Proceedings of the 2003 conference on EMNLP, 2003: 105-112.[46]Wiebe J, Riloff E.Creating subjective and objective sentence classifiers from unannotated texts[C]//Sixth international conference on intelligent text processing and computational linguistics, 2005.[47]Hatzivassiloglou V, Wiebe J.Effects of adjective orientation and gradability on sentence subjectivity[C]//Proceedings of the 18th international conference on computational linguistics, 2000.[48]Wiebe J.Learning subjective adjectives from corpora[C]//AAAI/IAAI, 2000: 735-740.[49]Wiebe J, Wilson T, Bruce R, et al.Martin M.Learning subjective language[C]//Technical Report TR-02-100.Department of Computer Science, University of Pittsburgh, Pittsburgh: Pennsylvania, 2002.[50]Yu H, Hatzivassiloglou V.Towards answering opinion questions: Separating facts from opinions and identifying the polarity of opinion sentences[C]//Proceedings of the 2003 conference on empirical methods in natural language processing, 2003: 129-136.[51]Esuli A, Sebastiani F.Determining the semantic orientation of terms through gloss classification[C]//Proceedings of CIKM-05, the ACM SIGIR conference on information and knowledge management.Bremen: DE, 2005.[52]Morinaga S, Yamanishi K, Tateishi K, et al.Mining Product Reputations on the web[C]//the 8th ACM SIGKDD international conference on Knowledge discovery and data mining.Canada: Edmonton, Alberta, 2002.[53]Pang B, Lee L.A sentimental education: Sentiment analysis using subjectivity summarization based on minimum cuts[C]// Proceedings 42nd ACL, Barcelona, Spain, 2004: 271-278.[54]Kennedy A, Inkpen D.Sentiment classification of movie reviews using contextual valence shifters[J].Computational Intelligence, 2006,22(2): 110-125.[55]Ye Q, Zhang Z Q, Law R.Sentiment classification of online reviews to travel destinations by supervised machine learning approaches[J].Expert Systems with Applications, 2009,36：6527-6535.[56]Gamon M.Sentiment classification on customer feedback data: Noisy data, large feature vectors, and the role of linguistic analysis[C]// Proceedings the 20th international conference on computational linguistics, 2004: 841-847.[57]Zhang C L, Zeng D, Xu Q Y, et al.Polarity Classification of Public Health Opinions in Chinese[C]// Yang C C, et al.ISI 2008 Workshops, LNCS 5075,2008: 449-454.[58]Hu M, Liu B.Mining and summarizing customer reviews[C]// KDD'04, Seattle, Washington, USA, 2004.[59]Liu B, Hu M, Cheng J.Opinion observer: Analyzing and comparing opinions on the web[C]// Proceedings of the 14th international world wide web conference(004km.cnLP-05, Jeju Island, Republic of Korea, 2005.[69]Kim S M, Hovy E.Identifying and analyzing judgment opinions[C]//Proceedings of HLT/NAACL-2006, New York City, 2006.[70]Chan K T, King I.Let's Tango-Finding the Right Couple for Feature-Opinion Association in Sentiment Analysis[C]//Theeramunkong T, et al.PAKDD 2009, LNAI5476, 2009: 741-748.[71]Li J, Sun M S.Experimental Study on Sentiment Classification of Chinese Review Using Machine Learning Techniques[C]//IEEE Xplore, 2007: 393-400.[72]Zhang Z Q, Li Y J, Ye Q, et al.Sentiment Classification for Chinese Reviews Using Machine Learning Methods Based on String Kernel[C]//Third 2008 International Conference on Convergence and Hybrid Information Technology, 2008: 909-914.[73]Li L L, Yao T F.Kernel-based Sentiment Classification for Chinese Sentence[C]//Sixth International Conference on Advanced Language Processing and Web Information Technology, 2007: 27-32.[74]Wiebe J, Wilson T, Cardie C.Annotating expressions of opinions and emotions in language[J].Language Resources and Evaluation, 2005, 2(1):165-210.[75]Prabowo R, Thelwall M.Sentiment analysis: A combined approach[J].Journal of Informetrics, 2009, 3:143-157.[76]Turney P D, Littman M L.Unsupervised learning of semantic orientation from a hundred-billion-word corpus[R].Technical Report ERB-1094.National Research Council Canada, Institute for Information Technology, 2002.[77]Turney P D, Littman M L.Measuring Praise and Criticism: Inference of Semantic Orientation from Association[J].ACM Transactions on Information Systems, 2003, 21(4): 315-346.[78]Matsumoto S, Takamura H, Okumura M.Sentiment classification using word sub-sequences and dependency sub-trees[C]//PAKDD 2005, 2005: 301-311.

第三篇：自動(dòng)生成論文目錄的方法

[轉(zhuǎn)] 論文自動(dòng)生成目錄的方法，大四的

寫畢業(yè)論文的注意了：怎樣自動(dòng)生成目錄（以后要用，怕沒(méi)了，轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)自己看）

微軟WORD這個(gè)軟件大家都很熟悉，但有不少功能我們并沒(méi)有用到，其中不乏非常實(shí)用的。今兒個(gè)我給大家介紹一下如何用WORD自動(dòng)生成目錄。這對(duì)那些用WORD寫書，寫論文的朋友很有幫助。

優(yōu)點(diǎn)：用WORD根據(jù)文章的章節(jié)自動(dòng)生成目錄不但快捷，而且閱讀查找內(nèi)容時(shí)也很方便，只是按住Ctrl點(diǎn)擊目錄中的某一章節(jié)就會(huì)直接跳轉(zhuǎn)到該頁(yè)，更重要的是便于今后修改，因?yàn)閷懲甑奈恼码y免多次修改，增加或刪減內(nèi)容。倘若用手工給目錄標(biāo)頁(yè)，中間內(nèi)容一改，后面頁(yè)碼全要改是一件很讓人頭痛的事情。應(yīng)該自動(dòng)生成的目錄，你可以任意修改文章內(nèi)容，最后更新一下目錄就會(huì)重新把目錄對(duì)應(yīng)到相應(yīng)的頁(yè)碼上去。

步驟：（以下內(nèi)容在WORD2003中操作，其它版本W(wǎng)ORD略有差別，但大同小異。）

1．在[格式]中選[樣式與格式]

2．出現(xiàn)右邊的一條“樣式格式”欄，這里面主要就是用到標(biāo)題1，標(biāo)題2，標(biāo)題3。把標(biāo)題1，標(biāo)題2，標(biāo)題3分別應(yīng)用到文中各個(gè)章節(jié)的標(biāo)題上。例如：文中的“第一章 制冷概論”我們就需要用標(biāo)題1定義。而“1.1制冷技術(shù)的發(fā)展歷史”就用標(biāo)題2定義。如果有1.1.1×××那就用標(biāo)題3來(lái)定義。

3．當(dāng)然標(biāo)題1，標(biāo)題2，標(biāo)題3的屬性（如字體大小，居中，加粗，等等）可以自行修改的。修改方法：右鍵點(diǎn)擊“標(biāo)題1”選“修改”，會(huì)彈出修改菜單，您可以根據(jù)自己的要求自行修改。

4．用標(biāo)題1，2，3分別去定義文中的每一章節(jié)。定義時(shí)很方便，只要把光標(biāo)點(diǎn)到“第一章 制冷概論”上，然后用鼠標(biāo)左鍵點(diǎn)一下右邊的標(biāo)題1，就定義好了；同樣方法用標(biāo)題2，3定義1.1；1.1.1；依此類推，第二章，第三章也這樣定義，直到全文節(jié)尾。

5．當(dāng)都定義好后，我們就可以生成目錄了。把光標(biāo)移到文章最開頭你要插入目錄的空白位置，選[插入]--[引用]--[索引和目錄](méi)

6．選第二個(gè)選項(xiàng)卡[目錄](méi)，然后點(diǎn)右下的確定。就OK了。

上圖就是自動(dòng)生成的目錄

7．當(dāng)你重新修改文章內(nèi)容后，你需要更新一下目錄，方法是：在目錄區(qū)域內(nèi)，點(diǎn)右鍵，選[更新域]

8．當(dāng)選[更新域]后，會(huì)出現(xiàn)上圖的選框，選第二個(gè)“更新整個(gè)目錄”點(diǎn)確定。就OK了。

第四篇：?jiǎn)慰寺】贵w的制備論文 (自動(dòng)保存的)

摘 要

單克隆抗體技術(shù)是現(xiàn)代生命科學(xué)研究的重要工具,在基因和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能研究方面有著不可或缺的作用。近年來(lái),隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,出現(xiàn)了嵌合單克隆抗體和由轉(zhuǎn)基因小鼠、噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)及共價(jià)展示技術(shù)所產(chǎn)生的單克隆抗體。這些技術(shù)將有效解決單克隆抗體的鼠源性等問(wèn)題。本文主要講述制備單抗的實(shí)驗(yàn)過(guò)程，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及其影響因素進(jìn)行分析。

關(guān)鍵詞：抗體，單克隆，腫瘤，細(xì)胞融合，淋巴細(xì)胞

Abstract

The monoclonal antibody technology is the modern life sciences research important tool, has the indispensable function in the gene and the protein structure and the function research aspect.In recent years, along with the molecular biology technology's development, presented the embedment monoclonal antibody and by the transgene mouse, the bacteriophage demonstrated that the technology, the ribosome demonstrated the technology and the covalence demonstrated the technology produces monoclonal antibody.These technologies effective addressing monoclonal antibody questions and so on mouse source.This article mainly prepares Shan Kang the new technology to the above several kinds to make a summary and analysis of factors.Keywords:antibodi,monoclonal, neoplasms,cell fusion,lymphocyte

目錄

1.前言....................................................................................................................4

1.1國(guó)外現(xiàn)代生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的現(xiàn)狀............................................................4 1.2我國(guó)現(xiàn)代生物技術(shù)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的現(xiàn)狀.....................................................4 2.文獻(xiàn)綜述.............................................................................................................5

2.1單克隆抗體的概念.....................................................................................5 2.2單克隆抗體的主要特點(diǎn)..............................................................................5 2.3單克隆抗體的應(yīng)用..................................................................................6 3實(shí)驗(yàn)方法.............................................................................................................9

3.1材料和方法：..........................................................................................9

3.1.1材料..............................................................................................9 3.1.2.方法............................................................................................10

4.結(jié)果與討論.......................................................................................................11

4.1細(xì)胞融合結(jié)果的差別..............................................................................11 4.2巨噬細(xì)胞在培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞株的作用...................................................12

4.3加入巨噬細(xì)胞的用量和時(shí)間..................................................................13 4.4不同源的巨噬細(xì)胞.................................................................................14 4.5細(xì)胞加入的量.........................................................................................15 4.6骨髓瘤細(xì)胞株的比較..............................................................................16 4.7融合劑的比較.........................................................................................17 4.8細(xì)胞融合溫度的比較..............................................................................18 4.9各種營(yíng)養(yǎng)液的比較.................................................................................19 4.10細(xì)胞換液的方案...................................................................................20 4.11微量培養(yǎng)...............................................................................................20 4.12無(wú)血清培養(yǎng)液.......................................................................................21 5.結(jié)論..................................................................................................................22 6.參考文獻(xiàn)..........................................................................................................24 7.致謝..................................................................................................................2

1.前言

現(xiàn)代生物技術(shù)制藥工業(yè)始于1971年，現(xiàn)已創(chuàng)造出35個(gè)重要治療藥物，全球大約有2500多家公司，主要產(chǎn)品有重組蛋白質(zhì)藥品、重組疫苗和診斷、治療用的單克隆機(jī)體三大類。我國(guó)自80年代在采用現(xiàn)代生物技術(shù)改造傳統(tǒng)生物技術(shù)制藥產(chǎn)業(yè)方面已取得初步成果。但我國(guó)生物技術(shù)診斷試劑、酶工程、動(dòng)植物細(xì)胞工程醫(yī)藥產(chǎn)品、現(xiàn)代生物技術(shù)支撐技術(shù)、后處理技術(shù)和制劑技術(shù)等方面與國(guó)外還存在差距。

1.1國(guó)外現(xiàn)代生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的現(xiàn)狀

自1971年Cetus公司成立至今，現(xiàn)代生物技術(shù)制藥工業(yè)已走完了二十五年的路程，創(chuàng)造出35個(gè)重要的治療藥物，目前已在治療癌癥、多發(fā)性硬化癥、貧血、發(fā)育不良，糖尿病、肝炎、心力衰竭、血友病、囊性纖維變性和一些罕見(jiàn)的遺傳性疾病中取得良好效果。在醫(yī)藥工業(yè)中，傳統(tǒng)生物技術(shù)（包括近代生物技術(shù)）已為人類提供了許多重要藥品，在保障人類生命健康和推動(dòng)社會(huì)進(jìn)步中發(fā)揮了巨大作用；現(xiàn)代生物技術(shù)以其特有的高新技術(shù)又為人類提供了傳統(tǒng)生物技術(shù)難以獲得的極微量的珍貴藥品。由于這一系列現(xiàn)代生物技術(shù)新型藥物的出現(xiàn)，使過(guò)去無(wú)法治療的疑難疾病得到了治療。同時(shí)，應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)DNA重組，細(xì)胞融合以及細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)等現(xiàn)代生物技術(shù)發(fā)展和提高傳統(tǒng)生物技術(shù)的生產(chǎn)水平，為抗生素、氨基酸、維生素以及基體激素等藥品的生產(chǎn)，構(gòu)建了高產(chǎn)新菌株，創(chuàng)造新工藝，提高生產(chǎn)能力，降低生產(chǎn)成本，促進(jìn)生產(chǎn)發(fā)展。

1.2我國(guó)現(xiàn)代生物技術(shù)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的現(xiàn)狀

現(xiàn)代生物技術(shù)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程：我國(guó)自80年代開始進(jìn)行現(xiàn)代生物技術(shù)藥品的研究和開發(fā)，雖然起步較晚，基礎(chǔ)較差，但一開始就受到黨和國(guó)家的高度重視，并列為“863”計(jì)劃和國(guó)家重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目的主要內(nèi)容，經(jīng)過(guò)十多年的努力，特別是近五年來(lái)，現(xiàn)代生物技術(shù)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)有了突破性的進(jìn)展，到1998年7月底我國(guó)已有十四種現(xiàn)代生物技術(shù)藥品和疫苗投入生產(chǎn)，據(jù)初步統(tǒng)計(jì)，1997年的工業(yè)總產(chǎn)值約20億（包括采用現(xiàn)代生物技術(shù)改造傳統(tǒng)生物技術(shù)后新增加的產(chǎn)值在內(nèi)）。目前我國(guó)己有近200多個(gè)現(xiàn)代生物技術(shù)制藥企業(yè)，其中約30家生產(chǎn)企業(yè)已具有不同規(guī)模的生產(chǎn)能力，陸續(xù)投入生產(chǎn)。因此，可以說(shuō)我國(guó)現(xiàn)代生物技術(shù)制藥產(chǎn)業(yè)化已經(jīng)開始。

本文主要介紹了單克隆抗體的制備過(guò)程及應(yīng)用。

2.文獻(xiàn)綜述

2.1單克隆抗體的概念

抗體是由B淋巴細(xì)胞分化形成的漿細(xì)胞合成、分泌的。每一個(gè)B淋巴細(xì)胞在成熟的過(guò)程中通過(guò)隨機(jī)重排只產(chǎn)生識(shí)別一個(gè)抗原的抗原受體基因。動(dòng)物脾臟有上百萬(wàn)種不同的B淋巴細(xì)胞系，重排后具有不同基因不同的B淋巴細(xì)胞合成不同的抗體。當(dāng)機(jī)體受抗原刺激時(shí)，抗原分子上的許多決定簇分別激活各個(gè)具有不同基因的B細(xì)胞。被激活的B細(xì)胞分裂增殖形成效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）和記憶B細(xì)胞，大量的漿細(xì)胞克隆合成和分泌大量的抗體分子分布到血液、體液中。如果能選出一個(gè)制造一種專一抗體的漿細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，就可得到由單細(xì)胞經(jīng)分裂增殖而形成細(xì)胞群，即單克隆。單克隆細(xì)胞將合成針對(duì)一種抗原決定簇的抗體，稱為單克隆抗體。

2.2單克隆抗體的主要特點(diǎn)

1)由于來(lái)于單克隆細(xì)胞，所分泌的抗體分子在結(jié)構(gòu)上高度均一，甚至在氨基酸序列及空間構(gòu)型上均相同；

2）由于抗體識(shí)別的是抗體分子上單一抗原位區(qū)，且所有抗體分子均相同，由此，單克隆抗體具有高度特異性；

3）產(chǎn)生該抗體的為一無(wú)性細(xì)胞系，且可長(zhǎng)期傳代并保存，為此可持續(xù)穩(wěn)定的生產(chǎn)同一性質(zhì)的抗體。2.3單克隆抗體的應(yīng)用

作為親合層析的配體:單克隆抗體能與其相應(yīng)的抗原特異性結(jié)合，因而能夠從復(fù)雜系統(tǒng)中識(shí)別出單個(gè)成分。只要得到針對(duì)某一成分的單克隆抗體，利用它作為配體，固定在層析柱上，通過(guò)親合層析，即可從復(fù)雜的混和物中分離、純化這一特定成分。如用抗人絨毛膜促性腺激素(hCG)親合層析柱，就可從孕婦尿中提取到純的hCG。與其它提取方法(沉淀法、高效疏水色譜法等)相比，具有簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)、產(chǎn)品活性高等優(yōu)點(diǎn)。

作為生物治療的導(dǎo)向武器:脂質(zhì)體是由既親水又親油的兩親磷脂組成的連續(xù)雙分子層微囊，內(nèi)含水相空間，可包裹水溶性物質(zhì)。包有細(xì)胞毒劑的脂質(zhì)體膜上偶聯(lián)抗體，可定向攻擊靶細(xì)胞，稱為免疫脂質(zhì)體。這種“導(dǎo)向治療”，在動(dòng)物試驗(yàn)與體外試驗(yàn)中已獲得滿意效果。如熱敏免疫脂質(zhì)體，由抗人乳癌細(xì)胞抗體經(jīng)疏水長(zhǎng)鏈脂肪酸修飾，抗體帶上長(zhǎng)的疏水碳鏈，部分插入脂質(zhì)體的脂雙層膜中，抗體Fab段仍暴露在膜表面，因而保持了抗體活性。熱敏免疫脂質(zhì)體可特異識(shí)別靶細(xì)胞(人乳癌細(xì)胞)，并通過(guò)相變溫度引起脂質(zhì)體破裂，從而定向釋放藥物。另外，可將化療藥物、細(xì)菌毒素、植物毒素或放射性同位素等細(xì)胞毒劑與抗腫瘤抗原的單克隆抗體直接交聯(lián)，利用其導(dǎo)向作用，使細(xì)胞毒劑定位于腫瘤細(xì)胞把它直接殺傷。這不僅提高了抗體的療效，也可降低細(xì)胞毒劑對(duì)正常細(xì)胞的毒性反應(yīng)。如應(yīng)用抗T細(xì)胞單抗和柔紅霉素結(jié)合物，在體外對(duì)非T淋巴細(xì)胞就無(wú)殺傷作用。但是，要把這種方法應(yīng)用于臨床，目前還存在不少技術(shù)難關(guān)，包括人體對(duì)鼠源單抗的排異問(wèn)題等。

作為免疫抑制劑:抗人T淋巴細(xì)胞單抗(McAb)作為一種新型免疫抑制劑，已廣泛應(yīng)用于臨床治療自身免疫疾病和抗器官移植的排斥反應(yīng)。其作用機(jī)理有賴于McAb的種類及其免疫學(xué)特性。注射抗小鼠Thy-1抗原的單抗，可以抑制小鼠同種皮膚移植的排斥反應(yīng)。此外，對(duì)用于同種骨髓移植的供體骨髓，在體外經(jīng)抗T細(xì)胞單抗加補(bǔ)體處理，能減輕移植物抗宿主病的發(fā)生。作為研究工作中的探針:單克隆抗體只與抗原分子上某一個(gè)表位(即抗原決定簇)相結(jié)合，利用這一特性就可把它作為研究工作中的探針。此時(shí)，可以從分子、細(xì)胞和器官的不同水平上，研究抗原物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系，進(jìn)而并可從理論上闡明其機(jī)理。如用熒光物質(zhì)標(biāo)記單抗作為探針，能方便地確定與其結(jié)合的相應(yīng)生物大分子(蛋白質(zhì)、核酸、酶等)在細(xì)胞中的位置和分布。

增強(qiáng)抗原的免疫原性:抗體對(duì)抗原免疫原性的增強(qiáng)作用由來(lái)已久，60年代就已發(fā)現(xiàn)幼豬對(duì)破傷風(fēng)類毒素難以產(chǎn)生抗體，注射相應(yīng)特異性抗體IgG，就能有效地提高對(duì)委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒的免疫應(yīng)答。1984年以來(lái)，Celis等發(fā)現(xiàn)，抗乙肝病毒(HBs)IgG可增強(qiáng)HBs抗原對(duì)特異性人T細(xì)胞克隆的刺激增殖，并可誘生干擾素。在小鼠中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)?shù)蛣┝康腍Bs抗原不產(chǎn)生免疫反應(yīng)時(shí)，加入抗HBs抗體組成的復(fù)合物，則可有效地誘生免疫反應(yīng)。根據(jù)這一作用，現(xiàn)已研制出乙肝的抗原—抗體復(fù)合物型治療性疫苗。

作為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)試劑:單克隆抗體作為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)試劑，更能充分發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)。單克隆抗體的特異性強(qiáng)，大大提高了抗原—抗體反應(yīng)的特異性，減少了和其它物質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)的可能性，使試驗(yàn)結(jié)果可信度更大。單抗的均一性和生物活性的單一性，使抗原—抗體區(qū)應(yīng)結(jié)果便于控制，利于標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化。目前已有許多檢驗(yàn)試劑盒用單抗制成，其主要用途如下：

(1)診斷各類病原體

這是單抗應(yīng)用最多的領(lǐng)域，已有大量診斷試劑商品供選擇。如用于診斷乙肝病毒、丙肝病毒、皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒和各種微生物、寄生蟲感染的試劑等。單抗所具有的靈敏度高、特異性好的特點(diǎn)，使其在鑒別菌種的型及亞型、病毒變異株，以及寄生蟲不同生活周期的抗原性等方面更具獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

(2)腫瘤特異性抗原和腫瘤相關(guān)抗原的檢測(cè)

用于腫瘤的診斷、分型及定位。盡管目前尚未制備出腫瘤特異性抗原的單抗，但對(duì)腫瘤相關(guān)抗原(如甲胎蛋白、腫瘤堿性蛋白和癌胚抗原)的單抗早就用于臨床檢驗(yàn)。隨著淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)的應(yīng)用，許多抗人腫瘤標(biāo)記物的雜交瘤細(xì)胞株已經(jīng)建立，這為腫瘤的早期診斷及其闡明腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，了解腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)活性及其定量研究奠定了基礎(chǔ)。用抗腫瘤單抗檢查病理標(biāo)本，可協(xié)助確定轉(zhuǎn)移腫瘤的原發(fā)部位。以放射性核素標(biāo)記單抗可用于體內(nèi)診斷，再結(jié)合X-線斷層掃描技術(shù)，可對(duì)腫瘤的大小及其轉(zhuǎn)移灶作出定量診斷。

(3)檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志

用于區(qū)分細(xì)胞亞群和細(xì)胞的分化階段。例如檢測(cè)CD系列標(biāo)志，有利于了解細(xì)胞的分化和T細(xì)胞亞群的數(shù)量和質(zhì)量變化，這對(duì)多種疾病診斷具有參考意義。細(xì)胞表面抗原的檢測(cè)，將對(duì)白血病患者的疾病分期、治療效果、預(yù)后判斷等方面有指導(dǎo)作用。組織相容性抗原檢測(cè)是移植免疫學(xué)的重要內(nèi)容，應(yīng)用單抗對(duì)其進(jìn)行位點(diǎn)檢測(cè)可得到更可信的結(jié)果。

(4)機(jī)體微量成分的測(cè)定

應(yīng)用單抗結(jié)合其它技術(shù)，可對(duì)機(jī)體的多種微量成分進(jìn)行測(cè)定。如放射免疫分析，即是利用了同位素的靈敏性和抗原-抗體反應(yīng)的特異性而建立起來(lái)的方法，它可以測(cè)至10-9～10-12g，使原來(lái)難以測(cè)定的激素能夠進(jìn)行定量分析。除了激素，還可檢測(cè)諸多酶類、維生素、藥物和其它生化物質(zhì)。這對(duì)受檢者健康狀態(tài)判斷、疾病檢出、指導(dǎo)診斷和臨床治療均具有實(shí)際意義。3實(shí)驗(yàn)方法

3.1材料和方法：

3.1.1材料

a．鹽溶液：將NaCl8克，KClO4克，Na2HPO4·2H2O1.77克，NaH2P04·H 692O0．克，葡萄糖2克，酚紅0.001克，溶于1000ml雙蒸水中，pH7.2。高壓115℃，15分鐘，保存于室溫。

標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液；RPMI1640，DMEM或者Iscove?s培養(yǎng)液，加入10％滅活血清(馬血清、小牛血清或胎牛血清)，貯存于4℃。在使用前加入2％100×谷酰胺，1％100×丙酮酸鈉，1％100 ×抗菌素(青霉素和鏈霉素各10000單位／m1)，0.05％0.1M硫乙二醇。所有培養(yǎng)液均需于兩天內(nèi)用完。

選擇性培養(yǎng)液：即所謂HAT培養(yǎng)液，100× HAT培養(yǎng)液，100×H：Hypoxanthine次黃嘌呤為10mM，必須在45℃溶解完全。100×A：Aminopterine氨基喋呤為0.04mM．必須在45℃溶解于稀釋NaOH溶液中，然后再用HCI中和。

I00×T；Thymidime胸腺嘧啶，1.6mM，在室溫中溶解。然后各溶液分別除菌過(guò)濾，分裝5m1一支，-20℃保存。HAT和HT的營(yíng)養(yǎng)液都必須在應(yīng)用前配制，方法把100×貯存液按1％加入營(yíng)養(yǎng)液即成。

細(xì)胞凍存液：為9份營(yíng)養(yǎng)濃加入l份DMSO二甲基亞砜，混勻。此時(shí)細(xì)胞株必須生長(zhǎng)良好[1]。b、骨髓瘤細(xì)胞株

BALB／c小鼠骨髓瘤細(xì)胞株，經(jīng)過(guò)克隆純化P3×63Ag8(簡(jiǎn)稱×63)和其衍生株SP—2／0，SP—2／0不產(chǎn)生球蛋白，此兩株細(xì)胞均為本研究所Dr、G、Kohler所培育，這些細(xì)胞株都適應(yīng)于各種標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液以及2.5cm2和7.5cm2的塑料培養(yǎng)瓶，分別裝入4ml或12ml營(yíng)養(yǎng)液，通入氣體為10％CO 2、7％O2和83％N2，37℃恒溫培養(yǎng)。3.1.2.方法

a、小鼠免疫

成年BALB／c小鼠各種性別均可，用流感病毒1000個(gè)血凝單位腹腔注射，作為首次免疫。7一12周后，再給200血凝單位病毒腹腔注射，作為加強(qiáng)免疫。

在加強(qiáng)免疫后4—5天，即可進(jìn)行細(xì)胞融合，處死小鼠、無(wú)菌取脾，把脾細(xì)胞輕輕壓入10m1的鹽溶液中，然后把細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)入15ml離心管中，毛細(xì)管吹打，然后至室溫中10分鐘，讓其自然下沉，吸出大約9ml上清液，不要攪動(dòng)底下的沉淀塊，然后用TURK溶液作白細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、腹腔內(nèi)巨噬細(xì)胞的采取

把成年BALB／c小鼠處死，剝開腹部皮膚，用4—5ml的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液或0.34M(＝11.6％)的蔗糖溶液注入腹腔，用18號(hào)針頭從恥骨聯(lián)合處，直接插入，把針頭朝向肝右葉上方，然后輕輕按摩腹部，再行吸出腹腔液體。每鼠可得1.5—3×105的巨噬細(xì)胞(m￠)，這些細(xì)胞可收集于塑料管中，用任何一種標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液洗細(xì)胞，并于30分鐘內(nèi)用完。c、大孔培養(yǎng)

24孔培養(yǎng)板，每孔可容2m1培養(yǎng)液，培養(yǎng)于37℃，含7%CO2/DA大氣恒溫箱中。濕度為85—95％。

換營(yíng)養(yǎng)液時(shí)，分別以無(wú)菌巴氏吸管聯(lián)接于吸引裝置上，吸出大約lml的血營(yíng)養(yǎng)液，然后用一個(gè)小口的25m1吸管，分別加入預(yù)熱的新鮮營(yíng)養(yǎng)液。

如果細(xì)胞長(zhǎng)得很密，可以用2ml吸管吸出培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)種于小瓶中，一般1.5ml細(xì)胞懸浮液可接種25㎝2的小瓶，當(dāng)小瓶中細(xì)胞長(zhǎng)至單層時(shí)，即可轉(zhuǎn)種至75cm2的瓶中。以后即可按轉(zhuǎn)種骨髓瘤細(xì)胞的方法，維持雜交瘤細(xì)胞。d、微量培養(yǎng)法

平底的微量培養(yǎng)板每孔可容納0.25mI的培養(yǎng)液，細(xì)胞培養(yǎng)條件與24孔培養(yǎng)板相同。當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)待很密時(shí)，第一步可轉(zhuǎn)入24孔培養(yǎng)板的二個(gè)孔中，加入1m1培養(yǎng)液，然后按24孔培養(yǎng)板處理。

4.結(jié)果與討論

通過(guò)體內(nèi)單克隆抗體培養(yǎng)的到以下結(jié)果，下面是對(duì)細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行的分析，并對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行討論。

4.1細(xì)胞融合結(jié)果的差別

用5×107的BALB／c小鼠脾細(xì)胞與5×106骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，方法按Kohler和Milstein（1975，1976)的方法，每批細(xì)胞融合物分裝到24個(gè)培養(yǎng)孔，培養(yǎng)28天，記錄活細(xì)胞每孔多余104者為陽(yáng)性，結(jié)果如表1所示。

表1 各次細(xì)胞融合結(jié)果的差別

實(shí)驗(yàn)

脾號(hào)

陽(yáng)性

孔

數(shù)3／24

0／

20／

223／ 22

2／

8／

24／ 2

824／24 3

0／24＋0／24

0／24＋0

／

18／24＋2

／

1／24＋0

／

2表1中融合的結(jié)果波動(dòng)很大，結(jié)果理想時(shí)，所有的培養(yǎng)孔可以都是陽(yáng)性，而不理想時(shí)則為0，而唯一確實(shí)可靠的結(jié)論是：只有在巨噬細(xì)胞活躍的培養(yǎng)孔中，才能得到抗體陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞克隆。這些培養(yǎng)孔看起來(lái)十分清亮，在最初培養(yǎng)的第一周內(nèi)，很少細(xì)胞碎片，而且這些巨噬細(xì)胞一直可存活到實(shí)驗(yàn)的結(jié)束。但巨噬細(xì)胞的存在并不是唯一的因素，在實(shí)驗(yàn)4、7、8和11中應(yīng)用了每個(gè)培養(yǎng)孔加入1×104的巨噬細(xì)胞，獲得理想結(jié)果，而相同地在實(shí)驗(yàn)3，12中也應(yīng)用1×104巨噬細(xì)胞，結(jié)果卻不理想。

4.2巨噬細(xì)胞在培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞株的作用

接下去一個(gè)實(shí)驗(yàn)，除了在實(shí)驗(yàn)的當(dāng)天給每個(gè)培養(yǎng)孔加入2×104的巨噬細(xì)胞外，其他方面都按Kohler和Milstein的方案進(jìn)行，結(jié)果見(jiàn)表2 細(xì)胞融合物的準(zhǔn)備，接種和判定都按表1方法進(jìn)行、本實(shí)驗(yàn)按表2所列于實(shí)驗(yàn)當(dāng)天加入巨噬細(xì)胞。

表2 巨噬細(xì)胞對(duì)雜交細(xì)胞的作用

實(shí)驗(yàn)

脾號(hào)

陽(yáng)性孔數(shù)

不加巨噬細(xì)胞

加巨噬細(xì)胞 2

2／24

24／24

8／23

21／24

24／24

24／24

24／24

24／24 4

0／24＋0／24

23／24

0／24＋0／24

24／24 11

18／24＋21／24

22／24 12

1／24＋0／24

24／24

由表2可得，巨噬細(xì)胞的效果十分明顯，表現(xiàn)在相同的脾臟9和10，不加巨噬細(xì)胞，沒(méi)有雜交單克隆細(xì)胞，加入巨噬細(xì)胞，結(jié)果大大增加。再如脾5，脾

6、脾12未加巨噬細(xì)胞時(shí)只有極少數(shù)雜交細(xì)胞克隆生長(zhǎng)，而加入后幾乎是90—100％都產(chǎn)生了雜交細(xì)胞的克隆。另外，在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，雖然脾12的細(xì)胞融合物在對(duì)照組中已加過(guò)了104巨噬細(xì)胞(參閱表1)但其效果并不理想，而當(dāng)?shù)诙渭尤肓硪粋€(gè)小鼠的巨噬細(xì)胞時(shí)，獲得理想結(jié)果，說(shuō)明前面的巨噬細(xì)胞是無(wú)效果的，為了避免遇上無(wú)效的巨噬細(xì)胞影響結(jié)果，應(yīng)該合并3—4只小鼠的腹腔洗出的巨噬細(xì)胞，作為喂養(yǎng)細(xì)胞。

4.3加入巨噬細(xì)胞的用量和時(shí)間

可以將投入實(shí)驗(yàn)的脾細(xì)胞的量減少10倍，其他方法則按照K6hler和M11stein(1975，1976)的方法進(jìn)行。不同劑量的巨噬細(xì)胞和不同時(shí)期加入的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 影響巨噬細(xì)胞的有關(guān)因素

加入日期

每孔加入巨噬細(xì)胞量

陽(yáng)性孔數(shù)

0

33×103

43×104

5-0

0

0

0

0

0

1

0 21

0

1Ca

4

0

0

0

0

2合計(jì)

0

--

表3說(shuō)明按照Kohler和Milstein(1975、1976)的方法，取一只BALB／c小鼠脾細(xì)胞5×106和骨留瘤細(xì)胞5×108進(jìn)行融合。融合當(dāng)天稱為“0”天，每天收集小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，并按各需要量加入培養(yǎng)孔，培養(yǎng)28天后，計(jì)算24個(gè)培養(yǎng)孔中，活細(xì)胞多于104的陽(yáng)性孔[2]。

4.4不同源的巨噬細(xì)胞

巨噬細(xì)胞來(lái)源于何種品系的動(dòng)物并不重要，來(lái)自不同種動(dòng)物的腹腔洗液，或者雜交動(dòng)物的小鼠、甚至大鼠或豚鼠的巨噬細(xì)胞都可促使雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，結(jié)果如表4

表4 用不同動(dòng)物巨噬細(xì)胞作為喂養(yǎng)細(xì)胞的比較

動(dòng)物來(lái)源

每個(gè)培養(yǎng)孔加入巨噬細(xì)胞數(shù)

總陽(yáng)性數(shù)

3×103

3×10

4105

小鼠BALB/c

52117

小鼠C57BL/6

小鼠C3H

0

321

小鼠Outbred(雜種)7

大鼠Rat

121

豚鼠Guinea pig

0

巨噬細(xì)胞來(lái)自各種動(dòng)物如表4所列，每種動(dòng)物各取了3只進(jìn)行臉皮灌洗，合并其巨噬細(xì)胞在細(xì)胞融合前一天接種于各培養(yǎng)孔，第25天時(shí)計(jì)數(shù)24個(gè)培養(yǎng)孔的陽(yáng)性數(shù)、(活細(xì)胞多于104者為陽(yáng)性。)．

另外，還試驗(yàn)了已經(jīng)建株的巨噬細(xì)胞系和在實(shí)驗(yàn)室中長(zhǎng)期傳代的巨噬細(xì)胞株，這些細(xì)胞都來(lái)自BALB／c小鼠。

4.5細(xì)胞加入的量

脾細(xì)胞參加細(xì)胞融合的用量，通過(guò)脾細(xì)胞限量試驗(yàn)可以得到結(jié)果，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 限量脾細(xì)胞雜交試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)

參加融合的脾細(xì)胞數(shù)

2×106

4×106

374 14

由表5可知4×106的脾細(xì)胞結(jié)果較好，細(xì)胞融合數(shù)較多。取BALB／c小鼠牌細(xì)胞，分別用下表所列的脾細(xì)胞量與5×106x 63骨朗瘤細(xì)胞融合，接種于24孔培養(yǎng)板中，細(xì)胞融合的前一天，每孔接種2×104腹腔巨噬細(xì)胞。培養(yǎng)24天后，每孔活細(xì)胞數(shù)多于104者為陽(yáng)性孔。4.6骨髓瘤細(xì)胞株的比較

細(xì)胞融合時(shí)脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞數(shù)如表6所列，接種于24孔塑料板，每孔并含2×104巨噬細(xì)胞，第28天記錄活細(xì)胞數(shù)大于104者為陽(yáng)性。

表6 骨髓瘤細(xì)胞株的比較

骨髓瘤細(xì)胞

參加融合的脾細(xì)胞數(shù)

總陽(yáng)性孔

數(shù)

3×106

X63

3×106

107

3×107

237 Sp2/0

3×108

0

0107

0

43×107

表6說(shuō)明，選擇合適的骨髓瘤細(xì)胞株，產(chǎn)生克隆的幾率較高，但不是都產(chǎn)生同一種抗體的。用骨髓瘤細(xì)胞x 63作為細(xì)胞融合的親代細(xì)胞，后來(lái)產(chǎn)生的存活的雜交細(xì)胞抹，實(shí)際上都帶有親代骨髓細(xì)胞瘤細(xì)胞基因密碼，因而各雜交細(xì)胞株產(chǎn)生的抗體（針對(duì)免疫原的)，都是球蛋白分子的混合物，上面帶有一個(gè)片段，就是所需要的鏈的結(jié)合物。4.7融合劑的比較

在細(xì)胞雜交時(shí)用同一種骨髓瘤細(xì)胞和同一種小鼠脾細(xì)胞，但PEG作用后的雜交細(xì)胞存活數(shù)比經(jīng)仙臺(tái)病毒作用的存活數(shù)要少，所以我們選用不同廠牌和分子量的PEG作細(xì)胞融合試驗(yàn)，表上所列數(shù)據(jù)，為培養(yǎng)23天后，計(jì)數(shù)24孔培養(yǎng)孔中的陽(yáng)性孔，結(jié)果如表7所示。

表7 PEG聚乙二醇比較表

產(chǎn)品來(lái)源

細(xì)胞融合方法

總陽(yáng)性孔

Ⅰ

Ⅱ

Ⅲ

BDH200

0

0 Merck200

0

Serva200

0

0

0

0 Baker1000

0 BDH1000

0

Koch-Light1000 5

3數(shù) Merch1000 GK 12

3Serva1000

1Merck20000

由表7說(shuō)明，所有低分子的PEG結(jié)果都差，其中有些是明顯有毒性反應(yīng)。但分子量太大陽(yáng)性數(shù)也會(huì)有所下降，因?yàn)樗鼈冞^(guò)份地粘稠，甚至加熱至45℃時(shí)，也會(huì)粘在管壁上，但當(dāng)高壓時(shí)加入等量的鹽水則較為穩(wěn)定。4.8細(xì)胞融合溫度的比較

脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞在應(yīng)用前都泡在水浴中，洗細(xì)胞時(shí)也都用低溫離心機(jī)(2℃)。偶爾有一次制備細(xì)胞時(shí)沒(méi)有進(jìn)行冷處理，而洗脾細(xì)胞時(shí)離心沉淀也在室溫進(jìn)行，得到較多的雜交細(xì)胞株，這樣重復(fù)試驗(yàn)，室溫比常規(guī)的4℃和0℃往往結(jié)果好，見(jiàn)表8。

表8 溫度對(duì)細(xì)胞融合的影響

實(shí)驗(yàn)

0-4℃

20℃

5×106

5×10 6

1/24

8/24

4/24

21/24 2

5/24

27/48

15/48

46/48 3

3/24

15/24

5/24

22/24 4

4/24

14/24

6/24

24/24 總陽(yáng)性孔數(shù)

113

脾細(xì)胞數(shù)如表8所列，分別與5×106FO細(xì)胞融合，融合溫度有0℃一4℃和20℃，在培養(yǎng)2l天時(shí)，活細(xì)胞數(shù)多于104為陽(yáng)性。4.9各種營(yíng)養(yǎng)液的比較

各種營(yíng)養(yǎng)液與血清的比較分成幾個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行，列于表9。

表9 各種營(yíng)養(yǎng)液的比較

參加細(xì)胞

DMEM＋10%血清

RPMI＋10%血清

Iscove`s＋10%血清骨髓瘤細(xì)胞 脾細(xì)胞 馬

牛

胎牛

馬

牛

胎牛

馬

牛

胎

牛

X63（5×10 6）10 6

0

5×10 6

5×10 6

5×10 6 20

15 17

20

脾細(xì)胞(三只小鼠脾細(xì)胞混合物)和骨髓瘤細(xì)胞的用量如表9所列，接種于24孔培養(yǎng)板，每孔并含有3×104的巨噬細(xì)胞，第23天確定陽(yáng)性培養(yǎng)孔數(shù)，本實(shí)驗(yàn)包括三個(gè)內(nèi)容：脾細(xì)胞的用量，RPMI培養(yǎng)液和I scove` s培養(yǎng)瓶三種血清的比較。由表9可知：DMEM、RPMI、Iscove` s三種營(yíng)養(yǎng)液都可得到較多的雜交細(xì)胞株，而對(duì)Iscove` s營(yíng)養(yǎng)液比其他培養(yǎng)液要更好些。x 63的融合物在培養(yǎng)液中若用10％馬血清雖然可以，但并不是常常都很理想。為了避免以后需要克隆限制雜交細(xì)胞的數(shù)量，我們常規(guī)應(yīng)用Iscove` s培養(yǎng)液，也選用RPMI1840，因?yàn)樗木彌_能力較強(qiáng)，不完全依賴于合適的氣體環(huán)境。Sp2/0(2×107)10 6

0

0

0

0

0

FO(5×10 6)10 6

4.10細(xì)胞換液的方案

表10 不同細(xì)胞換液方案比較

實(shí)驗(yàn)

換液方案

下列各天出現(xiàn)的陽(yáng)性孔數(shù)

總陽(yáng)性

6 8 10 12 14 16 20 24 28 Ⅰ

0

0

Ⅱ

0

07

Ⅲ

1數(shù)

Ⅰ

0

0

04

Ⅱ

0

410

1Ⅲ10 14 15

1516 17

表10試驗(yàn)了在細(xì)胞融合后，直接加入HAT選擇培養(yǎng)波，讓其直接暴露于高濃度的氨基喋呤中，比較結(jié)果，把細(xì)胞融合物直接接種于HAT培養(yǎng)液中為優(yōu)。

4.11微量培養(yǎng)

表11 在微量培養(yǎng)板上作雜交瘤細(xì)胞株選擇培養(yǎng)

細(xì)胞融合物

培養(yǎng)板 FO細(xì)胞

脾細(xì)胞

標(biāo)準(zhǔn)板

微量5×10 6

2×10

板

6×10 6

15×10 6

10 7

2×10 6

6×10 6

15×10

2×10 7

2×10 6

6×10

15×10

表11可知，微量孔培養(yǎng)的雜交細(xì)胞數(shù)常多于常規(guī)培養(yǎng)孔，最高可達(dá)106，細(xì)胞融合混合物為6×106。脾細(xì)胞和107FO骨髓瘤細(xì)胞，接種整個(gè)微量培養(yǎng)板可希望獲得12—16個(gè)雜交瘤細(xì)胞抹。

高度免疫的BALB／c小鼠脾細(xì)胞和FO骨髓瘤細(xì)胞融合，用50％PEG 4000作為促進(jìn)劑，細(xì)胞數(shù)皆列于下表，分別接種于24孔培養(yǎng)板(每孔含有2×104巨噬細(xì)胞于2mIHAT)和微量培養(yǎng)板(即96孔板，每孔含有3×103巨噬細(xì)胞于0.25HAT培養(yǎng)液中。)于第21天計(jì)算陽(yáng)性數(shù)[3]。

4.12無(wú)血清培養(yǎng)液

檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞株的產(chǎn)物常規(guī)是應(yīng)用其細(xì)胞培養(yǎng)瓶其中含有血清，也有胎牛血清。對(duì)檢測(cè)工作來(lái)說(shuō)并不希望有這些東西，因?yàn)橥鶗?huì)干擾測(cè)定，或者對(duì)某些測(cè)定帶來(lái)較高的基礎(chǔ)值，也會(huì)造成單克隆產(chǎn)品分離和純化的困難、我們?cè)囉昧藰?biāo)記氨基酸或無(wú)血清培養(yǎng)液以取得在這種條件下的單克隆抗體。

用MEM作基礎(chǔ)，加入標(biāo)記物可獲得理想的結(jié)果，可以從商業(yè)購(gòu)得缺乏亮氨酸的MEM，原液的配制：無(wú)亮氨酸的MEM 45ml，加入[14C]亮氨酸5m1[14C]leucinc(250uCi)、lml10％葡萄糖和0.5m120％牛血清蛋白，4℃?zhèn)溆茫谑褂们芭R時(shí)配制應(yīng)用液，即10ml原油十0.2m1100×谷酰胺十0.10m1100×丙酮酸鈉十0.2m1100×V itra—mines十 0.1m1100×抗菌素和0.01ml 0.1M硫乙二醇，接種106活細(xì)胞于此培養(yǎng)液中，37℃，過(guò)夜，此時(shí)最好應(yīng)用玻璃管并加塞[4]。

在實(shí)驗(yàn)中，所有的雜交瘤細(xì)胞克隆只在Iscovs`s完全培養(yǎng)液中才能生長(zhǎng)旺盛(GuiL—bert and lscove，1976Iscove和M elches，1978)，其中含有轉(zhuǎn)移素transferrin和血清蛋白為唯一的蛋白成份，雖然配制這種培養(yǎng)液比較麻煩，但能支持雜交細(xì)胞抹繼續(xù)生長(zhǎng)和分泌抗體、每天能產(chǎn)生純抗體10-20mg。

5.結(jié)論

通過(guò)小鼠免疫培養(yǎng)，腹腔內(nèi)巨噬細(xì)胞的采取，微量培養(yǎng)，大孔培養(yǎng)，可得到一定量的雜交瘤細(xì)胞，同時(shí)分析了實(shí)驗(yàn)的一些影響因素，結(jié)果如下。

（1）.各次細(xì)胞融合結(jié)果的差別，只有在巨噬細(xì)胞活躍的培養(yǎng)孔中，才能得到抗體陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞克隆。

（2）.巨噬細(xì)胞對(duì)雜交細(xì)胞的作用，不加巨噬細(xì)胞，沒(méi)有雜交單克隆細(xì)胞，加入巨噬細(xì)胞，結(jié)果大大增加。

（3）.加入巨噬細(xì)胞的用量和時(shí)間，投入實(shí)驗(yàn)的脾細(xì)胞的量減少10倍，培養(yǎng)28天后，活細(xì)胞多于104的陽(yáng)性孔。（4）.用不同動(dòng)物巨噬細(xì)胞作為喂養(yǎng)細(xì)胞，巨噬細(xì)胞來(lái)源于何種品系的動(dòng)物并不重要，來(lái)自不同種動(dòng)物的腹腔洗液，或者雜交動(dòng)物的小鼠、甚至大鼠或豚鼠的巨噬細(xì)胞都可促使雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)

（5）.限量脾細(xì)胞雜交試驗(yàn)可知脾細(xì)胞加入量為4×106時(shí)，結(jié)果較好，細(xì)胞融合數(shù)較多。

（6）.骨髓瘤細(xì)胞株的比較中，選擇合適的骨髓瘤細(xì)胞株（x63），產(chǎn)生單克隆抗體的幾率較高，但不是都產(chǎn)生同一種抗體的。

（7）.融合劑 PEG聚乙二醇的比較中，所有低分子的PEG結(jié)果都差，其中有些是明顯有毒性反應(yīng)，但分子量太大陽(yáng)性數(shù)也會(huì)有所下降。

（8）.細(xì)胞融合溫度的比較中，室溫比常規(guī)的4℃和0℃往往結(jié)果較理想。

（9）.各種營(yíng)養(yǎng)液的比較，DMEM、RPMI、Iscove` s三種營(yíng)養(yǎng)液都可得到較多的雜交細(xì)胞株，而對(duì)Iscove` s營(yíng)養(yǎng)液比其他培養(yǎng)液要更好些。

（10）.不同細(xì)胞換液方案比較中，細(xì)胞融合物直接接種于HAT培養(yǎng)液中為優(yōu)。

（11）.在微量培養(yǎng)板上作雜交瘤細(xì)胞株選擇培養(yǎng)，可知微量孔培養(yǎng)的雜交細(xì)胞數(shù)常多于常規(guī)培養(yǎng)孔。

（12）.在無(wú)血清培養(yǎng)液中，所有的雜交瘤細(xì)胞克隆只在Iscovs`s完全培養(yǎng)液中才能生長(zhǎng)旺盛。

6.參考文獻(xiàn)

[1]齊香君，現(xiàn)代生物制藥工藝學(xué)[M]，化學(xué)工業(yè)出版社，2003.9 [2]甄永蘇等，抗體工程藥物[M]，化學(xué)工業(yè)出版社，2002.5 [3]李元等，現(xiàn)代工程藥物[M]，化學(xué)工業(yè)出版社，2002.5 [4]張和君，單克隆抗體細(xì)胞免疫反應(yīng)技術(shù)[M]，云南科技出版社，1985.2 7.致謝

本課題在選題及研究過(guò)程中得到杜老師的悉心指導(dǎo)。在杜老師的精心指導(dǎo)下，為我們開拓研究思路，順利完成論文。杜老師一絲不茍的作風(fēng)，嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的態(tài)度，踏踏實(shí)實(shí)的精神，不僅授我以文，而且教我做人，給以我們終生受益無(wú)窮之道。對(duì)杜老師的感激之情是無(wú)法用言語(yǔ)表達(dá)的。

第五篇：超聲自動(dòng)探測(cè)國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀、發(fā)展趨勢(shì)

一、國(guó)內(nèi)外技術(shù)現(xiàn)狀、發(fā)展趨勢(shì)

1.1 超聲自動(dòng)檢測(cè)與無(wú)損評(píng)價(jià)技術(shù)研究意義

超聲探傷技術(shù)作為一種重要的無(wú)損檢測(cè)技術(shù)，在現(xiàn)代工業(yè)的各個(gè)方面都有著廣泛的應(yīng)用，體現(xiàn)在改進(jìn)產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)品設(shè)計(jì)、加工制造、成品檢驗(yàn)以及設(shè)備服役的各個(gè)階段；體現(xiàn)在新材料和新技術(shù)的研究中；也體現(xiàn)在保證機(jī)器零件、最終產(chǎn)品的可靠性和安全性上，世界各國(guó)對(duì)它的研究都非常重視。例如美國(guó)為了保持它在世界上科學(xué)技術(shù)的領(lǐng)先地位，早在1979年的政府工作報(bào)告中提出要成立的六大技術(shù)中心中，無(wú)損檢測(cè)技術(shù)便是其中之一。日本最近制定的21世紀(jì)優(yōu)先發(fā)展四大技術(shù)領(lǐng)域之一的設(shè)備延壽技術(shù)中，也把無(wú)損探傷放在十分重要的位置。另外，無(wú)損探傷技術(shù)所能帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)效率也是明顯的，目前我國(guó)的投入不比日本少，而國(guó)民生產(chǎn)總值只有日本的三分之一左右，這種現(xiàn)象主要是由于我國(guó)產(chǎn)品質(zhì)量上存在問(wèn)題而導(dǎo)致大量產(chǎn)品報(bào)廢所致。據(jù)測(cè)算，我國(guó)不良品的年損失約2000億元。再者，無(wú)損探傷的經(jīng)濟(jì)效益還表現(xiàn)在產(chǎn)品的競(jìng)爭(zhēng)能力上，在無(wú)損技術(shù)支持下提高產(chǎn)品質(zhì)量和可靠性，是保證產(chǎn)品進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)的決定性因素之一。例如，日本小汽車生產(chǎn)中30％零件采用無(wú)損檢測(cè)后質(zhì)量迅速超過(guò)美國(guó)，市場(chǎng)擴(kuò)大而嚴(yán)重威脅美國(guó)的汽車工業(yè)，德國(guó)奔馳汽車公司對(duì)汽車的幾千個(gè)零件全部進(jìn)行無(wú)損檢測(cè)后，運(yùn)行里程增加一倍，大大提高了產(chǎn)品在國(guó)際市場(chǎng)的競(jìng)爭(zhēng)能力。

鋁板在國(guó)民生產(chǎn)總值中的地位。由于板材缺陷而導(dǎo)致飛機(jī)失效甚至失事的所造成經(jīng)濟(jì)損失。

采用自動(dòng)超聲檢測(cè)能節(jié)省人力。

研究超聲無(wú)損評(píng)價(jià)技術(shù)對(duì)鋁板的質(zhì)量控制具有重大的意義。傳統(tǒng)的超聲檢測(cè)多是依據(jù)檢測(cè)者的經(jīng)驗(yàn)對(duì)超聲回波進(jìn)行主觀的評(píng)價(jià)。這種方法太主觀，檢測(cè)的可靠性和效率十分有限。隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)的快速發(fā)展，將信號(hào)分析與處理技術(shù)、成像技術(shù)、人工智能技術(shù)和自動(dòng)化控制技術(shù)應(yīng)用于超聲檢測(cè)已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)。不僅可以通過(guò)圖像來(lái)展現(xiàn)內(nèi)部缺陷，而且可以利用現(xiàn)代數(shù)字信號(hào)處理技術(shù)來(lái)進(jìn)行缺陷的定性定量分析和無(wú)損評(píng)價(jià)。

1.2 超聲檢測(cè)技術(shù)國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀、發(fā)展趨勢(shì)

1.2.1 超聲檢測(cè)方法和技術(shù)現(xiàn)狀 1)國(guó)內(nèi)現(xiàn)狀

國(guó)內(nèi)超聲檢測(cè)技術(shù)的主要研究領(lǐng)域可以分為檢測(cè)方法研究和設(shè)備研發(fā)。在設(shè)備研發(fā)方面主要為數(shù)字化超聲波探傷儀、TOFD超聲檢測(cè)系統(tǒng)、超聲成像系統(tǒng)和磁致伸縮超聲導(dǎo)波檢測(cè)系統(tǒng)；在檢測(cè)方法和技術(shù)方面，主要為自動(dòng)超聲檢測(cè)技術(shù)、超聲成像檢測(cè)技術(shù)、人工智能技術(shù)、TOFD超聲檢測(cè)技術(shù)和超聲導(dǎo)波檢測(cè)技術(shù)。

2000年以來(lái)，國(guó)內(nèi)研究機(jī)構(gòu)和高校主要側(cè)重于超聲相控陣技術(shù)。例如清華大學(xué)的施克仁教授和鮑曉宇博士、電子測(cè)試技術(shù)國(guó)防科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室利用數(shù)字波形相位延時(shí)技術(shù)，設(shè)計(jì)實(shí)現(xiàn)了多通道相控陣超聲檢測(cè)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，達(dá)到了很高的發(fā)射延時(shí)分辨率[1]。中國(guó)石油天然氣管道科學(xué)院聯(lián)合上海電氣自動(dòng)化設(shè)計(jì)研究所等單位，通過(guò)對(duì)超聲波相位控制和電子方法，實(shí)現(xiàn)了超聲波聲束聚焦、偏轉(zhuǎn)。與國(guó)外同類產(chǎn)品相比，增加了橫向裂紋的掃描檢測(cè)、三維動(dòng)態(tài)缺陷顯示功能。

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)科研機(jī)構(gòu)開始側(cè)重于研究數(shù)字化多通道超聲檢測(cè)技術(shù)，并結(jié)合自動(dòng)化控制技術(shù)，用于中小型管道類、曲面類構(gòu)件的無(wú)損檢測(cè)。例如，南京航空航天大學(xué)的芮華、徐大專把傳統(tǒng)的超聲波無(wú)損檢測(cè)技術(shù)和先進(jìn)的虛擬儀器、數(shù)字信號(hào)處理、嵌入式操作系統(tǒng)等技術(shù)相結(jié)合，研制了一種新型滿足了自動(dòng)化探傷中高重復(fù)頻率(>1kbp s)和實(shí)時(shí)報(bào)警等關(guān)鍵性能的要求的數(shù)字化超聲波自動(dòng)探傷系統(tǒng)[2]。

國(guó)內(nèi)研究的總體現(xiàn)狀是，大多局限于聲場(chǎng)理論的探討和國(guó)外已有產(chǎn)品的仿制，缺少新的檢測(cè)技術(shù)、檢測(cè)方法以及檢測(cè)系統(tǒng)設(shè)計(jì)方面的研究。換能器的研制上沒(méi)有創(chuàng)新，為了達(dá)到聚焦和偏轉(zhuǎn)的目的通常只考慮數(shù)字延時(shí)，幾乎都未考慮強(qiáng)度控制。國(guó)內(nèi)外超聲相控陣的檢測(cè)儀器價(jià)格昂貴，無(wú)法實(shí)現(xiàn)可控強(qiáng)度聚焦和偏轉(zhuǎn)。2)國(guó)外現(xiàn)狀

國(guó)內(nèi)外對(duì)超聲檢測(cè)技術(shù)的研究已經(jīng)十分深入，特別是近年來(lái)國(guó)外對(duì)相控陣超聲檢測(cè)技術(shù)的研究日趨活躍，例如在造船工業(yè)、核工業(yè)、航空工業(yè)等質(zhì)量要求高的行業(yè)，開始引入超聲相控陣技術(shù)進(jìn)行缺陷檢測(cè)。1.2.2 超聲檢測(cè)儀器現(xiàn)狀 1)國(guó)內(nèi)現(xiàn)狀

五十年代末六十年代初，國(guó)內(nèi)科研單位進(jìn)口了波蘭產(chǎn)超聲儀，并進(jìn)行仿制生產(chǎn)。目前已經(jīng)形成自己的研制和生產(chǎn)基地。許多廠家，如廣東汕頭超聲儀器研究所、中科院武漢物理研究所、武漢科聲、南通精密儀器、鞍山美斯等公司和研究機(jī)構(gòu)都推出了自己的超聲波探傷儀系列產(chǎn)品。其中一些單通道手持檢測(cè)儀的技術(shù)水平也已相當(dāng)接近國(guó)外同類產(chǎn)品的，但數(shù)字式多通道探傷儀（用于大型板材的自動(dòng)化超聲波探傷）的研制還基本處于起步階段。直到1988年鞍山鋼鐵公司從日本購(gòu)入了一套二手厚鋼板自動(dòng)探傷設(shè)備，在生產(chǎn)中取得了比較好的效果后，帶動(dòng)了國(guó)內(nèi)鋼板自動(dòng)探傷設(shè)備的開發(fā)。目前國(guó)內(nèi)在大型板材的探傷設(shè)備上，已經(jīng)取得了一定的成績(jī)[3]。例如武漢的中國(guó)科學(xué)院物理研究所推出的KS-128和KS-64兩種型號(hào)的探傷系統(tǒng)，以及鞍山美斯探傷設(shè)備公司研制的MS-8nB型多通道數(shù)字式超聲波探傷儀。分別用于在線檢測(cè)和離線檢測(cè)。汕頭超聲電子研制的國(guó)產(chǎn)64路檢測(cè)通道、實(shí)現(xiàn)動(dòng)態(tài)聚焦功能的CTS-2108便攜式超聲相控陣探傷儀，采用開放式結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，可隨時(shí)擴(kuò)展更多檢測(cè)通道。雖然也具有線掃和扇掃功能，但還不能達(dá)到一次同時(shí)多角度檢測(cè)，與國(guó)外產(chǎn)品存在一定的差距。

數(shù)字化超聲波探傷儀配套機(jī)械傳動(dòng)裝置構(gòu)成自動(dòng)超聲檢測(cè)裝置，國(guó)內(nèi)的一些公司已經(jīng)有相關(guān)產(chǎn)品。例如，武漢中科創(chuàng)新技術(shù)公司等國(guó)內(nèi)數(shù)10家公司生產(chǎn)的便攜式和多通道數(shù)字化超聲探傷儀，通道數(shù)多達(dá)128個(gè)，采樣率最高可達(dá)100MHz，已經(jīng)用于無(wú)縫鋼管、焊接鋼管、火車車輪、石油鉆桿和汽車關(guān)鍵部件的自動(dòng)化檢測(cè)。

國(guó)產(chǎn)超聲探傷儀在自動(dòng)化和智能化方面與國(guó)外儀器還有較大差距。國(guó)產(chǎn)超聲波探傷儀掃描范圍較小，測(cè)量還不是很精確。此外，對(duì)于大規(guī)格高性能鋁合金厚板全面積探傷成套設(shè)備，目前國(guó)內(nèi)尚沒(méi)有成熟的產(chǎn)品可供選用，而英國(guó)Ultrasonic Sciences公司的厚板水浸探傷成套設(shè)備（如圖1）技術(shù)成熟，已經(jīng)成功應(yīng)用于鋁合金厚板缺陷檢測(cè)。

圖1英國(guó)UltrasonicSciences公司生產(chǎn)的水浸探傷系統(tǒng)

2)國(guó)外現(xiàn)狀

國(guó)外公司如GE檢測(cè)科技、R/DTECH、西門子、IMASONIC等已推出商業(yè)化便攜式超聲相控陣檢測(cè)設(shè)備和大型超聲相控陣檢測(cè)系統(tǒng)。例如GEPhasorXS型相控陣超聲探傷儀可以一次同時(shí)多角度檢測(cè)，可隨意切換常規(guī)超聲和相控陣模式。使用相控陣模式時(shí)，PhasorXS的扇形掃描功能大大提高了缺陷檢測(cè)能力，只需要進(jìn)行一次掃查，就能覆蓋大面積的檢測(cè)區(qū)域，大大提高了檢測(cè)工作的效率。操作人員無(wú)需更換探頭或楔塊，就能方便地利用一個(gè)探頭達(dá)到多個(gè)角度和聚焦深度。

數(shù)字式超聲波檢測(cè)儀器的發(fā)展速度極為迅速，其探傷效率和探傷速率都有質(zhì)的飛躍。國(guó)際上處于領(lǐng)先地位的超聲探傷儀器生產(chǎn)商有：美國(guó)Panametrics公司、美國(guó)PAC公司、美國(guó)GE公司、德國(guó)Krautkraemer公司、英國(guó)Sonatest公司、英國(guó)UltrasonicSciences公司、法國(guó)SOFRATEST公司等。美國(guó)Panametrics公司產(chǎn)的EPOCH4PLUS數(shù)字式超聲探傷儀是手持便攜式的，操作簡(jiǎn)便，掃描范圍廣，可達(dá)到1-10000mm，頻率范圍大，模擬帶寬可達(dá)到25MHz，測(cè)量精度高。德國(guó)Krautkraemer公司超聲波探傷儀USN60是自動(dòng)掃查系統(tǒng)的便攜式超探儀，它集模擬性能與數(shù)字優(yōu)點(diǎn)于一身，在金屬中的掃描范圍可達(dá)到27940mm。德國(guó)KrautKraemer公司生產(chǎn)的USD10型智能超聲探傷儀能實(shí)現(xiàn)自動(dòng)探傷和顯示缺陷的位置和數(shù)值。

缺超聲自動(dòng)系統(tǒng) 1.2.3 超聲無(wú)損評(píng)價(jià)技術(shù)現(xiàn)狀 1)國(guó)內(nèi)現(xiàn)狀

針對(duì)在目前工業(yè)生產(chǎn)的超聲檢測(cè)中缺陷難以定性的問(wèn)題，國(guó)內(nèi)一些科研單位已經(jīng)開始了超聲無(wú)損評(píng)價(jià)技術(shù)的研究，并取得了一定的進(jìn)展。超聲無(wú)損評(píng)價(jià)技術(shù)主要涉及噪音信號(hào)的去除、特征提取和智能識(shí)別缺陷。例如，南昌航空工業(yè)學(xué)院的盧超、鄔冠華和吳偉在分析儀器電噪聲，材料散射噪聲和缺陷回波的小波變換特性的基礎(chǔ)上，提出一種用一個(gè)尺度間變化的門限閾值來(lái)抑制噪聲回波的小波變換系數(shù)再重構(gòu)檢測(cè)回波的方法提高信噪比[4]。浙江大學(xué)的車紅昆、項(xiàng)占琴、程耀東提出一種基于小波包變換時(shí)頻鄰域統(tǒng)計(jì)特征的自適應(yīng)消噪方法，能有效提高信號(hào)的信噪比以及不同類型缺陷信號(hào)之間的可區(qū)分性，并抑制波形失真和信號(hào)的能量衰減[5]。

中國(guó)礦業(yè)大學(xué)的弓樂(lè)、曹康和吳淼采用小波變換、小波包變換和動(dòng)態(tài)包絡(luò)等方法對(duì)超聲回波信號(hào)進(jìn)行降噪和特征提取，利用多種神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)對(duì)缺陷進(jìn)行分類，建立了一套金屬材料超聲探傷缺陷分類輔助系統(tǒng)，具有采集金屬材料中缺陷回波數(shù)據(jù)、降噪、特征提取和智能識(shí)別缺陷等主要功能[6]。華南理工大學(xué)的陳國(guó)華引入小波分析和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)技術(shù)進(jìn)行缺陷深度的智能識(shí)別，構(gòu)造了智能識(shí)別實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了裂紋型缺陷的智能識(shí)別和缺陷智能定量識(shí)別[7]。但是系統(tǒng)需要建立了數(shù)字超聲探傷缺陷樣本庫(kù)，在樣本庫(kù)中收集有各類缺陷的多種樣本，因此樣本的完備性很大程度決定了缺陷識(shí)別的準(zhǔn)確性。訓(xùn)練樣本量的多少和訓(xùn)練樣本的涵蓋范圍會(huì)直接影響到神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的推廣能力。

目前超聲波檢測(cè)的聲學(xué)理論基礎(chǔ)還主要停留在固體中少數(shù)規(guī)則缺陷（如球體、圓柱體、無(wú)限槽縫等）對(duì)超聲波的反射、固體中的晶粒對(duì)超聲波的散射，但超聲波檢測(cè)更重要的是根據(jù)已測(cè)得的散射情況推斷工件內(nèi)部存在著什么樣的缺陷。2)國(guó)外現(xiàn)狀

目前，作為提供智能識(shí)別方法之一的人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)在超聲檢測(cè)中得到了廣泛應(yīng)用。國(guó)外研究機(jī)構(gòu)在定性識(shí)別方面都開展了大量的研究。例如，Masnata及其合作者制造出了135個(gè)裂紋、夾渣等人工缺陷，采用Fisher判別方法對(duì)超聲檢測(cè)得到的參數(shù)進(jìn)行處理，選擇了波形的上升時(shí)間、下降時(shí)間、持續(xù)響應(yīng)等16個(gè)量作為神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)輸入，準(zhǔn)確地實(shí)現(xiàn)了對(duì)三種缺陷的分類識(shí)別[8]。

1.3 超聲檢測(cè)技術(shù)國(guó)內(nèi)外發(fā)展趨勢(shì)

超聲無(wú)損檢測(cè)診斷技術(shù)正向快速化、標(biāo)準(zhǔn)化、數(shù)字化、程序化和規(guī)范化地方向發(fā)展，其中包括高靈敏度、高可靠性、高效率的檢測(cè)診斷儀器和檢測(cè)診斷方法，檢測(cè)診斷和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)的指定，檢測(cè)診斷操作步驟的程序化、實(shí)施方法的規(guī)范化等。

目前國(guó)內(nèi)外已經(jīng)誕生了多種數(shù)字化便攜式探傷儀，然而自動(dòng)化超聲波探傷系統(tǒng)仍以多通道模擬方式為主。這類儀器可靠性差，檢測(cè)精度不高，操作不便，存在的問(wèn)題有模擬閘門報(bào)警方法的虛警和漏檢概率很大，檢測(cè)性能達(dá)不到實(shí)際使用要求，各通道之間參數(shù)的離散性大，不便于采用工業(yè)探傷標(biāo)準(zhǔn)；對(duì)波形的處理、存儲(chǔ)困難，不利于探傷結(jié)果的保存和分析，因此采用數(shù)字化檢測(cè)技術(shù)是必然的趨勢(shì)[2]。

現(xiàn)代超聲無(wú)損檢測(cè)技術(shù)正在向著數(shù)字化、自動(dòng)化、智能化和系統(tǒng)化方向發(fā)展，材料缺陷檢測(cè)中定位、定性、定量的可靠性將不斷得到提高[9]。世界無(wú)損檢測(cè)技術(shù)發(fā)展趨勢(shì)是廣泛采用計(jì)算機(jī)和信號(hào)處理技術(shù)來(lái)提高無(wú)損檢測(cè)技術(shù)的可靠性[10]。超聲無(wú)損檢測(cè)技術(shù)逐步從NDI和NDT向NDE過(guò)渡。超聲波無(wú)損探傷是初級(jí)階段，它的作用僅僅是在不損害零部件的前提下，發(fā)現(xiàn)其人眼不可見(jiàn)的內(nèi)部缺陷。以滿足工業(yè)設(shè)計(jì)中的強(qiáng)度要求。而超聲無(wú)損評(píng)價(jià)是超聲檢測(cè)發(fā)展的最高境界，不但要檢測(cè)缺陷的有無(wú)，還要給出材質(zhì)的定量評(píng)價(jià)，也包括對(duì)材料和缺陷的物理和力學(xué)性能的檢測(cè)及其評(píng)價(jià)。

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外在超聲探傷技術(shù)方面的研究與應(yīng)用有如下趨向：

1)由定性探傷向定量探傷和直接顯示缺陷的圖像發(fā)展。經(jīng)過(guò)上個(gè)世紀(jì)的科研積累，以及計(jì)算機(jī)圖像科學(xué)的發(fā)展，現(xiàn)在由定性地判斷缺陷的有無(wú)發(fā)展為對(duì)缺陷的位置、大小、形狀、性質(zhì)進(jìn)行定量判斷，并且利用各種成像技術(shù)直接顯示缺陷的二維、準(zhǔn)三維圖像。2)把信號(hào)處理領(lǐng)域的新成果引入到超聲信號(hào)的處理中，如各種快速計(jì)算技術(shù)，分離譜處理，小波分析等方法，使得超聲探傷的準(zhǔn)確性和快速性大大提高。3)把超聲探傷技術(shù)與自動(dòng)化技術(shù)與人工智能相結(jié)合，向在線自動(dòng)探傷和儀器的智能化發(fā)展，其中非接觸超聲探傷技術(shù)將有突破性進(jìn)展。

4)超聲探傷和斷裂力學(xué)相結(jié)合，對(duì)于重要工程構(gòu)件的壽命進(jìn)行評(píng)價(jià)。由于機(jī)械結(jié)構(gòu)裂紋缺陷的產(chǎn)生、擴(kuò)展往往伴隨著復(fù)雜的應(yīng)力變化，實(shí)現(xiàn)精確檢測(cè)，超聲檢測(cè)可用于金屬起始裂紋檢查。

5)超聲探傷和原子尺度材料缺陷的孕育與納觀材料缺陷相聯(lián)系，對(duì)被檢對(duì)象中缺陷的類型、尺寸、形狀、取向等加以檢測(cè)。

6)超聲探傷和材料的物性評(píng)價(jià)相結(jié)合，在新材料的設(shè)計(jì)、加工和工程應(yīng)用中迅速得到發(fā)展。7)把無(wú)損檢測(cè)技術(shù)直接運(yùn)用在機(jī)器生產(chǎn)的每一步，以便能夠?qū)崿F(xiàn)在線檢測(cè)和實(shí)時(shí)監(jiān)控。極大提高工業(yè)自動(dòng)化程度的提高。

8)自動(dòng)化超聲波探傷系統(tǒng)仍以多通道模擬方式為主轉(zhuǎn)為以多通道數(shù)字化超聲檢測(cè)為主。（？？？）

1.4 知識(shí)產(chǎn)權(quán)狀況及相關(guān)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的分析

參考文獻(xiàn)

[1] 鮑曉宇.相控陣超聲檢測(cè)系統(tǒng)及其關(guān)鍵技術(shù)的研究[D].清華大學(xué)材料加工工程, 2003.[2] 芮華, 徐大專.一種新型數(shù)字化超聲波自動(dòng)探傷系統(tǒng)的研制[J].儀器儀表學(xué)報(bào), 2005(09):957-960.[3] 李鋒.中厚鋼板多通道超聲自動(dòng)探傷系統(tǒng)的研究[D].天津大學(xué)精密儀器及機(jī)械, 2003.[4] 盧超, 鄔冠華, 吳偉.小波變換在超聲探傷儀檢測(cè)回波處理中的應(yīng)用[J].儀器儀表學(xué)報(bào), 2003,24(6):559-563.[5] 車紅昆, 項(xiàng)占琴, 程耀東.超聲檢測(cè)信號(hào)時(shí)頻鄰域自適應(yīng)消噪技術(shù)[J].機(jī)械工程學(xué)報(bào), 2007,43(6):226-231.[6] 弓樂(lè), 曹康, 吳淼.金屬材料超聲探傷缺陷分類輔助系統(tǒng)的研究[J].儀器儀表學(xué)報(bào), 2005,26(10):1085-1088.[7] 陳國(guó)華, 張新梅, 謝常歡, 等.超聲檢測(cè)中裂紋型缺陷深度的智能識(shí)別[J].華南理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2005(08):1-5.[8] Masnata A, Sunseri M.Neural network classification of flaws detected by ultrasonic means[J].NDT & E International, 1996,29(2):87-93.[9] 蔣志峰, 吳作倫, 吳瑞明, 等.材料缺陷超聲檢測(cè)中譜分析技術(shù)的研究[J].兵器材料科學(xué)與工程, 2009,32(4):117-120.[10] Ma H W, Zhang X H, Wei J.Research on an ultrasonic NDT system for complex surface parts[J].Journal of materials processing technology, 2002,129(1):667-670.