第一篇：現(xiàn)代生物學(xué)試驗(yàn)—遺傳與分子生物學(xué)試驗(yàn)教案

現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

（六）— 遺傳與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教案

課程名稱(chēng): 遺傳與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

英文名稱(chēng): Experiment Genetic & Molecular Biology 課程編號(hào):學(xué)科類(lèi)通修課程 課程學(xué)時(shí)：108學(xué)時(shí) 課程學(xué)分：3學(xué)分

教師姓名: 章

軍

周涵韜

楊玉榮 ……

前導(dǎo)課程：遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、動(dòng)物生物學(xué)、植物生物學(xué)、微生物學(xué)、生物化學(xué) 教學(xué)方式:實(shí)驗(yàn)及技術(shù)理論講授

考試方式:平時(shí)考核＋筆試＋實(shí)驗(yàn)操作考試 教學(xué)目標(biāo)和要求：

本課程性質(zhì)是一門(mén)研究生物遺傳規(guī)律和分子生物學(xué)的實(shí)踐課程，是生命科學(xué)相關(guān)專(zhuān)業(yè)的主干課。

本課程的學(xué)習(xí)目的與任務(wù)在于通過(guò)遺傳學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的學(xué)習(xí)和實(shí)踐，使學(xué)生加深遺傳學(xué)和分子生物學(xué)理論的認(rèn)識(shí)，掌握基本實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)，了解分子生物學(xué)技術(shù)前沿和研究方法，初步具備運(yùn)用所學(xué)知識(shí)分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力。

通過(guò)本實(shí)驗(yàn)的學(xué)習(xí)和實(shí)踐，學(xué)生掌握遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的基本原理和實(shí)驗(yàn)方法，加強(qiáng)解決生物學(xué)問(wèn)題的能力訓(xùn)練，達(dá)到本科教育水平，為繼續(xù)深造打好基礎(chǔ)。

主要內(nèi)容：

要求學(xué)生掌握遺傳學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本原理和基本知識(shí)，認(rèn)識(shí)現(xiàn)代遺傳學(xué)的發(fā)展歷史，掌握遺傳學(xué)與分子生物學(xué)的基本研究技術(shù)的方法和原理。在教學(xué)中安排了2個(gè)綜合性和設(shè)計(jì)性的開(kāi)放實(shí)驗(yàn)，還充分利用錄象、課件或多媒體做一些模擬實(shí)驗(yàn)。目的是培養(yǎng)學(xué)生的獨(dú)立操作和綜合分析實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Γ蕴岣邔W(xué)生科研素質(zhì)。

本課程分三個(gè)模塊化實(shí)驗(yàn)教學(xué)，主要知識(shí)點(diǎn)包括：

模塊一：經(jīng)典遺傳學(xué)研究方法，包含3次實(shí)驗(yàn)課和一個(gè)果蠅誘變開(kāi)放性實(shí)驗(yàn) 1.果蠅的飼養(yǎng)和觀察

2.果蠅的誘變方法及遺傳分析 3.細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)

4.轉(zhuǎn)座子引起的插入突變

模塊二：真核生物分子生物學(xué)研究方法，包含3次實(shí)驗(yàn)課和一個(gè)植物RAPD鑒定開(kāi)放性實(shí)驗(yàn)

1.真核細(xì)胞基因組提取 2.DNA純化及鑒定 3.PCR技術(shù)

4.植物染色體提取及RAPD鑒定 模塊三：原核生物分子生物學(xué)研究方法，包含4次實(shí)驗(yàn)課 1.質(zhì)粒DNA的制備

2.DNA片段從凝膠中分離 3.DNA酶切

4.DNA的連接及轉(zhuǎn)化

主要教學(xué)方法：實(shí)驗(yàn)技術(shù)及理論講授、實(shí)驗(yàn)為主，課件教學(xué)為輔；指導(dǎo)與學(xué)生的設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)、自主性實(shí)驗(yàn)相結(jié)合。

使用教材 : 遺傳與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)講義（自編）

參考書(shū)及其它: 1．劉祖洞等，遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)（第二版），高等教育出版社，1987.11 2．彭秀玲等，基因工程實(shí)驗(yàn)技術(shù)（第二版），湖南科學(xué)技術(shù)出版社，1997.1 3．林加涵等，現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，高等教育出版社，2001.10

實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

模塊一 經(jīng)典遺傳學(xué)研究方法 實(shí)驗(yàn)一 果蠅的飼養(yǎng)和觀察 實(shí)驗(yàn)二 果蠅的誘變方法及遺傳分析 實(shí)驗(yàn)三 細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)

實(shí)驗(yàn)四 轉(zhuǎn)座子引起的插入突變 模塊二 真核生物分子生物學(xué)研究方法 實(shí)驗(yàn)五 真核細(xì)胞基因組提取 實(shí)驗(yàn)六 DNA純化及鑒定 實(shí)驗(yàn)七 PCR技術(shù)

實(shí)驗(yàn)八 植物染色體提取及RAPD鑒定 模塊三 原核生物分子生物學(xué)研究方法 實(shí)驗(yàn)九 質(zhì)粒DNA的制備 實(shí)驗(yàn)十 DNA片段從凝膠中分離 實(shí)驗(yàn)十一 DNA酶切 實(shí)驗(yàn)十二 DNA的連接及轉(zhuǎn)化

以上部分由黃磊從大綱或教學(xué)信息表轉(zhuǎn)入，此處提供的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目可作為各模塊填寫(xiě)的參考，請(qǐng)各位老師修改，下面部分由各課老師按照模板填入,根據(jù)課程模塊內(nèi)容替換紅字部分，請(qǐng)?jiān)?0日之前修改完回復(fù)

模 塊1：經(jīng)典遺傳學(xué)研究方法

教學(xué)要求：

1．掌握經(jīng)典遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究背景和相關(guān)技術(shù)、方法要求，2.掌握各實(shí)驗(yàn)的基本原理，完成所有的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。3．掌握經(jīng)典遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本要求，學(xué)習(xí)方法。

4．掌握所學(xué)技術(shù)、方法在經(jīng)典遺傳學(xué)研究中的應(yīng)用和拓展。教學(xué)學(xué)時(shí)：30學(xué)時(shí) 講授的內(nèi)容：

1．模式生物介紹、果蠅雜交實(shí)驗(yàn)方法、細(xì)菌遺傳學(xué)的基本思路和原則； 2．各實(shí)驗(yàn)的基本原理，操作步驟和注意事項(xiàng)。

3．果蠅的飼養(yǎng)和觀察；果蠅的誘變方法及遺傳分析；細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)；轉(zhuǎn)座子引起的插入突變等。果蠅誘變開(kāi)放式實(shí)驗(yàn)的介紹和總結(jié)等。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目： 果蠅的飼養(yǎng)和觀察 2 果蠅的誘變方法及遺傳分析 3 細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)座子引起的插入突變

應(yīng)學(xué)習(xí)的技術(shù)和方法：果蠅的飼養(yǎng)方法，果蠅和細(xì)菌培養(yǎng)基配制方法，顯微觀察和拍照方法，細(xì)菌涂板和劃線篩選法，遺傳分析技術(shù)等。

應(yīng)學(xué)習(xí)的儀器使用方法：解剖鏡，普通離心機(jī)，恒溫培養(yǎng)箱，無(wú)菌操作臺(tái) 教學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)：

1．這是本院學(xué)生普通經(jīng)典遺傳實(shí)驗(yàn)的模塊，所以實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容的組織更新方面將會(huì)遇到困難。

2．講授部分的難點(diǎn)是研究歷史及進(jìn)展，不同方法、原理的介紹。3．與理論課的對(duì)接。難點(diǎn)的解決辦法：

1．該講的講深、講透，特別是不同方法的原理、應(yīng)用。2．細(xì)心進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)。3．提供相關(guān)的閱讀參考書(shū)。

4．更新教學(xué)內(nèi)容，提高同學(xué)們的學(xué)習(xí)興趣。

模 塊2：真核生物分子生物學(xué)研究方法

教學(xué)要求：

1．掌握真核生物分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究背景和相關(guān)技術(shù)、方法要求，2.掌握各實(shí)驗(yàn)的基本原理，完成所有的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。3．掌握真核生物分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本要求，學(xué)習(xí)方法。

4．掌握所學(xué)技術(shù)、方法在真核生物分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用和拓展。教學(xué)學(xué)時(shí)：30學(xué)時(shí) 講授的內(nèi)容：

1．分子生物學(xué)技術(shù)和進(jìn)展介紹、實(shí)驗(yàn)方法演示； 2．各實(shí)驗(yàn)的基本原理，操作步驟和注意事項(xiàng)。

3．真核細(xì)胞基因組提取，DNA純化及鑒定，PCR技術(shù)，植物染色體提取及RAPD鑒定等。

實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：

1.真核細(xì)胞基因組提取 2.DNA純化及鑒定 3.PCR技術(shù)

4.植物染色體提取及RAPD鑒定

應(yīng)學(xué)習(xí)的技術(shù)和方法：真核細(xì)胞基因組提取，DNA純化及鑒定，PCR技術(shù)，DNA電泳技術(shù)，植物染色體提取及RAPD鑒定等。

應(yīng)學(xué)習(xí)的儀器使用方法：離心機(jī)，無(wú)菌操作臺(tái)，PCR儀，紫外分光儀，電泳儀 教學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)：

1．這是本院學(xué)生真核生物分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的入門(mén)模塊，所以實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容的組織實(shí)施方面將會(huì)遇到困難。2．講授部分的難點(diǎn)是研究方法新進(jìn)展，不同方法、原理的介紹和應(yīng)用。3．與理論課的對(duì)接。難點(diǎn)的解決辦法：

1.實(shí)驗(yàn)教學(xué)錄像的演示。

2.講解實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)，特別是不同方法的原理、應(yīng)用。3.細(xì)心進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)。4.提供相關(guān)的閱讀參考書(shū)。

模 塊3：原核生物分子生物學(xué)研究方法

教學(xué)要求：

1．掌握原核生物分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究背景和相關(guān)技術(shù)、方法要求，2.掌握各實(shí)驗(yàn)的基本原理，完成所有的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。3．掌握原核生物分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本要求，學(xué)習(xí)方法。

4．掌握所學(xué)技術(shù)、方法在原核生物分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用和拓展。教學(xué)學(xué)時(shí)：30學(xué)時(shí) 講授的內(nèi)容：

1．原核生物分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)介紹、細(xì)菌分子生物學(xué)的基本思路和原則； 2．各實(shí)驗(yàn)的基本原理，操作步驟和注意事項(xiàng)。

3．質(zhì)粒DNA的制備，DNA片段從凝膠中分離DNA酶切，DNA的連接及轉(zhuǎn)化等。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：

1.質(zhì)粒DNA的制備 2.DNA片段從凝膠中分離 3.DNA酶切

4.DNA的連接及轉(zhuǎn)化

應(yīng)學(xué)習(xí)的技術(shù)和方法：質(zhì)粒DNA的制備，DNA片段從凝膠中分離DNA酶切，DNA電泳技術(shù)，DNA的連接及細(xì)菌轉(zhuǎn)化等。

應(yīng)學(xué)習(xí)的儀器使用方法：離心機(jī)，恒溫培養(yǎng)箱，無(wú)菌操作臺(tái)，搖床 教學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)：

1．這是本院學(xué)生原核生物分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的入門(mén)模塊，所以實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容的組織實(shí)施方面將會(huì)遇到困難。

2．講授部分的難點(diǎn)是研究技術(shù)進(jìn)展，不同方法、原理的介紹。3．與理論課的對(duì)接。難點(diǎn)的解決辦法：

1.演示錄像，講透實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)操作，特別是不同方法的原理、應(yīng)用。2.細(xì)心進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)。3.提供相關(guān)的閱讀參考書(shū)。

第二篇：分子生物學(xué)試驗(yàn)教學(xué)教案

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)教案(3000字)

河南科技大學(xué)

實(shí)驗(yàn)教學(xué)教案

課程名稱(chēng) 分子生物學(xué)

指導(dǎo)教師 李市場(chǎng)

河南科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)教案首頁(yè)

實(shí)驗(yàn)一 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過(guò)本實(shí)驗(yàn)，掌握大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化的方法和技術(shù)。實(shí)驗(yàn)原理 將質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)移進(jìn)受體細(xì)菌，需誘導(dǎo)受體細(xì)菌產(chǎn)生一種短暫的感受態(tài)以攝取外源DNA。

轉(zhuǎn)化(Transformation)是將外源DNA分子引入受體細(xì)胞,使之獲得新的遺傳性狀的一種手段,它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領(lǐng)域的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)。轉(zhuǎn)化過(guò)程所用的受體細(xì)胞一般是限制修飾系統(tǒng)缺陷的變異株，即不含限制性?xún)?nèi)切酶和甲基化酶的突變體(Rˉ,Mˉ),它可以容忍外源DNA分子進(jìn)入體內(nèi)并穩(wěn)定地遺傳給后代。為了提高轉(zhuǎn)化效率, 實(shí)驗(yàn)中要考慮以下幾個(gè)重要因素：

1.細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和密度: 細(xì)胞生長(zhǎng)密度以剛進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)為好，可通過(guò)監(jiān)測(cè)培養(yǎng)液的OD600 來(lái)控制。DH5α菌株的OD600 為0.5時(shí),細(xì)胞密度在5×107 個(gè)/ml左右(不同的菌株情況有所不同),這時(shí)比較合適。密度過(guò)高或不足均會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。

2.質(zhì)粒的質(zhì)量和濃度: 1ng的cccDNA即可使50μl 的感受態(tài)細(xì)胞達(dá)到飽和。一般情況下,DNA溶液的體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的5％。

3.試劑的質(zhì)量: 所用的試劑,如CaCl2 等均需是最高純度的(GR.或AR.),并用超純水配制,最好分裝保存于干燥的冷暗處。

4.防止雜菌和雜DNA的污染。

本實(shí)驗(yàn)以E.coli DH5a菌株為受體細(xì)胞,并用CaCl2處理,使其處于感受態(tài),然后與pUC19質(zhì)粒共保溫,實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。由于pUC19質(zhì)粒帶有氨芐青霉素抗性基因(Ampr)，可通過(guò)Amp抗性來(lái)篩選轉(zhuǎn)化子。如受體細(xì)胞沒(méi)有轉(zhuǎn)入pUC19，則在含Amp的培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)。能在Amp培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的受體細(xì)胞（轉(zhuǎn)化子）肯定已導(dǎo)入了pUC19。轉(zhuǎn)化子擴(kuò)增后，可將轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒提取出，進(jìn)行電泳、酶切等進(jìn)一步鑒定。

一.儀器 控溫?fù)u床(37℃)高速冷凍離心機(jī)

水浴鍋 冰箱（-20℃,‐70℃）

超凈工作臺(tái) 培養(yǎng)箱(37℃)752分光光度計(jì) 滅菌鍋

二.試劑 CaCl2 無(wú)菌水,冰

胰蛋白胨 酵母粉

Amp NaCl 三.其他用品

移液器，槍頭

1.5ml ,50ml 離心管 三角瓶 500ml 200ml 6cm平皿 試劑瓶60ml 量筒 燒杯

瓊脂 甘油

酒精燈 三角玻棒

酒精棉球 火柴

［溶液配制］ 0.1 mol/L CaCl2溶液 配置 滅菌

LB液體培養(yǎng)基

氨芐青霉素（Amp），用無(wú)菌水配制成50_60 mg/mL溶液，抽慮

滅菌置－20℃冰箱中保存。

四.材料 E.coli.DH5α

質(zhì)粒 DNA 五: 實(shí)驗(yàn)步驟：(CaCl2)（20人一班，分三組）

第一天：從大腸桿菌DH5α平板上挑取一個(gè)單菌落接于2 mL LB液體培養(yǎng)基

的試管中,37℃振蕩培過(guò)夜。

第二天：

1.取0.5 mL菌液轉(zhuǎn)接到一個(gè)含有50 mL LB液體培養(yǎng)基錐形瓶中，37℃振蕩培養(yǎng)

2－3 h(此時(shí)，OD600 ≤ 0.4-0.5，細(xì)胞數(shù)務(wù)必 ≤108／mL。此為實(shí)驗(yàn)成 功的關(guān)鍵)3.將菌液轉(zhuǎn)移到50 mL離心管中，冰上放置10 min。

4.離心10 min（4000r/min）,回收細(xì)胞。4℃

5.倒出培養(yǎng)液，將管倒置1min以便培養(yǎng)液流盡。

6.用冰冷的0.1 mol/L CaCl2 10 mL懸浮沉淀，立即放在冰上30 min。

7.0－4℃ 6000 r/min,離心10 min，回收細(xì)胞。

8.用冰冷的0.1mol/L CaCl2 2 mL懸浮細(xì)胞，（務(wù)必放在冰上）。

9.分裝細(xì)胞，每200 μL一份。此細(xì)胞為感受態(tài)細(xì)胞。

轉(zhuǎn)化：

10.取200 μL新鮮制備的感受態(tài)細(xì)胞，加入DNA 2 μL（50 ng）混勻冰上放置30 min。

同時(shí)作兩個(gè)對(duì)照管

受體菌對(duì)照：200 μL感受態(tài)細(xì)胞＋2 μL無(wú)菌水

質(zhì)粒對(duì)照：200 μL 0.1 mol/L CaCl2溶液＋2 μL 質(zhì)粒DNA溶液

11.將管放到42℃循環(huán)水浴1－2 min。

12.冰浴2 min。

13.每管加800 μL LB液體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)1 h（慢搖）。

14.將適當(dāng)體積（200 μL）已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，涂在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)皿中。

15.倒置平皿37℃培養(yǎng)12－16 h，出現(xiàn)菌落。

16.計(jì)算轉(zhuǎn)化效率

關(guān)于大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化講解：

1、感受態(tài)細(xì)胞的概念

重組DNA分子體外構(gòu)建完成后，必須導(dǎo)入特定的宿主（受體）細(xì)胞，使之無(wú)性繁殖并高效表達(dá)外源基因或直接改變其遺傳性狀，這個(gè)導(dǎo)入過(guò)程及操作統(tǒng)稱(chēng)為重組DNA分子的轉(zhuǎn)化。

在原核生物中，轉(zhuǎn)化是一個(gè)較普遍的現(xiàn)象，在細(xì)胞間轉(zhuǎn)化是否發(fā)生，一方面取決于供體菌與受體菌兩者在進(jìn)化過(guò)程中的親緣關(guān)系，另一方面還與受體菌是否處于一種感受狀態(tài)有著很大的關(guān)系。

所謂的感受態(tài)，即指受體（或者宿主）最易接受外源DNA片段并實(shí)現(xiàn)其轉(zhuǎn)化的一種生理狀態(tài)，它是由受體菌的遺傳性狀所決定的，同時(shí)也受菌齡、外界環(huán)

境因子的影響。cAMP可以使感受態(tài)水平提高一萬(wàn)倍，而Ca2+也可大大促進(jìn)轉(zhuǎn)化的作用。細(xì)胞的感受態(tài)一般出現(xiàn)在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，新鮮幼嫩的細(xì)胞是制備感受態(tài)細(xì)胞和進(jìn)行成功轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵。

制備出的感受態(tài)細(xì)胞暫時(shí)不用時(shí)，可加入占總體積15%的無(wú)菌甘油或-70℃保存（有效期6個(gè)月）。

2、轉(zhuǎn)化的概念及原理

在基因克隆技術(shù)中，轉(zhuǎn)化特指將質(zhì)粒DNA或以其為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入細(xì)菌體內(nèi)，使之獲得新的遺傳特性的一種方法。它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領(lǐng)域的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一。

受體細(xì)胞經(jīng)過(guò)一些特殊方法（如：電擊法，CaCl2等化學(xué)試劑法）處理后，使細(xì)胞膜的通透性發(fā)生變化，成為能容許外源DNA分子通過(guò)的感受態(tài)細(xì)胞。進(jìn)入細(xì)胞的DNA分子通過(guò)復(fù)制、表達(dá)實(shí)現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移，使受體細(xì)胞出現(xiàn)新的遺傳性狀。

大腸桿菌的轉(zhuǎn)化常用化學(xué)法（CaCl2法），該法最先是由Cohen于1972年發(fā)現(xiàn)的。其原理是細(xì)菌處于0℃，CaCl2的低滲溶液中，菌細(xì)胞膨脹成球形，轉(zhuǎn)化混合物中的DNA形成抗DNase的羥基-鈣磷酸復(fù)合物粘附于細(xì)胞表面，經(jīng)42℃短時(shí)間熱沖擊處理，促使細(xì)胞吸收DNA復(fù)合物，在豐富培養(yǎng)基上生長(zhǎng)數(shù)小時(shí)后，球狀細(xì)胞復(fù)原并分裂增值，被轉(zhuǎn)化的細(xì)菌中，重組子中基因得到表達(dá)，在選擇性培養(yǎng)基平板上，可選出所需的轉(zhuǎn)化子。

Ca2+處理的感受態(tài)細(xì)胞，其轉(zhuǎn)化率一般能達(dá)到5×106~2×107轉(zhuǎn)化子/ug質(zhì)粒DNA，可以滿(mǎn)足一般的基因克隆試驗(yàn)。如在Ca2+的基礎(chǔ)上，聯(lián)合其它的二價(jià)金屬離子（如Mn2+、Co2+）、DMSO或還原劑等物質(zhì)處理細(xì)菌，則可使轉(zhuǎn)化率提高100~1000倍。

化學(xué)法簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定、重復(fù)性好，菌株適用范圍廣，感受態(tài)細(xì)菌可以在-70℃保存，因此被廣泛用于外源基因的轉(zhuǎn)化。

除化學(xué)法轉(zhuǎn)化細(xì)菌外，還有電擊轉(zhuǎn)化法，電擊法不需要預(yù)先誘導(dǎo)細(xì)菌的感受態(tài)，依靠短暫的電擊，促使DNA進(jìn)入細(xì)菌，轉(zhuǎn)化率最高能達(dá)到109~1010轉(zhuǎn)化子/ug閉環(huán)DNA。因操作簡(jiǎn)便，愈來(lái)愈為人們所接受。

3、感受態(tài)細(xì)胞制備及轉(zhuǎn)化中的影響因素

⑴、細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和密度

最好從-70℃或-20℃甘油保存的菌種中直接轉(zhuǎn)接用于制備感受態(tài)細(xì)胞的菌液。不要用已經(jīng)過(guò)多次轉(zhuǎn)接，及貯存在4℃的培養(yǎng)菌液。細(xì)胞生長(zhǎng)密度以每毫升培養(yǎng)液中的細(xì)胞數(shù)在5×107個(gè)左右為佳。即應(yīng)用對(duì)數(shù)期或?qū)?shù)生長(zhǎng)前期的細(xì)菌，可通過(guò)測(cè)定培養(yǎng)液的OD600控制。對(duì)TG1菌株，OD600為0．5時(shí)，細(xì)胞密度在5×107個(gè)/ml左右。（應(yīng)注意OD600值與細(xì)胞數(shù)之間的關(guān)系隨菌株的不同而不同）。密度過(guò)高或不足均會(huì)使轉(zhuǎn)化率下降。

此外，受體細(xì)胞一般應(yīng)是限制-修飾系統(tǒng)缺陷的突變株，即不含限制性?xún)?nèi)切酶和甲基化酶的突變株。并且受體細(xì)胞還應(yīng)與所轉(zhuǎn)化的載體性質(zhì)相匹配。

⑵、質(zhì)粒DNA的質(zhì)量和濃度

用于轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA應(yīng)主要是超螺旋態(tài)的，轉(zhuǎn)化率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA的量過(guò)多或體積過(guò)大時(shí)，則會(huì)使轉(zhuǎn)化率下降。一般地，DNA溶液的體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的5%，1ng的cccDNA即可使50ul的感受態(tài)細(xì)胞達(dá)到飽和。

對(duì)于以質(zhì)粒為載體的重組分子而言，分子量大的轉(zhuǎn)化效率低，實(shí)驗(yàn)證明，大于30kb的重組質(zhì)粒將很難進(jìn)行轉(zhuǎn)化。此外，重組DNA分子的構(gòu)型與轉(zhuǎn)化效率也密切相關(guān)，環(huán)狀重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化率較分子量相同的線性重組質(zhì)粒高10~100倍，因此重組DNA大都構(gòu)成環(huán)狀雙螺旋分子。

⑶、試劑的質(zhì)量

所用的CaCl2等試劑均需是最高純度的，并用最純凈的水配制，最好分裝保存于4℃。

⑷、防止雜菌和雜DNA的污染

整個(gè)操作過(guò)程均應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，所用器皿，如離心管，移液槍頭等最好是新的，并經(jīng)高壓滅菌處理。所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、DNA酶或雜DNA所污染，否則均會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率或雜DNA的轉(zhuǎn)入。

⑸、整個(gè)操作均需在冰上進(jìn)行，不能離開(kāi)冰浴，否則細(xì)胞轉(zhuǎn)化率將會(huì)降低。

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實(shí)驗(yàn)

二、質(zhì)粒DNA的提取及其酶切

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過(guò)本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)和掌握堿裂解法提取質(zhì)粒DNA。

實(shí)驗(yàn)原理 堿裂解法提取質(zhì)粒是根據(jù)共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA與線性染色體DNA在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來(lái)分離它們。在pH值介于12.0～12.5這個(gè)狹窄的范圍內(nèi)，線性的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而被變性，盡管在這樣的條件下，共價(jià)閉環(huán)質(zhì)粒DNA的氫鍵會(huì)被斷裂，但兩條互補(bǔ)鏈彼此相互纏繞，仍會(huì)緊密地結(jié)合在一起。當(dāng)加入pH4.8的乙酸鉀高鹽緩沖液恢復(fù)pH 至中性時(shí)，共價(jià)閉合環(huán)狀的質(zhì)粒DNA的兩條互補(bǔ)鏈仍保持在一起，因此復(fù)性迅速而準(zhǔn)確，而線性的染色體DNA的兩條互補(bǔ)鏈彼此已完全分開(kāi)，復(fù)性就不會(huì)那木迅速而準(zhǔn)確，它們纏繞形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA，蛋白質(zhì)－SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。

實(shí)驗(yàn)儀器：微量移液器，微量離心管，常用玻璃器皿，臺(tái)式高速離心機(jī)，分光光度計(jì)，恒溫培養(yǎng)箱，恒溫?fù)u床，臺(tái)式離心機(jī)，高壓滅菌鍋。

試劑及溶液：(1)用堿法提取質(zhì)粒DNA 溶液1（GET緩沖液）：50 mmol／葡萄糖，10mmol/L EDTA，25mmol/LTris.HCI pH 8.o，用前加溶菌酶4rng／mL。

溶液2（變性液）：0．2 rnoI/I NaOH，1％ SDS。

溶液3（乙酸鉀溶液）：60 ml的5 mol／L KAc, 11.5 ml,冰醋酸，28.5Ml H2O。

（2）緩沖液

EcoR酶解緩沖液（l 0×）

TBE緩沖液（I O×）：稱(chēng)取Tris 108g,硼酸55g, 0.5moI／L, EDTA（pH8.o）40 ml，用H2o定容到l000 ml，高壓滅菌作為l 0×貯液9稀釋1 0倍后作為工作液使用。TE緩沖液：1 0 rnmol／L Tris HCl，I mmol／L EDTA pH 8.o，其中含有RNase2 0 μg／mL。

（3）上樣液及其他試劑 上樣液（6×）：0.25％溴酚藍(lán),質(zhì)量濃度40％蔗糖水溶液。

溴化乙啶染色液（10 rng／m t）：在20ml水中溶解0.2g溴化乙啶，混勻后4℃避

光保存。

異丙醇，7 0％乙醇等。

實(shí)驗(yàn)步驟

（一）提取質(zhì)粒

1.將2 ml 含相應(yīng)抗生素的LB液體培養(yǎng)基加入試管中，接入上述的含pUC19質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落，37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。

2.取培養(yǎng)物倒入微量1.5ml離心管中，4000 r/min 離心 2 min。

3.棄上清，吸盡殘液，使細(xì)胞沉淀盡可能干燥。4.加入100ul溶液Ⅰ，充分混勻，室溫放置10 min。加200 ul溶液 Ⅱ（新鮮配制），蓋緊管蓋，輕輕顛倒數(shù)次混勻，將離心管放冰上5min。

5.加入150ul溶液 Ⅲ（冰上預(yù)冷），蓋緊管口，顛倒數(shù)次使混勻。冰上放置15min。

6.12000 r/min ,離心15 min，將上清轉(zhuǎn)至另一離心管中。

7.加入等體積酚：氯仿（1：1）（去蛋白），反復(fù)混勻，12000 r/min，離心5 min，將上清轉(zhuǎn)移到另一離心管中。

8.加入2倍體積無(wú)水乙醇，混勻后，室溫放置5～10 min。12000r/min離心 5 min。倒去上清液，把離心管倒扣在吸水紙上，吸干液體。

9.用1 ml 70% 乙醇洗滌質(zhì)粒DNA沉淀，振蕩并離心，倒去上清液，真空抽干或空氣中干燥。

10.加50 ul TE緩沖液，其中含有20 ug/ml的胰RNA酶，使DNA完全溶解，－20℃保存。

（二）酶切

取DNA溶液，加酶切緩沖液，EcoRI酶1 ul，無(wú)菌水補(bǔ)至總體積10 ul，37℃保溫3h,加終止液，準(zhǔn)備下個(gè)實(shí)驗(yàn)電泳，分析質(zhì)粒DNA的限制性酶切圖譜。

質(zhì)粒提取的關(guān)鍵問(wèn)題即質(zhì)粒提取中三種溶液的作用： 堿法質(zhì)粒抽提用到三種溶液： 溶液I，50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0； 溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS； 溶液III，3 M 醋酸鉀 / 2 M 醋酸。讓我們先來(lái)看看溶液I的作用。任何生物化學(xué)反應(yīng)，首先要控

制好溶液的pH，因此用適當(dāng)濃度的和適當(dāng)pH值的Tris-Cl溶液，是再自然不過(guò)的了。那么50 mM葡萄糖是干什么的呢？說(shuō)起來(lái)不可思議，加了葡萄糖后最大的好處只是懸浮后的大腸桿菌不會(huì)快速沉積到管子的底部。因此，如果溶液I中缺了葡萄糖其實(shí)對(duì)質(zhì)粒的抽提本身而言，幾乎沒(méi)有任何影響。所以說(shuō)溶液I中葡萄糖是可缺的。那么EDTA呢？大家知道EDTA是Ca2+和Mg2+等二價(jià)金屬離子的螯合劑，配在分子生物學(xué)試劑中的主要作用是：抑制DNase的活性，和抑制微生物生長(zhǎng)。在溶液I中加入高達(dá) 10 mM 的EDTA，無(wú)非就是要把大腸桿菌細(xì)胞中的所有二價(jià)金屬離子都螯合掉。如果不加EDTA，其實(shí)也沒(méi)什么大不了的，只要不磨洋工，只要是在不太長(zhǎng)的時(shí)間里完成質(zhì)粒抽提，就不用怕DNA會(huì)迅速被降解，因?yàn)樽罱K溶解質(zhì)粒的TE緩沖液中有EDTA。如果哪天你手上正好缺了溶液I，可不可以抽提質(zhì)粒呢？實(shí)話(huà)告訴你，只要用等體積的水，或LB培養(yǎng)基來(lái)懸浮菌體就可以了。

有一點(diǎn)不能忘的是，菌體一定要懸浮均勻，不能有結(jié)塊。輪到溶液II了。這是用新鮮的0.4 N的NaOH和2％的SDS等體積混合后使用的。要新從濃NaOH稀釋制備0.4N的NaOH，無(wú)非是為了保證NaOH沒(méi)有吸收空氣中的CO2而減弱了堿性。很多人不知道其實(shí)破細(xì)胞的主要是堿，而不是SDS，所以才叫堿法抽提。事實(shí)上NaOH是最佳 的溶解細(xì)胞的試劑，不管是大腸桿菌還是哺乳動(dòng)物細(xì)胞，碰到了堿都會(huì)幾乎在瞬間就溶解，這是由于細(xì)胞膜發(fā)生了從bilayer（雙層膜）結(jié)構(gòu)向micelle（微囊）結(jié)構(gòu)的相變化所導(dǎo)致。用了不新鮮的0.4 N NaOH，即便是有SDS也無(wú)法有效溶解大腸桿菌（不妨可以自己試一下），自然就難高效率抽提得到質(zhì)粒。如果只用SDS當(dāng)然也能抽提得到少量質(zhì)粒，因?yàn)镾DS也是堿性的，只是弱了點(diǎn)而已。很多人對(duì)NaOH的作用誤以為是為了讓基因組DNA變性，以便沉淀，這是由于沒(méi)有正確理解一些書(shū)上的有關(guān)DNA變性復(fù)性的描述所導(dǎo)致。有人不禁要問(wèn)，既然是NaOH溶解的細(xì)胞，那為什么要加SDS呢？那是為下一步操作做的鋪墊。這一步要記住兩點(diǎn)：第一，時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，千萬(wàn)不要這時(shí)候去接電話(huà)，因?yàn)樵谶@樣的堿性條件下基因組DNA片斷會(huì)慢慢斷裂；第二，必須溫柔混合（象對(duì)待女孩子一樣），不然基因組DNA也會(huì)斷裂?；蚪MDNA的斷裂會(huì)帶來(lái)麻煩。

每個(gè)人都知道，溶液III加入后就會(huì)有大量的沉淀，但大部分人卻不明白這沉淀的本質(zhì)。最容易產(chǎn)生的誤解是，當(dāng)SDS碰到酸性后發(fā)生的沉淀。如果你這樣懷疑，往1%的SDS溶液中加如2M的醋酸溶液看看就知道不是這么回事了。大量沉淀的出現(xiàn)，顯然與SDS的加入有關(guān)系。如果在溶液II中不加SDS會(huì)怎樣呢，也會(huì)有少量的沉淀，但量上要少得多，顯然是鹽析和酸變性沉淀出來(lái)的蛋白質(zhì)。既然SDS不是遇酸發(fā)生的沉淀，那會(huì)不會(huì)是遇鹽發(fā)生的沉淀呢？在1％的SDS溶液中慢慢加入5 N的NaCl，你會(huì)發(fā)現(xiàn)SDS在高鹽濃度下是會(huì)產(chǎn)生沉淀的。因此高濃度的鹽導(dǎo)致了SDS的沉淀。但如果你加入的不是NaCl而是KCl，你會(huì)發(fā)現(xiàn)沉淀的量要多的多。這其實(shí)是十二烷基硫酸鈉（sodium dodecylsulfate）遇到鉀離子后變成了十二烷基硫酸鉀（potassium dodecylsulfate, PDS），而PDS是水不溶的，因此發(fā)生了沉淀。如此看來(lái)，溶液III加入后的沉淀實(shí)際上是鉀離子置換了SDS中的鈉離子形成了不溶性的PDS，而高濃度的鹽，使得沉淀更完全。大家知道SDS專(zhuān)門(mén)喜歡和蛋白質(zhì)結(jié)合，平均兩個(gè)氨基酸上結(jié)合一個(gè)SDS分子，鉀鈉離子置換所產(chǎn)生的大量沉淀自然就將絕大部分蛋白質(zhì)沉淀了，讓人高興的是大腸桿菌的基因組DNA也一起被共沉淀了。這個(gè)過(guò)程不難想象，因?yàn)榛蚪MDNA太長(zhǎng)了，長(zhǎng)長(zhǎng)的DNA自然容易被PDS給共沉淀了，盡管SDS并不與DNA分子結(jié)合。

那么2 M的醋酸又是為什么而加的呢？是為了中和NaOH，因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間的堿性條件會(huì)打斷DNA，所以要中和之。基因組DNA一旦發(fā)生斷裂，只要是50－100 kb大小的片斷，就沒(méi)有辦法再被PDS共沉淀了。所以堿處理的時(shí)間要短，而且不得激烈振蕩，不然最后得到的質(zhì)粒上總會(huì)有大量的基因組DNA混入，瓊脂糖電泳可以觀察到一條濃濃的總DNA條帶。很多人誤認(rèn)為是溶液III加入后基因組DNA無(wú)法快速?gòu)?fù)性就被沉淀了，這是天大的誤會(huì)，因?yàn)樽冃缘囊埠脧?fù)性的也好，DNA分子在中性溶液中都是溶解的。NaOH本來(lái)是為了溶解細(xì)胞而用的，DNA分子的變性其實(shí)是個(gè)副產(chǎn)物，與它是不是沉淀下來(lái)其實(shí)沒(méi)有關(guān)系。溶液III加入并混合均勻后在冰上放置，目的是為了PDS沉淀更充分一點(diǎn)。

不要以為PDS沉淀的形成就能將所有的蛋白質(zhì)沉淀了，其實(shí)還有很多蛋白質(zhì)不能被沉淀，因此要用酚/氯仿/異戊醇進(jìn)行抽提，然后進(jìn)行酒精沉淀才能得到質(zhì)量穩(wěn)定的質(zhì)粒DNA，不然時(shí)間一長(zhǎng)就會(huì)因?yàn)榛烊氲腄Nase而發(fā)生降解。這里用2 5/24/1的酚/氯仿/異戊醇是有很多道理的，這里做個(gè)全面的介紹。酚（Phenol）對(duì)蛋白質(zhì)的變性作用遠(yuǎn)大于氯仿，按道理應(yīng)該用酚來(lái)最大程度將蛋白質(zhì)抽提掉，但是水飽和酚的比重略比水重，碰到高濃度的鹽溶液（比如4M的異硫氰酸胍），離心后酚相會(huì)跑到上層，不利于含質(zhì)粒的水相的回收；但加入氯仿后可以增加比重，使得酚/氯仿始終在下層，方便水相的回收；還有一點(diǎn)，酚與水有很大的互溶性，如果單獨(dú)用酚抽提后會(huì)有大量的酚溶解到水相中，而酚會(huì)抑制很多酶反應(yīng)（比如限制性酶切反應(yīng)），因此如果單獨(dú)用酚抽提后一定要用氯仿抽提一次將水相中的酚去除，而用酚/氯仿的混合液進(jìn)行抽提，跑到水相中的酚則少得多，微量的酚在乙醇沉淀時(shí)就會(huì)被除干凈而不必?fù)?dān)心酶切等反應(yīng)不能正常進(jìn)行。至于異戊醇的添加，其作用主要是為了讓離心后上下層的界面更加清晰，也方便了水相的回收。

回收后的水相含有足夠多的鹽，因此只要加入2倍體積的乙醇，在室溫放置幾分鐘后離心就可以將質(zhì)粒DNA沉淀出來(lái)。這時(shí)候如果放到－20℃，時(shí)間一長(zhǎng)反而會(huì)導(dǎo)致大量鹽的沉淀，這點(diǎn)不同于普通的DNA酒精沉淀回收，所以不要過(guò)分小心了。高濃度的鹽會(huì)水合大量的水分子，因此DNA分子之間就容易形成氫鍵而發(fā)生沉淀。如果感覺(jué)發(fā)生了鹽的沉淀，就用70％的乙醇多洗幾次，每次在室溫放置一個(gè)小時(shí)以上，并用tip將沉淀打碎，就能得到好的樣品。得到的質(zhì)粒樣品一般用含RNase（50 ug/ml）的TE緩沖液進(jìn)行溶解，不然大量未降解的RNA會(huì)干擾電泳結(jié)果的.河南科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)教案首頁(yè)

實(shí)驗(yàn)三 瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)

［實(shí)驗(yàn)?zāi)康模萃ㄟ^(guò)本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的方法和技術(shù)。

［實(shí)驗(yàn)原理］DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。DNA分子在高于等電點(diǎn)的pH溶液中帶負(fù)電荷在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。由于糖－磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì)，相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此他們能以相同的速度向正極方向移動(dòng)。在一定的電場(chǎng)強(qiáng)度下，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應(yīng)，即DNA分子本身的大小和構(gòu)型。具有不同的相對(duì)分子質(zhì)量的DNA片段泳動(dòng)速度不一樣，可進(jìn)行分離。DNA分子的遷移速度與相對(duì)分子質(zhì)量對(duì)數(shù)值成反比關(guān)系.。凝膠電泳不僅可以分離不同相對(duì)分子質(zhì)量的DNA, 也可以分離相對(duì)分子質(zhì)量相同,但構(gòu)型不同的DNA分子。如上次實(shí)驗(yàn)提取的pUC19質(zhì)粒，有3種構(gòu)型：超螺旋的共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA(covalently closed circular DNA，簡(jiǎn)稱(chēng) CCCDNA)，開(kāi)環(huán)質(zhì)粒DNA，即共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA1條鏈斷裂，（open circular DNA, 簡(jiǎn)稱(chēng)OCDNA）,線狀質(zhì)粒DNA，即共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA2條鏈發(fā)生斷裂，（linear DNA，簡(jiǎn)稱(chēng)L DNA）。這3種構(gòu)型的質(zhì)粒DNA分子在凝膠電泳中的遷移率不同。因此電泳后呈3條帶，超螺旋質(zhì)粒DNA泳動(dòng)最快，其次為線狀DNA，開(kāi)環(huán)質(zhì)粒DNA。

[儀器、材料與試劑]

一、儀器

1.恒溫培養(yǎng)箱

2.瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)

3.臺(tái)式離心機(jī)

4.高壓滅菌鍋

5.紫外線透射儀

二、材料

1.三羥甲基氨基甲烷(Tris)2.硼酸

3.乙二胺四乙酸(EDTA)4.溴酚藍(lán)

5.蔗糖

6.瓊脂糖

7.溴化乙錠

8.DNA marker [實(shí)驗(yàn)步驟](一)制備瓊脂糖凝膠

電泳槽及用膠量：稱(chēng)取0.3g瓊脂糖，放入錐形瓶中，加入30ml0.5×TBE緩沖液，置微波爐或水浴加熱至完全溶化取出搖勻，則為1%的瓊脂糖凝膠液。

冷卻至60℃, 加入適量EB, 混勻。

（二）膠板的制備

1.取有機(jī)玻璃內(nèi)槽，洗凈，晾干，用橡皮膏將有機(jī)玻璃內(nèi)槽的兩端邊緣封好（一定封嚴(yán)，不能留縫隙）。

2.將有機(jī)玻璃內(nèi)槽放置于一水平位置，并放好樣品梳子。梳子調(diào)整齊

3.將冷到60℃左右的瓊脂糖凝膠液，緩緩倒入有機(jī)玻璃內(nèi)槽，直至有機(jī)玻璃板上形成一層均勻的膠面（注意不要形成氣泡）。

4.待膠凝固后，取出梳子，取下橡皮膏，將膠槽放在電泳槽內(nèi)。

5.加入電泳緩沖液至電泳槽中。

（三）加樣, 用移液器將已加入上樣緩沖液的DNA樣品加入樣品孔（記錄點(diǎn)樣順序及點(diǎn)樣量）。

（四）電泳

1.接通電泳槽與電泳儀的電源（注意正負(fù)極，DNA片段從負(fù)極向正極移動(dòng)）。DNA的遷移速度與電壓成正比，最高電壓不超過(guò)5 V/cm。

2.當(dāng)溴酚藍(lán)染料移動(dòng)到距凝膠前沿1~2cm處，停止電泳。

（五）染色

將電泳后的凝膠浸入溴化乙錠染色液中，染色以觀察在瓊脂糖凝膠中的帶（戴手套操作）。

問(wèn)題討論 1）在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)粒DNA是共價(jià)閉環(huán)DNA（covalently closed circular DN A，cccDNA），常以超螺旋形式存在。如果兩條鏈中有一條鏈發(fā)生一處或多處缺刻，分子就能旋轉(zhuǎn)而消除鏈的張力，這種松弛型的分子叫作開(kāi)環(huán)DNA（open circular DNA，ocDNA）；若兩條鏈在同一處或其附近斷裂，則變成性狀D N A分子。在電泳時(shí)，同一質(zhì)粒的電泳速度因DNA的構(gòu)型不同而異，其次序?yàn)椋篶ccDNA＞直線DNA＞ocDNA，因此在本次實(shí)驗(yàn)中瓊脂糖凝膠電泳上的自制質(zhì)粒呈現(xiàn)3條帶。如果你不小心在溶液II（實(shí)驗(yàn)二）加入后過(guò)度振蕩，會(huì)有第四條帶，這條帶泳動(dòng)得較慢，遠(yuǎn)離這三條帶，是20-100kb的大腸桿菌基因組DNA的片斷。非常偶然的是，有時(shí)候抽提到的質(zhì)粒會(huì)有7－10條帶，這是由于特殊的DNA序列導(dǎo)致了不同程度的超螺旋（超螺旋的圈數(shù)不同）所致。

2）瓊脂糖是一種從海藻中提取出來(lái)的線狀高聚物，當(dāng)熔化再凝固后就會(huì)形成固體基質(zhì)，其密度取決于溶液中所含瓊脂糖的量。帶負(fù)電荷的核酸就可以在這種基質(zhì)中。于電場(chǎng)的作用下向陽(yáng)極移動(dòng)。核酸在瓊脂糖基質(zhì)中的遷移率取決于下列參數(shù)：①DN A的分子大?。虎诃傊堑臐舛?；③DNA的構(gòu)象；④所加電壓；⑤電場(chǎng)方向；⑥堿基組成與溫度；⑦嵌入的染料；⑧電泳緩沖液的組成等。瓊脂糖濃度對(duì)核酸遷移率的影響是：一定大小的DNA片段，在不同濃度的瓊脂糖凝膠中的遷移率不同；在一定濃度的瓊脂糖凝膠能夠分辨的核酸片段大小范圍內(nèi)，核酸片段的遷移率與其相對(duì)分子質(zhì)量大小相反。

3）溴化乙啶的化學(xué)名稱(chēng)是3，8－二氨基r－乙基－6一苯基菲錠溴鹽（3，S－diamino－5－ethyl－6－phenyl－phenanthridinium bromide，簡(jiǎn)稱(chēng)EthidiumBromide或EB或EtBr），由于溴化乙錠分子插入，在紫外光的照射下，瓊脂糖凝膠電泳中DNA的條帶呈現(xiàn)出桔黃色的熒光，便于檢測(cè)。EB能插人DNA分子中的堿基對(duì)之間，完成與DNA結(jié)合（超螺旋DNA與EB結(jié)合能力小于雙鏈閉環(huán)，而雙鏈閉環(huán)DNA與EB結(jié)合能力小于線狀雙鏈DNA），DNA所吸收的260nm的紫外光（UV）傳遞給FE，或者結(jié)合的EB本身在3O0nm和360nm吸收的射線均在可見(jiàn)光譜的紅橙區(qū)，以590nm波長(zhǎng)發(fā)射出來(lái)。EB染色具有以下特點(diǎn)：①操作簡(jiǎn)便快速，室溫下染色15mm～20mm；②不會(huì)使核酸斷裂；③靈敏度高，10ng或更少的DNA即可檢出；④可以加到樣品中，隨時(shí)用紫外吸收追蹤檢查。但應(yīng)該特別注意的是，溴化乙啶是誘變劑，配制和使用時(shí)應(yīng)戴乳膠（或一次性塑料）手套，并且不要將該染色液灑在桌面或地面上。凡是沾污溴化乙啶的器皿或物品，必須經(jīng)特殊處理后，再進(jìn)行清洗或棄去。

河南科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)教案首頁(yè)

實(shí)驗(yàn)四植物基因組DNA的提取

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過(guò)本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)從植物組織中提取DNA的方法。

實(shí)驗(yàn)原理 利用液氮對(duì)植物組織進(jìn)行研磨，從而破碎細(xì)胞。細(xì)胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜，使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來(lái)。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液經(jīng)乙醇沉淀。實(shí)驗(yàn)材料: 新鮮植物葉片

【儀器、材料與試劑】

（－）儀器

1．低溫離心機(jī)

2．恒溫水浴器 3．臺(tái)式離心機(jī)

4．紫外分光光度計(jì)

5.液氮灌

（二）材料

l。三羥甲基氨基甲烷（Tris）

2．乙二胺四乙酸（EDTA）

3．氯化鈉（NaCl）

4．β-巰基乙醇

5．氯化鉀（KCI）

6．異丙醇

7．乙醇 8.．陶瓷研缽

9．吸頭、小指管

（三）試劑

（三）試劑

1．細(xì)胞提取液

mmol／L Tris.HCl(pH 8.0)5 mmol／L EDTA(pH 8.0)500 mmol／L NaCl 1.25％ SDS 1 mol／L β巰基乙醇

2．5 mol／L KCI 3，TE（見(jiàn)實(shí)驗(yàn)二質(zhì)粒DNA的提取及酶切）[實(shí)驗(yàn)步驟] 1.取4g新鮮葉片，在液氮中研磨成粉末狀（越細(xì)越好）。

2.轉(zhuǎn)移至50ml離心管中，加入16ml TENbf，充分混勻。65℃水浴保溫20min。

3.從水浴中取出離心管，加入5ml 5 mol/L KCl溶液，混勻，水浴20min。

4.4000r/min 離心 20 min。

5.將上清液轉(zhuǎn)移到另一50ml離心管中。

6.加等體積酚／氯仿混勻，12000r／min 離心5min，取上清。

7.加等體積氯仿，混勻，12000r／min 離心5min，取上清。

8.加入0.6－1倍體積的異丙醇（沉淀DNA），混勻。放置時(shí)間 9.離心獲得沉淀，70％乙醇洗3次。風(fēng)干沉淀。

10.加入3ml TE緩沖液，溶解DNA。

11.取3ml DNA溶液測(cè)定DNA在260nm和280nm的OD值，并分析DNA的純度和含量

[實(shí)驗(yàn)結(jié)果] 注意事項(xiàng)

1.盡量取材幼嫩葉片，如太老，酚類(lèi)物質(zhì) 多，必須用10 mM的β-ME處理。葉片磨得越細(xì)越好。

2.移液器的使用。

3.由于植物細(xì)胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作應(yīng)迅速，以免組織解凍，導(dǎo)致細(xì)胞裂解，釋放出DNA酶，使DNA降解。

4.研缽預(yù)凍，粉末至加CTAB前不要融化。5.氯仿/異戊醇抽提時(shí)動(dòng)作應(yīng)輕柔。

6.所用試劑必需滅菌。

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案[1] 全下

第三篇：換水試驗(yàn)教案

大家知道每年的12月1日是什么日子嗎？

“不錯(cuò)，世界艾滋病日，今年是第26個(gè)世界艾滋病日，主題是：實(shí)現(xiàn)零——零艾滋病病毒新發(fā)感染、零歧視和零艾滋病相關(guān)死亡”

“艾滋病全稱(chēng)獲得性免疫缺陷綜合癥，是由艾滋病病毒（HIV病毒）引起的一種嚴(yán)重傳染病，至今沒(méi)有有效地防治手段，幾乎沒(méi)有救治成功的病例，因此又被稱(chēng)為超級(jí)癌癥?！?/p>

“HIV病毒一旦侵入人體，便以免疫系統(tǒng)作為攻擊目標(biāo)，大量吞噬、破壞淋巴細(xì)胞，使免疫系統(tǒng)崩潰，從而使人體因喪失對(duì)各種疾病的抵抗力而病發(fā)死亡。”

“HIV病毒廣泛存在于感染者的體液內(nèi)，其中以血液、精液、陰道分泌物中的濃度最高。它在人體內(nèi)的潛伏期平均為12年至13年，在發(fā)展成艾滋病病人以前，外表看上去正常，他們可以沒(méi)有任何癥狀的生活和工作很多年?！?/p>

HIV病毒的傳播途徑主要有三條：性接觸傳播、血液傳播和母嬰傳播，而且傳播速度非?？臁＝裉?，我們一起通過(guò)一個(gè)小游戲來(lái)感受一下艾滋病傳播的隱匿性和速度的驚人性。

這個(gè)游戲的名稱(chēng)叫做“換水游戲”。在做游戲之前，我們先做一個(gè)約定:所有參與本游戲的同學(xué)都應(yīng)本著“相互尊重、平等參與、團(tuán)結(jié)合作、真誠(chéng)交流”的原則。

“大家看到講桌上一共有28只燒杯，分兩部分，第一部分24只，第二部分4只” “第一部分的24只燒杯中有23只裝的是清水，只有一只裝的是氫氧化鈉溶液。其中清水表示健康人的體液，氫氧化鈉表示艾滋病病毒攜帶者的體液。從表面上看是無(wú)法區(qū)分兩者的，都是無(wú)色透明的液體，但是用酚酞試劑可以檢測(cè)，酚酞可以使氫氧化鈉溶液變紅色，與清水沒(méi)有反應(yīng)。每一次換水表示發(fā)生一次性接觸。”

“第二部分的四只燒杯中裝的都是清水”

“我們先看游戲第一部分的規(guī)則：

1、第一次換水：與本組中對(duì)面同學(xué)換水一次。[用注射器取5mL加入對(duì)方燒杯中]

（第一次換水后每一組抽出一名同學(xué)離開(kāi)游戲不再參加下面的換水）

2、第二次換水：與本組中另一名同學(xué)換水一次。（不能重復(fù)）

3、第三次換水：與相鄰組的任一同學(xué)換水一次。（A組和B組，C組和D組）

4、第四次換水：與斜對(duì)組的任一同學(xué)換水一次。（A組和C組，B組和D組）”

（學(xué)生操作，完成游戲的第一部分）

“我們馬上進(jìn)入游戲的第二部分：4名同學(xué)，每人一只裝有20毫升飲用水的透明玻璃杯，一只10毫升注射器，在經(jīng)過(guò)4次液體交換的20名同學(xué)中任選一名（不能有重復(fù)選擇），進(jìn)行一次5毫升液體等量相互交換?！?/p>

“在每個(gè)燒杯中加入一滴酚酞試劑，觀察現(xiàn)象。” “游戲結(jié)果及分析：

1、經(jīng)過(guò)一次換水即退出的4只杯子都沒(méi)有變色，說(shuō)明雙方均有單一的性伴侶，感染艾滋病的幾率很小。

2、經(jīng)過(guò)4次換水后的20只杯子，有14杯變?yōu)榧t色，說(shuō)明多性伴導(dǎo)致的艾滋病病毒傳播速度驚人。

3、最后跟經(jīng)過(guò)4次換水后的20只杯子中的任選一只進(jìn)行換水的4只杯子，有3只變?yōu)榧t色，說(shuō)明跟高危人群發(fā)生哪怕是頻度很少的性接觸，其感染艾滋病病毒的幾率也是相當(dāng)高的。”

通過(guò)換水試驗(yàn)我們知道了，艾滋病通過(guò)性接觸傳播的速度是非?？斓?，我們應(yīng)該潔身自愛(ài)，遵守性道德。

“有哪位同學(xué)可以結(jié)合已有的知識(shí)談一談如何預(yù)防艾滋病呢？”

“其實(shí)艾滋病并不可怕，特別是在與艾滋病病人的交往中，日常生活和工作交往均不會(huì)感染艾滋病，所以，在日常生活中我們應(yīng)關(guān)心、幫助和不歧視艾滋病人和艾滋病病毒感染者，他們是疾病的受害者，應(yīng)該得到人道主義的同情和幫助。家庭和社會(huì)要為他們營(yíng)造一個(gè)友善、理解、健康的生活和工作環(huán)境，鼓勵(lì)他們采取積極的生活態(tài)度，改變危險(xiǎn)行為，配合治療，有利于提高他們的生命質(zhì)量、延長(zhǎng)生命，也有利于艾滋病的預(yù)防和維護(hù)社會(huì)安定”

第四篇：檢驗(yàn)與試驗(yàn)管理程序

檢驗(yàn)與試驗(yàn)管理程序

1、目的

對(duì)原、輔材料，過(guò)程產(chǎn)品，成品進(jìn)行規(guī)定的檢驗(yàn)和試驗(yàn)，以驗(yàn)證產(chǎn)品要求得到滿(mǎn)足，保證不合格產(chǎn)品不投入加工和支付。

2、范圍

適用于公司的原、輔材料，半成品和成品的檢驗(yàn)和試驗(yàn)。

3、職責(zé)

① 質(zhì)檢科負(fù)責(zé)檢驗(yàn)制度∕規(guī)程的制度，并負(fù)責(zé)原輔料、半成品和成品的檢驗(yàn)和試驗(yàn)。② 生產(chǎn)技術(shù)部負(fù)責(zé)產(chǎn)品工藝∕技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的收集、制定，檢測(cè)中心負(fù)責(zé)物理指標(biāo)的檢驗(yàn)和試驗(yàn)。

③ 倉(cāng)庫(kù)負(fù)責(zé)對(duì)機(jī)物料等物資的驗(yàn)證，設(shè)備管理員協(xié)助對(duì)機(jī)電物資的驗(yàn)證。④ 質(zhì)檢科主管負(fù)責(zé)產(chǎn)品的最終放行審批。

4、程序

① 檢驗(yàn)人員的要求和檢驗(yàn)、檢測(cè)前的準(zhǔn)備

檢驗(yàn)和檢測(cè)人員應(yīng)具有較強(qiáng)的責(zé)任心，應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)文件中的規(guī)定，檢查檢驗(yàn)和檢測(cè)用的器具狀況是否在規(guī)定的校準(zhǔn)有效期內(nèi)，并預(yù)先進(jìn)行調(diào)整。② 進(jìn)貨檢驗(yàn)程序（沈芳嫻、牟瓊蘭）

A胚布來(lái)料的檢驗(yàn)和試驗(yàn)：胚布入廠后由營(yíng)銷(xiāo)部填寫(xiě)《送檢單》注明客戶(hù)需達(dá)到的各項(xiàng)檢驗(yàn)、檢測(cè)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)范圍（如水壓需達(dá)到4000Pa以上，透氣量需達(dá)到120L∕㎡·S以上），一式兩份，一份留底，一份送檢測(cè)中心。胚布專(zhuān)職檢驗(yàn)員按《送檢單》及《進(jìn)貨檢驗(yàn)規(guī)程》對(duì)胚布進(jìn)行外觀檢驗(yàn)和內(nèi)在檢測(cè)。外觀檢由檢驗(yàn)員負(fù)責(zé)對(duì)服裝面料的門(mén)幅、規(guī)格、布面情況等進(jìn)行全檢。濾料面料檢驗(yàn)外包裝完好度、打卷整齊度、潮濕度進(jìn)行抽檢；內(nèi)在檢由檢測(cè)員負(fù)責(zé)對(duì)來(lái)料胚布的克重、水壓、透氣量、阻力、效率等進(jìn)行抽檢。抽檢來(lái)料的15%。胚布專(zhuān)職檢驗(yàn)員將檢驗(yàn)結(jié)果在《胚布檢驗(yàn)明細(xì)表》、《胚布檢驗(yàn)檢測(cè)報(bào)告》中予以記錄，報(bào)告一式五份：一份留底，一份車(chē)間負(fù)責(zé)人，一份檢測(cè)中心，一份業(yè)務(wù)部，一份倉(cāng)庫(kù)。凡抽檢項(xiàng)目有5%的不合格品，應(yīng)再抽15%，若再有不合格，則整批不合格。經(jīng)檢驗(yàn)合格后的胚布由專(zhuān)職檢驗(yàn)員做好標(biāo)識(shí)，倉(cāng)庫(kù)辦好入庫(kù)手續(xù)，填寫(xiě)臺(tái)賬。對(duì)經(jīng)檢驗(yàn)部合格的胚布，執(zhí)行《不合格品管理程序》。

B聚四氟乙烯樹(shù)脂粉、各類(lèi)助劑的檢驗(yàn)和試驗(yàn)（郎偉英）

各類(lèi)原、輔料進(jìn)廠后，由采購(gòu)部填寫(xiě)送檢單（注明：規(guī)格、數(shù)量、品名、送貨單位）交檢測(cè)中心。由原、輔料專(zhuān)職檢驗(yàn)員對(duì)樹(shù)脂粉和各類(lèi)助劑進(jìn)行外觀全檢，性能指標(biāo)抽檢，抽檢每個(gè)批號(hào)做試樣，并填寫(xiě)《來(lái)料檢驗(yàn)、檢測(cè)報(bào)告》一式五份：一份留底，一份檢測(cè)中心，一份倉(cāng)庫(kù)，一份采購(gòu)，一份車(chē)間負(fù)責(zé)人；針對(duì)絲線原料進(jìn)廠后需冷藏5-7天，取不同批號(hào)試樣，按1200D、500D不同工藝進(jìn)行測(cè)試。1200D定型1.4m∕min的速度8倍，分切5m∕min 4.5倍，結(jié)果達(dá)到3.5g∕d以上做1200D，達(dá)到3.8g∕d以上做500D；500D定型1.1m∕min的速度10倍，分切4.5m∕min 3.66倍，結(jié)果達(dá)到3.8g∕d以上可用于500D或1200D，結(jié)果達(dá)到3.5g∕d以上，可用于1200D。③ 產(chǎn)品工序檢驗(yàn)和試驗(yàn)

⑴ 班組長(zhǎng)和操作工的自檢、互檢。

各工序生產(chǎn)過(guò)程中，班組長(zhǎng)和操作工按各工段生產(chǎn)工藝操作規(guī)程和產(chǎn)品工藝標(biāo)準(zhǔn)操作檢驗(yàn)，對(duì)各工序半成品進(jìn)行自檢，自檢合格轉(zhuǎn)入下道工序，發(fā)現(xiàn)不合格時(shí)及時(shí)向相關(guān)人員反映，作出快速處理。各工序?qū)⒆詸z、互檢質(zhì)量情況在《工藝流程卡》上予以記錄。⑵ 檢驗(yàn)員、檢測(cè)中心人員的抽檢和全檢。復(fù)合過(guò)程檢：由復(fù)合專(zhuān)職檢驗(yàn)檢測(cè)員配合班組長(zhǎng)共同對(duì)復(fù)合過(guò)程中的產(chǎn)品外觀、內(nèi)在進(jìn)行檢驗(yàn)。一旦發(fā)現(xiàn)復(fù)合過(guò)程中有膠點(diǎn)、氣泡、粘膜等外觀現(xiàn)象和透氣量低、阻力、效率差等內(nèi)在現(xiàn)象，及時(shí)向班組長(zhǎng)或車(chē)間負(fù)責(zé)人反映。此過(guò)程檢驗(yàn)檢測(cè)員全檢，檢測(cè)中心抽檢本批量的20%。

拉幅過(guò)程檢：由專(zhuān)職檢驗(yàn)檢測(cè)員配合班組長(zhǎng)對(duì)拉幅過(guò)程中的產(chǎn)品外觀、內(nèi)在進(jìn)行檢驗(yàn)。一旦發(fā)現(xiàn)拉幅過(guò)程中有連續(xù)破洞、不均勻、固化低等外表現(xiàn)象和透氣量低等內(nèi)在現(xiàn)象及時(shí)向班組長(zhǎng)或車(chē)間負(fù)責(zé)人反映。此過(guò)程檢驗(yàn)員、檢測(cè)中心人員對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行抽檢。二次性膜檢測(cè)員需每卷進(jìn)行透氣量檢測(cè)，在《透氣量檢測(cè)單》中予以記錄。檢測(cè)中心人員每天至少抽檢5卷，在《檢測(cè)報(bào)告》中予以記錄。分切、加捻過(guò)程檢：由專(zhuān)職檢驗(yàn)員、檢測(cè)員配合班組長(zhǎng)對(duì)生產(chǎn)過(guò)程中的定型溫度、分切倍數(shù)、捻度、分切后克重、相對(duì)（g∕d）等進(jìn)行檢驗(yàn)、檢測(cè)。如果在生產(chǎn)過(guò)程中倍數(shù)達(dá)到相對(duì)（g∕d）要求，而克重達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)，那么換刀。分切克重偏差不能超過(guò)5%，此項(xiàng)過(guò)程中專(zhuān)職檢測(cè)員和檢測(cè)中心人員按批號(hào)要不定時(shí)對(duì)絲線進(jìn)行抽檢，每天至少5-8次。一旦發(fā)現(xiàn)達(dá)不到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，立即通知車(chē)間負(fù)責(zé)人及相關(guān)人員進(jìn)行過(guò)程調(diào)整。檢測(cè)結(jié)果在《絲、線檢測(cè)報(bào)告》中予以記錄。

④ 成品檢驗(yàn)和檢測(cè)

檢驗(yàn)檢測(cè)員按照《生產(chǎn)計(jì)劃單》及相關(guān)的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)和《成品檢驗(yàn)規(guī)程》對(duì)每個(gè)訂單的產(chǎn)品進(jìn)行外觀和內(nèi)在的質(zhì)量檢驗(yàn)，將檢驗(yàn)結(jié)果和檢測(cè)結(jié)果分別在《拼件單》、《品檢單》、《檢測(cè)報(bào)告》、《成品面料測(cè)試報(bào)告》、《成品濾料測(cè)試報(bào)告》中予以記錄。A 復(fù)合面料：

檢驗(yàn)員外觀檢——全檢，門(mén)幅、品名、規(guī)格、布面情況等。在《品檢單》中予以記錄。（沈芳嫻）

檢測(cè)員內(nèi)在檢——抽檢，抽檢本批量的30%，透濕、克重、水壓等。在《檢測(cè)報(bào)告》中予以記錄。（牟瓊蘭）

檢測(cè)中心對(duì)成品內(nèi)在進(jìn)行抽檢，抽檢批量的20%，檢驗(yàn)項(xiàng)目：水壓、透濕、克重、據(jù)油級(jí)別、熱收縮率、耐洗滌等（按客戶(hù)要求）。在《成品面料測(cè)試報(bào)告》中予以記錄。抽檢合格允許發(fā)貨。（章海燕）

B 復(fù)合濾料：

檢驗(yàn)員外觀檢——全檢，檢驗(yàn)項(xiàng)目：門(mén)幅、品名、規(guī)格、布面情況等，在《品檢單》中予以記錄。（沈芳嫻）

檢測(cè)員內(nèi)在檢——抽檢，檢驗(yàn)項(xiàng)目：透氣量、阻力、效率（按客戶(hù)要求），在《檢測(cè)報(bào)告》中予以記錄。（牟瓊蘭）

檢測(cè)中心對(duì)成品的內(nèi)在進(jìn)行抽檢，抽檢批量的20%，檢驗(yàn)項(xiàng)目：透氣量、阻力、效率等，在《成品濾料測(cè)試報(bào)告》中予以記錄。抽檢合格允許發(fā)貨。（章海燕）

C 服裝膜： 檢驗(yàn)員外觀檢——全檢，檢驗(yàn)項(xiàng)目：門(mén)幅、規(guī)格、膜面情況等，在《拼件單》中予以記錄。

檢驗(yàn)員內(nèi)在檢—— 檢測(cè)中心

D 一次性空氣膜：

檢驗(yàn)員外觀檢——全檢，檢驗(yàn)項(xiàng)目：規(guī)格、門(mén)幅、膜面情況等，在《拼件單》中予以記錄。

檢測(cè)員內(nèi)在檢——根據(jù)每個(gè)訂單的客戶(hù)要求實(shí)行每卷全檢，檢測(cè)項(xiàng)目：透氣量，在《檢測(cè)報(bào)告》中予以記錄。

檢測(cè)中心對(duì)成品內(nèi)在根據(jù)每個(gè)訂單的客戶(hù)要求進(jìn)行抽檢，抽檢每批的15%，檢驗(yàn)項(xiàng)目：透氣量，在《檢測(cè)報(bào)告》中予以記錄。（備注：此項(xiàng)需業(yè)務(wù)員在發(fā)貨通知單上注明透氣量范圍）

E 二次性空氣膜：

檢驗(yàn)員外觀檢——全檢，檢驗(yàn)項(xiàng)目：規(guī)格、門(mén)幅、膜面情況等，在《拼件單》中予以記錄，并根據(jù)《透氣量檢測(cè)單》分級(jí)打卷。

檢測(cè)員在生產(chǎn)過(guò)程中每卷全檢，檢測(cè)項(xiàng)目：透氣量，在《透氣量檢測(cè)單》中予以記錄。

檢測(cè)中心：⑴根據(jù)檢驗(yàn)員每天的檢驗(yàn)數(shù)量進(jìn)行抽檢，每天至少5卷。

⑵根據(jù)發(fā)貨通知單進(jìn)行抽檢，抽檢批量的10%，在《檢測(cè)報(bào)告》中予以記錄。

F 成品絲（500D）、成品線（1200D）：

檢驗(yàn)員：每箱進(jìn)行抽檢，至少4卷。檢測(cè)項(xiàng)目：克重、強(qiáng)度、相對(duì)（g∕d)，在《絲、線檢測(cè)報(bào)告》中予以記錄。

檢測(cè)中心：⑴每天進(jìn)行抽檢，至少6卷，檢測(cè)項(xiàng)目：克重、強(qiáng)度、相對(duì)（g∕d)，在《絲、線檢測(cè)報(bào)告》中予以記錄。⑵根據(jù)發(fā)貨通知單客戶(hù)要求的克重、強(qiáng)度要求，對(duì)每批貨物在發(fā)貨前進(jìn)行抽檢。并填寫(xiě)《絲、線對(duì)外檢測(cè)報(bào)告》。

第五篇：趣味化學(xué)試驗(yàn)教案

趣味化學(xué)實(shí)驗(yàn)教案

噴霧作畫(huà)

實(shí)驗(yàn)原理

FeCl3溶液遇到硫氰化鉀(KSCN)溶液顯血紅色,遇到亞鐵氰化鉀〔K4[Fe(CN)6]〕溶液顯藍(lán)色,遇到鐵氰化鉀〔K3[Fe(CN)6]〕溶液顯綠色,遇苯酚顯紫色。FeCl3溶液噴在白紙上顯黃色。

實(shí)驗(yàn)用品

白紙、毛筆、噴霧器、木架、摁釘。

FeCl3溶液、硫氰化鉀溶液、亞鐵氰化鉀濃溶液、鐵氰化鉀濃溶液、苯酚濃溶液。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.用毛筆分別蘸取硫氰化鉀溶液、亞鐵氰化鉀濃溶液、鐵氰化鉀濃溶液、苯酚濃溶液在白紙上繪畫(huà)。

2.把紙晾干, 釘在木架上。

3.用裝有FeCl3溶液的噴霧器在繪有圖畫(huà)的白紙上噴上FeCl3溶液。檢驗(yàn)含碘食鹽成分中的碘

實(shí)驗(yàn)原理

含碘食鹽中含有碘酸鉀(KIO3),除此之外，一般不含有其他氧化性物質(zhì)。在酸性條件下IO3-能將I-氧化成I2, I2遇淀粉試液變藍(lán)；而不加碘的食鹽則不能發(fā)生類(lèi)似的反應(yīng)。

實(shí)驗(yàn)用品

試管、膠頭滴管。

含碘食鹽溶液、不加碘食鹽溶液、KI溶液、稀硫酸、淀粉試液。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.在2支試管中分別加入少量含碘食鹽溶液和不加碘食鹽溶液,然后各滴入幾滴稀硫酸,再滴入幾滴淀粉試液。觀察現(xiàn)象。

2.在另一試管中加入適量KI溶液和幾滴稀硫酸,然后再滴入幾滴淀粉試液。觀察現(xiàn)象。

3.將第3支試管中的液體分別倒入前2支試管里，混合均勻,觀察現(xiàn)象。

電池的制作

①方法

用一根5 cm銅絲和一條2 mm寬的鋅片，分別插到土豆或西紅柿內(nèi)；再用耳機(jī)的兩端接觸銅絲和鋅片，便能清晰地聽(tīng)到聲音。如果把12個(gè)土豆按上法每個(gè)都插入銅片和鋅片然后串聯(lián)，接上電鍵及1.5 V的小電珠；合鍵時(shí)電珠被點(diǎn)亮。

②原理

銅鋅電池中銅為正極、鋅為負(fù)極，土豆汁或西紅柿汁為電解質(zhì)溶液，起導(dǎo)電作用。

燒不著的棉布

棉布是由棉花制成的，棉花主要的化學(xué)成分是纖維素分子構(gòu)成的，它含有碳、氫、氧元素，所以是可燃的物質(zhì)。布條事先浸過(guò)30％的磷酸鈉溶液，晾干后再浸入30％的明礬溶液中，再晾于，這樣，布條上就有兩種化學(xué)藥品，磷酸鈉和明礬，磷酸鈉在水中顯堿性，而明礬在水中顯酸性，它們反應(yīng)之后除生成水外，還生成不溶解于水的氫氧化鋁。所以實(shí)際上棉布條被一層氫氧化鋁薄膜包圍了，氫氧化鋁遇熱后又變成了氧化鋁和水，就是這層致密的氧化鋁薄膜保護(hù)了布條，才免于火的襲擊。經(jīng)過(guò)這樣處理過(guò)的棉布在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和國(guó)防建設(shè)上都廣泛的應(yīng)用。

紅糖制白糖

【實(shí)驗(yàn)原理】

紅糖中含有一些有色物質(zhì)，要制成白糖，須將紅糖溶于水，加入適量活性炭，將紅糖中的有色物質(zhì)吸附，再經(jīng)過(guò)濾、濃縮、冷卻后便可得到白糖。

【實(shí)驗(yàn)步驟及現(xiàn)象】

稱(chēng)取5 g～10 g紅糖放在小燒杯中，加入40 mL水，加熱使其溶解，加入0.5 g～1 g活性炭，并不斷攪拌，趁熱過(guò)濾懸濁液，得到無(wú)色液體，如果濾液呈黃色，可再加入適量的活性炭，直至無(wú)色為止。將濾液轉(zhuǎn)移到小燒杯里，在水浴中蒸發(fā)濃縮。當(dāng)體積減少到原溶液體積的1/4左右時(shí)，停止加熱。從水浴中取出燒杯，自然冷卻，有白糖析出。

“琥珀”標(biāo)本的制作

把買(mǎi)來(lái)的優(yōu)質(zhì)松香（用量的多少根據(jù)昆蟲(chóng)大小來(lái)決定，一般100克左右就能做一塊），放在燒杯內(nèi)，加少量酒精（它們的比例一般采用10：1），用酒精燈加熱，不斷地用玻璃棒攪拌，直到松香熔化，含的酒精基本上蒸發(fā)就好了

然后，把要做標(biāo)本的蝴蝶、甲殼蟲(chóng)、小植物放在事先用硬紙折好的小紙盒內(nèi)（先在折好的紙盒內(nèi)襯一層蠟紙）。紙盒折成象火柴盒芯子的形狀。再把熔化的松香慢慢倒入盒內(nèi)。當(dāng)松香凝結(jié)變硬以后，撕去紙盒，用快刀小心地削去標(biāo)本四周多余部分，這是琥珀標(biāo)本的毛坯，只有上面透明，可以看清楚里面的小昆蟲(chóng)，其余的五面是毛糙、不透明的，看不清里面的小昆蟲(chóng)，還必須經(jīng)過(guò)酒精洗滌，晾干，這樣整塊人造琥珀通身透明，小昆蟲(chóng)象冬眠般地睡在里面，微細(xì)的結(jié)構(gòu)都看得一清二楚，好象一塊真的昆蟲(chóng)琥珀一樣。裝在玻璃盒內(nèi)，標(biāo)本就制成功了。

制作不易生銹的鐵釘（帶有氧化膜）材料：鐵釘

儀器：三腳架，石棉網(wǎng)，酒精燈，燒杯，試管

藥品：稀鹽酸，稀氫氧化鈉，氫氧化鈉固體，硝酸鈉，亞硝酸鈉，蒸餾水

原理：

亞硝酸根在中性和堿性環(huán)境中有一定的氧化性，在強(qiáng)堿溶液中，與鐵反應(yīng)生成亞鐵酸鈉（Na2Fe2O4）和一水合氨，生成的亞鐵酸鈉不穩(wěn)定，在亞硝酸根和鐵的作用下在鐵表面分解為致密氧化膜。步驟：

1、先用試管量取適量稀氫氧化鈉，把鐵釘投進(jìn)，除去油膜

2、再用試管量取適量稀鹽酸，把鐵釘投進(jìn)，除去鍍鋅層，氧化膜和鐵銹

3、稱(chēng)取2g固體氫氧化鈉，0.3g硝酸鈉和一角匙亞硝酸鈉，在燒杯中溶于10ml蒸餾水

4、把鐵釘投入燒杯中，加熱至表面生成亮藍(lán)色或黑色的物質(zhì)為止 注意：

NaOH有強(qiáng)烈腐蝕性，并且溶于水時(shí)放出大量熱。而亞硝酸鈉為劇毒物質(zhì)，做完實(shí)驗(yàn)要徹底把手洗干凈。

指紋檢查

一、碘蒸氣法

試驗(yàn)原理

碘受熱時(shí)會(huì)升華變成碘蒸氣。碘蒸氣能溶解在手指上的油脂等分泌物中,并形成棕色指紋印跡。

實(shí)驗(yàn)用品

試管、橡膠塞、藥匙、酒精燈、剪刀、白紙。碘。實(shí)驗(yàn)步驟

1.取一張干凈、光滑的白紙,剪成長(zhǎng)約4 cm、寬不超過(guò)試管直徑的紙條,用手指在紙條上用力摁幾個(gè)手印。

2.用藥匙取芝麻粒大的一粒碘,放入試管中。把紙條懸于試管中(注意摁有手印的一面不要貼在管壁上),塞上橡膠塞。

3.把裝有碘的試管在酒精燈火焰上方微熱一下,待產(chǎn)生碘蒸氣后立即停止加熱,觀察紙條上的指紋印跡。

二、硝酸銀溶液法：

向指紋印上噴硝酸銀溶液，指紋印上的氯化鈉就會(huì)轉(zhuǎn)化成氯化銀不溶物。經(jīng)過(guò)日光照射，氯化銀分解出銀細(xì)粒，就會(huì)象照相館片那樣顯示棕黑色的指紋，這是刑偵中常用方法。這種方法可檢測(cè)出更長(zhǎng)時(shí)間之前的指紋。

自制豆腐

【實(shí)驗(yàn)步驟及現(xiàn)象】

（A）浸泡：加 300 mL水浸泡 24 小時(shí)（若氣溫較高時(shí)，中間可更換一次水），使黃豆充分膨脹，然后倒掉浸泡水。

（B）研磨：將泡好的大豆放在家用粉碎機(jī)內(nèi)，加入200 mL水，進(jìn)行粉碎。

（C）制漿：將研磨好的豆?jié){和豆渣一并倒入放有雙層紗布的過(guò)濾器中抽濾，另取100 mL水，分多次沖洗濾餅，充分提取豆渣中的豆?jié){。濾液即為濃豆?jié){。

（D）凝固變性：將自制的濃豆?jié){（或直接用市售的袋裝濃豆?jié){）倒入一個(gè)潔凈的500 mL的燒杯中，用酒精燈加熱至80 ℃左右，然后邊攪拌，邊向熱豆?jié){中加入飽和石膏水，直至有白色絮狀物產(chǎn)生。停止加熱，靜置片刻后，就會(huì)看到豆?jié){中有凝固的塊狀沉淀物析出。

（E）成型：將上述有塊狀沉淀物的豆?jié){靜置20分鐘后過(guò)濾，再將濾布上的沉淀物集中成一團(tuán)，疊成長(zhǎng)方形，放在潔凈的桌面上，用一個(gè)盛有冷水的小燒杯壓在包有豆腐團(tuán)塊的濾布上，大約30分鐘后，即可制成一小塊豆腐。若用市售的濃豆?jié){為原料，制成的豆腐更為細(xì)嫩潔白。

（F）保存：為了使制成的豆腐保鮮而不變質(zhì)，將新制成的豆腐浸于2%～5%的食鹽水中，放在陰涼處，可使豆腐數(shù)天內(nèi)保鮮而不變質(zhì)。

豆腐中鈣質(zhì)和蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)

用品：燒杯、漏斗、濾紙、鐵架臺(tái)(帶鐵圈)、精密pH試紙。

草酸鈉、濃硝酸。原理：豆腐中的鈣質(zhì)與草酸鈉溶液反應(yīng)便生成不溶于水的草酸鈣白色沉淀。

Ca2+＋Na2(COO)2－→Ca(COO)2↓＋2Na+ 蛋白質(zhì)遇到濃硝酸，微熱后呈黃色沉淀析出，冷卻后再加入過(guò)量的氨水，沉淀就變成橙黃色。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)分子中一般有帶苯環(huán)的氨基酸，濃硝酸和苯環(huán)發(fā)生硝化反應(yīng)，能生成黃色的硝基化合物，故可用來(lái)檢驗(yàn)蛋白質(zhì)。

操作：

1.豆腐的酸堿性試驗(yàn):取200克豆腐放入燒杯中，加入20毫升蒸餾水，用玻棒攪拌，并搗碎到不再有塊狀存在。過(guò)濾，得到無(wú)色澄清的濾液和白色的濾渣。

用精密pH試紙測(cè)試豆腐濾液的酸堿性(一般測(cè)得的pH值為6.2，顯弱酸性)。

2.豆腐中鈣質(zhì)的檢驗(yàn)取上述豆腐濾液2毫升于試管中，再滴入幾滴濃草酸鈉溶液，試管中立即出現(xiàn)明顯的白色沉淀。說(shuō)明豆腐中含有豐富的鈣質(zhì)，而且能溶于水，不一定與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起。

3.豆腐中蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)取上述白色的豆腐濾渣少許，放入試管中，再滴入幾滴濃硝酸，然后微熱，可以看到白色的豆腐濾渣變成黃色。冷卻后，加入過(guò)量的氨水，黃色轉(zhuǎn)變成橙黃色，這就是蛋白質(zhì)的黃色反應(yīng)。

注意事項(xiàng)：

1.在制豆腐濾液前，一定要把豆腐搗碎，才能使鈣離子溶解到水中。

2.由于豆腐中含有較多蛋白質(zhì)，形成膠體，故過(guò)濾較慢。但蛋白質(zhì)一般不易透過(guò)濾紙，所以濾液不會(huì)有黃色反應(yīng)。

燒不斷的棉線

在一杯熱水中不斷地加入食鹽，并不斷攪拌，直到食鹽不再溶解為止。取一根20 cm～30 cm的棉線，在一端縛上一個(gè)回形針，然后將棉線浸沒(méi)在濃鹽水中數(shù)分鐘，取出后將棉線吊起來(lái)晾干。把晾干的棉線再次浸入濃鹽水中，取出晾干，重復(fù)多次。

將這條特制棉線的一頭扎在鐵絲上，讓縛有回形針的那端懸在下面。用燃著的火柴去點(diǎn)棉線的下端。只見(jiàn)火焰慢慢地向上燃燒，一直燃到鐵絲后熄滅，棉線會(huì)被燒成焦黑卻沒(méi)有斷，回形針還掛在那里。這是因?yàn)樘刂泼蘧€中充滿(mǎn)了食鹽晶體，點(diǎn)燃后，棉線的纖維雖然已燒掉，但熔點(diǎn)高達(dá)800 ℃的食鹽卻不受影響，仍然能保持棉線的原有形狀。

在點(diǎn)燃棉線時(shí)，注意保持鐵絲穩(wěn)定，防止因?yàn)槎秳?dòng)而使棉線斷開(kāi)。如用明礬代替食鹽，將棉線換成一塊棉布，做這個(gè)實(shí)驗(yàn)的效果也很好，棉布燃燒過(guò)后，也能保持原樣不斷裂。

褪字靈的制作

藥品：草酸、蒸餾水、高錳酸鉀、濃鹽酸、漂白粉。

步驟：

先配甲液（草酸溶液），用角匙取少量草酸晶體、放入燒杯或錐形瓶中、加蒸餾水使之溶解。然后將此溶液倒入一只滴瓶中，標(biāo)簽注明甲液。

再配制乙液（氯水或漂白粉溶液）。

①氯水的配制方法：將一角匙高錳酸鉀晶體加入燒瓶中，然后再向燒瓶中加入濃鹽酸，將燒瓶塞和導(dǎo)管連接好，固定在鐵架臺(tái)的石棉網(wǎng)上，用酒精燈加熱。導(dǎo)管導(dǎo)入裝有蒸餾水的錐形瓶中，片刻后將錐瓶中新制成的氯水裝入乙滴瓶中。

②漂白粉溶液的配制：如果沒(méi)有條件準(zhǔn)備一套制氯水的裝置，就可以用漂白粉溶液代替氯水。配制漂白粉溶液的方法比較簡(jiǎn)單。用角匙將漂白粉加入到燒杯中，然后加蒸餾水溶解。漂白粉的溶解度較小，因此配制的溶液有些渾濁。將此液倒入乙滴瓶中即可。

這樣，消字靈就制成了。去字跡時(shí)，先用甲液滴在字跡上，然后再將乙液滴上一滴，字跡會(huì)立即消失。注意晾干后再將修改的字跡寫(xiě)上去。

用雞蛋做的趣味實(shí)驗(yàn) 趣味實(shí)驗(yàn)一：雞蛋入瓶 將雞蛋浸在10%的醋酸中，待雞蛋殼變軟后，將蛋取出，找一個(gè)瓶口略比雞蛋小的廣口瓶，往廣口瓶中投入一燃著的酒精棉球，火焰熄滅后，迅速將雞蛋的小頭對(duì)準(zhǔn)瓶口，雞蛋很快被吸入瓶中。這是因?yàn)槠恐袎簭?qiáng)低于外界大氣壓的緣故。過(guò)一段時(shí)間蛋殼會(huì)稍變硬，似雞蛋原樣。這是為什么呢？你能說(shuō)出其中的原因嗎？

趣味實(shí)驗(yàn)二：蛋殼刻畫(huà)

取一只紅殼雞蛋（紅殼雞蛋的蛋殼稍硬），洗凈，用布輕輕擦干。取10 g～20 g的蠟，加熱使之熔化，用毛筆蘸取蠟液，在蛋殼上繪圖或?qū)懽?，待白蠟冷凝后，把雞蛋慢慢浸入10%的醋酸中，用筷子撥動(dòng)雞蛋，使它均勻地跟溶液接觸約20～30分鐘。當(dāng)?shù)皻け砻娈a(chǎn)生較多的氣泡，蛋殼上有明顯的腐蝕現(xiàn)象即可。取出雞蛋，用清水漂洗，晾干。用鐵釘在雞蛋的兩端各打一孔，用嘴吹出蛋清和蛋黃。待蛋清和蛋白全部滴出后，用小刀輕輕刮去涂在殼上的白蠟，最后將蛋殼放在熱水中浸一下，就能看到明顯的圖案花紋或字跡，被腐蝕的蛋殼表面很容易上色

趣味實(shí)驗(yàn)三：蛋白留痕

取一只雞蛋，洗去表面的油污，擦干。用毛筆蘸取醋酸，在蛋殼上寫(xiě)字。等醋酸蒸發(fā)后，把雞蛋放在稀硫酸銅溶液里煮熟，12 待蛋冷卻后剝?nèi)サ皻ぃu蛋白上留下了藍(lán)色或紫色的清晰字跡，而外殼卻不留任何痕跡。

這是因?yàn)榇姿崛芙獾皻ず竽苌倭咳苋氲鞍?。雞蛋白是由氨基酸組成的球蛋白，它在弱酸性條件中發(fā)生水解，生成多肽等物質(zhì)，這些物質(zhì)中的肽鍵遇Cu2+發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，呈現(xiàn)藍(lán)色或者紫色。

、切去火頭和把火切為兩截

實(shí)驗(yàn)原理

銅具有良好的導(dǎo)熱性，將一張細(xì)眼銅絲網(wǎng)壓在火焰頭上，由于銅網(wǎng)使火焰熱量散失，穿過(guò)銅網(wǎng)的酒精蒸氣溫度下降到著火 點(diǎn)以下而熄滅，出現(xiàn)網(wǎng)下燃燒網(wǎng)上無(wú)火的“火去頭”的現(xiàn)象，用燃著的木條去點(diǎn)燃銅網(wǎng)上的酒精蒸氣，又燃燒起來(lái)，造成火焰被“切”為兩截的現(xiàn)象。

實(shí)驗(yàn)操作

取一張大小100 mm×100 mm左右、網(wǎng)眼l mm2左右的銅網(wǎng)，從酒精燈火焰上方壓至火焰內(nèi)焰中部，觀察“火被去頭”；再用燃著的木條點(diǎn)燃網(wǎng)上酒精蒸氣，觀察火焰被“切為兩截”。

葉脈書(shū)簽的制作

原理

葉肉遇到腐蝕性液體就會(huì)發(fā)生腐爛。經(jīng)過(guò)加熱，它會(huì)腐爛得更快。葉脈比較堅(jiān)韌，不容易被腐蝕。因此，可以將一些葉片堅(jiān)硬、葉脈堅(jiān)韌的樹(shù)葉制成葉脈書(shū)簽。

工具與材料

步驟

1、把約100毫升水倒入燒杯，在水中加入4克氫氧化鈉，2、把樹(shù)葉浸沒(méi)在溶液中，繼續(xù)加熱15分鐘左右，用鑷子輕

3、當(dāng)葉片變色、葉肉酥爛時(shí)，用鑷子取出葉片，放在盛有清水的玻璃杯內(nèi)。

4、從清水里取出葉片，放在玻璃上，用舊牙刷在流水中輕輕地刷葉片的正面和背面，刷去葉片的柔軟部分，露出白色的葉脈。

56、取出壓平的葉脈片，待葉脈干透后，用毛筆在葉脈兩面

7、取出涂上顏料的葉脈片，在它的葉柄上系一條彩色絲線，植物指示劑 實(shí)驗(yàn)原理

許多植物的花、果、莖、葉中都含有色素,這些色素在酸性溶液或堿性溶液里顯示不同的顏色,可以作為酸堿指示劑。

實(shí)驗(yàn)用品

試管、量筒、玻璃棒、研缽、膠頭滴管、點(diǎn)滴板、漏斗、紗布?；ò?如牽?；?、植物葉子(如紫甘藍(lán))、蘿卜(如胡蘿卜、北京心里美蘿卜)、酒精溶液(乙醇與水的體積比為1∶1)、稀鹽酸、稀NaOH溶液。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.取一些花瓣、植物葉子、蘿卜等,分別在研缽中搗爛后,各加入5 mL酒精溶液,攪拌。再分別用4層紗布過(guò)濾,所得濾液分別是花瓣色素、植物葉子色素和蘿卜色素等的酒精溶液，將它們分裝在3支試管中。

2.在白色點(diǎn)滴板的孔穴中分別滴入一些稀鹽酸、稀NaOH溶液、蒸餾水,然后各滴入3滴花瓣色素的酒精溶液。觀察現(xiàn)象。

3.用植物葉子色素的酒精溶液、蘿卜色素的酒精溶液等代替花瓣色素的酒精溶液做上述實(shí)驗(yàn),觀察現(xiàn)象。

實(shí)驗(yàn)記錄