第一篇：現(xiàn)代生物學試驗—遺傳與分子生物學試驗教案

現(xiàn)代生物學實驗

（六）— 遺傳與分子生物學實驗教案

課程名稱: 遺傳與分子生物學實驗

英文名稱: Experiment Genetic & Molecular Biology 課程編號:學科類通修課程 課程學時：108學時 課程學分：3學分

教師姓名: 章

軍

周涵韜

楊玉榮 ……

前導課程：遺傳學、分子生物學、動物生物學、植物生物學、微生物學、生物化學 教學方式:實驗及技術理論講授

考試方式:平時考核＋筆試＋實驗操作考試 教學目標和要求：

本課程性質是一門研究生物遺傳規(guī)律和分子生物學的實踐課程，是生命科學相關專業(yè)的主干課。

本課程的學習目的與任務在于通過遺傳學和分子生物學實驗的學習和實踐，使學生加深遺傳學和分子生物學理論的認識，掌握基本實驗方法和技術，了解分子生物學技術前沿和研究方法，初步具備運用所學知識分析問題和解決問題的能力。

通過本實驗的學習和實踐，學生掌握遺傳學和分子生物學的基本原理和實驗方法，加強解決生物學問題的能力訓練，達到本科教育水平，為繼續(xù)深造打好基礎。

主要內容：

要求學生掌握遺傳學與分子生物學實驗的基本原理和基本知識，認識現(xiàn)代遺傳學的發(fā)展歷史，掌握遺傳學與分子生物學的基本研究技術的方法和原理。在教學中安排了2個綜合性和設計性的開放實驗，還充分利用錄象、課件或多媒體做一些模擬實驗。目的是培養(yǎng)學生的獨立操作和綜合分析實驗能力，以提高學生科研素質。

本課程分三個模塊化實驗教學，主要知識點包括：

模塊一：經典遺傳學研究方法，包含3次實驗課和一個果蠅誘變開放性實驗 1.果蠅的飼養(yǎng)和觀察

2.果蠅的誘變方法及遺傳分析 3.細菌轉導

4.轉座子引起的插入突變

模塊二：真核生物分子生物學研究方法，包含3次實驗課和一個植物RAPD鑒定開放性實驗

1.真核細胞基因組提取 2.DNA純化及鑒定 3.PCR技術

4.植物染色體提取及RAPD鑒定 模塊三：原核生物分子生物學研究方法，包含4次實驗課 1.質粒DNA的制備

2.DNA片段從凝膠中分離 3.DNA酶切

4.DNA的連接及轉化

主要教學方法：實驗技術及理論講授、實驗為主，課件教學為輔；指導與學生的設計性實驗、自主性實驗相結合。

使用教材 : 遺傳與分子生物學實驗講義（自編）

參考書及其它: 1．劉祖洞等，遺傳學實驗（第二版），高等教育出版社，1987.11 2．彭秀玲等，基因工程實驗技術（第二版），湖南科學技術出版社，1997.1 3．林加涵等，現(xiàn)代生物學實驗，高等教育出版社，2001.10

實驗項目

模塊一 經典遺傳學研究方法 實驗一 果蠅的飼養(yǎng)和觀察 實驗二 果蠅的誘變方法及遺傳分析 實驗三 細菌轉導

實驗四 轉座子引起的插入突變 模塊二 真核生物分子生物學研究方法 實驗五 真核細胞基因組提取 實驗六 DNA純化及鑒定 實驗七 PCR技術

實驗八 植物染色體提取及RAPD鑒定 模塊三 原核生物分子生物學研究方法 實驗九 質粒DNA的制備 實驗十 DNA片段從凝膠中分離 實驗十一 DNA酶切 實驗十二 DNA的連接及轉化

以上部分由黃磊從大綱或教學信息表轉入，此處提供的實驗項目可作為各模塊填寫的參考，請各位老師修改，下面部分由各課老師按照模板填入,根據課程模塊內容替換紅字部分，請在20日之前修改完回復

模 塊1：經典遺傳學研究方法

教學要求：

1．掌握經典遺傳學實驗的研究背景和相關技術、方法要求，2.掌握各實驗的基本原理，完成所有的實驗項目。3．掌握經典遺傳學實驗的基本要求，學習方法。

4．掌握所學技術、方法在經典遺傳學研究中的應用和拓展。教學學時：30學時 講授的內容：

1．模式生物介紹、果蠅雜交實驗方法、細菌遺傳學的基本思路和原則； 2．各實驗的基本原理，操作步驟和注意事項。

3．果蠅的飼養(yǎng)和觀察；果蠅的誘變方法及遺傳分析；細菌轉導；轉座子引起的插入突變等。果蠅誘變開放式實驗的介紹和總結等。實驗項目： 果蠅的飼養(yǎng)和觀察 2 果蠅的誘變方法及遺傳分析 3 細菌轉導 轉座子引起的插入突變

應學習的技術和方法：果蠅的飼養(yǎng)方法，果蠅和細菌培養(yǎng)基配制方法，顯微觀察和拍照方法，細菌涂板和劃線篩選法，遺傳分析技術等。

應學習的儀器使用方法：解剖鏡，普通離心機，恒溫培養(yǎng)箱，無菌操作臺 教學的重點和難點：

1．這是本院學生普通經典遺傳實驗的模塊，所以實驗教學內容的組織更新方面將會遇到困難。

2．講授部分的難點是研究歷史及進展，不同方法、原理的介紹。3．與理論課的對接。難點的解決辦法：

1．該講的講深、講透，特別是不同方法的原理、應用。2．細心進行現(xiàn)場指導。3．提供相關的閱讀參考書。

4．更新教學內容，提高同學們的學習興趣。

模 塊2：真核生物分子生物學研究方法

教學要求：

1．掌握真核生物分子生物學實驗的研究背景和相關技術、方法要求，2.掌握各實驗的基本原理，完成所有的實驗項目。3．掌握真核生物分子生物學實驗的基本要求，學習方法。

4．掌握所學技術、方法在真核生物分子生物學研究中的應用和拓展。教學學時：30學時 講授的內容：

1．分子生物學技術和進展介紹、實驗方法演示； 2．各實驗的基本原理，操作步驟和注意事項。

3．真核細胞基因組提取，DNA純化及鑒定，PCR技術，植物染色體提取及RAPD鑒定等。

實驗項目：

1.真核細胞基因組提取 2.DNA純化及鑒定 3.PCR技術

4.植物染色體提取及RAPD鑒定

應學習的技術和方法：真核細胞基因組提取，DNA純化及鑒定，PCR技術，DNA電泳技術，植物染色體提取及RAPD鑒定等。

應學習的儀器使用方法：離心機，無菌操作臺，PCR儀，紫外分光儀，電泳儀 教學的重點和難點：

1．這是本院學生真核生物分子生物學實驗的入門模塊，所以實驗教學內容的組織實施方面將會遇到困難。2．講授部分的難點是研究方法新進展，不同方法、原理的介紹和應用。3．與理論課的對接。難點的解決辦法：

1.實驗教學錄像的演示。

2.講解實驗要點，特別是不同方法的原理、應用。3.細心進行現(xiàn)場指導。4.提供相關的閱讀參考書。

模 塊3：原核生物分子生物學研究方法

教學要求：

1．掌握原核生物分子生物學實驗的研究背景和相關技術、方法要求，2.掌握各實驗的基本原理，完成所有的實驗項目。3．掌握原核生物分子生物學實驗的基本要求，學習方法。

4．掌握所學技術、方法在原核生物分子生物學研究中的應用和拓展。教學學時：30學時 講授的內容：

1．原核生物分子生物學實驗介紹、細菌分子生物學的基本思路和原則； 2．各實驗的基本原理，操作步驟和注意事項。

3．質粒DNA的制備，DNA片段從凝膠中分離DNA酶切，DNA的連接及轉化等。實驗項目：

1.質粒DNA的制備 2.DNA片段從凝膠中分離 3.DNA酶切

4.DNA的連接及轉化

應學習的技術和方法：質粒DNA的制備，DNA片段從凝膠中分離DNA酶切，DNA電泳技術，DNA的連接及細菌轉化等。

應學習的儀器使用方法：離心機，恒溫培養(yǎng)箱，無菌操作臺，搖床 教學的重點和難點：

1．這是本院學生原核生物分子生物學實驗的入門模塊，所以實驗教學內容的組織實施方面將會遇到困難。

2．講授部分的難點是研究技術進展，不同方法、原理的介紹。3．與理論課的對接。難點的解決辦法：

1.演示錄像，講透實驗細節(jié)操作，特別是不同方法的原理、應用。2.細心進行現(xiàn)場指導。3.提供相關的閱讀參考書。

第二篇：分子生物學試驗教學教案

分子生物學實驗教學教案(3000字)

河南科技大學

實驗教學教案

課程名稱 分子生物學

指導教師 李市場

河南科技大學實驗教學教案首頁

實驗一 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備及轉化

實驗目的 通過本實驗，掌握大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備及轉化的方法和技術。實驗原理 將質粒載體轉移進受體細菌，需誘導受體細菌產生一種短暫的感受態(tài)以攝取外源DNA。

轉化(Transformation)是將外源DNA分子引入受體細胞,使之獲得新的遺傳性狀的一種手段,它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領域的基本實驗技術。轉化過程所用的受體細胞一般是限制修飾系統(tǒng)缺陷的變異株，即不含限制性內切酶和甲基化酶的突變體(Rˉ,Mˉ),它可以容忍外源DNA分子進入體內并穩(wěn)定地遺傳給后代。為了提高轉化效率, 實驗中要考慮以下幾個重要因素：

1.細胞生長狀態(tài)和密度: 細胞生長密度以剛進入對數生長期時為好，可通過監(jiān)測培養(yǎng)液的OD600 來控制。DH5α菌株的OD600 為0.5時,細胞密度在5×107 個/ml左右(不同的菌株情況有所不同),這時比較合適。密度過高或不足均會影響轉化效率。

2.質粒的質量和濃度: 1ng的cccDNA即可使50μl 的感受態(tài)細胞達到飽和。一般情況下,DNA溶液的體積不應超過感受態(tài)細胞體積的5％。

3.試劑的質量: 所用的試劑,如CaCl2 等均需是最高純度的(GR.或AR.),并用超純水配制,最好分裝保存于干燥的冷暗處。

4.防止雜菌和雜DNA的污染。

本實驗以E.coli DH5a菌株為受體細胞,并用CaCl2處理,使其處于感受態(tài),然后與pUC19質粒共保溫,實現(xiàn)轉化。由于pUC19質粒帶有氨芐青霉素抗性基因(Ampr)，可通過Amp抗性來篩選轉化子。如受體細胞沒有轉入pUC19，則在含Amp的培養(yǎng)基上不能生長。能在Amp培養(yǎng)基上生長的受體細胞（轉化子）肯定已導入了pUC19。轉化子擴增后，可將轉化的質粒提取出，進行電泳、酶切等進一步鑒定。

一.儀器 控溫搖床(37℃)高速冷凍離心機

水浴鍋 冰箱（-20℃,‐70℃）

超凈工作臺 培養(yǎng)箱(37℃)752分光光度計 滅菌鍋

二.試劑 CaCl2 無菌水,冰

胰蛋白胨 酵母粉

Amp NaCl 三.其他用品

移液器，槍頭

1.5ml ,50ml 離心管 三角瓶 500ml 200ml 6cm平皿 試劑瓶60ml 量筒 燒杯

瓊脂 甘油

酒精燈 三角玻棒

酒精棉球 火柴

［溶液配制］ 0.1 mol/L CaCl2溶液 配置 滅菌

LB液體培養(yǎng)基

氨芐青霉素（Amp），用無菌水配制成50_60 mg/mL溶液，抽慮

滅菌置－20℃冰箱中保存。

四.材料 E.coli.DH5α

質粒 DNA 五: 實驗步驟：(CaCl2)（20人一班，分三組）

第一天：從大腸桿菌DH5α平板上挑取一個單菌落接于2 mL LB液體培養(yǎng)基

的試管中,37℃振蕩培過夜。

第二天：

1.取0.5 mL菌液轉接到一個含有50 mL LB液體培養(yǎng)基錐形瓶中，37℃振蕩培養(yǎng)

2－3 h(此時，OD600 ≤ 0.4-0.5，細胞數務必 ≤108／mL。此為實驗成 功的關鍵)3.將菌液轉移到50 mL離心管中，冰上放置10 min。

4.離心10 min（4000r/min）,回收細胞。4℃

5.倒出培養(yǎng)液，將管倒置1min以便培養(yǎng)液流盡。

6.用冰冷的0.1 mol/L CaCl2 10 mL懸浮沉淀，立即放在冰上30 min。

7.0－4℃ 6000 r/min,離心10 min，回收細胞。

8.用冰冷的0.1mol/L CaCl2 2 mL懸浮細胞，（務必放在冰上）。

9.分裝細胞，每200 μL一份。此細胞為感受態(tài)細胞。

轉化：

10.取200 μL新鮮制備的感受態(tài)細胞，加入DNA 2 μL（50 ng）混勻冰上放置30 min。

同時作兩個對照管

受體菌對照：200 μL感受態(tài)細胞＋2 μL無菌水

質粒對照：200 μL 0.1 mol/L CaCl2溶液＋2 μL 質粒DNA溶液

11.將管放到42℃循環(huán)水浴1－2 min。

12.冰浴2 min。

13.每管加800 μL LB液體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)1 h（慢搖）。

14.將適當體積（200 μL）已轉化的感受態(tài)細胞，涂在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)皿中。

15.倒置平皿37℃培養(yǎng)12－16 h，出現(xiàn)菌落。

16.計算轉化效率

關于大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備及轉化講解：

1、感受態(tài)細胞的概念

重組DNA分子體外構建完成后，必須導入特定的宿主（受體）細胞，使之無性繁殖并高效表達外源基因或直接改變其遺傳性狀，這個導入過程及操作統(tǒng)稱為重組DNA分子的轉化。

在原核生物中，轉化是一個較普遍的現(xiàn)象，在細胞間轉化是否發(fā)生，一方面取決于供體菌與受體菌兩者在進化過程中的親緣關系，另一方面還與受體菌是否處于一種感受狀態(tài)有著很大的關系。

所謂的感受態(tài)，即指受體（或者宿主）最易接受外源DNA片段并實現(xiàn)其轉化的一種生理狀態(tài)，它是由受體菌的遺傳性狀所決定的，同時也受菌齡、外界環(huán)

境因子的影響。cAMP可以使感受態(tài)水平提高一萬倍，而Ca2+也可大大促進轉化的作用。細胞的感受態(tài)一般出現(xiàn)在對數生長期，新鮮幼嫩的細胞是制備感受態(tài)細胞和進行成功轉化的關鍵。

制備出的感受態(tài)細胞暫時不用時，可加入占總體積15%的無菌甘油或-70℃保存（有效期6個月）。

2、轉化的概念及原理

在基因克隆技術中，轉化特指將質粒DNA或以其為載體構建的重組DNA導入細菌體內，使之獲得新的遺傳特性的一種方法。它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領域的基本實驗技術之一。

受體細胞經過一些特殊方法（如：電擊法，CaCl2等化學試劑法）處理后，使細胞膜的通透性發(fā)生變化，成為能容許外源DNA分子通過的感受態(tài)細胞。進入細胞的DNA分子通過復制、表達實現(xiàn)遺傳信息的轉移，使受體細胞出現(xiàn)新的遺傳性狀。

大腸桿菌的轉化常用化學法（CaCl2法），該法最先是由Cohen于1972年發(fā)現(xiàn)的。其原理是細菌處于0℃，CaCl2的低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形，轉化混合物中的DNA形成抗DNase的羥基-鈣磷酸復合物粘附于細胞表面，經42℃短時間熱沖擊處理，促使細胞吸收DNA復合物，在豐富培養(yǎng)基上生長數小時后，球狀細胞復原并分裂增值，被轉化的細菌中，重組子中基因得到表達，在選擇性培養(yǎng)基平板上，可選出所需的轉化子。

Ca2+處理的感受態(tài)細胞，其轉化率一般能達到5×106~2×107轉化子/ug質粒DNA，可以滿足一般的基因克隆試驗。如在Ca2+的基礎上，聯(lián)合其它的二價金屬離子（如Mn2+、Co2+）、DMSO或還原劑等物質處理細菌，則可使轉化率提高100~1000倍。

化學法簡單、快速、穩(wěn)定、重復性好，菌株適用范圍廣，感受態(tài)細菌可以在-70℃保存，因此被廣泛用于外源基因的轉化。

除化學法轉化細菌外，還有電擊轉化法，電擊法不需要預先誘導細菌的感受態(tài)，依靠短暫的電擊，促使DNA進入細菌，轉化率最高能達到109~1010轉化子/ug閉環(huán)DNA。因操作簡便，愈來愈為人們所接受。

3、感受態(tài)細胞制備及轉化中的影響因素

⑴、細胞的生長狀態(tài)和密度

最好從-70℃或-20℃甘油保存的菌種中直接轉接用于制備感受態(tài)細胞的菌液。不要用已經過多次轉接，及貯存在4℃的培養(yǎng)菌液。細胞生長密度以每毫升培養(yǎng)液中的細胞數在5×107個左右為佳。即應用對數期或對數生長前期的細菌，可通過測定培養(yǎng)液的OD600控制。對TG1菌株，OD600為0．5時，細胞密度在5×107個/ml左右。（應注意OD600值與細胞數之間的關系隨菌株的不同而不同）。密度過高或不足均會使轉化率下降。

此外，受體細胞一般應是限制-修飾系統(tǒng)缺陷的突變株，即不含限制性內切酶和甲基化酶的突變株。并且受體細胞還應與所轉化的載體性質相匹配。

⑵、質粒DNA的質量和濃度

用于轉化的質粒DNA應主要是超螺旋態(tài)的，轉化率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA的量過多或體積過大時，則會使轉化率下降。一般地，DNA溶液的體積不應超過感受態(tài)細胞體積的5%，1ng的cccDNA即可使50ul的感受態(tài)細胞達到飽和。

對于以質粒為載體的重組分子而言，分子量大的轉化效率低，實驗證明，大于30kb的重組質粒將很難進行轉化。此外，重組DNA分子的構型與轉化效率也密切相關，環(huán)狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，因此重組DNA大都構成環(huán)狀雙螺旋分子。

⑶、試劑的質量

所用的CaCl2等試劑均需是最高純度的，并用最純凈的水配制，最好分裝保存于4℃。

⑷、防止雜菌和雜DNA的污染

整個操作過程均應在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管，移液槍頭等最好是新的，并經高壓滅菌處理。所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、DNA酶或雜DNA所污染，否則均會影響轉化效率或雜DNA的轉入。

⑸、整個操作均需在冰上進行，不能離開冰浴，否則細胞轉化率將會降低。

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實驗

二、質粒DNA的提取及其酶切

實驗目的 通過本實驗學習和掌握堿裂解法提取質粒DNA。

實驗原理 堿裂解法提取質粒是根據共價閉合環(huán)狀質粒DNA與線性染色體DNA在拓撲學上的差異來分離它們。在pH值介于12.0～12.5這個狹窄的范圍內，線性的DNA雙螺旋結構解開而被變性，盡管在這樣的條件下，共價閉環(huán)質粒DNA的氫鍵會被斷裂，但兩條互補鏈彼此相互纏繞，仍會緊密地結合在一起。當加入pH4.8的乙酸鉀高鹽緩沖液恢復pH 至中性時，共價閉合環(huán)狀的質粒DNA的兩條互補鏈仍保持在一起，因此復性迅速而準確，而線性的染色體DNA的兩條互補鏈彼此已完全分開，復性就不會那木迅速而準確，它們纏繞形成網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA，蛋白質－SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。

實驗儀器：微量移液器，微量離心管，常用玻璃器皿，臺式高速離心機，分光光度計，恒溫培養(yǎng)箱，恒溫搖床，臺式離心機，高壓滅菌鍋。

試劑及溶液：(1)用堿法提取質粒DNA 溶液1（GET緩沖液）：50 mmol／葡萄糖，10mmol/L EDTA，25mmol/LTris.HCI pH 8.o，用前加溶菌酶4rng／mL。

溶液2（變性液）：0．2 rnoI/I NaOH，1％ SDS。

溶液3（乙酸鉀溶液）：60 ml的5 mol／L KAc, 11.5 ml,冰醋酸，28.5Ml H2O。

（2）緩沖液

EcoR酶解緩沖液（l 0×）

TBE緩沖液（I O×）：稱取Tris 108g,硼酸55g, 0.5moI／L, EDTA（pH8.o）40 ml，用H2o定容到l000 ml，高壓滅菌作為l 0×貯液9稀釋1 0倍后作為工作液使用。TE緩沖液：1 0 rnmol／L Tris HCl，I mmol／L EDTA pH 8.o，其中含有RNase2 0 μg／mL。

（3）上樣液及其他試劑 上樣液（6×）：0.25％溴酚藍,質量濃度40％蔗糖水溶液。

溴化乙啶染色液（10 rng／m t）：在20ml水中溶解0.2g溴化乙啶，混勻后4℃避

光保存。

異丙醇，7 0％乙醇等。

實驗步驟

（一）提取質粒

1.將2 ml 含相應抗生素的LB液體培養(yǎng)基加入試管中，接入上述的含pUC19質粒的大腸桿菌單菌落，37℃振蕩培養(yǎng)過夜。

2.取培養(yǎng)物倒入微量1.5ml離心管中，4000 r/min 離心 2 min。

3.棄上清，吸盡殘液，使細胞沉淀盡可能干燥。4.加入100ul溶液Ⅰ，充分混勻，室溫放置10 min。加200 ul溶液 Ⅱ（新鮮配制），蓋緊管蓋，輕輕顛倒數次混勻，將離心管放冰上5min。

5.加入150ul溶液 Ⅲ（冰上預冷），蓋緊管口，顛倒數次使混勻。冰上放置15min。

6.12000 r/min ,離心15 min，將上清轉至另一離心管中。

7.加入等體積酚：氯仿（1：1）（去蛋白），反復混勻，12000 r/min，離心5 min，將上清轉移到另一離心管中。

8.加入2倍體積無水乙醇，混勻后，室溫放置5～10 min。12000r/min離心 5 min。倒去上清液，把離心管倒扣在吸水紙上，吸干液體。

9.用1 ml 70% 乙醇洗滌質粒DNA沉淀，振蕩并離心，倒去上清液，真空抽干或空氣中干燥。

10.加50 ul TE緩沖液，其中含有20 ug/ml的胰RNA酶，使DNA完全溶解，－20℃保存。

（二）酶切

取DNA溶液，加酶切緩沖液，EcoRI酶1 ul，無菌水補至總體積10 ul，37℃保溫3h,加終止液，準備下個實驗電泳，分析質粒DNA的限制性酶切圖譜。

質粒提取的關鍵問題即質粒提取中三種溶液的作用： 堿法質粒抽提用到三種溶液： 溶液I，50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0； 溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS； 溶液III，3 M 醋酸鉀 / 2 M 醋酸。讓我們先來看看溶液I的作用。任何生物化學反應，首先要控

制好溶液的pH，因此用適當濃度的和適當pH值的Tris-Cl溶液，是再自然不過的了。那么50 mM葡萄糖是干什么的呢？說起來不可思議，加了葡萄糖后最大的好處只是懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部。因此，如果溶液I中缺了葡萄糖其實對質粒的抽提本身而言，幾乎沒有任何影響。所以說溶液I中葡萄糖是可缺的。那么EDTA呢？大家知道EDTA是Ca2+和Mg2+等二價金屬離子的螯合劑，配在分子生物學試劑中的主要作用是：抑制DNase的活性，和抑制微生物生長。在溶液I中加入高達 10 mM 的EDTA，無非就是要把大腸桿菌細胞中的所有二價金屬離子都螯合掉。如果不加EDTA，其實也沒什么大不了的，只要不磨洋工，只要是在不太長的時間里完成質粒抽提，就不用怕DNA會迅速被降解，因為最終溶解質粒的TE緩沖液中有EDTA。如果哪天你手上正好缺了溶液I，可不可以抽提質粒呢？實話告訴你，只要用等體積的水，或LB培養(yǎng)基來懸浮菌體就可以了。

有一點不能忘的是，菌體一定要懸浮均勻，不能有結塊。輪到溶液II了。這是用新鮮的0.4 N的NaOH和2％的SDS等體積混合后使用的。要新從濃NaOH稀釋制備0.4N的NaOH，無非是為了保證NaOH沒有吸收空氣中的CO2而減弱了堿性。很多人不知道其實破細胞的主要是堿，而不是SDS，所以才叫堿法抽提。事實上NaOH是最佳 的溶解細胞的試劑，不管是大腸桿菌還是哺乳動物細胞，碰到了堿都會幾乎在瞬間就溶解，這是由于細胞膜發(fā)生了從bilayer（雙層膜）結構向micelle（微囊）結構的相變化所導致。用了不新鮮的0.4 N NaOH，即便是有SDS也無法有效溶解大腸桿菌（不妨可以自己試一下），自然就難高效率抽提得到質粒。如果只用SDS當然也能抽提得到少量質粒，因為SDS也是堿性的，只是弱了點而已。很多人對NaOH的作用誤以為是為了讓基因組DNA變性，以便沉淀，這是由于沒有正確理解一些書上的有關DNA變性復性的描述所導致。有人不禁要問，既然是NaOH溶解的細胞，那為什么要加SDS呢？那是為下一步操作做的鋪墊。這一步要記住兩點：第一，時間不能過長，千萬不要這時候去接電話，因為在這樣的堿性條件下基因組DNA片斷會慢慢斷裂；第二，必須溫柔混合（象對待女孩子一樣），不然基因組DNA也會斷裂?；蚪MDNA的斷裂會帶來麻煩。

每個人都知道，溶液III加入后就會有大量的沉淀，但大部分人卻不明白這沉淀的本質。最容易產生的誤解是，當SDS碰到酸性后發(fā)生的沉淀。如果你這樣懷疑，往1%的SDS溶液中加如2M的醋酸溶液看看就知道不是這么回事了。大量沉淀的出現(xiàn)，顯然與SDS的加入有關系。如果在溶液II中不加SDS會怎樣呢，也會有少量的沉淀，但量上要少得多，顯然是鹽析和酸變性沉淀出來的蛋白質。既然SDS不是遇酸發(fā)生的沉淀，那會不會是遇鹽發(fā)生的沉淀呢？在1％的SDS溶液中慢慢加入5 N的NaCl，你會發(fā)現(xiàn)SDS在高鹽濃度下是會產生沉淀的。因此高濃度的鹽導致了SDS的沉淀。但如果你加入的不是NaCl而是KCl，你會發(fā)現(xiàn)沉淀的量要多的多。這其實是十二烷基硫酸鈉（sodium dodecylsulfate）遇到鉀離子后變成了十二烷基硫酸鉀（potassium dodecylsulfate, PDS），而PDS是水不溶的，因此發(fā)生了沉淀。如此看來，溶液III加入后的沉淀實際上是鉀離子置換了SDS中的鈉離子形成了不溶性的PDS，而高濃度的鹽，使得沉淀更完全。大家知道SDS專門喜歡和蛋白質結合，平均兩個氨基酸上結合一個SDS分子，鉀鈉離子置換所產生的大量沉淀自然就將絕大部分蛋白質沉淀了，讓人高興的是大腸桿菌的基因組DNA也一起被共沉淀了。這個過程不難想象，因為基因組DNA太長了，長長的DNA自然容易被PDS給共沉淀了，盡管SDS并不與DNA分子結合。

那么2 M的醋酸又是為什么而加的呢？是為了中和NaOH，因為長時間的堿性條件會打斷DNA，所以要中和之?；蚪MDNA一旦發(fā)生斷裂，只要是50－100 kb大小的片斷，就沒有辦法再被PDS共沉淀了。所以堿處理的時間要短，而且不得激烈振蕩，不然最后得到的質粒上總會有大量的基因組DNA混入，瓊脂糖電泳可以觀察到一條濃濃的總DNA條帶。很多人誤認為是溶液III加入后基因組DNA無法快速復性就被沉淀了，這是天大的誤會，因為變性的也好復性的也好，DNA分子在中性溶液中都是溶解的。NaOH本來是為了溶解細胞而用的，DNA分子的變性其實是個副產物，與它是不是沉淀下來其實沒有關系。溶液III加入并混合均勻后在冰上放置，目的是為了PDS沉淀更充分一點。

不要以為PDS沉淀的形成就能將所有的蛋白質沉淀了，其實還有很多蛋白質不能被沉淀，因此要用酚/氯仿/異戊醇進行抽提，然后進行酒精沉淀才能得到質量穩(wěn)定的質粒DNA，不然時間一長就會因為混入的DNase而發(fā)生降解。這里用2 5/24/1的酚/氯仿/異戊醇是有很多道理的，這里做個全面的介紹。酚（Phenol）對蛋白質的變性作用遠大于氯仿，按道理應該用酚來最大程度將蛋白質抽提掉，但是水飽和酚的比重略比水重，碰到高濃度的鹽溶液（比如4M的異硫氰酸胍），離心后酚相會跑到上層，不利于含質粒的水相的回收；但加入氯仿后可以增加比重，使得酚/氯仿始終在下層，方便水相的回收；還有一點，酚與水有很大的互溶性，如果單獨用酚抽提后會有大量的酚溶解到水相中，而酚會抑制很多酶反應（比如限制性酶切反應），因此如果單獨用酚抽提后一定要用氯仿抽提一次將水相中的酚去除，而用酚/氯仿的混合液進行抽提，跑到水相中的酚則少得多，微量的酚在乙醇沉淀時就會被除干凈而不必擔心酶切等反應不能正常進行。至于異戊醇的添加，其作用主要是為了讓離心后上下層的界面更加清晰，也方便了水相的回收。

回收后的水相含有足夠多的鹽，因此只要加入2倍體積的乙醇，在室溫放置幾分鐘后離心就可以將質粒DNA沉淀出來。這時候如果放到－20℃，時間一長反而會導致大量鹽的沉淀，這點不同于普通的DNA酒精沉淀回收，所以不要過分小心了。高濃度的鹽會水合大量的水分子，因此DNA分子之間就容易形成氫鍵而發(fā)生沉淀。如果感覺發(fā)生了鹽的沉淀，就用70％的乙醇多洗幾次，每次在室溫放置一個小時以上，并用tip將沉淀打碎，就能得到好的樣品。得到的質粒樣品一般用含RNase（50 ug/ml）的TE緩沖液進行溶解，不然大量未降解的RNA會干擾電泳結果的.河南科技大學實驗教學教案首頁

實驗三 瓊脂糖凝膠電泳技術

［實驗目的］通過本實驗學習瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法和技術。

［實驗原理］DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷在電場中向正極移動。由于糖－磷酸骨架在結構上的重復性質，相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此他們能以相同的速度向正極方向移動。在一定的電場強度下，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應，即DNA分子本身的大小和構型。具有不同的相對分子質量的DNA片段泳動速度不一樣，可進行分離。DNA分子的遷移速度與相對分子質量對數值成反比關系.。凝膠電泳不僅可以分離不同相對分子質量的DNA, 也可以分離相對分子質量相同,但構型不同的DNA分子。如上次實驗提取的pUC19質粒，有3種構型：超螺旋的共價閉合環(huán)狀質粒DNA(covalently closed circular DNA，簡稱 CCCDNA)，開環(huán)質粒DNA，即共價閉合環(huán)狀質粒DNA1條鏈斷裂，（open circular DNA, 簡稱OCDNA）,線狀質粒DNA，即共價閉合環(huán)狀質粒DNA2條鏈發(fā)生斷裂，（linear DNA，簡稱L DNA）。這3種構型的質粒DNA分子在凝膠電泳中的遷移率不同。因此電泳后呈3條帶，超螺旋質粒DNA泳動最快，其次為線狀DNA，開環(huán)質粒DNA。

[儀器、材料與試劑]

一、儀器

1.恒溫培養(yǎng)箱

2.瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)

3.臺式離心機

4.高壓滅菌鍋

5.紫外線透射儀

二、材料

1.三羥甲基氨基甲烷(Tris)2.硼酸

3.乙二胺四乙酸(EDTA)4.溴酚藍

5.蔗糖

6.瓊脂糖

7.溴化乙錠

8.DNA marker [實驗步驟](一)制備瓊脂糖凝膠

電泳槽及用膠量：稱取0.3g瓊脂糖，放入錐形瓶中，加入30ml0.5×TBE緩沖液，置微波爐或水浴加熱至完全溶化取出搖勻，則為1%的瓊脂糖凝膠液。

冷卻至60℃, 加入適量EB, 混勻。

（二）膠板的制備

1.取有機玻璃內槽，洗凈，晾干，用橡皮膏將有機玻璃內槽的兩端邊緣封好（一定封嚴，不能留縫隙）。

2.將有機玻璃內槽放置于一水平位置，并放好樣品梳子。梳子調整齊

3.將冷到60℃左右的瓊脂糖凝膠液，緩緩倒入有機玻璃內槽，直至有機玻璃板上形成一層均勻的膠面（注意不要形成氣泡）。

4.待膠凝固后，取出梳子，取下橡皮膏，將膠槽放在電泳槽內。

5.加入電泳緩沖液至電泳槽中。

（三）加樣, 用移液器將已加入上樣緩沖液的DNA樣品加入樣品孔（記錄點樣順序及點樣量）。

（四）電泳

1.接通電泳槽與電泳儀的電源（注意正負極，DNA片段從負極向正極移動）。DNA的遷移速度與電壓成正比，最高電壓不超過5 V/cm。

2.當溴酚藍染料移動到距凝膠前沿1~2cm處，停止電泳。

（五）染色

將電泳后的凝膠浸入溴化乙錠染色液中，染色以觀察在瓊脂糖凝膠中的帶（戴手套操作）。

問題討論 1）在細胞內質粒DNA是共價閉環(huán)DNA（covalently closed circular DN A，cccDNA），常以超螺旋形式存在。如果兩條鏈中有一條鏈發(fā)生一處或多處缺刻，分子就能旋轉而消除鏈的張力，這種松弛型的分子叫作開環(huán)DNA（open circular DNA，ocDNA）；若兩條鏈在同一處或其附近斷裂，則變成性狀D N A分子。在電泳時，同一質粒的電泳速度因DNA的構型不同而異，其次序為：cccDNA＞直線DNA＞ocDNA，因此在本次實驗中瓊脂糖凝膠電泳上的自制質粒呈現(xiàn)3條帶。如果你不小心在溶液II（實驗二）加入后過度振蕩，會有第四條帶，這條帶泳動得較慢，遠離這三條帶，是20-100kb的大腸桿菌基因組DNA的片斷。非常偶然的是，有時候抽提到的質粒會有7－10條帶，這是由于特殊的DNA序列導致了不同程度的超螺旋（超螺旋的圈數不同）所致。

2）瓊脂糖是一種從海藻中提取出來的線狀高聚物，當熔化再凝固后就會形成固體基質，其密度取決于溶液中所含瓊脂糖的量。帶負電荷的核酸就可以在這種基質中。于電場的作用下向陽極移動。核酸在瓊脂糖基質中的遷移率取決于下列參數：①DN A的分子大??；②瓊脂糖的濃度；③DNA的構象；④所加電壓；⑤電場方向；⑥堿基組成與溫度；⑦嵌入的染料；⑧電泳緩沖液的組成等。瓊脂糖濃度對核酸遷移率的影響是：一定大小的DNA片段，在不同濃度的瓊脂糖凝膠中的遷移率不同；在一定濃度的瓊脂糖凝膠能夠分辨的核酸片段大小范圍內，核酸片段的遷移率與其相對分子質量大小相反。

3）溴化乙啶的化學名稱是3，8－二氨基r－乙基－6一苯基菲錠溴鹽（3，S－diamino－5－ethyl－6－phenyl－phenanthridinium bromide，簡稱EthidiumBromide或EB或EtBr），由于溴化乙錠分子插入，在紫外光的照射下，瓊脂糖凝膠電泳中DNA的條帶呈現(xiàn)出桔黃色的熒光，便于檢測。EB能插人DNA分子中的堿基對之間，完成與DNA結合（超螺旋DNA與EB結合能力小于雙鏈閉環(huán)，而雙鏈閉環(huán)DNA與EB結合能力小于線狀雙鏈DNA），DNA所吸收的260nm的紫外光（UV）傳遞給FE，或者結合的EB本身在3O0nm和360nm吸收的射線均在可見光譜的紅橙區(qū)，以590nm波長發(fā)射出來。EB染色具有以下特點：①操作簡便快速，室溫下染色15mm～20mm；②不會使核酸斷裂；③靈敏度高，10ng或更少的DNA即可檢出；④可以加到樣品中，隨時用紫外吸收追蹤檢查。但應該特別注意的是，溴化乙啶是誘變劑，配制和使用時應戴乳膠（或一次性塑料）手套，并且不要將該染色液灑在桌面或地面上。凡是沾污溴化乙啶的器皿或物品，必須經特殊處理后，再進行清洗或棄去。

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實驗四植物基因組DNA的提取

實驗目的 通過本實驗學習從植物組織中提取DNA的方法。

實驗原理 利用液氮對植物組織進行研磨，從而破碎細胞。細胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破壞細胞膜，使蛋白質變性而沉淀下來。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液經乙醇沉淀。實驗材料: 新鮮植物葉片

【儀器、材料與試劑】

（－）儀器

1．低溫離心機

2．恒溫水浴器 3．臺式離心機

4．紫外分光光度計

5.液氮灌

（二）材料

l。三羥甲基氨基甲烷（Tris）

2．乙二胺四乙酸（EDTA）

3．氯化鈉（NaCl）

4．β-巰基乙醇

5．氯化鉀（KCI）

6．異丙醇

7．乙醇 8.．陶瓷研缽

9．吸頭、小指管

（三）試劑

（三）試劑

1．細胞提取液

mmol／L Tris.HCl(pH 8.0)5 mmol／L EDTA(pH 8.0)500 mmol／L NaCl 1.25％ SDS 1 mol／L β巰基乙醇

2．5 mol／L KCI 3，TE（見實驗二質粒DNA的提取及酶切）[實驗步驟] 1.取4g新鮮葉片，在液氮中研磨成粉末狀（越細越好）。

2.轉移至50ml離心管中，加入16ml TENbf，充分混勻。65℃水浴保溫20min。

3.從水浴中取出離心管，加入5ml 5 mol/L KCl溶液，混勻，水浴20min。

4.4000r/min 離心 20 min。

5.將上清液轉移到另一50ml離心管中。

6.加等體積酚／氯仿混勻，12000r／min 離心5min，取上清。

7.加等體積氯仿，混勻，12000r／min 離心5min，取上清。

8.加入0.6－1倍體積的異丙醇（沉淀DNA），混勻。放置時間 9.離心獲得沉淀，70％乙醇洗3次。風干沉淀。

10.加入3ml TE緩沖液，溶解DNA。

11.取3ml DNA溶液測定DNA在260nm和280nm的OD值，并分析DNA的純度和含量

[實驗結果] 注意事項

1.盡量取材幼嫩葉片，如太老，酚類物質 多，必須用10 mM的β-ME處理。葉片磨得越細越好。

2.移液器的使用。

3.由于植物細胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作應迅速，以免組織解凍，導致細胞裂解，釋放出DNA酶，使DNA降解。

4.研缽預凍，粉末至加CTAB前不要融化。5.氯仿/異戊醇抽提時動作應輕柔。

6.所用試劑必需滅菌。

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第三篇：換水試驗教案

大家知道每年的12月1日是什么日子嗎？

“不錯，世界艾滋病日，今年是第26個世界艾滋病日，主題是：實現(xiàn)零——零艾滋病病毒新發(fā)感染、零歧視和零艾滋病相關死亡”

“艾滋病全稱獲得性免疫缺陷綜合癥，是由艾滋病病毒（HIV病毒）引起的一種嚴重傳染病，至今沒有有效地防治手段，幾乎沒有救治成功的病例，因此又被稱為超級癌癥。”

“HIV病毒一旦侵入人體，便以免疫系統(tǒng)作為攻擊目標，大量吞噬、破壞淋巴細胞，使免疫系統(tǒng)崩潰，從而使人體因喪失對各種疾病的抵抗力而病發(fā)死亡?！?/p>

“HIV病毒廣泛存在于感染者的體液內，其中以血液、精液、陰道分泌物中的濃度最高。它在人體內的潛伏期平均為12年至13年，在發(fā)展成艾滋病病人以前，外表看上去正常，他們可以沒有任何癥狀的生活和工作很多年?！?/p>

HIV病毒的傳播途徑主要有三條：性接觸傳播、血液傳播和母嬰傳播，而且傳播速度非?？?。今天，我們一起通過一個小游戲來感受一下艾滋病傳播的隱匿性和速度的驚人性。

這個游戲的名稱叫做“換水游戲”。在做游戲之前，我們先做一個約定:所有參與本游戲的同學都應本著“相互尊重、平等參與、團結合作、真誠交流”的原則。

“大家看到講桌上一共有28只燒杯，分兩部分，第一部分24只，第二部分4只” “第一部分的24只燒杯中有23只裝的是清水，只有一只裝的是氫氧化鈉溶液。其中清水表示健康人的體液，氫氧化鈉表示艾滋病病毒攜帶者的體液。從表面上看是無法區(qū)分兩者的，都是無色透明的液體，但是用酚酞試劑可以檢測，酚酞可以使氫氧化鈉溶液變紅色，與清水沒有反應。每一次換水表示發(fā)生一次性接觸?！?/p>

“第二部分的四只燒杯中裝的都是清水”

“我們先看游戲第一部分的規(guī)則：

1、第一次換水：與本組中對面同學換水一次。[用注射器取5mL加入對方燒杯中]

（第一次換水后每一組抽出一名同學離開游戲不再參加下面的換水）

2、第二次換水：與本組中另一名同學換水一次。（不能重復）

3、第三次換水：與相鄰組的任一同學換水一次。（A組和B組，C組和D組）

4、第四次換水：與斜對組的任一同學換水一次。（A組和C組，B組和D組）”

（學生操作，完成游戲的第一部分）

“我們馬上進入游戲的第二部分：4名同學，每人一只裝有20毫升飲用水的透明玻璃杯，一只10毫升注射器，在經過4次液體交換的20名同學中任選一名（不能有重復選擇），進行一次5毫升液體等量相互交換?！?/p>

“在每個燒杯中加入一滴酚酞試劑，觀察現(xiàn)象?！?“游戲結果及分析：

1、經過一次換水即退出的4只杯子都沒有變色，說明雙方均有單一的性伴侶，感染艾滋病的幾率很小。

2、經過4次換水后的20只杯子，有14杯變?yōu)榧t色，說明多性伴導致的艾滋病病毒傳播速度驚人。

3、最后跟經過4次換水后的20只杯子中的任選一只進行換水的4只杯子，有3只變?yōu)榧t色，說明跟高危人群發(fā)生哪怕是頻度很少的性接觸，其感染艾滋病病毒的幾率也是相當高的。”

通過換水試驗我們知道了，艾滋病通過性接觸傳播的速度是非?？斓模覀儜摑嵣碜詯?，遵守性道德。

“有哪位同學可以結合已有的知識談一談如何預防艾滋病呢？”

“其實艾滋病并不可怕，特別是在與艾滋病病人的交往中，日常生活和工作交往均不會感染艾滋病，所以，在日常生活中我們應關心、幫助和不歧視艾滋病人和艾滋病病毒感染者，他們是疾病的受害者，應該得到人道主義的同情和幫助。家庭和社會要為他們營造一個友善、理解、健康的生活和工作環(huán)境，鼓勵他們采取積極的生活態(tài)度，改變危險行為，配合治療，有利于提高他們的生命質量、延長生命，也有利于艾滋病的預防和維護社會安定”

第四篇：檢驗與試驗管理程序

檢驗與試驗管理程序

1、目的

對原、輔材料，過程產品，成品進行規(guī)定的檢驗和試驗，以驗證產品要求得到滿足，保證不合格產品不投入加工和支付。

2、范圍

適用于公司的原、輔材料，半成品和成品的檢驗和試驗。

3、職責

① 質檢科負責檢驗制度∕規(guī)程的制度，并負責原輔料、半成品和成品的檢驗和試驗。② 生產技術部負責產品工藝∕技術標準的收集、制定，檢測中心負責物理指標的檢驗和試驗。

③ 倉庫負責對機物料等物資的驗證，設備管理員協(xié)助對機電物資的驗證。④ 質檢科主管負責產品的最終放行審批。

4、程序

① 檢驗人員的要求和檢驗、檢測前的準備

檢驗和檢測人員應具有較強的責任心，應根據檢驗文件中的規(guī)定，檢查檢驗和檢測用的器具狀況是否在規(guī)定的校準有效期內，并預先進行調整。② 進貨檢驗程序（沈芳嫻、牟瓊蘭）

A胚布來料的檢驗和試驗：胚布入廠后由營銷部填寫《送檢單》注明客戶需達到的各項檢驗、檢測項目標準范圍（如水壓需達到4000Pa以上，透氣量需達到120L∕㎡·S以上），一式兩份，一份留底，一份送檢測中心。胚布專職檢驗員按《送檢單》及《進貨檢驗規(guī)程》對胚布進行外觀檢驗和內在檢測。外觀檢由檢驗員負責對服裝面料的門幅、規(guī)格、布面情況等進行全檢。濾料面料檢驗外包裝完好度、打卷整齊度、潮濕度進行抽檢；內在檢由檢測員負責對來料胚布的克重、水壓、透氣量、阻力、效率等進行抽檢。抽檢來料的15%。胚布專職檢驗員將檢驗結果在《胚布檢驗明細表》、《胚布檢驗檢測報告》中予以記錄，報告一式五份：一份留底，一份車間負責人，一份檢測中心，一份業(yè)務部，一份倉庫。凡抽檢項目有5%的不合格品，應再抽15%，若再有不合格，則整批不合格。經檢驗合格后的胚布由專職檢驗員做好標識，倉庫辦好入庫手續(xù)，填寫臺賬。對經檢驗部合格的胚布，執(zhí)行《不合格品管理程序》。

B聚四氟乙烯樹脂粉、各類助劑的檢驗和試驗（郎偉英）

各類原、輔料進廠后，由采購部填寫送檢單（注明：規(guī)格、數量、品名、送貨單位）交檢測中心。由原、輔料專職檢驗員對樹脂粉和各類助劑進行外觀全檢，性能指標抽檢，抽檢每個批號做試樣，并填寫《來料檢驗、檢測報告》一式五份：一份留底，一份檢測中心，一份倉庫，一份采購，一份車間負責人；針對絲線原料進廠后需冷藏5-7天，取不同批號試樣，按1200D、500D不同工藝進行測試。1200D定型1.4m∕min的速度8倍，分切5m∕min 4.5倍，結果達到3.5g∕d以上做1200D，達到3.8g∕d以上做500D；500D定型1.1m∕min的速度10倍，分切4.5m∕min 3.66倍，結果達到3.8g∕d以上可用于500D或1200D，結果達到3.5g∕d以上，可用于1200D。③ 產品工序檢驗和試驗

⑴ 班組長和操作工的自檢、互檢。

各工序生產過程中，班組長和操作工按各工段生產工藝操作規(guī)程和產品工藝標準操作檢驗，對各工序半成品進行自檢，自檢合格轉入下道工序，發(fā)現(xiàn)不合格時及時向相關人員反映，作出快速處理。各工序將自檢、互檢質量情況在《工藝流程卡》上予以記錄。⑵ 檢驗員、檢測中心人員的抽檢和全檢。復合過程檢：由復合專職檢驗檢測員配合班組長共同對復合過程中的產品外觀、內在進行檢驗。一旦發(fā)現(xiàn)復合過程中有膠點、氣泡、粘膜等外觀現(xiàn)象和透氣量低、阻力、效率差等內在現(xiàn)象，及時向班組長或車間負責人反映。此過程檢驗檢測員全檢，檢測中心抽檢本批量的20%。

拉幅過程檢：由專職檢驗檢測員配合班組長對拉幅過程中的產品外觀、內在進行檢驗。一旦發(fā)現(xiàn)拉幅過程中有連續(xù)破洞、不均勻、固化低等外表現(xiàn)象和透氣量低等內在現(xiàn)象及時向班組長或車間負責人反映。此過程檢驗員、檢測中心人員對產品進行抽檢。二次性膜檢測員需每卷進行透氣量檢測，在《透氣量檢測單》中予以記錄。檢測中心人員每天至少抽檢5卷，在《檢測報告》中予以記錄。分切、加捻過程檢：由專職檢驗員、檢測員配合班組長對生產過程中的定型溫度、分切倍數、捻度、分切后克重、相對（g∕d）等進行檢驗、檢測。如果在生產過程中倍數達到相對（g∕d）要求，而克重達不到標準，那么換刀。分切克重偏差不能超過5%，此項過程中專職檢測員和檢測中心人員按批號要不定時對絲線進行抽檢，每天至少5-8次。一旦發(fā)現(xiàn)達不到規(guī)定標準，立即通知車間負責人及相關人員進行過程調整。檢測結果在《絲、線檢測報告》中予以記錄。

④ 成品檢驗和檢測

檢驗檢測員按照《生產計劃單》及相關的產品標準和《成品檢驗規(guī)程》對每個訂單的產品進行外觀和內在的質量檢驗，將檢驗結果和檢測結果分別在《拼件單》、《品檢單》、《檢測報告》、《成品面料測試報告》、《成品濾料測試報告》中予以記錄。A 復合面料：

檢驗員外觀檢——全檢，門幅、品名、規(guī)格、布面情況等。在《品檢單》中予以記錄。（沈芳嫻）

檢測員內在檢——抽檢，抽檢本批量的30%，透濕、克重、水壓等。在《檢測報告》中予以記錄。（牟瓊蘭）

檢測中心對成品內在進行抽檢，抽檢批量的20%，檢驗項目：水壓、透濕、克重、據油級別、熱收縮率、耐洗滌等（按客戶要求）。在《成品面料測試報告》中予以記錄。抽檢合格允許發(fā)貨。（章海燕）

B 復合濾料：

檢驗員外觀檢——全檢，檢驗項目：門幅、品名、規(guī)格、布面情況等，在《品檢單》中予以記錄。（沈芳嫻）

檢測員內在檢——抽檢，檢驗項目：透氣量、阻力、效率（按客戶要求），在《檢測報告》中予以記錄。（牟瓊蘭）

檢測中心對成品的內在進行抽檢，抽檢批量的20%，檢驗項目：透氣量、阻力、效率等，在《成品濾料測試報告》中予以記錄。抽檢合格允許發(fā)貨。（章海燕）

C 服裝膜： 檢驗員外觀檢——全檢，檢驗項目：門幅、規(guī)格、膜面情況等，在《拼件單》中予以記錄。

檢驗員內在檢—— 檢測中心

D 一次性空氣膜：

檢驗員外觀檢——全檢，檢驗項目：規(guī)格、門幅、膜面情況等，在《拼件單》中予以記錄。

檢測員內在檢——根據每個訂單的客戶要求實行每卷全檢，檢測項目：透氣量，在《檢測報告》中予以記錄。

檢測中心對成品內在根據每個訂單的客戶要求進行抽檢，抽檢每批的15%，檢驗項目：透氣量，在《檢測報告》中予以記錄。（備注：此項需業(yè)務員在發(fā)貨通知單上注明透氣量范圍）

E 二次性空氣膜：

檢驗員外觀檢——全檢，檢驗項目：規(guī)格、門幅、膜面情況等，在《拼件單》中予以記錄，并根據《透氣量檢測單》分級打卷。

檢測員在生產過程中每卷全檢，檢測項目：透氣量，在《透氣量檢測單》中予以記錄。

檢測中心：⑴根據檢驗員每天的檢驗數量進行抽檢，每天至少5卷。

⑵根據發(fā)貨通知單進行抽檢，抽檢批量的10%，在《檢測報告》中予以記錄。

F 成品絲（500D）、成品線（1200D）：

檢驗員：每箱進行抽檢，至少4卷。檢測項目：克重、強度、相對（g∕d)，在《絲、線檢測報告》中予以記錄。

檢測中心：⑴每天進行抽檢，至少6卷，檢測項目：克重、強度、相對（g∕d)，在《絲、線檢測報告》中予以記錄。⑵根據發(fā)貨通知單客戶要求的克重、強度要求，對每批貨物在發(fā)貨前進行抽檢。并填寫《絲、線對外檢測報告》。

第五篇：趣味化學試驗教案

趣味化學實驗教案

噴霧作畫

實驗原理

FeCl3溶液遇到硫氰化鉀(KSCN)溶液顯血紅色,遇到亞鐵氰化鉀〔K4[Fe(CN)6]〕溶液顯藍色,遇到鐵氰化鉀〔K3[Fe(CN)6]〕溶液顯綠色,遇苯酚顯紫色。FeCl3溶液噴在白紙上顯黃色。

實驗用品

白紙、毛筆、噴霧器、木架、摁釘。

FeCl3溶液、硫氰化鉀溶液、亞鐵氰化鉀濃溶液、鐵氰化鉀濃溶液、苯酚濃溶液。

實驗步驟

1.用毛筆分別蘸取硫氰化鉀溶液、亞鐵氰化鉀濃溶液、鐵氰化鉀濃溶液、苯酚濃溶液在白紙上繪畫。

2.把紙晾干, 釘在木架上。

3.用裝有FeCl3溶液的噴霧器在繪有圖畫的白紙上噴上FeCl3溶液。檢驗含碘食鹽成分中的碘

實驗原理

含碘食鹽中含有碘酸鉀(KIO3),除此之外，一般不含有其他氧化性物質。在酸性條件下IO3-能將I-氧化成I2, I2遇淀粉試液變藍；而不加碘的食鹽則不能發(fā)生類似的反應。

實驗用品

試管、膠頭滴管。

含碘食鹽溶液、不加碘食鹽溶液、KI溶液、稀硫酸、淀粉試液。

實驗步驟

1.在2支試管中分別加入少量含碘食鹽溶液和不加碘食鹽溶液,然后各滴入幾滴稀硫酸,再滴入幾滴淀粉試液。觀察現(xiàn)象。

2.在另一試管中加入適量KI溶液和幾滴稀硫酸,然后再滴入幾滴淀粉試液。觀察現(xiàn)象。

3.將第3支試管中的液體分別倒入前2支試管里，混合均勻,觀察現(xiàn)象。

電池的制作

①方法

用一根5 cm銅絲和一條2 mm寬的鋅片，分別插到土豆或西紅柿內；再用耳機的兩端接觸銅絲和鋅片，便能清晰地聽到聲音。如果把12個土豆按上法每個都插入銅片和鋅片然后串聯(lián)，接上電鍵及1.5 V的小電珠；合鍵時電珠被點亮。

②原理

銅鋅電池中銅為正極、鋅為負極，土豆汁或西紅柿汁為電解質溶液，起導電作用。

燒不著的棉布

棉布是由棉花制成的，棉花主要的化學成分是纖維素分子構成的，它含有碳、氫、氧元素，所以是可燃的物質。布條事先浸過30％的磷酸鈉溶液，晾干后再浸入30％的明礬溶液中，再晾于，這樣，布條上就有兩種化學藥品，磷酸鈉和明礬，磷酸鈉在水中顯堿性，而明礬在水中顯酸性，它們反應之后除生成水外，還生成不溶解于水的氫氧化鋁。所以實際上棉布條被一層氫氧化鋁薄膜包圍了，氫氧化鋁遇熱后又變成了氧化鋁和水，就是這層致密的氧化鋁薄膜保護了布條，才免于火的襲擊。經過這樣處理過的棉布在工農業(yè)生產和國防建設上都廣泛的應用。

紅糖制白糖

【實驗原理】

紅糖中含有一些有色物質，要制成白糖，須將紅糖溶于水，加入適量活性炭，將紅糖中的有色物質吸附，再經過濾、濃縮、冷卻后便可得到白糖。

【實驗步驟及現(xiàn)象】

稱取5 g～10 g紅糖放在小燒杯中，加入40 mL水，加熱使其溶解，加入0.5 g～1 g活性炭，并不斷攪拌，趁熱過濾懸濁液，得到無色液體，如果濾液呈黃色，可再加入適量的活性炭，直至無色為止。將濾液轉移到小燒杯里，在水浴中蒸發(fā)濃縮。當體積減少到原溶液體積的1/4左右時，停止加熱。從水浴中取出燒杯，自然冷卻，有白糖析出。

“琥珀”標本的制作

把買來的優(yōu)質松香（用量的多少根據昆蟲大小來決定，一般100克左右就能做一塊），放在燒杯內，加少量酒精（它們的比例一般采用10：1），用酒精燈加熱，不斷地用玻璃棒攪拌，直到松香熔化，含的酒精基本上蒸發(fā)就好了

然后，把要做標本的蝴蝶、甲殼蟲、小植物放在事先用硬紙折好的小紙盒內（先在折好的紙盒內襯一層蠟紙）。紙盒折成象火柴盒芯子的形狀。再把熔化的松香慢慢倒入盒內。當松香凝結變硬以后，撕去紙盒，用快刀小心地削去標本四周多余部分，這是琥珀標本的毛坯，只有上面透明，可以看清楚里面的小昆蟲，其余的五面是毛糙、不透明的，看不清里面的小昆蟲，還必須經過酒精洗滌，晾干，這樣整塊人造琥珀通身透明，小昆蟲象冬眠般地睡在里面，微細的結構都看得一清二楚，好象一塊真的昆蟲琥珀一樣。裝在玻璃盒內，標本就制成功了。

制作不易生銹的鐵釘（帶有氧化膜）材料：鐵釘

儀器：三腳架，石棉網，酒精燈，燒杯，試管

藥品：稀鹽酸，稀氫氧化鈉，氫氧化鈉固體，硝酸鈉，亞硝酸鈉，蒸餾水

原理：

亞硝酸根在中性和堿性環(huán)境中有一定的氧化性，在強堿溶液中，與鐵反應生成亞鐵酸鈉（Na2Fe2O4）和一水合氨，生成的亞鐵酸鈉不穩(wěn)定，在亞硝酸根和鐵的作用下在鐵表面分解為致密氧化膜。步驟：

1、先用試管量取適量稀氫氧化鈉，把鐵釘投進，除去油膜

2、再用試管量取適量稀鹽酸，把鐵釘投進，除去鍍鋅層，氧化膜和鐵銹

3、稱取2g固體氫氧化鈉，0.3g硝酸鈉和一角匙亞硝酸鈉，在燒杯中溶于10ml蒸餾水

4、把鐵釘投入燒杯中，加熱至表面生成亮藍色或黑色的物質為止 注意：

NaOH有強烈腐蝕性，并且溶于水時放出大量熱。而亞硝酸鈉為劇毒物質，做完實驗要徹底把手洗干凈。

指紋檢查

一、碘蒸氣法

試驗原理

碘受熱時會升華變成碘蒸氣。碘蒸氣能溶解在手指上的油脂等分泌物中,并形成棕色指紋印跡。

實驗用品

試管、橡膠塞、藥匙、酒精燈、剪刀、白紙。碘。實驗步驟

1.取一張干凈、光滑的白紙,剪成長約4 cm、寬不超過試管直徑的紙條,用手指在紙條上用力摁幾個手印。

2.用藥匙取芝麻粒大的一粒碘,放入試管中。把紙條懸于試管中(注意摁有手印的一面不要貼在管壁上),塞上橡膠塞。

3.把裝有碘的試管在酒精燈火焰上方微熱一下,待產生碘蒸氣后立即停止加熱,觀察紙條上的指紋印跡。

二、硝酸銀溶液法：

向指紋印上噴硝酸銀溶液，指紋印上的氯化鈉就會轉化成氯化銀不溶物。經過日光照射，氯化銀分解出銀細粒，就會象照相館片那樣顯示棕黑色的指紋，這是刑偵中常用方法。這種方法可檢測出更長時間之前的指紋。

自制豆腐

【實驗步驟及現(xiàn)象】

（A）浸泡：加 300 mL水浸泡 24 小時（若氣溫較高時，中間可更換一次水），使黃豆充分膨脹，然后倒掉浸泡水。

（B）研磨：將泡好的大豆放在家用粉碎機內，加入200 mL水，進行粉碎。

（C）制漿：將研磨好的豆?jié){和豆渣一并倒入放有雙層紗布的過濾器中抽濾，另取100 mL水，分多次沖洗濾餅，充分提取豆渣中的豆?jié){。濾液即為濃豆?jié){。

（D）凝固變性：將自制的濃豆?jié){（或直接用市售的袋裝濃豆?jié){）倒入一個潔凈的500 mL的燒杯中，用酒精燈加熱至80 ℃左右，然后邊攪拌，邊向熱豆?jié){中加入飽和石膏水，直至有白色絮狀物產生。停止加熱，靜置片刻后，就會看到豆?jié){中有凝固的塊狀沉淀物析出。

（E）成型：將上述有塊狀沉淀物的豆?jié){靜置20分鐘后過濾，再將濾布上的沉淀物集中成一團，疊成長方形，放在潔凈的桌面上，用一個盛有冷水的小燒杯壓在包有豆腐團塊的濾布上，大約30分鐘后，即可制成一小塊豆腐。若用市售的濃豆?jié){為原料，制成的豆腐更為細嫩潔白。

（F）保存：為了使制成的豆腐保鮮而不變質，將新制成的豆腐浸于2%～5%的食鹽水中，放在陰涼處，可使豆腐數天內保鮮而不變質。

豆腐中鈣質和蛋白質的檢驗

用品：燒杯、漏斗、濾紙、鐵架臺(帶鐵圈)、精密pH試紙。

草酸鈉、濃硝酸。原理：豆腐中的鈣質與草酸鈉溶液反應便生成不溶于水的草酸鈣白色沉淀。

Ca2+＋Na2(COO)2－→Ca(COO)2↓＋2Na+ 蛋白質遇到濃硝酸，微熱后呈黃色沉淀析出，冷卻后再加入過量的氨水，沉淀就變成橙黃色。因為蛋白質分子中一般有帶苯環(huán)的氨基酸，濃硝酸和苯環(huán)發(fā)生硝化反應，能生成黃色的硝基化合物，故可用來檢驗蛋白質。

操作：

1.豆腐的酸堿性試驗:取200克豆腐放入燒杯中，加入20毫升蒸餾水，用玻棒攪拌，并搗碎到不再有塊狀存在。過濾，得到無色澄清的濾液和白色的濾渣。

用精密pH試紙測試豆腐濾液的酸堿性(一般測得的pH值為6.2，顯弱酸性)。

2.豆腐中鈣質的檢驗取上述豆腐濾液2毫升于試管中，再滴入幾滴濃草酸鈉溶液，試管中立即出現(xiàn)明顯的白色沉淀。說明豆腐中含有豐富的鈣質，而且能溶于水，不一定與蛋白質結合在一起。

3.豆腐中蛋白質的檢驗取上述白色的豆腐濾渣少許，放入試管中，再滴入幾滴濃硝酸，然后微熱，可以看到白色的豆腐濾渣變成黃色。冷卻后，加入過量的氨水，黃色轉變成橙黃色，這就是蛋白質的黃色反應。

注意事項：

1.在制豆腐濾液前，一定要把豆腐搗碎，才能使鈣離子溶解到水中。

2.由于豆腐中含有較多蛋白質，形成膠體，故過濾較慢。但蛋白質一般不易透過濾紙，所以濾液不會有黃色反應。

燒不斷的棉線

在一杯熱水中不斷地加入食鹽，并不斷攪拌，直到食鹽不再溶解為止。取一根20 cm～30 cm的棉線，在一端縛上一個回形針，然后將棉線浸沒在濃鹽水中數分鐘，取出后將棉線吊起來晾干。把晾干的棉線再次浸入濃鹽水中，取出晾干，重復多次。

將這條特制棉線的一頭扎在鐵絲上，讓縛有回形針的那端懸在下面。用燃著的火柴去點棉線的下端。只見火焰慢慢地向上燃燒，一直燃到鐵絲后熄滅，棉線會被燒成焦黑卻沒有斷，回形針還掛在那里。這是因為特制棉線中充滿了食鹽晶體，點燃后，棉線的纖維雖然已燒掉，但熔點高達800 ℃的食鹽卻不受影響，仍然能保持棉線的原有形狀。

在點燃棉線時，注意保持鐵絲穩(wěn)定，防止因為抖動而使棉線斷開。如用明礬代替食鹽，將棉線換成一塊棉布，做這個實驗的效果也很好，棉布燃燒過后，也能保持原樣不斷裂。

褪字靈的制作

藥品：草酸、蒸餾水、高錳酸鉀、濃鹽酸、漂白粉。

步驟：

先配甲液（草酸溶液），用角匙取少量草酸晶體、放入燒杯或錐形瓶中、加蒸餾水使之溶解。然后將此溶液倒入一只滴瓶中，標簽注明甲液。

再配制乙液（氯水或漂白粉溶液）。

①氯水的配制方法：將一角匙高錳酸鉀晶體加入燒瓶中，然后再向燒瓶中加入濃鹽酸，將燒瓶塞和導管連接好，固定在鐵架臺的石棉網上，用酒精燈加熱。導管導入裝有蒸餾水的錐形瓶中，片刻后將錐瓶中新制成的氯水裝入乙滴瓶中。

②漂白粉溶液的配制：如果沒有條件準備一套制氯水的裝置，就可以用漂白粉溶液代替氯水。配制漂白粉溶液的方法比較簡單。用角匙將漂白粉加入到燒杯中，然后加蒸餾水溶解。漂白粉的溶解度較小，因此配制的溶液有些渾濁。將此液倒入乙滴瓶中即可。

這樣，消字靈就制成了。去字跡時，先用甲液滴在字跡上，然后再將乙液滴上一滴，字跡會立即消失。注意晾干后再將修改的字跡寫上去。

用雞蛋做的趣味實驗 趣味實驗一：雞蛋入瓶 將雞蛋浸在10%的醋酸中，待雞蛋殼變軟后，將蛋取出，找一個瓶口略比雞蛋小的廣口瓶，往廣口瓶中投入一燃著的酒精棉球，火焰熄滅后，迅速將雞蛋的小頭對準瓶口，雞蛋很快被吸入瓶中。這是因為瓶中壓強低于外界大氣壓的緣故。過一段時間蛋殼會稍變硬，似雞蛋原樣。這是為什么呢？你能說出其中的原因嗎？

趣味實驗二：蛋殼刻畫

取一只紅殼雞蛋（紅殼雞蛋的蛋殼稍硬），洗凈，用布輕輕擦干。取10 g～20 g的蠟，加熱使之熔化，用毛筆蘸取蠟液，在蛋殼上繪圖或寫字，待白蠟冷凝后，把雞蛋慢慢浸入10%的醋酸中，用筷子撥動雞蛋，使它均勻地跟溶液接觸約20～30分鐘。當蛋殼表面產生較多的氣泡，蛋殼上有明顯的腐蝕現(xiàn)象即可。取出雞蛋，用清水漂洗，晾干。用鐵釘在雞蛋的兩端各打一孔，用嘴吹出蛋清和蛋黃。待蛋清和蛋白全部滴出后，用小刀輕輕刮去涂在殼上的白蠟，最后將蛋殼放在熱水中浸一下，就能看到明顯的圖案花紋或字跡，被腐蝕的蛋殼表面很容易上色

趣味實驗三：蛋白留痕

取一只雞蛋，洗去表面的油污，擦干。用毛筆蘸取醋酸，在蛋殼上寫字。等醋酸蒸發(fā)后，把雞蛋放在稀硫酸銅溶液里煮熟，12 待蛋冷卻后剝去蛋殼，雞蛋白上留下了藍色或紫色的清晰字跡，而外殼卻不留任何痕跡。

這是因為醋酸溶解蛋殼后能少量溶入蛋白。雞蛋白是由氨基酸組成的球蛋白，它在弱酸性條件中發(fā)生水解，生成多肽等物質，這些物質中的肽鍵遇Cu2+發(fā)生絡合反應，呈現(xiàn)藍色或者紫色。

、切去火頭和把火切為兩截

實驗原理

銅具有良好的導熱性，將一張細眼銅絲網壓在火焰頭上，由于銅網使火焰熱量散失，穿過銅網的酒精蒸氣溫度下降到著火 點以下而熄滅，出現(xiàn)網下燃燒網上無火的“火去頭”的現(xiàn)象，用燃著的木條去點燃銅網上的酒精蒸氣，又燃燒起來，造成火焰被“切”為兩截的現(xiàn)象。

實驗操作

取一張大小100 mm×100 mm左右、網眼l mm2左右的銅網，從酒精燈火焰上方壓至火焰內焰中部，觀察“火被去頭”；再用燃著的木條點燃網上酒精蒸氣，觀察火焰被“切為兩截”。

葉脈書簽的制作

原理

葉肉遇到腐蝕性液體就會發(fā)生腐爛。經過加熱，它會腐爛得更快。葉脈比較堅韌，不容易被腐蝕。因此，可以將一些葉片堅硬、葉脈堅韌的樹葉制成葉脈書簽。

工具與材料

步驟

1、把約100毫升水倒入燒杯，在水中加入4克氫氧化鈉，2、把樹葉浸沒在溶液中，繼續(xù)加熱15分鐘左右，用鑷子輕

3、當葉片變色、葉肉酥爛時，用鑷子取出葉片，放在盛有清水的玻璃杯內。

4、從清水里取出葉片，放在玻璃上，用舊牙刷在流水中輕輕地刷葉片的正面和背面，刷去葉片的柔軟部分，露出白色的葉脈。

56、取出壓平的葉脈片，待葉脈干透后，用毛筆在葉脈兩面

7、取出涂上顏料的葉脈片，在它的葉柄上系一條彩色絲線，植物指示劑 實驗原理

許多植物的花、果、莖、葉中都含有色素,這些色素在酸性溶液或堿性溶液里顯示不同的顏色,可以作為酸堿指示劑。

實驗用品

試管、量筒、玻璃棒、研缽、膠頭滴管、點滴板、漏斗、紗布。花瓣(如牽?；?、植物葉子(如紫甘藍)、蘿卜(如胡蘿卜、北京心里美蘿卜)、酒精溶液(乙醇與水的體積比為1∶1)、稀鹽酸、稀NaOH溶液。

實驗步驟

1.取一些花瓣、植物葉子、蘿卜等,分別在研缽中搗爛后,各加入5 mL酒精溶液,攪拌。再分別用4層紗布過濾,所得濾液分別是花瓣色素、植物葉子色素和蘿卜色素等的酒精溶液，將它們分裝在3支試管中。

2.在白色點滴板的孔穴中分別滴入一些稀鹽酸、稀NaOH溶液、蒸餾水,然后各滴入3滴花瓣色素的酒精溶液。觀察現(xiàn)象。

3.用植物葉子色素的酒精溶液、蘿卜色素的酒精溶液等代替花瓣色素的酒精溶液做上述實驗,觀察現(xiàn)象。

實驗記錄