第一篇：微生物的鑒定方法總結-2015.6.26

目錄 微生物鑒定技術—傳統(tǒng)方法..........................................1 1.1 細菌微菌落技術..............................................1 1.2 生理生化反應特征............................................1 1.3 生態(tài)學特征..................................................2 1.4 血清學反應..................................................2 1.5 選擇、鑒定用培養(yǎng)基法........................................3 1.6 微量多項實驗鑒定系統(tǒng)........................................3 2 微生物鑒別方法—新技術新方法......................................3 2.1 細胞壁組分分析..............................................3 2.2 紅外光譜IR..................................................3 2.3 氣相色譜GC..................................................4 2.4 高效液相色譜HPLC............................................4 2.5 質譜分析MS..................................................4 3 微生物鑒別方法—分子生物學方法....................................4 3.1分子生物學技術...............................................4 3.2 PCR技術.....................................................4 3.3 基因探針技術................................................4 3.4 16SrDNA基因同源性分析.......................................5

蘭州理工大學生命科學與工程學院2014屆研究生發(fā)酵工程原理作業(yè)

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微生物的鑒定方法 微生物鑒定技術—傳統(tǒng)方法

在傳統(tǒng)的分類鑒定中，微生物分類鑒定的主要依據(jù)是形態(tài)學特征、生理生化反應特征、生態(tài)學特征以及血清學反應、對噬菌體的敏感性等。在鑒定時，我們把這些依據(jù)作為鑒定項目，進行一系列的觀察和鑒定工作。1.1 細菌微菌落技術

細菌的形態(tài)、大小、顏色及其它特征與細菌的基本生物學特性如代謝類型、分裂方式、繁殖速度等有密切關系。肉眼所見菌落，即大菌落是由大量的菌體緊密堆積而成，有不少生物學特性不能辨別；微菌落則是指細菌生長繁殖早期在固相載體上形成的只能借助顯微鏡進行觀察的細菌集落。與大菌落相比，微菌落邊緣及中央有明顯不同的表形特征?？蓳?jù)此對微生物的種類進行鑒定。缺點：受操作人員主觀性影響大。（1）細胞形態(tài)

在顯微鏡下觀察細胞外形大小、形狀、排列等，細胞構造，革蘭氏染色反應，能否運動、鞭毛著生部位和數(shù)目，有無芽孢和莢膜、芽孢的大小和位置，放線菌和真菌的繁殖器官的形狀、構造，孢子的數(shù)目、形狀、大小、顏色和表面特征等。（2）群體形態(tài)

群體形態(tài)通常是指以下情況的特征：在一定的固體培養(yǎng)基上生長的菌落特征，包括外形、大小、光澤、黏稠度、透明度、邊緣、隆起情況、正反面顏色、質地、氣味、是否分泌水溶性色素等；在一定的斜面培養(yǎng)基上生長的菌苔特征，包括生長程度、形狀、邊緣、隆起、顏色等；在半固體培養(yǎng)基上經穿刺接種后的生長情況；在液體培養(yǎng)基中生長情況，包括是否產生菌膜，均勻渾濁還是發(fā)生沉淀，有無氣泡，培養(yǎng)基的顏色等。如是酵母菌，還要注意是成醭狀、環(huán)狀還是島狀。

1.2 生理生化反應特征（1）利用物質的能力 蘭州理工大學生命科學與工程學院2014屆研究生發(fā)酵工程原理作業(yè)

包括對各種碳源利用的能力（能否以CO2為唯一碳源、各種糖類的利用情況等）、對各種氮源的利用能力（能否固氮、硝酸鹽和銨鹽利用情況等）、能源的要求（光能還是化能、氧化無機物還是氧化有機物等）、對生長因子的要求（是否需要生長因子以及需要什么生長因子等）。（2）代謝產物的特殊性

這方面的鑒定項目非常多，如是否產生H2S、吲哚、CO2、醇、有機酸，能否還原硝酸鹽，能否使牛奶凝固、凍化等。（3）與溫度和氧氣的關系

測出適合某種微生物生長的溫度范圍以及它的最適生長溫度、最低生長溫度和最高生長溫度。對氧氣的關系，看它是好氧、微量好氧、兼性好氧、耐氧還是專性厭氧。1.3 生態(tài)學特征

生態(tài)學特征主要包括它與其他生物之間的關系（是寄生還是共生，寄主范圍以及致病的情況）。在自然界的分布情況（pH情況、水分程度等）、滲透壓情況（是否耐高滲、是否有嗜鹽性等）。1.4 血清學反應

很多細菌有十分相似的外表結構（如鞭毛）或有作用相同的酶（如乳酸桿菌屬內各種細菌都有乳酸脫氫酶）。雖然它們的蛋白質分子結構各異，但在普通技術下（如電子顯微鏡或生化反應），仍無法分辨它們。然而利用抗原與抗體的高度敏感特異性反應，就可用來鑒別相似的菌種，或對同種微生物分型。用已知菌種、型或菌株制成的抗血清，與待鑒定的對象是否發(fā)生特異性的血清學反應來鑒定未知菌種、型或菌株。

該法常用于腸道菌、噬菌體和病毒的分類鑒定。利用此法，已將傷寒桿菌、肺炎鏈球菌等菌分成數(shù)十種菌型。蘭州理工大學生命科學與工程學院2014屆研究生發(fā)酵工程原理作業(yè)

1.5 選擇、鑒定用培養(yǎng)基法

在培養(yǎng)基中加入特異性的生化反應底物、抗體、熒光反應底物、酶反應底物等，可使目標培養(yǎng)物的選擇、分離、鑒定一次性完成。如生物一梅里埃公司的BP+RPF(兔血漿+纖維蛋白原)培養(yǎng)基，可在24h內鑒定金黃色葡萄球菌。1.6 微量多項實驗鑒定系統(tǒng)

該系統(tǒng)的原理是根據(jù)微生物生理生化特征鑒定的結果，所進行的數(shù)碼分類鑒 定。它是針對微生物的生理生化特性，配制各種底物、培養(yǎng)基、試劑等，分別微量加入各個分隔室中，冷凍干燥脫水或不干燥脫水，各分室在同一塑料條或板上構成檢測卡。在未知菌加入其中檢測后，通過查檢索表或直接輸入計算機得到鑒定結果。最短甚至能在2-4h出結果。

微生物多項鑒定技術優(yōu)點突出，能快速、敏感、準確、重復性好的鑒定微生物，缺點是各系統(tǒng)差異較大，有的價格昂貴，有的個別反應不準。但毫無疑問，它是微生物鑒定技術向快速、簡易和自動化發(fā)展的重要方向之一。微生物鑒別方法—新技術新方法

2.1 細胞壁組分分析

細胞壁組分分析首先應用于放線菌分類中，把它作為區(qū)分“屬”的依據(jù)之一。它比單純用形態(tài)進行分類更全面。近年來，有人對18個屬的放線菌的細胞壁進行了分析，根據(jù)細胞壁的氨基酸組成，將其分為6個細胞壁類型，又根據(jù)細胞壁的糖的組成分成4個糖類型，在此基礎上，結合形態(tài)特征提出了相應的科屬檢索表。

2.2 紅外光譜IR 一般認為，每種物質的化學結構都有特定的紅外光譜。若兩個樣品的吸收光譜完全相同，可以初步認為它們是同一種物質。因此，紅外光譜技術被應用到微生物的分類中。它先后對芽孢桿菌、乳酸菌、大腸桿菌、酵母菌進行分類，近年來又應用于放線菌分類中。

根據(jù)有關學者的試驗表明，這種方法簡便快速，樣品少，結果較好，不僅可 蘭州理工大學生命科學與工程學院2014屆研究生發(fā)酵工程原理作業(yè)

以初步了解各屬菌的細胞成分的化學性質，同時也有助于微生物間系統(tǒng)發(fā)育關系的探索。但是它也有不足之處，借助于紅外線光譜區(qū)分屬內的種和菌株是困難的，但可以作為“屬”的分類特征。2.3 氣相色譜GC 2.4 高效液相色譜HPLC 2.5 質譜分析MS 3 微生物鑒別方法—分子生物學方法

3.1分子生物學技術

以上幾種都是應用細菌的表現(xiàn)特性(包括形態(tài)、生理、生化、血清等)進行鑒定。雖然這種方法很成功，但對十分相似的細菌卻難以區(qū)別。進二十年來，核酸技術應用于分類鑒定已成為發(fā)展趨勢。3.2 PCR技術

PCR技術采用體外酶促反應合成特異性DNA片段，再通過擴增產物來識別細菌。由于PCR靈敏度高，理論上可以檢出一個拷貝的基因，因此在細菌的檢測中只需短時間增菌甚至不增菌，即可通過PCR進行篩選，節(jié)約了大量時問，但PCR技術缺點：增菌培養(yǎng)基成分和其他微生物DNA對Taq酶具有作用，可能導致檢驗結果假陰性；微量的外源性DNA進入PCR后可以引起無限大產生假陽性結果；擴增過程中有一定的裝配誤差會對結果產生影響。3.3 基因探針技術

基因探針技術利用具有同源性序列的核酸單鏈在適當條件下互補形成穩(wěn)定的DNA RNA或DNA DNA鏈的原理，采用高度特異性基因片段制備基因探針來識別細菌?；蛱结樀膬?yōu)點是減少了基因片段長度多態(tài)性所需要分析的條帶數(shù)。如法國生物一梅里埃公司的基因探針檢測系統(tǒng)，30min完成微生物的確證試驗，基因探針的缺點是不能鑒定目標菌以外的其他菌。蘭州理工大學生命科學與工程學院2014屆研究生發(fā)酵工程原理作業(yè)

3.4 16SrDNA基因同源性分析

16S rDNA基因同源性分析是一種常用的細菌分子鑒定方法，16SrDNA基因的擴增需要細菌染色體DNA作為模板。目前建立了1種新的快速高效的細菌染色體DNA提取方法，整個提取過程僅耗時2min，從而使得細菌的快速鑒定成為可能。

當前制藥企業(yè)中應有較多的是表型鑒定的一些系統(tǒng)，但隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，微生物鑒定正經歷由表現(xiàn)型向基因型鑒定轉變的過程。近年來興起的基因探針技術及全自動微生物檢測系統(tǒng)，將從根本上改變微生物的檢測方法，具有非常廣闊的應用前景。

參考文獻：

[1]陳艷.微生物鑒定方法的比較[J]-中國水產.2005(1).[2]夏菠,周傳云,張慶芬等.開菲爾中菌種分離與鑒定方法初探[C].2005.[3]蘇德模,馬緒榮.藥品微生物學檢驗技術.2007.01(1).[4]吳清平,周艷紅,蔡芷荷.衛(wèi)生微生物特異性顯色培養(yǎng)基的研究與應用[J].中 國衛(wèi)生檢驗雜志,2005,15(1).

第二篇：表面微生物檢測方法

空氣、食品接觸面微生物檢驗方法、檢驗標準 目的：

檢測生產車間空氣、操作人員手部、與食品有直接接觸面的機械設備的微生物指標，生產區(qū)域環(huán)境當中病原微生物的監(jiān)控，達到規(guī)定標準，以控制食品成品的質量。參照標準：

中華人民共和國國家標準《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》GB15979－1995、《HACCP原理與實施》、中華人民共和國國家標準《公共場所空氣微生物檢驗方法細菌總數(shù)測定》GB/T 18204.1－2000、中華人民共和國進出口商品檢驗行業(yè)標準SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境檢驗檢疫局二000四年《出入食品微生物檢驗培訓教材》中《出入食品生產廠衛(wèi)生細菌檢驗方法》、日本東京冷凍食品檢驗方法。采樣與檢測方法：

3.1空氣的采樣與測試方法 3.1.1樣品采集：(1)取樣頻率：

a)車間轉換不同衛(wèi)生要求的產品時，在加工前進行采樣，以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。b)全廠統(tǒng)一放長假后，車間生產前，進行采樣。

c)產品檢驗結果超內控標準時，應及時對車間進行采樣，如有檢驗不合格點，整改后再進行采樣檢驗。

d)實驗性新產品，按客戶規(guī)定頻率采樣檢驗。e)正常生產狀態(tài)的采樣，每周一次。（2）采樣方法

在動態(tài)下進行，室內面積不超過30 m2，在對角線上設里、中、外三點，里、外點位置距墻1 m；室內面積超過30 m2，設東、西、南、北、中五點，周圍4點距墻1 m。采樣時，將含平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的平板(直徑9 cm)置采樣點(約桌面高度)，并避開空調、門窗等空氣流通處，打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露5 min。采樣后必須盡快對樣品進行相應指標的檢測，送檢時間不得超過6h，若樣品保存于0～4℃條件時，送檢時間不得超過24h。3.1.2菌落培養(yǎng)：

（1）在采樣前將準備好的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基平板置37℃±1℃培養(yǎng)24 h，取出檢查有無污染，將污染培養(yǎng)基剔除。（2）將已采集樣品的培養(yǎng)基在6 h內送實驗室，細菌總數(shù)于37℃±1℃培養(yǎng)48h觀察結果，計數(shù)平板上細菌菌落數(shù)。（3）菌落計算：

a)記錄平均菌落數(shù)，用“個/皿”來報告結果。用肉眼直接計數(shù)，標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查，不可遺漏。

b)若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2 個或2個以上菌落計數(shù)。3.2工作臺（機械器具）表面與工人手表面采樣與測試方法： 3.2.1樣品采集：(1)取樣頻率：

a)車間轉換不同衛(wèi)生要求的產品時，在加工前進行擦拭檢驗，以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。

b)全廠統(tǒng)一放長假后，車間生產前，進行全面擦拭檢驗。

c)產品檢驗結果超內控標準時，應及時對車間可疑處進行擦拭，如有檢驗不合格點，整改后再進行擦拭檢驗。

d)實驗新產品，按客戶規(guī)定擦拭頻率擦拭檢驗。e)對工作表面消毒產生懷疑時，進行擦拭檢驗。f)正常生產狀態(tài)的擦拭，每周一次。（2）采樣方法：

a)工作臺（機械器具）：用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面（取與食品直接接觸或有一定影響的表面）取25cm2 的面積，在其內涂抹10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內送檢。

b)工人手：被檢人五指并攏，用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內送檢。（3）采樣注意事項： 擦拭時棉簽要隨時轉動，保證擦拭的準確性。對每個擦拭點應詳細記錄所在分場的具體位置、擦拭時間及所擦拭環(huán)節(jié)的消毒時間 3.2.2 細菌·大腸菌群的檢測培養(yǎng): 樣液稀釋：將放有棉棒的試管充分振搖。此液為1：10稀釋液。如污染嚴重，可十倍遞增稀釋，吸取1ml 1：10樣液加9ml無菌生理鹽水中，混勻，此液為1：100稀釋液。3.2.2.1 細菌總數(shù)：

（1）以無菌操作，選擇1～2個稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿（平行樣），將已融化冷至45℃左右的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15ml，充分混合。

（2）待瓊脂凝固后，將平皿翻轉，置36℃±1℃培養(yǎng)48 h后計數(shù)。（3）結果報告：報告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù) 3.2.2.2大腸菌群：（1）平板法: a)以無菌操作，選擇1～2個稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿（平行樣），將已融化冷至45℃左右的去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15ml，充分混合。待瓊脂凝固后,再覆蓋一層培養(yǎng)基，約3-5 ml。

b)待瓊脂凝固后，將平皿翻轉，置36℃±1℃培養(yǎng)24h后計數(shù)。c)結果計算：以平板上出現(xiàn)紫紅色菌落的個數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出。d)結果報告：報告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)（2）試管法: a)以無菌操作，選擇3個稀釋度各取1ml樣液分別接種到BGLB肉湯培養(yǎng)基中，每個稀釋度接種三管。

b)置BGLB肉湯管于36℃±1℃培養(yǎng)48±2h。記錄所有BGLB肉湯管的產氣管數(shù)。

c)結果報告：按BGLB肉湯管產氣管數(shù)，查MPN表報告每25cm2食品接觸面中或每只手的大腸菌群值。

3.2.3 金黃色葡萄球菌檢測（1）定性檢測

a)取1ml 稀釋液注入滅菌的平皿內，傾注15-20ml的B-P培養(yǎng)基，（或是吸取0.1稀釋液，用L棒涂布于表面干燥的B-P瓊脂平板），放進36±1℃的恒溫箱內培養(yǎng)48±2小時。b)從每個平板上至少挑取1個可疑金黃色葡萄球菌的菌落作血漿凝固酶實驗。

c)結果報告：B-P瓊脂平板的可疑菌落作血漿凝固酶實驗為陽性，即報告手（工器具）上有金黃色葡萄球菌存在。（2）定量檢測 a)以無菌操作，選擇3個稀釋度各取1ml樣液分別接種到含10﹪氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，每個稀釋度接種三管。

b)置肉湯管于36±1℃的恒溫箱內培養(yǎng)48小時。劃線接種于表面干燥的B-P瓊脂平板，置36℃±1℃培養(yǎng)45～48小時。

c)從B-P瓊脂平板上，挑取典型或可疑金黃色葡萄球菌菌落接種肉湯培養(yǎng)基，36℃±1℃培養(yǎng)20～24小時。

d)取肉湯培養(yǎng)物做血漿凝固酶試驗，記錄試驗結果。

e)報告結果：根據(jù)凝固酶試驗結果，查MPN表報告每25 cm2食品接觸面中或每只手的金黃色葡萄球菌值。

3.3工廠環(huán)境中病原體的檢測計劃與方法

檢測計劃：為了保證食品安全，工廠應該對生產環(huán)境中的病原微生物進行檢測和評估，檢測項目包括李斯特菌，沙門氏菌等病原體微生物，化驗室應該按照一定的計劃對生產場所環(huán)境中的病原體進行檢測，其中包括地面、下水道、排水溝、墻壁、天花板、設備框架、運輸?shù)闹Ъ?，冷藏裝置、速凍機、傳送帶、設備的螺絲、維修工具等部位。當某個點檢測到病員微生物時，應該對環(huán)境中的相似點加大檢測頻率；在把所有的預定點檢測完后，應該對環(huán)境中的病原微生物的存在狀況進行全面評估，在下一次環(huán)境檢測循環(huán)過程中加強檢測容易出現(xiàn)病原體的環(huán)境點，達到持續(xù)改進的目的。

檢測頻率: 每月兩次,每次每個區(qū)域至少選取5個檢測點,分別進行檢測。

3.3.1 環(huán)境李斯特菌的檢測方法（3MTM PetrifilmTM 環(huán)境李斯特菌的測試片）3.3.1.1 用涂抹棒，海綿或者其他采樣設備收集環(huán)境樣本。

3.3.1.2 將收集的樣本添加10毫升滅菌的緩沖蛋白胨水，將樣本與緩沖蛋白胨混合1分鐘，將樣品置于室溫（20-30℃）1小時，最久不超過1.5小時，以修復損傷的李斯特菌。3.3.1.3 將測試片放在平坦處，掀起上層膜。

3.3.1.4 用移液器垂直滴加3毫升樣品到下層膜中央，將上層膜緩慢蓋下，以免產生氣泡。3.3.1.5 輕輕將塑料壓板放在位于接種區(qū)上層膜上，不要壓，扭轉或者滑動壓板。提起壓板等至少十分鐘，以使膠體凝固。

3.3.1.6 將測試片透明面朝上，可疊放至十片，在37℃±1℃培養(yǎng)26-30小時，可以用標準菌落記數(shù)器或者其他光學放大器判讀，不要記數(shù)圓形輪廓上的菌落，因為他們不受選擇性培養(yǎng)基的影響。

3.3.1.7 對于定性檢測，根據(jù)紫紅色菌落是否存在，結果記為檢出或者未檢出。3.3.2 環(huán)境中沙門氏菌的檢測方法

3.3.2.1采樣地點: 選取采樣點時因盡量選取微生物容易滋生的地方 冷凍車間

FD車間

東區(qū)初加工

傳遞窗口表面、排水溝、排水溝出口、墻壁、地面

卸料間 墻壁、墻角、地面、天花板、物料車表面

東區(qū)精加工

地面、墻壁、墻角、排水溝、排水溝出口、速動機鏈條、天花板

暫存間

墻壁、地面、天花板、墻角、墻縫

西區(qū)初加工

傳遞窗口表面、地面、墻壁、排水溝、排水溝出口

挑選間

墻壁、地面、天花板、墻角、墊板

西區(qū)精加工

地面、墻壁、墻角、排水溝、排水溝出口、速動機鏈條、天花板

包裝室

墻壁、地面、天花板、金探傳送帶表面、落地料存放處

3.3.2.2 操作步驟

3.3.2.2.1采樣應在生產開始后進行，用已浸潤過的棉拭在選定的被測表面旋轉涂抹約100cm2的面積，然后將棉拭放回涂抹試管并蓋緊。3.3.2.2.2將樣品帶回實驗室，每5個點混合成一個樣品, 登記編號,按照SN0170-92標準及時檢測，若有陽性結果出現(xiàn)，應逐步對所混合的每個點分別檢測。

物體表面涂抹菌落總數(shù)計算方式：物體表面細菌總數(shù)（cfu/c㎡）=平皿上菌落的平均數(shù)*采樣液稀釋倍數(shù)/采樣面積（cm2）

根椐GB15979－2002《一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》的標準,生產環(huán)境衛(wèi)生指標 1 裝配與包裝車間空氣中細菌菌落總數(shù)應≤2 500 cfu/m3。2 工作臺表面細菌菌落總數(shù)應≤20 cfu/cm2。

3.工人手表面細菌菌落總數(shù)應≤300 cfu/只手，并不得檢出致病菌。人員和環(huán)境衛(wèi)生檢測方法

一、空氣采樣及檢驗方法

1培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)瓊脂平板，按GB4789.28中3.7條配制 2采樣（空氣沉降法）

2.1布點：面積小于30平方米的車間，設一對角線，在線上取3點，即中心一點，兩端在距墻1米處各取一點；面積大于30平方米的車間，設東、西、南、北、中5個點，其中東、西、南、北點均距墻1米。

2.2采樣高度：與地面垂直高度80-150厘米。

2.3采樣方法；用直徑為9厘米的普通營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點上暴露20分鐘蓋上送檢培養(yǎng)。3培養(yǎng)：于37℃培養(yǎng)24小時。4檢測頻率：每周 空氣質量標準：

生車間、熟車間、成品車間：低于100個 半成品庫、成品庫：低于10個

二、設備的采樣與檢驗方法

根據(jù)生產過程所要求的重點衛(wèi)生部位，實驗室對其進行涂抹采樣，進行細菌總數(shù)檢驗。1采樣方法

1.1涂抹法（適用于表面平坦的設備和工器具產品接觸面）

取經過滅菌的鋁片框（框內面積為50平方厘米）放在需檢查的部位上，用無菌棉球蘸上無菌生理鹽水擦拭鋁片中間方框部分，擦完后立即將棉球投入盛有10毫升無菌生理鹽水的試管中，此液每毫升代表5平方厘米。

1.2貼紙法（適用于表面不平坦的設備和工器具接處面）

將無菌規(guī)格紙（5×5厘米，紙質要薄而軟）用無菌生理鹽水泡濕后，于需測部分分別貼上兩張，兩張紙面積共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升無菌生理鹽水的試管中，此液每毫升代表5平方厘米。2檢驗方法

2.1細菌總數(shù)的檢驗

將上述樣液充分振搖，根據(jù)衛(wèi)生情況，相應地做10倍遞增稀釋，選擇其中2-3個合適的稀釋度作平皿傾注培養(yǎng)，培養(yǎng)基用普通營養(yǎng)瓊脂，每個稀釋度作2個平皿，每個平皿注入1毫升樣液，于37℃培養(yǎng)24小時后計菌落數(shù)。結果計算

表面細菌總數(shù)（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均數(shù)×樣液稀釋倍數(shù)/30×2 2.2致病菌的檢驗

沙門氏菌，參照GB4789.4進行 金黃色葡球菌，參照GB7918.5進行

4.檢驗合格標準：細菌總數(shù)10－100個∕cm2，5.關鍵點：細菌總數(shù)≤10個∕cm2 一般區(qū)域：細菌總數(shù)≤100個∕cm2

三、人員手表面細菌污染情況的檢驗

1.采樣方法：用一支蘸有無菌生理鹽水的棉拭子涂擦被檢對象手的全部，反復兩次，涂擦的時候棉拭子要相應地轉動，擦完后，將手接觸部分剪去，將棉拭子放入裝有10毫升無菌生理鹽水的試管內送檢培養(yǎng)。

2.檢驗方法：同工器具表面細菌總數(shù)檢驗方法。

3.結果計算：每只手表面的細菌總數(shù)（cfu/只手）=平皿上菌落的平均數(shù)×樣液稀釋倍數(shù)

四、消毒液藥效的微生物學鑒定法

1采樣對象：正常使用的消毒液，和已知配制好備用的消毒液 2采樣及檢驗方法

在無菌條件下，用無菌吸管吸取1毫升樣液，加入9毫升稀釋液中混勻，對于醇類與酚類消毒劑，稀釋液用普通營養(yǎng)肉湯即可；對于含氯消毒劑、含碘消毒劑，需在肉湯中加入0.1%硫代硫酸鈉，對洗必泰、季銨鹽類消毒劑，需在肉湯中加入3%（W/V）土溫80和0.3%卵磷脂；對醛類消毒劑，需在肉湯中加入0.3%甘氨酸；對于含有表面活性劑的各種復方消毒劑，需在肉湯中加入（W/V）土溫80，以中和被檢樣液中的殘效作用，將注入了樣液的稀釋液充分搖勻，取1毫升注入平皿，隨之倒入普通營養(yǎng)瓊脂，待瓊脂凝固后，翻轉平皿，將平皿于37℃條件下培養(yǎng)24小時后計平板上生長的菌落數(shù)。3結果分析

平板上有菌生長，表明被檢樣液中有殘存活菌，若每個平板菌落數(shù)在10個以下，仍可用于消毒，若每個平板菌落數(shù)超過10個，說明每毫升被檢樣液含菌量已超過100個，即不宜在用于消毒。

該公式是一個經驗公式.它的理論模式依據(jù)是:100CM2的面積上10MIN降落的菌落數(shù), 等于1升空氣中所含的細菌總數(shù).系數(shù)50000基于上述假說和單位換算而來.細菌總數(shù)(CFU/M3)=5/10T*100/A*1000*N=50000*N/AT

5/10T:實際放置了5MIN;

100/A:A單一培養(yǎng)皿面積;

1000:1M3=1000L啊,換算成m3

1、空氣細菌落菌數(shù)單位既然是cfu/m3，那采樣時應該還要記錄放置平皿的高度。

2、食品安全管理體系中罐頭行業(yè)有個標準如下：

落下菌數(shù)

空氣污染程度

評價

30以下

清潔

安全

30～50

中等清潔

50～70

低等清潔

應加注意

70～100

高度污染

對空氣要進行消毒

100以上

嚴重污染

禁止加工

3、是否可根據(jù)企業(yè)相應的加工產品微生物指標進行自行制定？

第三篇：微生物總結

微生物：一類分布廣泛、體積微小、結構簡單、肉眼直接看不到，微小生物的總稱。

細菌L型：細菌細胞壁的肽聚糖結構受理化或生物因素直接破壞或合成被抑制，這種細胞壁受損的細菌在高滲環(huán)境下仍可存活，稱細菌細胞壁缺陷型或L型。

質粒：是染色體外的遺傳物質，控制某些特定的生物學性狀，不是細菌生長所必需。

莢膜：是細菌合成分泌的包繞于細胞壁外的一層粘液性物質。界限清晰性質穩(wěn)定結合牢固。培養(yǎng)基：由人工方法經滅菌后制成，專供微生物生長使用的混合營養(yǎng)制品。一般pH為7.2-7.6。

兼性厭氧菌：兼有需氧呼吸和無氧發(fā)酵兩種功能，無論在有氧或無氧環(huán)境中都能生長，但以有氧時生長較好，大多數(shù)病原菌屬于此。菌落：在固體培養(yǎng)基中，經過十八到24小時培養(yǎng)后，單個細菌分裂繁殖成一堆肉眼可見的細紅細胞吸附：流感病毒等感染細胞后，由于細胞膜上出現(xiàn)了血凝素（HA），具有吸附脊椎動物紅細胞的能力，這一現(xiàn)象稱為紅細胞吸附。抗毒素：通常是用細菌類毒素給馬多次注射后，取其免疫血清提取免疫球蛋白精制而成抗生素：微生物來源的抗菌藥物，以及人工化學修飾或半合成的衍生物

無菌：就是指沒有活菌的意思。

1：細胞壁結構、化學組成及功能？答：化學組成：G+①肽聚糖：聚糖骨架、四肽側鏈、五肽交聯(lián)橋②磷壁酸：粘附功能，與致病性有關；抗原性很強③其他成分：如A群鏈球菌的M蛋白G-①肽聚糖：聚糖骨架；四肽側鏈②外膜：脂蛋白；脂質雙層；脂多糖：脂類A（毒性成分，無種屬特異性）；核心多糖；特異多糖。功能：①維持細菌固有形態(tài)②保護細菌抵抗低滲環(huán)境③物質交換④決定菌體的抗原性。2：G-菌與G+菌細胞壁的異同點及其意義？答：兼性厭氧菌、專性厭氧菌。

11：與醫(yī)學有關的合成代謝產物？答：① 毒素與侵襲性酶：外毒素和內毒素②熱原質：G-菌細胞壁的脂多糖，耐高溫，250℃干烤破壞。③抗生素：某些微生物代謝中產生的一類能抑制或殺死其他微生物或腫瘤細胞的物質。④維生素：如VitK、B族維生素。⑤色素：脂溶性和水溶性色素。⑥細菌素：無治療應用價值。13：病毒的形態(tài)、結構與化學組成。答：多數(shù)病毒呈球形或近似球形，少數(shù)呈桿狀（植物病毒）、絲狀（初分離的流感病毒）、彈狀（狂犬病毒）、磚塊狀（如痘類病毒）和蝌蚪狀（噬菌體）。病毒的核心和衣殼，二者構成核衣殼，病毒包膜和其他輔助結構。化學組成：核心：主要為核酸，化學組成為DNA或RNA。衣殼：包繞在核心外面的一層蛋白質，由許多蛋白質亞單位（殼粒）組成。包膜：化學組成： 脂質蛋白質糖類。

答：單細胞真菌呈圓形或卵圓形。多細胞真菌

結構：菌絲和孢子，菌絲：分為營養(yǎng)菌絲、氣中菌絲、生殖菌絲；孢子：是真菌的繁殖體。結構：細胞壁外成分；細胞壁；隔膜；其他結構。

25：真菌培養(yǎng)特性。答：最常用的培養(yǎng):沙保弱培養(yǎng)基。溫度:多數(shù)都在22 ~ 28oC，但深部感染真菌最適溫度為37oC，pH4.0 ~ 6.0病原菌通常生長緩慢，1~4周。

26：真菌繁殖方式。答：①無性生殖：①由菌絲斷裂形成新個體②細胞直接分裂產生子細胞③產生芽生孢子④產生孢子囊孢子和分生孢子②有性生殖：指經過兩性細胞配合產生新個體的繁殖方式。

27：真菌抵抗力答：①對干燥、陽光、紫外線及常用消毒劑有強抵抗力②不耐熱，菌絲與孢子60℃ 1小時均可殺死③2﹪石炭酸、10%甲醛、0.1%升汞、2.5%碘酊敏感④抗真菌藥物：菌集團。

純培養(yǎng)基：挑取一個菌落，移種到另一培養(yǎng)基中，生長出來的細菌均為純種。

毒性噬菌體：在宿主菌細胞內噬菌體增殖產生子代噬菌體，宿主菌被裂解，形成溶菌性周期。溫和噬菌體：噬菌體基因與宿主菌染色體整合，成為前噬菌體，噬菌體DNA能隨細菌DNA復制而復制，并隨細菌的分裂而傳到子代細菌的基因組中，變成溶原性細菌，形成溶原性周期。前噬菌體：整合在細菌染色體上的噬菌體基因。轉座子：細菌基因組中的一段DNA序列，可以在染色體、質?；蚴删w之間自行移動的遺傳成分，伴隨轉座子的移動，會出現(xiàn)插入突變?；蜣D移：遺傳物質由供體菌轉入受體菌的過程為基因轉移。

重組：轉移的基因與受體菌DNA整合在一起稱為重組，重組使受體菌獲得供體菌的某些性狀。轉化：細菌通過性菌毛相互連接溝通，將質粒或染色體等遺傳物質從供體菌轉移給受體菌的過程。

接合：是受體菌直接攝取供體菌DNA片段，從而獲得新的遺傳性狀的過程。

轉導：以噬菌體為載體將供菌的DNA片段轉移到受菌體內使受菌獲得供菌的部分遺傳性狀。溶原性轉換：某些前噬菌體可導致細菌基因型和性狀發(fā)生改變，例如白喉棒狀桿菌產生白喉毒素的機理，溫和噬菌體感染細菌時，其基因可整合于宿主菌染色體中，使宿主菌獲得噬菌體基因賦予的新的性狀，稱溶原性轉換。原生質體融合：將兩種不同的細菌經溶菌酶或青霉素等處理，失去細胞壁成為原生質體后進行融合的過程。融合后的染色體之間發(fā)生重組。病毒的自我復制：以病毒核酸為模板，經過復雜的生化過程，復制子代病毒的核酸并通過轉錄翻譯產生病毒蛋白質，裝配成熟后釋放到細胞外，這種增殖方式稱為病毒的自我復制。頓挫感染：被病毒侵入的細胞如不能為病毒增殖提供必需成分，則病毒不能合成本身成分，或能合成但不能組裝和釋出有感染性的病毒顆粒。非容納細胞與容納細胞

缺陷病毒：病毒基因組不完整或某一基因位點改變，不能正常增殖，不能復制出完整有感染性的病毒顆粒，此病毒即缺陷病毒。缺陷病毒+輔助病毒?完成復制

干擾現(xiàn)象：當兩種病毒感染同一宿主細胞時，發(fā)生一種病毒的增殖抑制另一種病毒增殖的現(xiàn)象。某些病毒感染細胞時不出現(xiàn)CPE或其他易于測出的變化（如HAd），但能干擾其后感染的另一病毒的增殖，從而阻抑后者所特有的CPE 芽孢：某些細菌在一定環(huán)境條件下，胞質脫水濃縮，在菌體內部形成的一個圓形或卵圓形小體。

正常菌群：正常人的體表和與外界相通的眼結膜，口腔、鼻腔、腸道、泌尿生殖道等腔道粘膜中的不同種類和數(shù)量及對人體無害而有益的微生物。正常微生物群通稱為正常菌群

細菌群體：細菌附著在有生命或無生命的材料表面后，由細菌及其所分泌的胞外多聚物共同組成的呈膜狀的細菌群體。機會性感染：由正常菌群在機體免疫功能低下、寄居部位改變、菌群失調等特定條件下引起的感染。

毒力：致病性的強弱程度。

侵襲素：某些細菌的基因編碼一些具有侵襲功能的蛋白多肽，促進該病原菌向鄰近組織擴散甚至介導進入鄰近黏膜上皮細胞內。

包涵體：細胞漿或細胞核內出現(xiàn)光鏡下可見的斑塊狀結構

G+ 菌:①肽聚糖：聚糖骨架,四肽側鏈,五肽交聯(lián)橋,三維立體②磷壁酸:重要表面抗原，與粘附致病有關，加強穩(wěn)定細胞壁G－菌:①肽聚糖：聚糖骨架,四肽側鏈組成二維結構, ②外膜（脂蛋白、脂質雙層、脂多糖組成）功能:屏障結構LPS是G－菌的內毒素。細胞壁結構異同:G+菌/G－菌--強度:較堅韌/較疏松--厚度:厚20-80nm/薄10-15nm--肽聚糖層數(shù):多可達50層/少，1-2層--肽聚糖結構:聚糖骨架,四肽側鏈,五肽交聯(lián)橋,三維立體/聚糖骨架,四肽側鏈,二維平面--脂類含量/少/多--磷壁酸:有/無--外膜:無/有,由脂蛋白、脂質雙層、脂多糖組成3：細菌L型，特殊結構種類、化學組成、抗原性及意義？答：定義：細菌細胞壁的肽聚糖結構受理化或生物因素直接破壞或合成被抑制，這種細胞壁受損的細菌在高滲環(huán)境下仍可存活，稱細菌細胞壁缺陷型或L型。種類：G+菌細胞壁缺失后，僅有胞膜，稱原生質體，G--菌肽聚糖層受損，尚有外膜，稱原生質球。抗原性及意義：高度多形性，大小不一；大多染成G－；高滲低瓊脂含血清培養(yǎng)基—油煎蛋樣菌落；去除誘因后，有些可回復為原菌；某些L型仍有致病性,引起慢性感染。作用于胞壁的抗菌性藥對L型感染治療無效

4：細菌的特殊結構？答：①莢膜：多糖或多肽的多聚體。功能a抗吞噬b黏附作用c抗有害物質的損傷d有抗原性，用于細菌的鑒定和分型②鞭毛：蛋白質，由基礎小體絲狀體鉤狀體組成，高度抗原性。功能a是細菌的運動器官b某些細菌的鞭毛與致病性有關c根據(jù)鞭毛的動力和鞭毛的抗原性可用以細菌的鑒別和分類③菌毛：由亞單位菌毛蛋白構成。功能a黏附作用b傳遞遺傳物質④芽孢：生產芽孢的細菌都是革陽菌。功能：a增強抵抗力b不直接致病c鑒定。

5：細菌的遺傳物質？答：細菌染色體，質粒，噬菌體：

6：基因轉移與重組方式的種類及定義？答：定義：基因轉移：遺傳物質由供體菌轉入受體菌的過程為基因轉移。重組：轉移的基因與受體菌DNA整合在一起稱為重組，重組使受體菌獲得供體菌的某些性狀。分類：轉化,接合,轉導,融合,轉換.【表格】類型：基因來源/轉移方式--轉化：供菌游離的DNA片段/直接攝入--接合：供菌質粒DNA/ 性菌毛--轉導：供菌任意DNA或噬菌體與供菌特定DNA/噬菌體--融合：兩菌原生質體的DNA/融合--轉換：溫和噬菌體/吸附穿入

7：噬菌體及其相關概念。答：1）毒性噬菌體：在宿主菌細胞內噬菌體增殖產生子代噬菌體，宿主菌被裂解，形成溶菌性周期。2）溫和噬菌體：噬菌體基因與宿主菌染色體整合，成為前噬菌體，噬菌體DNA能隨細菌DNA復制而復制，并隨細菌的分裂而傳到子代細菌的基因組中，變成溶原性細菌，形成溶原性周期。

8：細菌生長繁殖的條件？答:營養(yǎng)物質/酸堿度 多數(shù)病原菌最適pH為7.2~7.6/溫度 多數(shù)病原菌生長最適溫度為37℃/氣體 據(jù)代謝時對分子氧的需要與否，專性需氧菌、微需氧菌、兼性厭氧菌、專性厭氧菌/滲透壓。

9：細菌群體的生長繁殖？答：生長曲線：一定數(shù)量的細菌接種到定量的液體培養(yǎng)基中，連續(xù)定時取樣測定活菌數(shù)量，以培養(yǎng)時間為橫坐標，以活菌數(shù)的對數(shù)為縱坐標作圖，得到的一條曲線。遲緩期：適應階段。對數(shù)期：對抗生素敏感，細菌鑒定選此期。穩(wěn)定期：代謝產物形成（如外毒素、抗生素、芽胞等）。衰亡期：菌體細胞呈現(xiàn)多種形態(tài)。

10：按細菌對氧需要的分類？答：據(jù)代謝時對分子氧的需要與否，專性需氧菌、微需氧菌、14：雙鏈DNA病毒的復制周期？答：vDNA（RNA聚合酶）→早期mRNA（翻譯）→早期蛋白（酶）→ vDNA（酶）子代DNA →? mRNA?→結構蛋白.→子代DNA+結構蛋白→子代病毒。簡要過程：吸附，穿入，脫殼，生物合成，組裝、成熟與釋放。

15：頓挫病毒，缺陷病毒的概念？答：頓挫病毒：被病毒侵入的細胞如不能為病毒增殖提供必需成分，則病毒不能合成本身成分，或能合成但不能組裝和釋出有感染性的病毒顆粒。非容納細胞與容納細胞。缺陷病毒：病毒基因組不完整或某一基因位點改變，不能正常增殖，不能復制出完整有感染性的病毒顆粒，此病毒即缺陷病毒。缺陷病毒+輔助病毒=完成復制 16：細菌的感染與致病。答：感染：在一定條件下，微生物與機體相互作用并導致機體產生不同程度的病理過程?！?/p>

17：細菌的毒力比較，外毒素與內毒素生物學特性。答：【表格】種類：內毒素★外毒素。來源：G-菌★G+菌部分G-菌。編碼基因：染色體基因★質粒或前噬菌體或染色體基因。存在部位：細胞壁成分、細菌裂解后釋出★活菌分泌或細菌溶解后散出?；瘜W成分：脂多糖★蛋白質。穩(wěn)定性：好(160℃2~4h才破壞）★差（60~80 ℃30m可破壞）。毒性作用：弱、各種內毒素作用大致相同★強、對機體組織器官有選擇性?？乖裕喝?，甲醛處理后不能形成類毒素★強，能刺激機體形成抗毒素，經甲醛脫毒后能形成類毒素。

18：細菌感染的類型答：①不感染②隱性感染③潛伏感染④顯性感染：急慢性感染；局部、全身感染⑤帶菌狀態(tài)。

19：病毒感染類型。答：①隱性感染②顯性感染：急性病毒感染：潛伏期短，發(fā)病急，數(shù)日或數(shù)周回復，病原消滅型感染。持續(xù)性病毒感染：慢性病毒感染；潛伏性病毒感染；慢發(fā)病毒感染。

20：細菌的致病機制。答：細菌的致病性強弱取決于毒力，細菌的毒力因子：①侵襲力：致病菌突破宿主生理屏障，進入機體并在體內定植、繁殖和擴散的能力包括黏附素、莢膜和微莢膜、侵襲性物質②毒素：細菌產生的損傷宿主引起生理功能紊亂的毒性物質，包括內毒素和外毒素。

21：正常菌群的生理作用。答：①生物拮抗：競爭粘附（占位性保護）作用；產生有害代謝物質；營養(yǎng)競爭②營養(yǎng)作用③免疫作用④抑癌作用⑤抗衰老作用。

22：病毒分離鑒定方法及病毒在培養(yǎng)細胞中的增殖的指標。答：病毒的分離：①動物接種②雞胚培養(yǎng)；流感病毒初次分離接種于羊膜腔；流感病毒的再培養(yǎng)接種于尿囊腔③組織培養(yǎng)④細胞培養(yǎng) — 病毒分離鑒定中最常用的方法單層細胞培養(yǎng)；原代細胞培養(yǎng)；二倍體細胞培養(yǎng)；傳代細胞培養(yǎng)。指標：1）細胞的變化①細胞病變效應：有些病毒在細胞內增殖時引起的特有的細胞病變，如細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落②多核巨細胞形成：有些病毒如麻疹病毒、巨細胞病毒等作用于細胞膜，使鄰近的細胞融合，形成多核巨細胞③胞質或核內包涵體的形成狂犬病病毒、巨細胞病毒。2）紅細胞吸附流感病毒等感染細胞后，由于細胞膜上出現(xiàn)了血凝素，具有吸附脊椎動物紅細胞的能力，這一現(xiàn)象稱為紅細胞吸附。常用來鑒定具有血凝素的黏病毒或副黏病毒的增殖3）.紅細胞凝集檢測含血凝素病毒的方法4）干擾現(xiàn)象5）空斑形成試驗。

23：病毒成份的檢測（抗原、核酸檢測）答：1.病毒抗原的檢測2.病毒核酸的檢測

24：真菌的形態(tài)結構（單細胞和多細胞真菌）。

灰黃霉素、制霉菌素B、二性霉素B、氟康唑和酮康唑；對抗生素不敏感。

28：抗菌藥物的種類與作用機制。答：殺菌藥和抑菌藥。機制：①抑制細菌細胞壁的合成②抑制細菌

細胞膜功③抑制細菌蛋白質合成④抑制細菌核酸合成。29：細菌耐藥的機制。答：產生鈍化酶；細胞通透性的改變；靶位結構的改變；建立代謝旁路；代謝酶分子的改變

30：醫(yī)院感染的定義。答：由醫(yī)院的病原生物或其毒素導致的局部或全身感染性疾病。

31：細菌分離培養(yǎng)和鑒定、生化試驗、血清學試驗？答：細菌分離培養(yǎng)和鑒定：原則上應對所有送檢標本做分離培養(yǎng)，以便獲得單個菌落后進行純培養(yǎng)，從而對細菌做進一步的生物學、免疫學、致病性或細菌的藥物敏感性等方面的檢查，最終獲得確切的報告。生化試驗：得到細菌的純培養(yǎng)物后，用糖發(fā)酵試驗，吲哚試驗，硝酸鹽還原實驗等對細菌的酶系統(tǒng)和其代謝產物的檢查，是鑒別細菌的重要方法之一。血清學實驗：利用含已知的特異性抗體的免疫血清，對細菌進行群和型的鑒別。

微生物種類名稱★生物學性狀★致病物質、致病機理及所致疾病

破傷風梭菌：菌體細長，芽胞正圓比菌體粗，位于菌體頂端菌體鼓槌狀★不發(fā)酵糖類，不分解蛋白質。條件：局部傷口需形成厭氧微環(huán)境，傷口窄而深，有泥土或異物污染，大面積創(chuàng)傷，壞死組織多，局部組織缺血，同時有需氧菌或兼性厭氧菌混合感染的傷口。防治原則：特異性預防：注射破傷風類毒素主動免疫；迅速對傷口清創(chuàng)擴創(chuàng)，防止形成厭氧微環(huán)境；緊急預防：TAT（精制破傷風抗毒素）；治療： 早期足量使用TAT，抗生素。產氣莢膜梭菌：G+粗大桿菌，芽胞位于次極端，橢圓形，直徑小于菌體形成明顯莢膜★血平板：雙層溶血環(huán)，代謝十分活躍，牛奶培養(yǎng)基：“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象。增加血管通透性，組織壞死，氣性壞疽，食物中毒，壞死性腸炎。

肉毒梭菌：G+粗短桿菌，芽胞位于次極端，橢圓形，菌體呈網(wǎng)球拍狀，嚴格厭氧，分型多，生化反應復雜★肉毒毒素，抑制乙酰膽堿釋放，引起運動神經末梢失調→肌肉麻痹；食物中毒，嬰兒肉毒中毒。

支原體：菌落油煎蛋型，高度多形態(tài)型，細胞膜含高度固醇，無細胞壁，對青霉素有抵抗作用★支原體肺炎，病變?yōu)殚g質性肺炎，可合并支氣管肺炎。稱為原發(fā)性非典型性肺炎。不規(guī)則發(fā)熱，刺激性咳嗽，頭痛。嬰幼兒病情嚴重，發(fā)病急，病程長，以呼吸困難為主。有些合并其他系統(tǒng)病變，如循環(huán)系統(tǒng)等。飛沫傳播。立克次體：是一類體積微小，絕大多數(shù)為自身代謝不完善，嚴格細胞內寄生的原核細胞型微生物★流行性斑疹傷寒、地方性斑疹傷寒、恙蟲病、Q熱

衣原體：嚴格細胞內寄生，有獨特發(fā)育周期，能通過細菌濾器，原核細胞型微生物★ 沙眼:感染眼結膜上皮細胞→增殖，包涵體→局部炎癥→早期流淚、有粘液膿性分泌物、結膜充血及濾泡增生→后期結膜瘢痕、眼瞼內翻、倒睫以及角膜血管翳引起的角膜損害→影響視力或致盲包涵體結膜炎、泌尿生殖道感染、沙眼衣原體肺炎、性病淋巴肉芽腫

螺旋體：是一類細長、柔軟、彎曲、運動活潑的原核細胞型微生物基本結構及生物學形狀與細菌相似★梅毒，人是唯一傳染源，致病物質為莢膜樣物質，透明質酸酶；后天通過性接觸傳播或者先天經過母體傳播。

第四篇：微生物總結

第一章、緒論

巴斯得的貢獻：

1、徹底否定了“自生說”

2、免疫學—預防接種

3、證實發(fā)酵是由微生物引起的3、巴斯德消毒法

柯赫貢獻：

1、證實炭疽病菌是炭疽病的病原菌

2、發(fā)現(xiàn)了肺結核病的病原菌

3、提出了證明某種微生物是否為某種疾病病原體的病原菌——柯赫原則

4、固體培養(yǎng)基分離純化微生物的技術

5、配制培養(yǎng)基

微生物的5大共性：

1、體積小、面積大

2、吸收多、轉化快

3生長旺、繁殖快

4、分布廣、種類多

5、適應性強、易變異 第二章、微生物的純培養(yǎng)和顯微技術

一、涂布平板法作用：用于純種分離、篩選菌落、得到單菌落，對一些細菌進行計數(shù) 五區(qū)劃線發(fā)作用：純化菌種、得到單菌落

搖瓶實驗作用：菌種篩選、發(fā)酵實驗、種子培養(yǎng)等 穿刺法的作用：保藏厭氧菌種、研究微生物的動力 之字劃線法的作用：保藏菌種、單菌落的獲取

二、斜面菌種保藏法：保藏期限3個月以內，沙土管保藏法：保藏期限1~10年主要適用于產孢子的，如芽孢桿菌、放線菌 石蠟油封藏法：保藏期限1~2年

真空冷凍干燥法：保藏期限5~10年，液氮超低溫病結法：保藏期限5~10年 第三章

一、細胞壁：根據(jù)細胞壁將原核生物分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌兩種。

1、革蘭氏陽性菌細胞壁的特點：厚度大（20~80nm）和化學組分簡單，一般只含90%肽聚糖和10%磷壁酸。

革蘭氏陽性菌的機械阻攔與保護作用有肽聚糖完成。磷壁酸：是結合在革蘭氏陽性菌細胞壁上的一種酸性多糖，主要成分為甘油磷酸或核糖醇磷酸。

磷壁酸為革蘭氏陽性菌所特有。對于革蘭氏陽性菌而言，抗原性由磷壁酸完成。磷壁酸的主要生理功能：1）、其磷酸分子上較多的負電荷可提高細胞周圍鎂離子的濃度進入細胞后就可以保證細胞膜上一些需鎂離子的合成提高活性 2）儲藏磷元素 3）、增強某些致病菌如A族鏈球菌對宿主細胞的黏連、避免被白細胞吞噬以及補抗體的作用 4）賦予革蘭氏陽性菌以特異的表面抗原 5）可作為噬菌體的特異性吸附受體

6）調節(jié)細胞自溶素的活力，借以防止細胞自溶而死亡

2、革蘭氏陰性菌：由肽聚糖和外膜組成，外膜中的脂多糖是革蘭氏陰性菌所特有的 外壁層可分為3層：外層為脂多糖層，中層為磷脂層，內層為脂蛋白 革蘭氏陰性菌外膜的作用：1）控制細胞透性

2）提高鎂離子濃度 3）決定細胞的抗原性

4）類脂A是類毒素的主要成分

脂多糖：是位于革蘭氏陰性菌細胞壁最外層的一層較厚的類脂多糖物質，由類脂A、核心多糖和O-特異側鏈

脂多糖的功能：1）其中類脂A是革蘭氏陰性菌致病物質——內毒素的物質基礎 2）因其負電荷較強，有吸附鎂離子、鈣離子等陽離子以提高其在細胞表面的濃度作用 3)由于LPS結構多變，決定了革蘭氏陰性菌細胞表面抗原決定族 4）是許多噬菌體在在細胞表面的吸附受體 5）具有控制某些物質進出細胞的部分選擇性屏障功能

3、革蘭氏染色機制：通過結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞膜內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物。革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚，肽聚糖網(wǎng)層次多和交聯(lián)致密，故與乙醇與丙酮作脫色處理時因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會溶出縫隙，因此能把結晶紫與碘的復合物牢牢留在壁內，使其任呈紫色。反之革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層的類脂含量高、肽聚糖層薄和交聯(lián)度差，遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結晶紫與碘的復合物的溶出，因此，通過乙醇脫色后細胞退成無色。這時，再經沙黃等紅色染料進行復染，就使革蘭氏陰性菌呈現(xiàn)紅色，而革蘭氏陽性則保留紫色。

二、芽孢

芽孢：某些細胞在生長發(fā)育后期，在細胞內形成一個圓形或橢圓形、厚壁、含水量極低、抗逆性極強的休眠體

芽孢的特點：1）芽孢內新陳代謝幾乎停止，處于休眠狀態(tài)，但保持潛在萌發(fā)力

2）芽孢不具生殖能力，僅只是一種休眠體 3）抗逆性最強的生命體之一，有抗熱、抗化學藥物、抗輻射和抗靜水壓能力 4）含水量低，壁厚而致密，通透性差，不易著色，折光性強

5）一個孢子萌發(fā)只產生一個營養(yǎng)狀態(tài)的細胞 芽孢的耐熱機制：芽孢的耐熱性在于芽孢衣對多價陽離子和水分的透性很差和皮層的離子強度很高，從而是皮層產生極高的滲透壓去奪取芽孢核心中的水分，其結果造成皮層的充分膨脹，而核心部分的細胞質卻變得高度失水，因此，導致核心具極強的耐熱性。第四章微生物的營養(yǎng)要求

一、營養(yǎng)物質：能夠滿足微生物機體生長、繁殖和完成各種生理條件所需的物質 營養(yǎng)：微生物獲得U和利用營養(yǎng)物質的過程

二、1、碳源：是在微生物生長過程中為微生物提供碳素來源的物質。為微生物提供碳元素與能量

2、氮源：為微生物提供氮元素來源，只有少數(shù)自養(yǎng)微生物能利用銨鹽、硝酸鹽同時作為氮源與能源（是構成細胞中核酸和蛋白質的重要元素）氮源的類型：無機氮、有機氮、氣體氮

3、無機鹽：作用：作為酶活性中心的組成部分、維持生物大分子和細胞結構的穩(wěn)定性、調節(jié)并維持細胞的滲透壓、控制細胞的氧化還原電位和作為某些微生物生長的能源物質。

4、生長因子：通常是指那些微生物生長所必需的的且需量很少，但微生物自身不能合成或合成量不足以滿足機體生長需要的有機化合物

5、水：生理功能：1)起到溶劑與運輸介質的作用

2）參與細胞內一系列的化學反應

3）維持蛋白質、核酸等生物大分子穩(wěn)定的天然構象

4）是良好的導熱體，調節(jié)細胞溫度 微生物的營養(yǎng)類型分類（P84表格）

三、1、培養(yǎng)基的配制原則：1）目標明確

2）營養(yǎng)協(xié)調

3）物理化學條件適宜

4）原料來源的選擇

2、C多有助于次生物質分泌，N多有助于個體生長發(fā)育

3、PH：細菌：7.0~8.0

酵母菌：4.0~6.0

放線菌：8.0~9.0

霉菌：4.0~5.8

4、維持培養(yǎng)基PH的方法：1）加緩沖劑一氫和二氫磷酸鹽的混合物

2）備用堿：CaCO3、CaHCO3 3）弱酸鹽：檸檬酸鹽、乳酸鹽

4）液氨或鹽酸

5、原料來源：1）經濟節(jié)約原則：以粗代精、以廢代好、以簡代繁

2）原料來源要廣泛

3）原料藥易處理、處理成本要低

4）原料處理后廢物、廢液、廢氣要少

6、選擇和配制培養(yǎng)基的方法四種：生態(tài)模擬、查閱文獻、精心設計、實驗比較

四、培養(yǎng)基的分類

1、按成分不同劃分：天然培養(yǎng)基：優(yōu)點為取材方便，營養(yǎng)豐富，種了多樣，配制方便合成培養(yǎng)基：優(yōu)點：組分精確，重復性好確定：較昂貴，一般用于研究

2、根據(jù)物料狀態(tài)劃分：固體培養(yǎng)基：一般用于進行微生物的分離、鑒定、活菌計數(shù)及菌種保藏半固體培養(yǎng)基：用于觀察微生物的運動特征、分類鑒定及噬菌體效價滴定液體培養(yǎng)基：用于大量培養(yǎng)微生物，研究生理代謝

3、按用途劃分：基礎培養(yǎng)基：用于培養(yǎng)野生型微生物和原養(yǎng)型微生物 加富培養(yǎng)基（營養(yǎng)培養(yǎng)基）：在基礎培養(yǎng)基中加入某些特殊營養(yǎng)物質制成的一類營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基作用一般為分離某種微生物而專門設計或培養(yǎng)營養(yǎng)要求嚴謹?shù)漠悩游⑸?鑒別培養(yǎng)基：在培養(yǎng)可中加入某種特殊化學物質 選擇培養(yǎng)基：根據(jù)不同種類微生物的特殊營養(yǎng)需求或對某種化學物質的敏感性不同，在培養(yǎng)基中加入相應的特殊營養(yǎng)物質或化學物質，抑制不需要的微生物的生長，有利于所需要微生物的生長，有利于所需微生物的生長 第五章、微生物代謝

微生物發(fā)酵過程的三個階段：脫氫（電子）、遞氫（或電子）和受氫（或電子）發(fā)酵：是指微生物細胞將有機物氧化釋放的電子直接交給底物本身未完全氧化的某些中間產物，同時釋放能量并產生各種不同的代謝產物

代謝：生命存在的基本特征，是微生物體內所進行的全部生化反應的總稱。主要由分解代謝和合成代謝兩個過程組成。分解代謝：是指將大分子物質降解成小分子物質，并在這個過程中產生能量（都是氧化反應）合成代謝：是指細胞利用簡單的小分子物質合成復雜大分子，在這個過程要消耗能量（都是還原反應）

代謝途徑都是有一系列連續(xù)的酶促反應構成的

P102~P105EMP HM ED途徑的特點功能以及途徑路線

根據(jù)氧化還原反應電子受體的不同可將發(fā)酵和呼吸分為有氧和無氧呼吸兩種 P108 TCA途徑圖

TCA循環(huán)特點：1）氧雖然不直接參與其中反應，但必需在有氧條件下運行

2）每個丙酮酸產生15個ATP 3）位于一切分解代謝與合成代謝的樞紐地位，可為生物合成提供各種碳價原料

TCA的生理意義：1）為細胞提供能量

2）各種能源物質徹底氧化的共同代謝途徑（對于微生物來說）3）物質轉化樞紐

無氧呼吸：電子受體不是氧氣而是外源無機物與部分簡單小分子有機物

發(fā)酵作用：沒有外源電子受體，底物具有的能量只釋放一小部分，合成少量ATP 三種磷酸化：底物水平磷酸化，高能磷酸化，氧化磷酸化

光合磷酸化的特點：1）光驅使下電子自菌綠素上逐出后經類似呼吸鏈又回到菌綠素

2）產還原力[H]和產ATP分別進行，還原力來自于H2O等無機物

3）不產生氧氣 合成代謝：微生物利用能量代謝所產生的能量、中間代謝產物以及從外界吸收的小分子合成復雜細胞物質的過程

P118~P119 CO2固定路線圖

藍細菌孤單的抗氧化保護機制：1）分化出特殊的還原性異形胞

2）非異形胞藍細菌固氮酶的保護將固氮與光合進行時間上分隔

微生物固氮反應6要素：1）ATP的供應

2)還原力[H]及傳遞氫載體

3）固氮酶

4）還原底物——氮氣

5）鎂離子

6）嚴格厭氧微環(huán)境

聯(lián)合固氮菌：指必需生活在植物根莖葉，動物腸道等處才能進行固氮的微生物，不形成類似根瘤的共生結構 微生物的代謝調節(jié)主要有兩種類型：一是酶活性的調節(jié)，即調節(jié)已經存在的酶分子的活性，是酶在化學水平的變化。另一類是酶合成的調節(jié)，即調節(jié)酶分子的合成量，是遺傳水平發(fā)生的變化 第六章

一、生長曲線延滯期

特點：1）生長速率常數(shù)為零，細胞數(shù)目不增加或增加很小

2）細胞形態(tài)變大或 增長許多桿菌可長成絲狀

3）合成代謝十分活躍，核糖體、酶類和ATP 的合成加速產生各種誘導酶

4）對外界不良條件如NaCl溶液，溫度和抗 生素等理化因素反應敏感

出現(xiàn)原因：1）微生物接種到一個新的環(huán)境，暫缺乏足夠的能量和必需的生長因子

2）“種子”老化即處于未對數(shù)期或種子未活化

3）接種時損傷

影響其長短的因素與實踐意義：1）接種齡：對數(shù)期種子延滯期短，延滯期或衰亡期的種子延滯期較長

2）接種量：接種量大，延滯期較短，接種量小，延滯期較長

3）培養(yǎng)基成分：培養(yǎng)基成分豐富的延滯期較短，培養(yǎng)基成分與種子培養(yǎng)基一致的延滯期較短

二、生長曲線指數(shù)期

特點：1）生長速率最快，細胞呈指數(shù)增長

2）生長速率恒定

3）代謝旺盛，細胞組分平衡發(fā)展

4）群體的生理特性一致

影響指數(shù)期的意義：1）菌種：不同菌種代時差異極大

2）營養(yǎng)成分：營養(yǎng)越豐富代時越短

3）營養(yǎng)物濃度：影響微生物的生長速率和生長總量

4）培養(yǎng)溫度：影響微生物的生長速率和生長總量

指數(shù)期的實踐意義：1）是代謝、生理研究的良好材料

2)是增殖噬菌體的最適宿主菌齡

4）革蘭氏染色是采用此期微生物

生長曲線穩(wěn)定期特點：1）活細胞總數(shù)維持不變即新增殖的細胞數(shù)與衰亡的細胞數(shù)相等，菌體總數(shù)達到最高點

2）細胞生長速率為零

3）細胞生理上處于衰老，代謝活力鈍化，細胞成分合成緩慢，革蘭氏染色發(fā)生變化

三、生長曲線衰亡期

特點：細胞以指數(shù)速率死亡，有時細胞速率的降低是由于抗性細胞的積累，細胞變形退化，有的發(fā)生自溶，革蘭氏染色發(fā)生變化

影響衰亡期的因素及實踐意義：1）與菌種的遺傳特性有關：有些細菌的培養(yǎng)經歷所有的各個生長時期，幾天以后死亡，有細菌培養(yǎng)基個月乃至幾年以后任然有一些貨細胞

2）與是否產芽孢有關：產芽孢的細菌更易幸存下來

3）與營養(yǎng)物質和有毒物質有關：補充營養(yǎng)和能源，以及中和環(huán)境毒性，可以減緩死亡細胞的死亡速率，延長細菌培養(yǎng)物的存貨時間

四、分批培養(yǎng)：是指將微生物置于一定容積的的培養(yǎng)基中，經過生長培養(yǎng)，最后一次收獲培養(yǎng)方式 連續(xù)培養(yǎng)：在一個恒定容積的的流動系統(tǒng)中培養(yǎng)微生物，一方面以一定速率加入新的培養(yǎng)基，另一方面又以相同的速率流出培養(yǎng)物（菌體和代謝產物）

連續(xù)發(fā)酵的優(yōu)點：1）高效

2）產品質量較穩(wěn)定

3）節(jié)約了大量動力、人力、水和蒸汽，且使水、汽、電的負荷均衡合理

連續(xù)發(fā)酵的缺點：1）菌種易退化

2）易污染雜菌 3）營養(yǎng)物質的利用率一般 同步生長：就是指在培養(yǎng)物中所有微生物細胞都同一生長階段，并都能同時分裂的生長方式 同步培養(yǎng)法包括誘導法與選擇法

誘導法：是采用物理、化學一男子使微生物生長到某一階段而停下來，使所有細菌都達到這個階段時再使其生長 恒濁器：根據(jù)培養(yǎng)器內微生物的生長密度并借光電控制系統(tǒng)來控制培養(yǎng)液流速，以取得菌體密度高，生長速度恒定的微生物細胞的連續(xù)培養(yǎng)

恒化器：與恒濁器相反，是一種設法使培養(yǎng)液流速保持不變 最高生長速率條件下進行生長繁殖的一種連續(xù)培養(yǎng)裝置 裝置

控制對象

培養(yǎng)基

培養(yǎng)基流速

生長速率

產物

應用范圍

恒濁器

菌體密度(內控制)

無限制生長因子

不恒定

最高速率

大量菌體或與菌體平行的代謝產物

生產為主

恒化器

培養(yǎng)基流速（外控制）

有限制生長因子

恒定

低于最高速率

不同生長速率的菌體、并使微生物始終在低于其

實驗室為主

五、防腐：是在某些化學物質或物理因子作用下防止或抑制微生物生長的一種措施，它能防止食物腐敗或防止其他物質霉變 消毒：利用某種殺死或滅活物質或物體中所有微生物的一種措施，它可以起到防止感染或傳播的作用

滅菌：利用某種方法殺死物體中包括芽孢在內的所有微生物的一種措施 第七章

1、病毒的特點:1)形態(tài)及其微小，一般能通過細菌濾器必須自電鏡下才能觀察

2）沒有細胞構造，主要成分僅為核酸與蛋白質

3）每一種病毒致含有一種核酸

DNA和RNA 4）依靠自身的核酸進行復制，一病毒的核酸和蛋白質等原件實現(xiàn)裝配，實現(xiàn)繁殖

5）嚴格細胞內寄生，缺乏完整的酶和產能系統(tǒng)，只能利用宿主細胞的現(xiàn)成的代謝系統(tǒng)合成病毒自身的核酸和蛋白質

6）在離體條件下，能以無生命力的大分子狀態(tài)存在，并可長期保持器侵染力

7）對一般抗生素不敏感，但對干擾素敏感

8）有些病毒的基因可以整合到宿主的基因中去

2、病毒與活細胞的區(qū)別：1）結構簡單，沒有細胞結構

2）幾乎所有的毒粒中只有DNA或RNA一種類型的核酸

3）在細胞外不能增殖

3、得到一步生長曲線的實驗：二院培養(yǎng)系統(tǒng)：1）低濃度病毒宿主細胞(給幾分鐘時間侵染)2）高倍稀釋病毒與細胞的培養(yǎng)物

3）保濕培養(yǎng)

4）不同時間取樣，涂布平板，得到效價

5）以時間為橫坐標，病毒濃度為縱坐標繪圖

4、烈性噬菌體：感染宿主后增殖裂解宿主 溶原性噬菌體（溫和性細菌）：感染后大多數(shù)可整合到宿主基因中少數(shù)以染色體外獨立存在

5、病毒分為真病毒和亞病毒，亞病毒又分為類病毒、衛(wèi)星病毒、衛(wèi)星RNA、朊病毒 類病毒：是一種只包含RNA的病毒，只在植物中出現(xiàn)，分質量極小，不能編碼蛋白質 衛(wèi)星病毒：寄生于與之無關的輔助病毒的基因產物的病毒 衛(wèi)星RNA：是指必需依賴一些輔助病毒進行復制的小分子單鏈RNA，他們被包藏在輔助病毒的殼體中

朊病毒：是一類能引起哺乳動物亞急性海綿樣腦病的病原因子 第八章

P204頁Griffith轉化實驗等3個實驗

基因組：是指位于細菌或細胞中的所有基因 大腸桿菌基因組的特點：1）遺傳信息的連續(xù)性

2）功能相關的結構基因組成操縱子結構

3）結構基因的單拷貝及rRNA基因的多拷貝

4）基因組重復序列少而短

質粒：是一種獨立于染色體外，能進行自主復制的細胞質遺傳因子，主要存在于各種微生物中

轉座子：是位于染色體或質粒上的一種能改變自身位置的DNA序列，廣泛分布于原核和真核細胞中

質粒的主要類型：致育因子、抗性因子、Col質粒、毒性質粒、代謝質粒、隱秘質粒

致育因子：又稱F質粒，其大小約100kb，這是最早發(fā)現(xiàn)的一種與大腸桿菌的有性生殖現(xiàn)象（結合作用）有關的質粒

抗性因子：是另一類普遍而重要的質粒，主要包括抗藥性和抗重金屬兩大類，簡稱R質粒 Col質粒：該質粒含有編碼大腸菌素的基因，大腸菌素是一種細菌蛋白，只殺死近緣且不含Col質粒的菌株，而宿主不受其產生的細菌素的影響

毒性質粒：致病菌中攜帶的能引起致病性的質粒，這些質粒具有編碼毒素的基因 代謝質粒：攜帶有能降解某些基質的酶的基因的質粒

隱秘質粒：不顯示任何表型效應，它們的存在只有通過物理方法檢測出來 原核生物中對的轉座因子有3種類型：插入順序（IS）、轉座子（Tn）、病毒（Mu）轉座的遺傳學效應：插入突變、產生染色體畸變、基因的移動和重排

基因突變：一個基因內部遺傳結構或DNA序列的任何改變包括一對或幾對堿基的缺失、插入或置換，而導致的遺傳變化

堿基變化對遺傳信息改變的四種類型：同義突變，錯義突變，無義突變，移碼突變 同義突變：是指某個堿基的變化沒有改變產物氨基酸序列的密碼子變化

錯義突變：是指堿基序列的改變引起了產物氨基酸的改變（可能為致死突變）無義突變：是指某個堿基的改變，使代表某種氨基酸的密碼子變?yōu)榈鞍踪|的合成的終止密碼子，蛋白質的合成提前終止，產生短截的蛋白質

移碼突變：由于DNA序列中發(fā)生1~2個核苷酸的缺失或插入，使翻譯的閱讀框發(fā)生改變，從而導致改變位置以后的氨基酸序列的完全變化（一般為致死突變）

表型變化的突變型：營養(yǎng)缺陷型，抗藥性突變型，條件致死突變型，形態(tài)突變型 營養(yǎng)缺陷型：缺乏合成其生存所必需的營養(yǎng)物的突變型，只有從周圍環(huán)境或培養(yǎng)基中獲得這些營養(yǎng)或前體物才能生長 影印平板P218 抗藥性突變型：是由于基因突變使菌株對某種或某幾種藥物，特別是抗生素產生抗性的一種突變型

條件致死突變型：是指在某一條件下具有致死效應，而在另一條件下沒有致死效應的突變型 形態(tài)突變型：是指造成形態(tài)改變的突變型（包括菌落形態(tài)、顏色一件噬菌斑形態(tài)）

自發(fā)突變的緣由：1）NDA復制過程產生的錯誤

2）堿基互變異構體的相互轉變

3）轉座子的隨機插入基因

自發(fā)突變的特性：1）非對應性

2）稀有性

3）規(guī)律性

4）獨立性

5）遺傳和回復

6）可誘變性

誘發(fā)突變：堿基類似物、插入染料、直接與DNA其化學反應的誘變劑、輻射和熱、生物誘變因子

DNA損傷修復：光復活作用、切除修復、重組修復、SOS修復 光復活：由phr基因編碼的光解酶進行

切除修復：又稱暗修復，該修復系統(tǒng)除了堿基錯誤配對和單核苷酸插入不能修復外，幾乎其他DNA損傷均可修復，是細胞內主要修復系統(tǒng)

重組修復：是一種越過損傷而進行的修復，這種修復不將損傷堿基除去

SOS修復：是DNA分子受到較大范圍的重大損傷時誘導產生的一種應急反應 P226~227 高頻重組菌等

轉導：是由病毒介導的細胞間進行遺傳交換的一種方式

供體DNA進入受體的命運：1）發(fā)生穩(wěn)定的轉導子

2）流產轉導：即不被降解，又不被整合，也不被復制

3）外源DNA被降解，轉導失敗

遺傳轉化：是指同源或異源的游離DNA分子被自然或人工感受態(tài)細胞攝取，并得到表達的水平方向的基因轉移過程

4個影響供體DNA與受體細胞間的最初相互作用：1）轉化片段的大小

2）形態(tài)：雙鏈DNA 3）濃度：在在臨界值出現(xiàn)之前成正比

4）生理狀態(tài)：感受器——剛停止DNA合成 微生物育種：誘變育種、代謝育種、體內基因組育種 代謝育種：改變代謝途徑、擴展代謝途徑、構建新的代謝途徑 體內基因組育種：原生質體融合，雜交育種

融合子的判別：1）親本遺傳標記的互補的2）親本滅活后性狀的恢復

3）具有雙親本的熒光標記 第九章

順式作用元件：位于基因的旁側，可以調控影響基因表達的核酸序列。其本身并不編碼蛋白質

反式作用因子：通常為蛋白質或RNA，其特征是可以合成并擴散到目標場所發(fā)揮作用 正調控：控制因子通過與啟動子原件結合來激活基因的表達 負調控：抑制物與操縱基因結合起來阻止基因表達 P248 操縱子的結構

P249圖

P250 圖

啟動子：是RNA聚合酶和CAP的結合位點，控制著轉錄的起始，一個啟動子可以啟動多個基因的表達

操縱基因：DNA上的一個結合位點，阻抑物能與之結合抑制相鄰啟動子的起始轉錄，操縱基因不表達任何東西 終止子：控制轉錄結束

轉錄因子：轉錄起始過程中RNA聚合酶所需要的輔助因子

轉錄水平的調控:1）DNA的結構

2）RNA聚合酶的功能

3）蛋白質因子及其他小分子配基的相互作用

第五篇：食品微生物檢驗采樣方法

食品微生物檢驗采樣方法

按照上述采樣方案,能采取最小包裝的樣品就采取完整包裝,必須拆包裝取樣的應按無菌操作進行。

不同類型的食品應采用不同的工具和方法: 1.液體樣品：充分混勻,以無菌操作開啟包裝,用100mL無菌注射器抽取,注入無菌容器。2半固體樣品：以無菌操作拆開包裝,用無菌勺子從幾個部位挖取樣品,放入無菌容器。3.固體食品：大塊整體食品應用無菌刀具和鑷子從不同部位割取,割取時應兼顧表面與深部,注意樣品的代表性;小塊大包裝食品應從不同部位的小塊上切取樣品,放入無菌容器。若為檢驗食品的污染情況，可取表層樣品；若為檢驗食品品質的情況，應從深部取樣。4.冷凍食品：大包裝小塊冷凍食品按小塊個體采取;大塊冷凍食品可以用無菌刀從不同部位削取樣品或用無菌小手鋸從凍塊上舉取樣品,也可以用無菌鉆頭鉆取碎屑狀樣品,放入容器。固體食品和冷凍食品的取樣還應注意檢驗目的,若需檢驗食品污染情況,可取表層樣品;若需檢驗其品質情況,應取深部樣品。5.生產工序監(jiān)測

(1)車間用水。自來水樣從車間各水龍頭上采取冷卻水;湯料等從車間容器不同部位用100mL無菌注射器抽取。

(2)車間臺面、用具及加工人員手的衛(wèi)生監(jiān)測。用5cm2孔無菌采樣板及5支無菌棉簽擦拭25cm2面積。若所采表面干燥,則用無菌稀釋液潤濕棉簽后擦拭;若表面有水,則用干棉簽擦拭,擦拭后立即將棉簽頭用無菌剪刀剪入盛樣容器。

(3)車間空氣采樣。直接降塵法。將5個直徑90mm的普通營養(yǎng)瓊脂平板分別置于車間的四角和中部,打開平皿蓋5min,然后蓋蓋送檢。