第一篇：實驗20植物組織中游離氨基酸總量的測定

實驗20植物組織中游離氨基酸總量的測定

茚三酮顯色法 氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位也是蛋白質(zhì)的分解產(chǎn)物。植物根系吸收、同化的氮素主要以氨基酸和酰胺的形式進行運輸。所以測定植物組織中不同時期、不同部位游離氨基酸的含量對于研究根系生理、氮素代謝有一定意義。

一、原理 氨基酸與茚三酮共熱時能定量地生成二酮茚胺。該產(chǎn)物顯示藍紫色稱為 Ruhemans 紫。其吸收峰在 570 nm 而且在一定范圍內(nèi)吸光度與氨基酸濃度成正比。氨基酸與茚三酮的反應(yīng)分兩步進行第一步氨基酸被氧化形成 CO 2、NH 3 和醛茚三酮被還原成還原型茚三酮第二步所形成的還原型茚三酮與另一個茚三酮分子和一分子氨脫水縮合生成二酮茚–二酮茚胺 Ruhemans 紫反應(yīng)式如下 在一定范圍內(nèi)反應(yīng)體系顏色的深淺與游離氨基的含量成正比因此可用分光光度法測定其含量。

二、實驗材料、試劑與儀器設(shè)備 一實驗材料 各種植物組織。二試劑 1.水合茚三酮試劑稱取 0.6 g 再結(jié)晶的茚三酮置燒杯中加入 15 mL 正丙醇攪拌使其溶解。再加入 30 mL 正丁醇及 60 mL 乙二醇最后加入 9 mL pH5.4 的乙酸–乙酸鈉緩沖液混勻貯于棕色瓶置 4 ℃下保存?zhèn)溆?10 d 內(nèi)有效。2.乙酸–乙酸鈉緩沖液 pH 5.4 稱取乙酸鈉 54.4 g 加入 100 mL 無氨蒸餾水在電爐上加熱至沸使體積蒸發(fā)至 60 mL 左右。冷卻后轉(zhuǎn)入 100 mL 容量瓶中加 30 mL 冰醋酸再用無氨蒸餾水稀釋至 100 mL。3.標(biāo)準(zhǔn)氨基酸稱取 80 ℃下烘干的亮氨酸 46.8 mg 溶于少量 10 異丙醇中用 10 異丙醇定容至 100 mL。取該溶液 5 mL 用蒸餾水稀釋至 50 mL 即為含氨基氮 5 μ g/mL 的標(biāo)準(zhǔn)氨基酸溶液。4.0.1 抗壞血酸稱取 50 mg 抗壞血酸溶于 50 mL 無氨蒸餾水中隨配隨用。5.10 乙酸。三儀器設(shè)備 分光光度計分析天平研缽容量瓶試管移液管水浴鍋三角瓶漏斗。

三、實驗步驟 1.樣品制備 取新鮮植物樣品洗凈、擦干并剪碎、混勻后迅速稱取 0.5 1.0 g 于研缽中加入 5 mL 10 乙酸研磨勻漿后用蒸餾水稀釋至 100 mL?；靹虿⒂酶蔀V紙過濾到三角瓶中備用。2.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 取 6 支 20 mL 刻度試管按表 27 – 1 操作。表 27-1 制作游離氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線各試劑量及操作程序 試 劑 管 號 1 2 3 4 5 6 標(biāo)準(zhǔn)氨基酸 mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 無氨蒸餾水 mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮 mL 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 抗壞血酸 mL 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 每管含氮量 μ g 0 1 2 3 4 5 加完試劑后混勻蓋上大小合適的玻璃球置沸水中加熱 15 min 取出后用冷水迅速冷卻并不時搖動使加熱時形成的紅色被空氣逐漸氧化而褪去當(dāng)呈現(xiàn)藍紫色時用 60 乙醇定容至 20 mL。混勻后用 1 cm 光徑比色皿在 570 nm 波長下測定吸光度以吸光度為縱坐標(biāo)以含氮量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.樣品測定 吸取樣品濾液 1.0 mL 放入 20 mL 干燥試管中加無氨蒸餾水 1.0 mL 其他步驟與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線相同。根據(jù)樣品吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得含氮量。

四、結(jié)果計算 按下式計算樣品中氨基態(tài)氮的含量。式中 C ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的氨基態(tài)氮含量 μg。V T ——樣品稀釋總體積 mL。V S ——測定時樣品體積 mL。W ——樣品鮮重 g。思考題 1.茚三酮與所有氨基酸的反應(yīng)產(chǎn)物顏色都相同嗎 為什么 2.抗壞血酸在測定中的作用是什么 【 附注 】 1.茚三酮重結(jié)晶的方法 合格的茚三酮應(yīng)該是微黃色結(jié)晶若保管不當(dāng)顏色加深或變成微紅色必須重結(jié)晶后方可使用。其方法如下 5 g 茚三酮溶于 15 mL 熱蒸餾水中加入 0.25 g 活性炭輕輕搖動溶液太稠時可適量加水 30 min 后用濾紙過濾濾液置冰箱中過夜后即可見微黃色結(jié)晶析出用干濾紙過濾再用 1 mL 蒸餾水洗結(jié)晶一次置于干燥器中干燥后貯于棕色瓶中。2.茚三酮與氨基酸反應(yīng)所生成的 Ruhemans 紫在 1 h 內(nèi)保持穩(wěn)定故稀釋后盡快比色。3.空氣中的氧干擾顯色反應(yīng)的第一步。以抗壞血酸為還原劑可提高反應(yīng)的靈敏度并使顏色穩(wěn)定。但由于抗壞血酸也可與茚三酮反應(yīng)使溶液顏色過深故應(yīng)嚴(yán)格掌握加入抗壞血酸的量。4.反應(yīng)溫度影響顯色穩(wěn)定性超過 80 ℃溶液易褪色可在 80 ℃水浴中加熱并適當(dāng)延長反應(yīng)時間效果良好。5.谷物籽粒等含蛋白質(zhì)的樣品可用酸水解法將蛋白質(zhì)水解后用本法測定水解液中的氨基酸含量可計算出樣品蛋白質(zhì)含量。

第二篇：植物組織游離脯氨酸含量的測定

植物組織游離脯氨酸含量的測定

原理

植物在逆境條件下，游離脯氨酸便會大量積累，且積累指數(shù)與植物的抗逆性有關(guān)。因此，脯氨酸可作為植物抗逆性的一項生化指標(biāo)。

采用磺基水楊酸提取植物體內(nèi)的游離脯氨酸，不僅大大減少了其他氨基酸的干擾，快速簡便，而且不受樣品狀態(tài)(干或鮮樣)限制。在酸性條件下，脯氨酸與茚三酮反應(yīng)生成穩(wěn)定的紅色縮合物，用甲苯萃取后，此縮合物在波長520nm處有一最大吸收峰。脯氨酸濃度的高低在一定范圍內(nèi)與其消光度成正比。材料、儀器設(shè)備及試劑 1．材料

植物葉片

2．儀器設(shè)備

分光光度計；水浴鍋：漏斗：大試管(20m1)；具塞刻度試管(20m1)注射器或滴管(5～lOml)。3．試劑

(1)3％磺基水楊酸溶液

(2)甲苯；

(3)2.5％酸性茚三酮顯色液：冰乙酸和6mo1.L-l磷酸以3:2混合，作為溶劑進行配制，此液在4℃下2～3天有效；

‘

(4)脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取25mg脯氨酸，用蒸餾水溶解后定容至250ml，其濃度為100ug.mL-l。再取此液10ml，用蒸餾水稀釋至lOOml，即成10μg．mL-1的脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)液。

1．標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

（1）取7支具塞刻度試管按表9.2-1加入各試劑?；靹蚝蠹硬Ａ蛉诜兴屑訜?0min。

(2)取出冷卻后向各管加入5ml甲苯充分振蕩，以萃取紅色物質(zhì)。靜置待分層后吸取甲苯層以0號管勻?qū)φ赵诓ㄩL520nm下比色。

（3）以消光值為縱坐標(biāo)，脯氨酸含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求線性回歸方程

表9．2．1各試管中試劑加入量 試管

0

脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(m1)

0

0．2

0．4

0．8

1．2

1．6

2．0

水(m1)

1．8

1．6

1．2

0．8

0．4

0

冰乙酸(m1)

茚三酮顯色液(m1)

樣品測定

（1）脯氨酸提?。喝〔煌幚淼募羲榛靹蛑参锶~片0．2～0．5g(干樣根據(jù)水分含量酌減)，分別置于大試管中，加入5m1 3％磺基水楊酸溶液，管口加蓋玻璃球，于沸水浴中浸提10min。

(2)取出試管，待冷卻至室溫后，吸取上清液2m1，加2m1冰乙酸和3m1顯色液，于沸水浴中加熱40min，下步操作按標(biāo)準(zhǔn)曲線制做方法進行甲苯萃取和比色（向各管加入5ml甲苯充分振蕩，以萃取紅色物質(zhì)。靜置待分層后吸取甲苯層以0號管勻?qū)φ赵诓ㄩL520nm下比色）。

(3)結(jié)果計算：從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出測定液中脯氨酸濃度 脯氨酸含量的百分?jǐn)?shù)。

脯氨酸[μg.g-1(干或鮮重)](C．V)·(a·W)－1

式中：C一提取液中脯氨酸濃度(PS)，由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得：

V － 提取液總體積（ml）

A---測定時所吸取得體積（ml）

W-----樣品重（g）

第三篇：植物組織中淀粉含量的測定

植物組織中淀粉含量的測定 2007-01-12 08:55 Ⅰ 蒽酮硫酸法

一、原理

淀粉是由葡萄糖殘基組成的多糖，在酸性條件下加熱使其水解成葡萄糖，然后在濃硫酸的作用下，使單糖脫水生成糠醛類化合物，利用蒽酮試劑與糠醛化合物的顯色反應(yīng)，即可進行比色測定。

二、實驗材料、試劑與儀器設(shè)備

（一）實驗材料 任何植物材料。

（二）試劑

濃硫酸（比重 1.84）。9.2mol/L HClO 4。

2%蒽酮試劑，同實驗 24。

（三）儀器設(shè)備

電子天平，容量瓶： 100 mL 4 個、50 mL 2 個，漏斗，小試管若干支，電爐，刻度吸管 0.5mL 1 支、2.0 mL 3 支、5 mL 4 支，分光光度計，記號筆。

三、實驗步驟

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

取小試管11支從0～10編號，按表24-3加入溶液和蒸餾水。

以下步驟按苯酚法或蒽酮法均可，見方法一或方法二，繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

表24-3 各試管加入標(biāo)準(zhǔn)液和蒸餾水量

管 號 0 1～2 3～4 5～6

7～8 9～10 淀粉標(biāo)準(zhǔn)液(ml)

0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 蒸 餾 水（ml）

2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0

淀粉含量（mg）

0 40 80 120 160 200 2.樣品提取 稱取 50 ～ 100 mg 粉碎過 100 目篩的烘干樣品，置于 15 mL 刻度試管中，加入 6 ～ 7 mL 80 ％乙醇，在 80 ℃水浴中提取 30 min，取出離心（3000 rpm）5 min，收集上清液。重復(fù)提取兩次（各 10 min）同樣離心，收集三次上清液合并于燒杯，置于 85 ℃恒溫水浴，使乙醇蒸發(fā)至 2 ～ 3 mL，轉(zhuǎn)移至 50 mL 容量瓶，以蒸餾水定容，供可溶性糖的測定。

向沉淀中加蒸餾水 3 mL，攪拌均勻，放入沸水浴中糊化 15 min。冷卻后，加入 2 mL 冷的 9.2 mol/L 高氯酸，不時攪拌，提取 15 min 后加蒸餾水至 10 mL，混勻，離心 10 min，上清液傾入 50 mL 容量瓶。再向沉淀中加入 2 mL 4.6 mol/L 高氯酸，攪拌提取 15 min 后加水至 10 mL，混勻后離心 10 min，收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀 1 ～ 2 次，離心，合并離心液于 50 mL 容量瓶用蒸餾水定容供測淀粉用。

3.測定 取待測樣品提取液 1.0 mL 于試管中，再加蒽酮試劑 5 mL，快速搖勻，然后在沸水浴中煮 10 min，取出冷卻，在 620 nm 波長下，用空白調(diào)零測定光密度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出淀粉含量（mg）。

四、結(jié)果計算 ：含量（%）=100*C*VT/V1*1000*W

式中： C ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得淀粉量，mg。V T ——樣品提取液總體積 , mL。V 1 ——顯色時取樣品液量，mL。W ——樣品重，g。

0.9 ——由葡萄糖換算為淀粉的系數(shù)。

Ⅱ 碘-淀粉比色法

一、原理

對于淀粉含量較少的植株樣品，也可采用碘–淀粉比色法。淀粉在加熱情況下能溶于硝酸鈣溶液中，當(dāng)?shù)饣浐拖跛徕}共存時，碘能以碘–淀粉藍色化合物沉淀全部淀粉。將此沉淀溶于堿液，并在酸性條件下與碘作用形成藍色溶液進行比色。

二、實驗材料、試劑與儀器設(shè)備

（一）實驗材料 任何植物材料。

（二）試劑 ． 80 ％硝酸鈣溶液。． 0.5 ％碘液：稱 5.00 g 結(jié)晶碘和 10.00 g 碘化鉀，放入研缽混合干研，然后加 10 mL 蒸餾水研至全部碘溶解，將溶液全部轉(zhuǎn)入 1000 mL 容量瓶定容后，貯于磨口試劑瓶。

3 ． 5 ％含碘硝酸鈣溶液：取 10 mL 80 ％的硝酸鈣溶液，加入 160 mL 水再加入 3 mL 0.5 ％的碘液混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。．標(biāo)準(zhǔn)淀粉溶液：稱取純淀粉 50 mg 于研缽中，加 3 mL 80 ％硝酸鈣溶液，研細(xì)并轉(zhuǎn)移到 100 mL 的三角瓶中，用 15 mL 80 ％的硝酸鈣溶液沖洗研缽，無損地收集于三角瓶中。將三角瓶置于沸水浴中煮沸 5 min，冷卻后全部轉(zhuǎn)入 50 mL 容量瓶中并定容。此液為 1 mg/mL 的淀粉標(biāo)準(zhǔn)液。． 0.1 mol/L NaOH。6 ． 0.1 mol/L HCl。

（三）儀器設(shè)備

分析天平，研缽，容量瓶，量筒，三角瓶，水浴，小漏斗，電爐，離心機，離心管，試劑瓶。

三、實驗步驟 ．稱取 1 ～ 3 g 葉片，剪碎放入研缽，加 5 mL 80 ％的硝酸鈣溶液，研磨成糊狀移入 100 mL 的三角瓶中，用 10 mL 80 ％的硝酸鈣沖洗研缽，無損地收集于三角瓶中，瓶口蓋上小漏斗，在沸水浴上煮沸 3 ～ 5 min（葉片含淀粉少的 3 min，含淀粉多的 5 min），使樣品中淀粉轉(zhuǎn)變?yōu)槟z體溶液。．給三角瓶中加 20 mL 蒸餾水，混合液轉(zhuǎn)入離心管中離心（2000 ～ 3000 rpm）2 ～ 3 min，將離心后的淀粉膠體渾濁液移入 100 mL 容量瓶（淀粉含量少時，可移入 50 mL 容量瓶），三角瓶及離心沉淀物用 5 ～ 10 mL 熱蒸餾水沖洗并同樣離心，離心液并入容量瓶中（共洗 2 ～ 3 次）定容，即為淀粉提取液。．取 5 ～ 10 mL 淀粉待測液，加入到盛有 2 mL 0.5 ％碘液的離心管中，混勻靜置 15 min 后離心（3000 rpm）5 min，棄上清液。沉淀用 5 ％的含碘硝酸鈣溶液沖洗兩次，向沖洗后的沉淀中加入 10 mL 0.1 mol/L 的 NaOH 混勻，將離心管浸入沸水內(nèi) 5 min，使沉淀溶解。將溶液轉(zhuǎn)入 50 mL 容量瓶中，加入 0.3 mL 0.5 ％碘液，用 30 mL 左右的水沖洗并入容量瓶，加入 2 mL 1mol/L 的鹽酸，用水定容并顯色，在 590 nm 波長處測定光密度。4 ．繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 取標(biāo)準(zhǔn)淀粉溶液（1 mg/mL）0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 于 6 個離心管中，用 80 ％硝酸鈣溶液將各管的體積補足至 5 mL，再向各管加入 2 mL 0.5 ％碘液，混勻靜置 15 min 后離心，其他操作同樣品測定步驟，顯色后在 590 nm 波長下測定光密度。此系列溶液的淀粉含量分別為 0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mg，然后以光密度為橫坐標(biāo)，以淀粉含量為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

四、結(jié)果計算 ：含量（%）=100*C*VT/V1*1000*W 式中： C ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得淀粉量，mg。V T ——樣品提取液總體積 , mL。V 1 ——顯色時取樣品液量，mL。W ——樣品重（g）。

III 旋光法（谷物淀粉含量的測定）

一、原理： 酸性氯化鈣溶液與磨細(xì)的含淀粉樣品共煮，可使淀粉輕度水解。同時鈣離子與淀粉分子上的羥基絡(luò)合，這就使得淀粉分子充分地分散到溶液中，成為淀粉溶液。淀粉分子具有不對稱碳原子，因而具有旋光性，可以利用旋光儀測定淀粉溶膠的旋光度（α），旋光度的大小與淀粉的濃度成正比，據(jù)此可以求出淀粉含量。溶提淀粉溶膠所用的酸性氯化鈣溶液的pH值必須保持2.30，密度須為1.30，加時間的長短也要控制在一定范圍。因為只有在這些條件下，各種不同來源的淀粉溶液的比旋度［α］才都是203°，恒定不變。樣品中其他旋光性物質(zhì)（如糖分）須預(yù)先除去。

二、材料、儀器設(shè)備及試劑：

（一）材料：面粉或其他風(fēng)干樣品

（二）儀器設(shè)備：1.植物樣品粉碎機；2.離心機；3.分析天平；4.粗天平；5.旋光儀及附件；6.三角瓶；7.分樣篩（100目）；8.布氏漏斗、抽濾瓶及真空泵；9.離心管；10.小電爐。

（三）試劑：

三、實驗步驟：

1.樣品準(zhǔn)備：（1）稱取樣品：將樣品風(fēng)干、研磨、通過100目篩，精確稱取約2.5g樣品細(xì)粉（要求含淀粉約2g，請參考附注估計），置于離心管內(nèi)。（2）脫脂：加乙醚數(shù)ml到離心管內(nèi)，用細(xì)玻棒充分?jǐn)嚢?，然后離心。傾出上清液并收集以備回收乙醚。重復(fù)脫脂數(shù)次，以去除大部分油脂、色素等（因油脂的的存在會使以后淀粉溶液的過濾困難）。大多數(shù)谷物樣品含脂肪較少，可免去這個脫脂手續(xù)。（3）抑制酶活性：加含有氯化高汞的乙醇溶液10ml到離心管內(nèi)，充分?jǐn)嚢?，然后離心，傾去上清液，得到殘余物。（4）脫糖：加80％乙醇10ml到離心管中，充分?jǐn)嚢枰韵礈鞖堄辔铮看味加猛徊０簦x心，傾去下清液。重復(fù)洗滌數(shù)次以去除可溶性糖分。

2.溶提淀粉：（1）加醋酸－氯化鈣：先用醋酸氯化鈣溶液約10ml加到離心管中，攪拌后全部傾入250ml三角瓶內(nèi)，再用醋酸氯化鈣溶液50ml分?jǐn)?shù)次洗滌離心管，洗滌液并入三角瓶內(nèi)，攪拌玻棒也轉(zhuǎn)移到三角瓶內(nèi)。（2）煮沸溶解：先用蠟筆標(biāo)記液面高度，直接置于加有石棉網(wǎng)的小電爐上，在4min～5min內(nèi)迅速煮沸，保持沸騰15min～17min，立即將三角瓶取下，置流水中冷卻。煮沸過程中要時加攪拌，勿令燒焦；要調(diào)節(jié)溫度，勿使泡沫涌出瓶外；常用玻璃將瓶側(cè)的細(xì)粒擦下；并加水保持液面高度。

3.沉淀雜質(zhì)和定容：（1）加沉淀劑：將三角瓶內(nèi)的水解液轉(zhuǎn)入100ml容量瓶，用醋酸氯化鈣溶液充分洗滌三角瓶瓶，并入容量內(nèi)，加30％ZnSO41ml混合后，再加15％K4Fe（CN）61ml，用水稀釋至接近刻度時，加95％乙醇一滴以破壞泡沫，然后稀釋到刻度，充分混合，靜置，以使蛋白充分沉淀。（2）濾清：用布氏漏斗（加一層濾紙）吸氣過濾。先傾清溶液約10ml于此濾紙上，使其完全濕潤，讓溶液流干，棄去濾液，再傾清溶液進行過濾，用干燥的容器接受此濾液，收集約50ml，即可供測定之用。

4.測定旋光度：用旋光測定管裝滿濾液，小心地按照旋光儀使用說明，進行旋光度的測定。淀粉（％）＝α×N×100/{[α]20D×L×(W－K)}×100 式中：α：用鈉光時觀測到的旋光度；［α］20 D：淀粉的比旋度，在這種方法條件下為203°；L：旋光管長度（cm）；W：樣品質(zhì)量（g）；K：樣品水分含量（％）；N：稀釋倍數(shù)；100：換算為百分率。也可以不用上列公式計算，改用工作曲線來求得淀粉含量，這樣準(zhǔn)確度高些。

Ⅲ、淀粉含量的測定

一、目的

掌握植物組織中淀粉含量測定的原理和方法。

二、原理

淀粉用鹽酸水解轉(zhuǎn)化成葡萄糖后，測定葡萄糖含量，根據(jù)葡萄糖含量換算成淀粉含量。

三、材料、儀器設(shè)備及試劑

材料、儀器設(shè)備及試劑與上述蔗糖的測定相同，另增加碘試劑；100ml、250ml容量瓶。碘試劑（碘化鉀—碘溶液）的配制：稱取碘化鉀20g及碘10g溶于100ml蒸餾水中。使用前需稀釋10倍。

四、實驗步驟

1.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作與上述還原糖含量測定相同。2.淀粉的水解

取上述還原糖含量測定中經(jīng)85﹪乙醇浸提后的全部淀粉殘渣，放入100ml三角瓶中，加 入6mol·L－1鹽酸10ml，混勻，在沸水浴中加熱10min－30min（用碘試劑檢查淀粉水解程度，直至不顯藍色為止），再加蒸餾水20ml,搖勻并過濾于100ml容量瓶中，過濾后殘渣再用蒸餾水沖洗3次，一并過濾入容量瓶，定容至100ml。準(zhǔn)確取出10ml過濾液置入250ml容量瓶中，加酚酞2滴，用10﹪NaOH中和至微紅色，用蒸餾水定容至250ml，待測。

3.還原糖含量測定

取4 支25ml刻度試管，編號，其中3支（三個重復(fù)）分別加入待測液2ml,1支空白管加2ml蒸餾水代替樣品液，然后各管再加入DNS試劑1.5ml，搖勻，混合液在沸水浴中加熱5min，然后用自來水冷卻，各加入21.5ml蒸餾水使總體積為25ml，搖勻，在520nm波長下測定吸光度（A）值。

五、結(jié)果計算

根據(jù)待測液的吸光度從上述標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出其相應(yīng)的還原糖含量，然后按下公式計算出樣品中還原糖（葡萄糖）含量和淀粉含量的百分率。

淀粉水解液總量（ml）從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得還原糖(mg)×————————————

測定時水解液用量（ml）

還原糖（﹪）= ———————————————————————————×100

（葡萄糖）樣品重（mg）

粗淀粉含量（﹪）= 葡萄糖含量 × 0.9

式中系數(shù)0.9依據(jù)淀粉（C6 H10 O5）n水解時吸收n 個分子水。

第四篇：生物化學(xué)--實驗九血漿膽固醇總量的測定

一、授課題目：血清總膽固醇的測定（硫磷鐵法）講授學(xué)時數(shù)：3學(xué)時

二、授課教師姓名： 孫千鴻 單位：昆醫(yī)海源學(xué)院生化，化學(xué)綜合實驗室

職稱：助教 職務(wù)：

三、使用教材（包括名稱、主編、版次、出版社、出版時間）： 《生物化學(xué)實驗教程》

四、本次授課的目的、要求（掌握、熟悉、了解）：

1、掌握血清膽固醇的測定的原理，臨床意義。

2、熟悉血清膽固醇的測定的方法。

五、本次授課的重點、難點： 重點：血清膽固醇的測定的方法。難點：血清膽固醇的測定的原理。

六、教學(xué)方法和教學(xué)手段：

1、聯(lián)系相關(guān)課程內(nèi)容，引入后續(xù)內(nèi)容的方式。

2、引導(dǎo)式、啟發(fā)式教學(xué)方法。

3、以示教為主。

4、激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，以學(xué)生動手操作為主。

七、本次授課的設(shè)計方案，包括：

1、各部分內(nèi)容的講授時間分配、擬采用的教學(xué)方案、多媒體及板書設(shè)計、專業(yè)外語詞匯等。

A、本次授課分為八部分內(nèi)容講授，各部分內(nèi)容的講授時間分配、擬采用的教學(xué)方案如下：

1）聯(lián)系相關(guān)課程內(nèi)容，講授血清中總膽固醇的分類、來源。（4分鐘）

2）以引導(dǎo)式教學(xué)介紹影響血清總膽固醇水平的多種因素。（2分鐘）3）為了激發(fā)學(xué)生的實驗興趣，以啟發(fā)式教學(xué)方式著重講解血清總膽固醇升高的臨床意義。（5分鐘）

4）講解硫磷鐵法測定血清總膽固醇含量的原理。（5分鐘）5）以實際操作演示實驗的操作步驟。（15分鐘）6）實驗結(jié)果的分析，強調(diào)計算公式。（3分鐘）7）實驗的注意事項。（5分鐘）8）布置下次實驗預(yù)習(xí)內(nèi)容（1分鐘）

B、板書設(shè)計： 1）目的要求： 2）實驗原理： 3）實驗操作： 4）注意事項： 5）結(jié)果與討論： 6）預(yù)習(xí)下次實驗：

2、重點和難點的講授方法、時間分配等。1）實驗原理（16分鐘）

a、聯(lián)系相關(guān)課程內(nèi)容，介紹血清中總膽固醇的分類、來源以及去路。（4分鐘）

b、以引導(dǎo)式教學(xué)方式，以引導(dǎo)式教學(xué)介紹影響血清總膽固醇水平的多種因素。（2分鐘）

c、為了激發(fā)學(xué)生的實驗興趣，以啟發(fā)式教學(xué)方式著重講解血清總膽固醇升高的臨床意義。（5分鐘）

d、講解硫磷鐵法測定血清總膽固醇含量的原理。（5分鐘）2）實驗操作（15分鐘）

a、以實際操作演示抽提濾液的制作過程，強調(diào)混勻的操作要領(lǐng)。（5分鐘）

b、以實際操作示教，詳細(xì)介紹離心機的使用，強調(diào)離心前平衡的重要性。（2分鐘）

c、以實際操作示教，樣品的加入，強調(diào)加樣順序，混勻時的注意事項。（5分鐘）

d、復(fù)習(xí)分光光度計的使用，比色后記錄數(shù)據(jù)。（3分鐘）3）引導(dǎo)學(xué)生對實驗數(shù)據(jù)進行計算，并分析結(jié)果。（3分鐘）5）強調(diào)實驗注意事項。（5分鐘）a、硫磷鐵試劑的酸性極強，強調(diào)同學(xué)們操作小心且緩慢，硫磷鐵試劑沿試管壁緩慢加入。

b、采取旋轉(zhuǎn)式混勻方式，防止強酸濺出，并且混勻后再進行冷卻。c、本實驗呈色反應(yīng)受水分影響，試管及操作過程要保持干凈。d、實驗過程中如有強酸濺出，強調(diào)處理方法：保持冷靜，先用干布擦拭，再用水沖洗。

八、課堂小結(jié)：

1、顏色出現(xiàn)后可進行比色，以免因為顏色的消退而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，且顯色后勿將試管置于強光下，因為光線會加快褪色。

2、旋轉(zhuǎn)式混勻方法掌握得不夠好，多組同學(xué)在數(shù)據(jù)上偏差較大。

3、培養(yǎng)學(xué)生查閱文獻的能力，掌握血清膽固醇等物質(zhì)測定的臨床意義。

九、本次授課內(nèi)容的參考資料（教科書、專著、期刊等）：

1、《臨床生物化學(xué)與生物化學(xué)檢驗》，主編周新，人民衛(wèi)生出版社，第三版，2006年6月。

2、《臨床醫(yī)學(xué)檢驗與技術(shù)（中級）》，主編全國衛(wèi)生專業(yè)技術(shù)資格考試委員會，人民衛(wèi)生出版社，第一版。

3、《生物化學(xué)檢驗分冊》，主編梁淑新，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，第一版，2007年4月。

十、復(fù)習(xí)思考題或課后作業(yè)：

1)本實驗操作中特別需要注意些什么？為什么？

2)酯類難溶于水，將它們均勻分散在水中則形成乳濁液，為什么正常人血漿和血清中含有酯類雖多，但卻清澈透明？

3）影響血清膽固醇濃度的因素有那些？

附：指導(dǎo)教師意見（本欄僅限有指導(dǎo)教師的青年教師填寫）

指導(dǎo)教師簽名： 年 月 日

第五篇：GB 5009.124-2016_食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中氨基酸的測定

GB 5009.124-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中氨基酸的測定

基本信息

【英文名稱】暫無 【標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)】現(xiàn)行 【全文語種】中文簡體 【發(fā)布日期】1994/3/18 【實施日期】2017/6/23 【修訂日期】2016/12/23 【中國標(biāo)準(zhǔn)分類號】X09 【國際標(biāo)準(zhǔn)分類號】暫無

關(guān)聯(lián)標(biāo)準(zhǔn)

【代替標(biāo)準(zhǔn)】GB/T 5009.124-2003 【被代替標(biāo)準(zhǔn)】暫無 【引用標(biāo)準(zhǔn)】暫無

適用范圍&文摘

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用氨基酸分析儀(茚三酮柱后衍生離子交換色譜儀)測定食品中氨基酸的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中酸水解氨基酸的測定包括天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、賴氨酸和精氨酸共16種氨基酸。