第一篇：食品微生物檢驗(yàn)采樣方法

食品微生物檢驗(yàn)采樣方法

按照上述采樣方案,能采取最小包裝的樣品就采取完整包裝,必須拆包裝取樣的應(yīng)按無菌操作進(jìn)行。

不同類型的食品應(yīng)采用不同的工具和方法: 1.液體樣品：充分混勻,以無菌操作開啟包裝,用100mL無菌注射器抽取,注入無菌容器。2半固體樣品：以無菌操作拆開包裝,用無菌勺子從幾個部位挖取樣品,放入無菌容器。3.固體食品：大塊整體食品應(yīng)用無菌刀具和鑷子從不同部位割取,割取時應(yīng)兼顧表面與深部,注意樣品的代表性;小塊大包裝食品應(yīng)從不同部位的小塊上切取樣品,放入無菌容器。若為檢驗(yàn)食品的污染情況，可取表層樣品；若為檢驗(yàn)食品品質(zhì)的情況，應(yīng)從深部取樣。4.冷凍食品：大包裝小塊冷凍食品按小塊個體采取;大塊冷凍食品可以用無菌刀從不同部位削取樣品或用無菌小手鋸從凍塊上舉取樣品,也可以用無菌鉆頭鉆取碎屑狀樣品,放入容器。固體食品和冷凍食品的取樣還應(yīng)注意檢驗(yàn)?zāi)康?若需檢驗(yàn)食品污染情況,可取表層樣品;若需檢驗(yàn)其品質(zhì)情況,應(yīng)取深部樣品。5.生產(chǎn)工序監(jiān)測

(1)車間用水。自來水樣從車間各水龍頭上采取冷卻水;湯料等從車間容器不同部位用100mL無菌注射器抽取。

(2)車間臺面、用具及加工人員手的衛(wèi)生監(jiān)測。用5cm2孔無菌采樣板及5支無菌棉簽擦拭25cm2面積。若所采表面干燥,則用無菌稀釋液潤濕棉簽后擦拭;若表面有水,則用干棉簽擦拭,擦拭后立即將棉簽頭用無菌剪刀剪入盛樣容器。

(3)車間空氣采樣。直接降塵法。將5個直徑90mm的普通營養(yǎng)瓊脂平板分別置于車間的四角和中部,打開平皿蓋5min,然后蓋蓋送檢。

第二篇：食品微生物檢驗(yàn)總結(jié)

1.食品微生物檢驗(yàn)是應(yīng)用微生物學(xué)的理論與方法，研究外界環(huán)境和食品中微生物的種類、數(shù)量、性質(zhì)、活動規(guī)律、對人

和動物健康的影響及其檢驗(yàn)方法與指標(biāo)的一門學(xué)科。

2.食品微生物檢驗(yàn)指標(biāo)：（1）菌落總數(shù)：指食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后1g[1ml或1cm2（表面積）]檢樣中

所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。（2）大腸菌群：指一群在37攝氏度培養(yǎng)24小時能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭陰性無芽孢桿菌。（3）致病菌：即能夠引起人們發(fā)病的細(xì)菌。

3.ICMSF取樣方案：A.三級法 用做菌落總數(shù)和大腸菌群；B.二級法 用做致病菌。根據(jù)食品危害程度和 指標(biāo)嚴(yán)重程度劃

分。

4.美國FDA取樣方案P69自已畫圖

5.樣品可分為大樣、中樣、小樣。要準(zhǔn)確區(qū)分。大樣指一整批；中樣是從樣品各部分取的混合樣，一般為200g;小樣又稱

為檢樣，一般以25g為準(zhǔn)，用于檢樣.6.食品常用的采樣方法：（1）液體食品：充分混勻，用無菌操作拆開包裝，用100ml無菌注射器抽取，注入無菌盛樣容

器。（2）半固體食品：用無菌操作拆開包裝，用無菌勺子從幾個部位挖取樣品，放入無菌盛樣容器。（3）固體樣品：大塊整體食的代表性，小塊大包裝食品應(yīng)從不同部位的小塊上切取樣品，放入無菌盛樣容器（4）冷凍食品：大包裝小塊冷凍食品按小塊個體采取，大塊冷凍食品可以用無菌刀從不同部位削取樣品或用無菌小手鋸從凍快上鋸取樣品，也可以用無菌鉆頭鉆取碎屑狀樣品，放入無菌盛樣容品應(yīng)用無菌刀具和鑷子從不同部位割取，割取時應(yīng)兼顧表面與深部，注意樣品器（5）若需檢驗(yàn)食品污染情況，可取表層樣品；若需檢驗(yàn)其品質(zhì)情況，應(yīng)取深部樣品。

7.樣品的制備是指對所采集的樣品再進(jìn)行分取、粉碎以及混勻等過程。制備的方法可以根據(jù)被檢食品的性狀和檢驗(yàn)要求，采取剪碎振搖法、搗碎均質(zhì)法、胃蠕動均質(zhì)法、研磨法等。

8.檢樣處理：25+225 做成一個均勻的1：10的10倍遞增稀釋液。

9.菌落總數(shù)的測定：自已畫示意圖

菌落總數(shù)檢驗(yàn)程序水樣

做幾個適當(dāng)倍數(shù)的稀釋度

選擇3個適宜稀釋度，各取1ml加入到滅菌平皿內(nèi)

每個平皿內(nèi)加入45攝氏度左右的適量瓊脂

（36+-1）攝氏度（24+-1）h

菌落計數(shù)

報告

10.大腸菌群的檢驗(yàn):自已畫示意圖大腸桿菌為革蘭氏陰性菌

（1）檢樣的處理（2）初發(fā)酵（3）分離培養(yǎng)(4）證實(shí)實(shí)驗(yàn)（5）報告：查MPN表

11.致病菌的檢驗(yàn)：自已畫示意圖

（1）沙門氏菌的檢驗(yàn)：沙門氏菌為革蘭氏陰性菌

A.增菌：凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品均應(yīng)經(jīng)過前增菌。鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經(jīng)加工的食品不必經(jīng)過前增菌。B選擇性增菌C分離D生化實(shí)驗(yàn)E血清學(xué)檢驗(yàn)

（2）金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)：金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性菌

A檢樣的處理B增菌C分離培養(yǎng)D證實(shí)實(shí)驗(yàn)

第三篇：動物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法

動物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法

NY/T 541—2002

前言

動物病料樣品的采集是動物疾病診斷、流行病學(xué)調(diào)查或免疫監(jiān)測所不可缺少的重要步驟，在各國的獸醫(yī)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)中都把這一部分納入第一重要內(nèi)容，廣泛應(yīng)用于動物疾病流行病學(xué)調(diào)查、動物檢疫和科研教學(xué)。世界動物衛(wèi)生組織[World Organization for Animal Health(英)，Office Intentional des Epizootic(法)，OIE]推薦的診斷方法中，也將該部分內(nèi)容列為第一部分內(nèi)容。

本標(biāo)準(zhǔn)是依據(jù)世界動物衛(wèi)生組織(OIE)《診斷試驗(yàn)和疫苗標(biāo)準(zhǔn)手冊》(2000版)(Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines，2000)第1·1.1章“Sampling Methods”的技術(shù)要求編寫的。本標(biāo)準(zhǔn)與該章的非原則性差異在于: ——本標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合本國實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)對操作程序和條件作了更具體的陳述和規(guī)定；

——本標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)GB/T1.1-2000的規(guī)定和漢語習(xí)慣將該章的陳述性文本改為規(guī)范性標(biāo)準(zhǔn)文件。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:農(nóng)業(yè)部動物檢疫所。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:吳延功、杜元釗、朱萬光、劉佩蘭、仰惠芬。1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動物疫病診斷實(shí)驗(yàn)室的樣品采集方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于病因(原)學(xué)、病理組織學(xué)、血清學(xué)、免疫學(xué)等實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)所需樣品的采集。

2樣品采集的一般原則和采集前的準(zhǔn)備 2.1樣品采集所遵循的一般原則

2.1.1凡發(fā)現(xiàn)患畜(包括馬、牛、羊及豬等)有急性死亡時，如懷疑是炭疽，則不可隨意解剖，應(yīng)采取患畜的血液，萬不得已時局部解剖作脾臟觸片的顯微鏡檢查。只有在確定不是炭疽后，方可進(jìn)行剖檢。

2.1.2采取病料的種類，根據(jù)不同的疾病或檢驗(yàn)?zāi)康?，采其相?yīng)的臟器、內(nèi)容物、分泌物、排泄物或其他材料；進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查、抗體檢測、動物群體健康評估或環(huán)境衛(wèi)生檢測時，樣品的數(shù)量應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)的要求。采樣時應(yīng)小心謹(jǐn)慎，以免對動物產(chǎn)生不必要的剌激或損害和對采樣者構(gòu)成威脅。在無法估計病因時，可進(jìn)行全面的采集。檢查病變與采集病料應(yīng)統(tǒng)籌考慮。

2.1.3內(nèi)臟病料的采取，如患畜已死亡，應(yīng)盡快采集，最遲不超過6h。2.1.4血液樣品在采集前一般禁食8h。

2.1.5應(yīng)做好人身防護(hù)，嚴(yán)防人畜共患病感染。

2.1.6應(yīng)防止污染環(huán)境，防止疫病傳播，做好環(huán)境消毒和病害肉尸的處理。2.2使用器械的消毒

刀、剪、鑷子等用具煮沸消毒30min，使用前用酒精擦拭，用時進(jìn)行火焰消毒。器皿(玻制、陶制等)經(jīng)103kPa高壓30min，或經(jīng)160℃干烤2h滅菌；或放于0.5%～1%的碳酸氫鈉(NaHCO3)水中煮沸10min～15min，水洗后，再用清潔紗布擦干，保存于酒精、乙醚等溶液中備用。注射器和針頭放于清潔水中煮沸30min。一般要求使用“一次性”針頭和注射器。采取一種病料，使用一套器械與容器，不可用其再采其他病料或容納其他臟器材料。采過病料的用具應(yīng)先消毒后清洗。檢查過傳染性海綿狀腦病的器械要放在2mol/L的氫氧化納(NaOH)溶液中浸泡2h以上，才可再使用。

3樣品的采集 3.1血液

3.1.1采血部位

大的哺乳動物可選用頸靜脈或尾靜脈采血，也可采脛外靜脈和乳房靜脈血。毛皮動物小量采血可穿刺耳尖或耳殼外側(cè)靜脈，多量采血可在隱靜脈采集，也可用尖刀劃破趾墊 0.5cm深或剪斷尾尖部采血。嚙齒類動物可從尾尖采血，也可由眼窩內(nèi)的血管叢采血；兔可從耳背靜脈、頸靜脈或心臟采血。禽類通常選擇翅靜脈采血，也可通過心臟采血。

3.1.2采血方法

對動物采血部位的皮膚先剃毛(拔毛)，75%的酒精消毒，待干燥后采血，采血可用針管、針頭、真空管或用三棱針穿刺，將血液滴到開口的試管內(nèi)。禽類等的少量血清樣品的采集，可用塑料管采集。用針頭刺破消毒過的翅靜脈，將血液滴到直徑為3mm～4mm的塑料管內(nèi)，將一端封口。

3.1.3采血種類 3.1.3.1全血樣品

進(jìn)行血液學(xué)分析，細(xì)菌、病毒或原蟲培養(yǎng)，通常用全血樣品，樣品中加抗凝劑?？鼓齽┛捎?.1%肝素、阿氏液(見第A.l章)(阿氏液為紅細(xì)胞保存液，使用時，以1份血液加2份阿氏液)，或枸櫞酸鈉(3.8%～4%的枸櫞酸鈉0.1mL，可抗1mL血液)。采血時應(yīng)直接將血液滴入抗凝劑中，并立即連續(xù)搖動，充分混合。也可將血液放入裝有玻璃珠的滅菌瓶內(nèi)，震蕩脫纖維蛋白。

3.1.3.2血清樣品

進(jìn)行血清學(xué)試驗(yàn)通常用血清樣品。用作血清樣品的血液中不加抗凝劑，血液在室溫下靜置2h～4h(防止曝曬)，待血液凝固，有血清析出時，用無菌剝離針剝離血凝塊，然后置4℃冰箱過夜，待大部分血清析出后取出血清，必要時經(jīng)低速離心分離出血清。在不影響檢驗(yàn)要求原則下可因需要加入適宜的防腐劑。做病毒中和試驗(yàn)的血清避免使用化學(xué)防腐劑(如硼酸、硫柳汞等)。若需長時間保存，則將血清置20℃以下保存，但要盡量防止或減少反復(fù)凍融。樣品容器上貼詳細(xì)標(biāo)簽。3.1.3.3血漿的采集

采血試管內(nèi)先加上抗凝劑(每10mL血加檸檬酸鈉0.04g～0.05g)，血液采完后，將試管顛倒幾次，使血液與抗凝劑充分混合，然后靜止，待細(xì)胞下沉后，上層即為血漿。

3.2一般組織 3.2.1采樣方法

用常規(guī)解剖器械剝離死亡動物的皮膚，體腔用消毒的器械剝開，所需病料按無菌操作方法從新鮮尸體中采集。剖開腹腔后，注意不要損壞腸道。

作病原分離用:進(jìn)行細(xì)菌、病毒、原蟲等病原分離所用組織塊的采集，可用一套新消毒的器械切取所需器官的組織塊，每個組織塊應(yīng)單獨(dú)放在已消毒的容器內(nèi)，容器壁上注明日期、組織或動物名稱。注意防止組織間相互污染。

3.2.2采樣種類

3.2.2.1病原分離樣品的采集

用于微生物學(xué)檢驗(yàn)的病料應(yīng)新鮮，盡可能的減少污染。用于細(xì)菌分離的樣品的采集，首先以燒紅的刀片燙烙臟器表面，在燒烙部位刺一孔，用滅菌后的鉑耳伸入孔內(nèi)，取少量組織或液體，作涂片鏡檢或劃線接種于適宜的培養(yǎng)基上。

3.2.2.2組織病理學(xué)檢查樣品的采集

采集包括病灶及臨近正常組織的組織塊，立即放入10倍于組織塊的10%福爾馬林溶液中固定。組織塊厚度不超過0.5cm，切成1cm2～2cm2(檢查狂犬病則需要較大的組織塊)。組織塊切忌擠壓、刮摸和用水洗。如作冷凍切片用，則將組織塊放在0℃～4℃容器中，盡快送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。

3.3腸內(nèi)容物或糞便

腸道只需選擇病變最明顯的部分，將其中的內(nèi)容物棄去，用滅菌生理鹽水輕輕沖洗；也可燒烙腸壁表面，用吸管扎穿腸壁，從腸腔內(nèi)吸取內(nèi)容物，將腸內(nèi)容物放入盛有滅菌的30%甘油鹽水緩沖保存液(見第A.2章)中送檢。或者，將帶有糞便的腸管兩端結(jié)扎，從兩端剪斷送檢。

從體外采集糞便，應(yīng)力求新鮮?；蛘撸檬米有⌒牡夭宓街蹦c粘膜表面采集糞便，然后將拭子放入盛有滅菌的30%甘油鹽水緩沖保存液中送檢。

3.4胃液及瘤胃內(nèi)容物 3.4.1胃液采集

胃液可用多孔的胃管抽取。將胃管送入胃內(nèi)，其外露端接在吸引器的負(fù)壓瓶上，加負(fù)壓后，胃液即可自動流出。

3.4.2瘤胃內(nèi)容物采集 反芻動物在反芻時，與食團(tuán)從食道逆入口腔時，立即開口拉住舌頭，另一只手深入口腔即可取出少量的瘤胃內(nèi)容物。

3.5呼吸道

應(yīng)用滅菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉或氣管內(nèi)的分泌物，蘸取分泌物后立即將拭子浸入保存液中，密封低溫保存。常用的保存液有pH7.2～7.4的滅菌肉湯(見第A.3章)或磷酸鹽緩沖鹽水，如準(zhǔn)備將待檢標(biāo)本接種組織培養(yǎng)，則保存于含0.5%乳蛋白水解物的漢克氏(Hanks)液中。一般每支拭子需保存液5mL。

3.6生殖道

可采集陰道或包皮沖洗液，或者采用合適的拭子，有時也可用尿道拭子采集。3.7眼睛

眼結(jié)膜表面用拭子輕輕擦拭后，放在滅菌的30%甘油鹽水緩沖保存液中送檢。有時，也采取病變組織碎屑，置載玻片上，供顯微鏡檢查。

3.8皮膚

病料直接采自病變部位，如病變皮膚的碎屑、未破裂水泡的水泡液、水泡皮等。3.9胎兒

將流產(chǎn)后的整個胎兒，用塑料薄膜、油布或數(shù)層不透水的油紙包緊，裝入木箱內(nèi)，立即送往實(shí)驗(yàn)室。

3.10小家畜及家禽

將整個尸體包入不透水塑料薄膜、油紙或油布中，裝入木箱內(nèi)，送往實(shí)驗(yàn)室。3.11骨

需要完整的骨標(biāo)本時，應(yīng)將附著的肌肉和韌帶等全部除去，表面撒上食鹽，然后包入浸過5%石炭酸溶液的紗布中，裝入不漏水的容器內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室。

3.12腦、脊髓

3.12.1全腦、脊髓的采集

如采取腦、脊髓做病毒檢查，可將腦、脊髓浸入30%甘油鹽水液中或?qū)⒄麄€頭部割下，包入浸過消毒液的紗布中，置于不漏水的容器內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室。

3.12.2腦、脊髓液的采集 3.12.2.1采樣前的準(zhǔn)備

采樣使用特制的專用穿刺針，或用長的封閉針頭(將針頭稍磨鈍，并配以合適的針芯)；采樣前，術(shù)部及用具均按常規(guī)消毒。3.12.2.2采樣方法

3.12.2.2.1頸椎穿刺法:穿刺點(diǎn)為環(huán)樞孔。將動物實(shí)施站立或橫臥保定，使其頭部向前下方屈曲，術(shù)部經(jīng)剪毛消毒，穿刺針與皮膚面呈垂直緩慢刺入。將針體刺入蛛網(wǎng)膜下腔，立即拔出針芯，腦脊髓液自動流出或點(diǎn)滴狀流出，盛入消毒容器內(nèi)。

3.12.2.2.2腰椎穿刺法:穿刺部位為腰薦孔。實(shí)施站立保定，術(shù)部剪毛消毒后，用專用的穿刺針刺入，當(dāng)刺入蛛網(wǎng)膜下腔時，即有腦脊髓液滴狀滴出或用消毒注射器抽取，盛入消毒容器內(nèi)。

3.12.2.3采樣數(shù)量

大型動物頸部穿刺一次采集量35mL～70mL，腰椎穿刺一次采集量15mL～30mL。3.13液體病料

采集膽汁、膿、粘液或關(guān)節(jié)液等樣品時，用燙烙法消毒采樣部位，用滅菌吸管、毛細(xì)吸管或注射器經(jīng)燙烙部位插入，吸取內(nèi)部液體材料，然后將材料注入滅菌的試管中，塞好棉塞送檢。也可用接種環(huán)經(jīng)消毒的部位插入，提取病料直接接種在培養(yǎng)基上。

供顯微鏡檢查的膿、血液及粘液抹片的制備方法:先將材料置玻片上，再用一滅菌玻棒均勻涂抹或另用一玻片推抹。組織塊、致密結(jié)節(jié)及膿汁等亦可在兩張玻片中間，然后沿水平面向兩端推移。用組織塊作觸片時，持小鑷將組織塊的游離面在玻片上輕輕涂抹即可。

3.14乳汁

乳房先用消毒藥水洗凈(取乳者的手亦應(yīng)事先消毒)，并把乳房附近的毛刷濕，最初所擠的3～4把乳汁棄去，然后再采集10mL左右乳汁于滅菌試管中。進(jìn)行血清學(xué)檢驗(yàn)的乳汁不應(yīng)凍結(jié)、加熱或強(qiáng)烈震動。

3.15精液

精液樣品用人工方法采集，所采樣品應(yīng)包括“富精”部分，并避免加入防腐劑。3.16尿液的采集 在動物排尿時，用潔凈的容器直接接取。也可使用塑料袋，固定在雌畜外陰部或雄畜的陰莖下接取尿液。采取尿液，宜早晨進(jìn)行。

3.17環(huán)境

為監(jiān)測環(huán)境衛(wèi)生或調(diào)查疾病，可從遺棄物、通風(fēng)管、下水道、孵化廠或屠宰場采集有代表性樣品。

4送檢樣品的記錄

送往實(shí)驗(yàn)室的樣品應(yīng)有一式三份的送檢報告，一份隨樣品送實(shí)驗(yàn)室，一份隨后寄去，另一份備案。樣品記錄至少應(yīng)包括以下內(nèi)容: a)畜主的姓名和畜禽場的地址；

b)畜(農(nóng))場里飼養(yǎng)的動物品種及其數(shù)量； c)被感染的動物種類；

d)首發(fā)病例和繼發(fā)病例的日期及造成的損失； e)感染動物在畜群中的分布情況；

f)死亡動物數(shù)、出現(xiàn)臨床癥狀的動物數(shù)量及其年齡；

g)臨床癥狀及其持續(xù)時間，包括口腔、眼睛和腿部的情況，產(chǎn)奶或產(chǎn)蛋的記錄，死亡情況和時間，免疫和用藥情況等；

h)飼養(yǎng)類型和標(biāo)準(zhǔn)，包括飼料種類；

i)送檢樣品清單和說明，包括病料的種類、保存方法等； j)動物治療史； k)要求做何種試驗(yàn)；

l)送檢者的姓名、地址、郵編和電話； m)送檢日期。5樣品的運(yùn)送

所采集的樣品以最快最直接的途徑送往實(shí)驗(yàn)室。如果樣品能在采集后24h內(nèi)送抵實(shí)驗(yàn)室，則可放在4℃左右的容器中運(yùn)送。只有在24h內(nèi)不能將樣品送往實(shí)驗(yàn)室并不致影響檢驗(yàn)結(jié)果的情況下，才可把樣品冷凍，并以此狀態(tài)運(yùn)送。根據(jù)試驗(yàn)需要決定送往實(shí)驗(yàn)室的樣品是否放在保存液中運(yùn)送。

要避免樣品泄漏。裝在試管或廣口瓶中的病料密封后裝在冰瓶中運(yùn)送，防止試管和容器傾倒。如需寄送，則用帶螺口的瓶子裝樣品，并用膠帶或石蠟封口。將裝樣品的并有識別標(biāo)志的瓶子放到更大的具有堅實(shí)外殼的容器內(nèi)，并墊上足夠的緩沖材料?？者\(yùn)時，將其放到飛機(jī)的加壓艙內(nèi)。

制成的涂片、觸片、玻片上注名號碼，并另附說明。玻片兩端用細(xì)木條分隔開，層層疊加，底層和最上一片，涂面向內(nèi)，用細(xì)線包扎，再用紙包好，在保證不被壓碎的條件下運(yùn)送。

所有樣品都要貼上詳細(xì)標(biāo)簽。附錄A(規(guī)范性附錄)待檢樣品保存液的配制 A.1阿(Alserer)氏液

葡萄糖

2.05g 檸檬酸鈉(Na3C6H5O7·2H2 O)

0.80g 氯化鈉(NaCl)

0.42g 蒸鎦水(或無離子水)

加至100mL 溶解后，以10%檸檬酸調(diào)至pH為6.1分裝后，70kPa 10 min滅菌，冷卻后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

A.2 30%甘油鹽水緩沖液

甘油

30mL 氯化鈉

4.2g 磷酸二氫鉀

1.0g 磷酸氫二鉀

3.lg 0.02%酚紅

1.5mL 蒸餾水

加至100mL 加熱溶化，校正pH值為7.6，100 kPa 15min滅菌，冰箱保存?zhèn)溆?。A.3肉湯(broth)牛肉膏

3.5g 蛋白胨

10g 氯化鈉

5g 充分混合后，加熱溶解，校正pH為7.2～7.4，再用流通蒸氣加熱30min，用濾紙過濾，獲苗黃色透

明液體，分裝于試管或燒瓶中，以100kPa20min滅菌。保存于冰箱中備用。

第四篇：食品微生物檢驗(yàn)的一般流程

食品微生物檢驗(yàn)的一般流程

食品微生物檢驗(yàn)是一門應(yīng)用微生物學(xué)理論與實(shí)驗(yàn)方法的一門科學(xué)，是對食品和微生 物的存在與否及種類和數(shù)量的驗(yàn)證。眾所周知，在生物科學(xué)中，微生物學(xué)是一門實(shí)踐性 最強(qiáng)的學(xué)科之一，它有一套自己獨(dú)特的研究方法。要學(xué)習(xí)好微生物檢驗(yàn)，必須具有醫(yī)學(xué) 微生物學(xué)、獸醫(yī)微生物學(xué)、食品微生物學(xué)、傳染病學(xué)、病理學(xué)等學(xué)科的基礎(chǔ)，要了解食物中毒的臨床癥狀和流行病學(xué)，熟悉各種致病菌的生物學(xué)特性；掌握各種致病菌、霉菌 和病毒的檢驗(yàn)程序。

食品微生物檢驗(yàn)的一般步驟，可按圖1的程序圖進(jìn)行，此圖對各類食品各項(xiàng)微生物 指標(biāo)的檢驗(yàn)具有一定的指導(dǎo)性。

一、檢驗(yàn)前準(zhǔn)備

(1)準(zhǔn)備好所需的各種儀器，如冰箱、恒溫水浴箱、顯微鏡等。

(2)各種玻璃儀器，如吸管、平皿、廣口瓶、試管等均需刷洗干凈(121℃20min)或干法(160℃一170℃，2h)滅菌，冷卻后送無菌室備用

(3)準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需的各種試劑、藥品，做好普通瓊脂培養(yǎng)基或其他選擇性培養(yǎng)基，根據(jù)需要分裝試管或滅菌后傾注平板或保存在46℃的水浴中或保存在4℃的冰箱中備 用。

(4)無菌室滅菌；如用紫外燈法滅菌，時間不應(yīng)少于45mln，關(guān)燈半小時后方可進(jìn)入 工作；如用超凈工作臺，需提前半小時開機(jī)。必要時進(jìn)行無菌室的空氣檢驗(yàn)，把瓊脂平板暴露在空氣中15min，培養(yǎng)后每個平板上不得超過15個菌落。

(5)檢驗(yàn)人員的工作衣、帽、鞋、口罩等滅菌后備用。工作人員進(jìn)入無菌室后． 實(shí)驗(yàn)沒完成前不得隨便出入無菌室。

二、樣品的采集與處理

在食品的檢驗(yàn)中，樣品的采集是極為重要的一個步驟。所采集的樣品必須具有代表 性，這就要求檢驗(yàn)入員不但要掌握正確的采樣方法，而且要了解食品加工的批號、原料 的來源、加工方法、保藏條件、運(yùn)輸、銷售中的各環(huán)節(jié)，以及銷售入員的責(zé)任心和衛(wèi)生 知識水平等。樣品可分為大樣、中樣、小樣三種。大樣指一整批，中樣是從樣品各部分 取的混合樣，一般為200g小樣又稱為檢樣，一般以25g為準(zhǔn)，用于檢驗(yàn)。樣品的種類 不同，采樣的數(shù)量及采樣的方法也不一樣。但是，一切樣品的采集必須具有代表性，即 所取的樣品能夠代表食物的所有成分。如果采集的樣品沒有代表性，即使一系列檢驗(yàn)工 作非常精密、淮確，其結(jié)果也毫無價值，甚至?xí)霈F(xiàn)錯誤的結(jié)論。

取樣及樣品處理是任何檢驗(yàn)工作中最重要的組成部分，以檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性來說，實(shí) 驗(yàn)室收到的樣品是否具代表性及其狀態(tài)如何是關(guān)鍵問題。如果取樣沒有代表性或?qū)悠?的處理不當(dāng)，得出的檢驗(yàn)結(jié)果可能毫無意義。如果根據(jù)一小份樣品的檢驗(yàn)結(jié)果去說明一 大批食品的質(zhì)量或一起食物中毒的性質(zhì)，那么設(shè)計一種科學(xué)的取樣方案及采取正確的樣 品制備方法是必不可少的條件。

(一)食品微生物檢驗(yàn)的取樣方案

采用什么樣的取樣方案主要取決于檢驗(yàn)的目的．例如用一般的食品的衛(wèi)生學(xué)微生物 檢驗(yàn)去判定一批食品合格與否；查找食物中毒病原微生物；鑒定畜禽產(chǎn)品中是否含有人 獸共患病原體等等。目的不同，取樣方案也不同。

1．食品衛(wèi)生學(xué)微生物檢驗(yàn)的取樣方案

目前國內(nèi)外使用的取樣方案多種多樣，如一批產(chǎn)品采若干個樣后混合在一起檢驗(yàn)，按 百分比抽樣；按食品的危害程度不同抽樣；按數(shù)理統(tǒng)計的方法決定抽樣個數(shù)等等。不管 采取何種方案，對抽樣代表性的要求是一致的。最好對整批產(chǎn)品的單位包裝進(jìn)行編號，實(shí) 行隨機(jī)抽樣。下而列舉當(dāng)今世界上較為常見的幾種取樣方案。(1)ICMSF的取樣方案

國際食品微生物規(guī)范委員會(簡稱IcMSF)的取樣方案是依據(jù)事先給食品進(jìn)行的危

害程度劃分來確定的，將所有食品分成三種危害度，I類危害：老人和嬰幼兒食品及在 食用前可能會增加危害的食品5E類危害：立即食用的食品，在食用前危害基本不變5a 類危害：食用前經(jīng)加熱處理，危害減小的食品。另外，將檢驗(yàn)指標(biāo)對食品衛(wèi)生的重要程 度分成一般、中等和嚴(yán)重三檔，根據(jù)以上危害度的分類，又將取樣方案分成二級法和三 級法。

①二級法：設(shè)定取樣數(shù)n，指標(biāo)值m，超過指標(biāo)值m的樣品數(shù)為c，只要c＞o，就 判定整批產(chǎn)品不合格。

⑧三級法：設(shè)定取樣數(shù)n，指標(biāo)值m，附加指標(biāo)值M，介于m與M之間的樣品數(shù)c。只要有一個樣品值超過M或C規(guī)定的數(shù)就判整批產(chǎn)品不合格。具體使用方法見表1。

(2)美國FDA的取樣方案

食R9D藥品管理局(FDA)的取樣方案與IcM5F的取樣方案基本一致，所不同的是嚴(yán)重指標(biāo)苗所取的15、30、60個樣可以分別混合，混合的樣品量最大不超過375g。也就是說所取的樣品每個為100g，從中取出25g，然后將15個25g混合成一個375g樣品，混勻后再取258作為試樣檢驗(yàn)，剩余樣品妥善保存?zhèn)溆谩?/p>

(3)世界糧農(nóng)組織(FAo)規(guī)定的食品微生物質(zhì)量

1979年版FA()食品與營養(yǎng)報告中的食品質(zhì)量控制手吩的微生物學(xué)分析中列舉了各 種食品的微生物限量標(biāo)準(zhǔn)，由于是按ICMsF的取樣方案判定的，所以在此引用，見表2。

2．食物中毒微生物檢驗(yàn)的取樣

當(dāng)懷疑發(fā)生食物中毒時，應(yīng)及時收集可疑中毒源食品或餐具物、糞便或血液等。

3．人畜共用病病原微生物檢驗(yàn)的取樣

當(dāng)懷疑某一動物產(chǎn)品可能帶有入獸共患病病原體時，應(yīng)結(jié)合知識，采取病原體最集中、最易檢出的組織或體液送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。

(二)食品微生物檢驗(yàn)采樣方法

按照上述采樣方案，能采取最小包裝的食品就采取完整包裝按無菌操作進(jìn)行。不同類型的食品應(yīng)采用不同的工具和方法：

①液體食品，充分混勻，用無菌操作開啟包裝菌盛樣容器。②固體樣品，大塊整體食品應(yīng)用無菌刀具和鑷子從不同部位割取，割取時應(yīng)兼顧表面與深部，注意樣品的代表性，小塊大包裝食品應(yīng)從不同部位的小塊上切取樣品，放入無菌盛樣容器。④冷凍食品，大包裝小塊冷凍食品按小塊個體采取，大塊冷凍食品可以用無菌刀從不同部位削取樣品或用無菌小手鋸從凍塊上鋸取樣品，也可以用無菌鉆頭鉆取碎屑狀樣品，放入盛樣容器。

②④所述食品取樣還應(yīng)注意檢驗(yàn)?zāi)康?需檢驗(yàn)其品質(zhì)情況，應(yīng)取探部樣品。⑤生產(chǎn)工序監(jiān)測采樣： 若需檢驗(yàn)食品污染情況

a．車間用水：自來水樣從車間各水龍頭上采取冷卻水；湯料等從車間容器不同部位用100mL無菌注射器抽取。

b．車間臺面、用具及加工人員手的衛(wèi)生監(jiān)測：用5cmz孔無菌采樣板及5支無菌棉簽擦拭25cm2面積《若所采表面干燥，則用無菌稀釋液濕潤棉簽后擦拭，若表面有水，則用下棉簽擦拭，擦拭后立即將棉簽頭用無菌剪刀剪入盛樣容器。

c．車間空氣采樣：育接沉降法。將5個直徑90mm的普通營養(yǎng)瓊脂乎板分別置于車間的四角和中部，打開乎皿蓋5min，然后蓋蓋送檢。

(三)食品微生物檢驗(yàn)的樣品處理

樣品處理應(yīng)在無菌室內(nèi)進(jìn)行，若是冷凍樣品必須事先在原容器中解凍2℃一5C不超過18h或45℃不超過15min。

一般固體食品的樣品處理方法有以下幾種：

1．搗碎均質(zhì)方法

將100g或100g以上樣品剪碎混勻，從中取25g放入帶225mI稀釋液的無菌均質(zhì)杯中8000r／min一10000r／min均質(zhì)1min一2mm，這是對大部分食品樣品都適用的辦法。

2．剪碎振搖法

將100g或100g以上樣品剪碎混勻，從中取25g進(jìn)一步剪碎，放入帶有225mL稀釋液和適量45mm左右玻璃珠的稀釋瓶中，蓋緊瓶蓋，用力快速振搖50次，振幅不小于40cm。

3．研磨法

將100g或100g以上樣品剪碎混勻，取25g放入無菌乳缽充分研磨后再放入帶有225mI無菌稀釋液的稀釋瓶中，蓋緊蓋后充分搖勻。

4．整粒振搖法

有完整自然保護(hù)膜的穎粒狀樣品(如蒜瓣、青豆等)可以直接稱取25s整粒樣品入帶有225mL無菌稀釋液和適量玻璃珠的無菌稀釋瓶中，蓋緊瓶蓋，用力快速振搖50次，振幅在40cm以上。凍蒜瓣樣品若剪碎或均質(zhì)，由于大蒜素的殺菌作用，所得結(jié)果大大低于實(shí)際水平。

5.胃蠕動均質(zhì)法

這是國外使用的一種新型的均質(zhì)樣品的方法，將一定量的樣品和稀釋液放入無菌均質(zhì)袋中，開機(jī)均質(zhì)。均質(zhì)器有一個長方形金屬盒，其旁安有金屬葉板，可打擊塑樹袋，金屬M(fèi) L板由恒速馬達(dá)帶動，作前后移動而撞碎樣品。

三、樣品的送檢與檢驗(yàn)

(1)采集好的樣品應(yīng)及時送到食品微生物檢驗(yàn)室，越快越好，一般不應(yīng)超過3h，如果路途遙遠(yuǎn)，可將不需冷凍的樣品保持在1℃一5℃的環(huán)境中，勿使凍結(jié)，以免細(xì)菌遭受破壞；如需保持冷凍狀態(tài)，則需保存在泡沫塑料隔熱箱內(nèi)(箱內(nèi)有干冰可維持在0℃以下)，應(yīng)防止反復(fù)冰涼和溶解。

(2]樣品送檢時，必須認(rèn)真填寫申請單，以供檢驗(yàn)入員參考。

(3)檢驗(yàn)人員接到送檢單后，應(yīng)立即登記，填寫序號，并按檢驗(yàn)要求放在冰箱或冰盒中，并積極準(zhǔn)備條件進(jìn)行檢驗(yàn)。

(4)食品微生物檢驗(yàn)室必須備有專用冰箱存放樣品，一般陽性樣品發(fā)出報告后3d(持殊情況可適當(dāng)延長)方能處理樣品；進(jìn)口食品的陽性樣品，需保存六個月方能處理，每種指標(biāo)都有一種或幾種檢驗(yàn)方法，應(yīng)根據(jù)不同的食品、不同的檢驗(yàn)?zāi)康膩磉x擇恰當(dāng)?shù)臋z驗(yàn)方法。本書重點(diǎn)介紹的是通常所用的常規(guī)檢驗(yàn)方法，主要參考現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)。但除了國標(biāo)外，國內(nèi)尚有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(如出口食品微生物檢驗(yàn)方法)，國外尚有國際標(biāo)準(zhǔn)(如FAo標(biāo)準(zhǔn)、wHo標(biāo)準(zhǔn)等)和每個食品進(jìn)口因的標(biāo)準(zhǔn)(如美國FDA標(biāo)準(zhǔn)h日本厚生省標(biāo)準(zhǔn)、歐共體標(biāo)準(zhǔn)等)?？傊畱?yīng)根據(jù)食品的消費(fèi)去向選擇相應(yīng)的檢驗(yàn)方法。

五、結(jié)果報告

樣品檢驗(yàn)完畢后，檢驗(yàn)人員應(yīng)及時填寫報告單，簽名后送主管人核章，以示生效，并立即交給食品衛(wèi)生監(jiān)督人員處理。第五節(jié)食品微生物檢驗(yàn)染色法

微生物中細(xì)菌、致病菌是很小的生物體，必須通過染色的方法，在顯微鏡下才能看得清楚，并且還可以通過染色的方法鑒別革蘭氏染色特性，以及是古長有鞭毛、周毛、莢膜和芽孢等。

第五篇：食品微生物學(xué)習(xí)心得

學(xué)習(xí)心得

隨著科技發(fā)展和人們生活水平的提高，食品安全和衛(wèi)生已成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)?！笆称肺⑸餀z驗(yàn)”是衡量食品衛(wèi)生的重要指標(biāo)之一，也是判斷被檢食品能否食用的科學(xué)依據(jù)之一，對食品的質(zhì)量與安全起著監(jiān)督、預(yù)防、評價等作用。通過食品微生物檢驗(yàn)可以判斷企業(yè)中食品加工環(huán)境、食品衛(wèi)生環(huán)境的優(yōu)劣，能夠?qū)κ称繁晃⑸镂廴镜某潭茸龀稣_的評價。食品微生物是一項(xiàng)實(shí)踐性和應(yīng)用性很強(qiáng)的學(xué)科，在實(shí)際生產(chǎn)生活中，微生物與食品的儲藏、運(yùn)輸、加工、制造過程緊密相連。一方面是利用有益微生物的作用制造發(fā)酵食品；另一方面是防止有害微生物污染食品，保證食品安全。

本次為期18天的食品微生物檢驗(yàn)學(xué)習(xí)，使我的專業(yè)理論知識與實(shí)際檢驗(yàn)水平都得到了全面的啟發(fā)與提高，借此機(jī)會要感謝公司領(lǐng)導(dǎo)對我的信任與大力支持！

此次學(xué)習(xí)分為二個階段，一是理論學(xué)習(xí)階段，2015年10月25日-11月4日于自治區(qū)質(zhì)監(jiān)局培訓(xùn)中心學(xué)習(xí)微生物檢測技術(shù)理論知識。二是實(shí)習(xí)階段，11月5日-11月13日于自治區(qū)質(zhì)監(jiān)局檢測中心微生物檢驗(yàn)室檢驗(yàn)食品中的常規(guī)菌與致病菌。

一、理論學(xué)習(xí)。

1、食品衛(wèi)生學(xué)的意義；食品中菌落總數(shù)；大腸菌群；金黃色葡萄球菌；志賀氏菌；沙門氏菌；單核細(xì)胞增生李斯特菌；霉菌，酵母菌等常見致病微生物的鑒別、分型與檢測技術(shù)；食源性微生物的分類與分布；食品內(nèi)外環(huán)境因素與微生物生長的關(guān)系；食品傳播性微生物的致病性與感染；食品腐敗的鑒評、監(jiān)控；細(xì)菌的能量代謝、分解代謝、合成代謝等。使我們掌握了更多食品微生物的基本原理、新的檢測技能和方法以及食品質(zhì)量的控制等。可使我們今后的工作更加精益求精，也為致病菌的檢驗(yàn)奠定了堅實(shí)的基礎(chǔ)。

2、解讀了新《食品安全法》，食品安全關(guān)系到社會穩(wěn)定，關(guān)系到百姓健康，新《食品安全法》的正式實(shí)施，對食品企業(yè)提出了更高的要求，食品標(biāo)準(zhǔn)也從衛(wèi)生方面上升到安全層面，確保了對公眾身體健康和生命安全。食品企業(yè)是食品安全的重要環(huán)節(jié)，食品企業(yè)的微生物安全是關(guān)乎到千萬百姓的生命健康。因此，要求我們檢驗(yàn)員要有較高素質(zhì)，不但應(yīng)具有很好的技術(shù)能力，還要有實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度和良好的職業(yè)道德。

3、授課老師思路清晰，突出重點(diǎn)，善于引導(dǎo)學(xué)生思考，使我們更加深入的了解了各種食品中的各種微生物和豐富的微觀世界。通過幻燈片向我們展示了隨處可見的食品都與哪些微生物有關(guān)及腐敗食品因微生物污染引起的食物中毒實(shí)例與數(shù)據(jù)。通過鮮明的圖片與生動的講解，使我們了解了食品微生物的重要性，在感慨微生物的強(qiáng)大作用之余，深切的體會到了食品企業(yè)不僅要生產(chǎn)出好的食品，更要生產(chǎn)出更好、更優(yōu)質(zhì)的食品。

二、實(shí)習(xí)階段。

1、學(xué)習(xí)了更加嚴(yán)格的無菌操作技術(shù)、殺菌技術(shù)；完成了送檢食品及抽檢食品中各種細(xì)菌的分離純化培養(yǎng)、分型與鑒定；微生物觀察及分析；學(xué)習(xí)了菌種保藏與遺傳育種技術(shù)；完成了各種細(xì)菌培養(yǎng)基的配制。

2、借鑒了各種試劑的配制、使用記錄；各種儀器設(shè)備的操作使用記錄；實(shí)驗(yàn)室與操作器具的消毒記錄等，以完善我單位的各項(xiàng)記錄。可參考致病菌的初篩可用快速檢測試紙片及初步證實(shí)實(shí)驗(yàn)同步進(jìn)行；對于已被證實(shí)的菌種可使用VITEK或PCR技術(shù)與下一步的生化實(shí)驗(yàn)同步進(jìn)行。很大程度上提高了檢出效率及準(zhǔn)確率。

3、了解了實(shí)驗(yàn)前后的有效處理。前處理：?；髅蟮南礈炜墒褂贸暡ㄇ逑礄C(jī)；洗滌后的試管擺放可使用高壓筐層層堆疊，然后立起的方式；分裝液體可使用分液器；實(shí)驗(yàn)過程中可實(shí)驗(yàn)移液槍；錐形瓶塞可使用橡皮筋封口等，從而可極大提高工作效率。對于培養(yǎng)基要求115℃滅菌的，需提前將試管于121℃高壓鍋內(nèi)滅菌，以保證管內(nèi)細(xì)菌完全滅活。后處理：必須將已發(fā)酵或者已長菌的容器用獨(dú)立高壓菌鍋滅菌后才可洗滌。加強(qiáng)防范意識，保護(hù)自身安全。

4、經(jīng)過證實(shí)，我單位曾一直使用的大腸菌群檢測方法有誤：1）沒有證實(shí)實(shí)驗(yàn)。我單位大腸菌群的檢測一直采用的是GB 4789.3-2010的檢驗(yàn)方法，LST初發(fā)酵后便查MPN表報出檢出值，違背了大腸菌群的國標(biāo)檢驗(yàn)三步法的規(guī)定（初發(fā)酵、復(fù)發(fā)酵和證實(shí)實(shí)驗(yàn)）。規(guī)定中第一步LST發(fā)酵實(shí)驗(yàn)是樣品的發(fā)酵結(jié)果，不是純菌發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，所以初發(fā)酵陽性管經(jīng)過后兩步有可能成為陰性。大量檢驗(yàn)數(shù)據(jù)證明，食品中大腸菌群檢驗(yàn)程序的符合率、初發(fā)酵與證實(shí)實(shí)驗(yàn)相差很大，不同食品三步法的符合情況也不一致。只做一步初發(fā)酵，誤差是比較大的，這樣會有相當(dāng)部分的合格樣品被作為不合格樣品處理。我單位必須加以重視，避免經(jīng)濟(jì)損失。2）套用的國家標(biāo)準(zhǔn)有誤。根據(jù)我單位產(chǎn)品的微生物技術(shù)檢測要求，應(yīng)采取GB 4789.3-2003的檢測方法。初發(fā)酵：將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)。分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，培養(yǎng)后觀察菌落形態(tài)。證實(shí)實(shí)驗(yàn)：在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上挑取可疑大腸菌群于乳糖發(fā)酵管繼續(xù)培養(yǎng)并觀察產(chǎn)氣情況，同時做革蘭氏染色證實(shí)；查MPN表，報出檢出值。

此次學(xué)習(xí)與實(shí)習(xí)雖然時間較短，但內(nèi)容豐富、涉及面廣，理論與實(shí)踐相結(jié)合，可謂受益匪淺、收獲良多，不僅豐富了知識、增長了見識，而且開闊了眼界、拓寬了思路，這些對我今后的工作和學(xué)習(xí)必將起到積極而長遠(yuǎn)的影響。在今后的工作中，我將不斷學(xué)習(xí)、積累經(jīng)驗(yàn)、克服不足，腳踏實(shí)地、盡職盡責(zé)的做好各項(xiàng)工作。不斷提高自身素質(zhì)和業(yè)務(wù)能力，提升工作的主動性和創(chuàng)造性，以飽滿的熱情、扎實(shí)的作風(fēng)投入到工作學(xué)習(xí)當(dāng)中去，為公司貢獻(xiàn)自己的一份光和熱。

品管部：孔香 2015年11月19日