第一篇：微生物限度檢查法標準操作規(guī)程

微生物限度檢查法標準操作規(guī)程

一、目的：建立微生物限度檢查的基本操作規(guī)程，為微生物檢查人員提供正確的操作規(guī)程。

二、適用范圍：適用于品管化驗室的微生物限度檢查。

三、職責：品管微生物檢驗員對本標準的實施負責。

四、正文： 定義：微生物限度檢查法：系指非規(guī)定滅菌制劑及其原輔料受到微生物污染程度的一種檢查方法，包括染菌量及控制菌的檢查。2 實驗用具：

電熱恒溫培養(yǎng)箱、電熱恒溫水溫箱、試管、刻度吸管、量筒、三角瓶、培養(yǎng)皿、試管架、注射器、針頭、注射器盒、研缽、75%酒精棉球、紫外燈（365nm 波長）。3 培養(yǎng)基：

3.1 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、乳糖膽鹽培養(yǎng)基、蛋白胨水培養(yǎng)基。

3.2 培養(yǎng)基的管理、配制應符合檢定菌、培養(yǎng)基管理規(guī)程、培養(yǎng)基配制規(guī)程。試液：甲基紅試液、a-奈酚乙醇試液、40%氫氧化鉀溶液、靛基質試液。稀釋劑：0.9%無菌氯化鈉溶液。供試品溶液的制備：取供試品（供試品如為固體，置研缽中研磨成細粉）放入試管中，加入適量的稀釋劑制成1：10 濃度的供試品溶液。對照用菌液：控制菌檢查均應作相應已知菌的對照試驗，對照菌株為大腸桿菌[CMCC（B）441022]。取相應菌株的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物1 白金耳，接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內，培養(yǎng)18-20 小時，稀釋至1：106，對照菌的加入量為50-100 個。8 檢查法：

8.1 除另有規(guī)定外，細菌的培養(yǎng)溫度為30-35℃，霉菌的培養(yǎng)溫度為25-28℃，控制菌的培養(yǎng)溫度為35±1℃。8.2 細菌、霉菌計數：

8.2.1平皿菌落計數法取均勻供試液，進一步稀釋成1：102、1：103 等適宜的稀釋級。分別取連續(xù)三級10 倍稀釋的供試液各1ml，置直徑約90mm 的平皿中，再注入約45℃的培養(yǎng)基約15ml，混勻，等凝固后，倒置培養(yǎng)，每個稀釋級應作2~3 個平皿。

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細菌計數，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌計數。8.2.2 菌數測定陰性對照試驗取供試驗用的稀釋劑各1ml，置4 個無菌平皿中，分別按細菌、霉菌計數用的培養(yǎng)基制備平板，培養(yǎng)，檢查，不得長菌。

8.2.3 細菌培養(yǎng)時間為48 小時，分別在24 小時及48 小時點計菌落數，一般以48 小時菌落數為準，霉菌培養(yǎng)時間為72 小時，分別在48 小時及72 小時點計菌落數，一般以72 小時菌落數為準。菌落如蔓延生長成片，不宜計數。

8.2.4 點計后，計算各稀釋級的平均菌落數，按菌數報告規(guī)則報告菌數。

8.2.5 菌數報告規(guī)則：細菌宜選取平均菌落數在30-300 之間的稀釋級，霉菌宜選取平均菌落數在30-100 之間的稀釋級，作為報告菌數計算的依據。如只有1 個稀釋級菌落數在30-300（30-100）

之間時，將該稀釋級的菌落數乘以稀釋倍數報告，如同時有兩個稀釋級在30-300（30-100）之間時，按下式計算兩級比值。比值=低稀釋級平均菌落數稀釋倍數

高稀釋級平均菌落數稀釋倍數

.當比值≤2 時，以兩稀釋級的均值報告，當比值＞2 時以低稀釋級平均菌落數乘以稀釋倍數報告，如同時有3 個稀釋級的平均菌落數均在30-300（30-100）之間時，以后兩個稀釋級計算級間比值，如各稀釋級的平均菌落數均不在30-300（30-100）之間，以最接近30 或300 的稀釋級平均菌數乘以稀釋倍數報告，如各稀釋級平均菌落數均在300（100）以上，按最高稀釋級菌落數乘以稀釋倍數報告，如各稀釋級平均菌落數均小于30 時，一般按最低稀釋級的菌落數乘以稀釋倍數報告，如當1：10（1： 100）稀釋級平均菌落數等于或大于原液（或1：10）時，應以培養(yǎng)基稀釋法測定，按測定結果報告菌數。8.2.6 培養(yǎng)基稀釋法：取供試液（原液或1：10 供試液）3 份，每份各1ml，分別注入5 個平皿內（每皿各0.2ml）每個平皿中傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml，混勻，凝固后倒置培養(yǎng)，計數，每1ml 注入的5 個平板點計的菌落數之和即為每1ml 的菌落數，共得3 組數據，以3 份供試液菌落數的平均值乘以稀釋倍數報告。

如各稀釋級平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級平均菌落數小于1 時，則報告菌數為小于10 個。

8.3 控制菌檢查除另有規(guī)定外，取供試液10ml（相當于供試品1g、1ml、cm2），直接或處理后接種，經增菌、分離培養(yǎng)后，進行革蘭氏染色、生化試驗等項檢查。8.3.1 大腸菌群：

8.3.1.1 檢樣稀釋及培養(yǎng)

① 以無菌操作，將檢樣25g（ml）放于含有225ml 滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內（瓶內預置適當數量的玻璃珠），經充分振搖或研磨做成1：10 的均勻稀釋液。固體檢樣在加入稀釋液后，最好在均質器中以8000—10000r/min 的速度處理1min，作成1：10 的均勻稀釋液。

② 用1ml 滅菌吸管吸取1：10 稀釋液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml 滅菌生理鹽水的試管內（注意吸管尖不要接觸管內稀釋液），混合均勻，做成1：100 的稀釋液。

③ 另取1ml 滅菌吸管，按上述操作順序，做10 倍遞增稀釋液。如此每次遞增稀釋一次，即換用一支1ml 滅菌吸管。

④ 根據食品衛(wèi)生標準要求或標本污染情況的估計，選擇3 個合適的稀釋度，每個稀釋度接種三管。8.3.1.2 乳糖發(fā)酵試驗

將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內，接種量在1ml 以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1ml 及1ml 以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種三管，置36±1℃溫箱內，培養(yǎng)24±2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產氣者，則按下列程序進行。8.3.1.3 分離培養(yǎng)

將產氣的發(fā)酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上，置36±1℃溫箱內，培養(yǎng)18~24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實試驗。

8.3.1.4 證實試驗

在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1~2 個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，置36±1℃溫箱內，培養(yǎng)24±2h，觀察產氣情況。凡乳糖管產氣，革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。

8.3.1.5 報告：根據證實為大腸菌群陽性的管數，查MPN 檢索表，報告每100ml（g）大腸菌群的MPN 值。9 結果判斷：

9.1 細菌菌落數、霉菌菌落數、控制菌三項均符合該品種微生物限度項下的規(guī)定，應判為供試品符合規(guī)定；其中任何一項不符合該品種項下規(guī)定，應判供試品不符合規(guī)定。

9.2 細菌菌落數、霉菌菌落數第一次測定超過該品種項下微生物限度規(guī)定時，應從同一批號樣品中隨機抽樣，復試兩次，以三次結果平均值報告。

9.3 如營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上生長霉菌菌落數或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上生長細菌菌落數超過該品種項下微生物限度規(guī)定時，經復試2 次，如3 次結果平均值仍超過規(guī)定，應判為供試品不符合規(guī)定。9.4 各類制劑檢出控制菌或其他致病菌時，按第一次檢出結果為準，不再抽樣復試，即應判該供試品不符合規(guī)定。

第二篇：康腹止瀉片微生物限度檢查法

康腹止瀉片微生物限度檢查法

【摘要】目的 建立康腹止瀉片微生物限度檢查法。

方法 采用培養(yǎng)基稀釋法。

結果 該法能有效消除康腹止瀉片在檢驗條件下對細菌、真菌及酵母菌的抑制作用;控制菌可用常規(guī)法檢查。結論 該法簡單、快捷，可用于康腹止瀉片的微生物限度檢查，有效控制其質量。

【關鍵詞】康腹止瀉片;微生物限度檢查;培養(yǎng)基稀釋法

康腹止瀉片是由木餾油、老鸛草粉、黃柏干浸膏等藥材經加工而成的中成藥片劑。本品味特異，具有化滯止瀉功效。用于飲食不節(jié)或水土不服導致的食欲不振、惡心嘔吐、腹脹腹瀉、消化不良等癥。處方中的老鸛草、黃柏具有一定的抑菌作用

[1，2]，若用常規(guī)法對其進行微生物限度檢查，結果將不能真實反映樣品的污染情況[3]。為此，根據《中國藥典》2010年版的有關規(guī)定[4]，對康腹止瀉片微生物限度檢查方法進行驗證，以確定其是否適用于本品的微生物限度檢查，從而準確有效地檢出樣品中污染的微生物[5]。驗證表明，采用培養(yǎng)基稀釋法對本品進行檢查，可使污染的微生物能被順利檢出，常規(guī)法則可用于控制菌的檢查。該方法簡便、快捷、準確、可行，能有效控制康腹止瀉片的質量，并可為同類藥品的微生物限度檢查法提供科學的實驗依據。儀器與試藥

1.1 菌種

金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大腸埃希菌[CMCC(B)44102]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)10123]，均購自中國藥品生物制品檢定所;黑曲霉(ATCC16404)購自廣東省微生物研究所。

1.2 培養(yǎng)基

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基。

1.3 供試品

康腹止瀉片(批號41EA1)，大幸藥品株式會社。方法與結果

2.1 菌液的制備[4]

2.1.1 大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌

取新鮮培養(yǎng)物接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24 h;培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1 mL含菌數為50～100 cfu的菌懸液。用于控制菌驗證時制成每1 mL含菌數為<100 cfu的菌懸液。

2.1.2 白色念珠菌 取新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24～48 h;培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1 mL含菌數為50～l00 cfu的菌懸液。

2.1.3 黑曲霉 取新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5～7 d，加入0.9%無菌氯化鈉溶液3～5 mL，將孢子洗脫。然后，用適宜的方法吸出胞子懸液至無菌試管內，用0.05%(體積分數)聚山梨醇的0.9%(體積分數)無菌氯化鈉溶液制成每l mL含孢子數50～100 cfu的孢子懸液。

2.1.4金黃葡萄球菌檢測

金黃色葡萄球菌—為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽孢，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。

該菌是葡萄球菌中對人類致病力最強的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴重時可導致敗血癥。

3、血瓊脂培養(yǎng)基：

成分：營養(yǎng)瓊脂100ml

脫纖維羊血（或兔血）10ml

制法：將營養(yǎng)瓊脂加熱融化，待冷至50℃左右無菌操作加入脫纖維羊血（或兔血）搖勻，制成平板，置冰箱內備用。

4、菌落特征：

血瓊脂平板：菌落呈金黃色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈。

Baird-Parker平板：菌落呈圓形，光滑，凸起，濕潤，直徑為2—3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍一混濁帶，在其外層有一透明帶。

5、鏡檢：為革蘭氏陽性菌，排列呈葡萄狀，無芽孢，無莢膜，致病性葡萄球菌，菌體較小，直徑約為0.5um—1um。

2.2 供試液的制備

取樣品10 g，加入pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液至100 mL，用勻漿儀打碎，搖勻，制成1∶10的供試液。

2.3 驗證試驗

驗證實驗所用培養(yǎng)基均按《中國藥典》2010年版附錄“微生物限度檢查法”要求，進行培養(yǎng)基適用性檢查，且均符合規(guī)定。

2.3.1 細菌、真菌及酵母菌計數(平皿法培養(yǎng)基稀釋法)在確定適合的檢查方法后，驗證試驗至少應進行3次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。

試驗組:各取1∶10供試液1、0.5、0.2 mL和試驗菌液1 mL，分別注入平皿中，立即傾注相應瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌數。

菌液組:取試驗菌液1 mL注入平皿中，立即傾注相應瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，測定所加的試驗菌數。

供試品對照組:各取1∶10供試液1、0.5、0.2 mL，按試驗組操作，不加菌液，測定樣品本底菌。

計算各試驗菌株的回收率，結果見表1。表1 計數驗證菌各菌株回收率結果由表1可見:黑曲霉的回收試驗，當供試液為1 mL·皿-1時，3次試驗的回收率均即可達到70%以上;白色念珠菌當稀釋至0.5 mL·皿-1時，3次試驗的回收率達到70%以上;而大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌3個菌株的回收率試驗，要稀釋至0.2 mL·皿-1，3次驗證的回收率才能均達到70%以上。因此本品的細菌計數、真菌及酵母菌計數均可用培養(yǎng)基稀釋法檢查:細菌計數用0.2 mL·皿-1，真菌及酵母菌計數用0.5 mL·皿-1。

2.3.2 控制菌檢查法的驗證 本品為含有藥材粉末投料的口服制劑,控制菌應檢查大腸埃希菌和大腸菌群，驗證大腸菌群檢查法時，采用大腸埃希菌作為試驗菌。

2.3.2.1 大腸埃希菌檢查法的驗證 取1∶10供試液10 mL及大腸埃希菌菌液1 mL加入100、200 mL的BL增菌培養(yǎng)基中，按大腸埃希菌的檢查法進行檢驗。

2.3.2.2 大腸菌群檢查法的驗證 取1∶10供試液1 mL及大腸埃希菌菌液1 mL加入不少于15、30 mL的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基中，按大腸菌群的檢查法進行檢驗。

由表2可知，試驗組均檢出大腸埃希菌，因此本制劑的大腸埃希菌和大腸菌群均可用常規(guī)法檢查。討論

本品含有木餾油、阿仙粉、黃柏粉等成分，有一定的抑菌作用，驗證試驗結果證明，本品對革蘭陽性菌有較強的抑制作用。藥典收載的除去供試品抑菌作用的方法有培養(yǎng)基稀釋法、薄膜過濾法、離心沉淀法等，或幾法聯(lián)用。由于本品是中成藥，推斷其抑菌作用不會太強，因此嘗試采用培養(yǎng)基稀釋法，通過擴大培養(yǎng)基的使用量，使供試品在培養(yǎng)基中稀釋，結果各規(guī)定菌株的回收率均達到藥典要求;控制菌則用常規(guī)法即能順利檢出試驗菌。培養(yǎng)基稀釋法操作簡單，不需要特殊儀器設備，只需增加培養(yǎng)基量，即可很好地消除本制劑在試驗條件下的抑菌作用問題，因此本方法簡便快捷、準確有效，能很好地控制康腹止瀉片的質量。表2 控制菌驗證結果

作者：朱文娟，林鐵豪，鐘燕飛，林麗英

【參考文獻】

[1] 金晴昊，崔京浩，郭健鵬.老鸛草的研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2005，16(9)：840-841.[2] 金建玲，欒永娜，華國強.含小檗堿中藥的抑菌活性與小檗堿含量的關系[J].中醫(yī)藥學報，2005，33(5):19-21.[3] 許華玉，杜鵑，湯楊.藥品中微生物污染檢測方法驗證的必要性[J].中國藥品標準，2005,6(4):262,46-47.[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄79.[5] 林麗英,湛文青,饒春意.野牡丹止痢片微生物限度檢查法的建立[J].中藥材,2006,29(3):299-302.小組成員：制藥101班：陳妙珊、曾潔茹、郭慧芳

第三篇：2010版與2005版藥典微生物限度檢查法對比

2010版與2005版藥典微生物限度檢查法對比

引子：新版藥典即將實施，在這里列出微生物限度檢查法的改動。2010版與2005版藥典微生物限度檢查法對比

內容2010 版2005 版

總論細菌 30~ 35 ℃、控制菌溫度 細菌與控制菌培養(yǎng)溫度合并為 35~ 37 ℃(2000 版藥典是與 30~ 35 ℃2010 版藥典一致的)

10g 或 10ml, 膜劑 10cm 2, 沙

門氏菌檢驗用量應增加至 20g 10g 或 10ml, 膜劑 10cm 2

或 20ml檢驗量

無貼劑供試品溶液的制備(2)

增加貼劑供試品溶液的制備 具3000 轉 / 分離心 20 分鐘

有抑菌活性的供試品 , 離心沉(供試品若有沉淀，先以 500 供試液的制備淀法 500 轉離心 3 分鐘，取上轉 / 分離心 5 分鐘)棄去上

清液混合清液，留底部集菌液紅 2ml，加稀釋液補至原量

菌液制備黑曲霉最后稀釋黑曲霉最后稀釋劑 : 0.9% 無菌劑 :0.05%(ml/ml)聚山梨酯 80 氯化鈉溶液的 0.9% 無菌氯化鈉溶液

細菌培養(yǎng)由 2 天改為 3 天 ,霉菌與酵母菌培養(yǎng) 5 天 , 必要細菌培養(yǎng)由 48 小時 , 霉菌與

時延長到 7 天 增加營養(yǎng)瓊脂培酵母菌培養(yǎng)由 72 小時 , 必要

養(yǎng)基及玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基以及時延長到 5-7 天 無菌落細菌 霉菌酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基報告規(guī)則細菌及酵母菌平均菌及酵母菌計數的適用性檢查 菌落報告規(guī)則細落數在 30~300, 霉菌平均菌落

菌及酵母菌選取平均菌落數小于 數在 30~100 之間稀釋級作為

300cfu, 霉菌小于 100cfu 的稀菌數報告的依據

釋級作為菌數報告的依據

增加適用性檢查 , 包括促生長控制菌檢查用能力 , 抑制能力以及指示能力無培養(yǎng)基的檢查

常用干擾物的中和劑或滅活增加

方法

控制菌檢查增加白色念珠菌檢查法無無

陰道 尿道給藥制劑增加白色

念珠菌檢查 眼部給藥刪除 , 按微生物限度標無眼部給藥限度 需檢查大劑型項目檢查無菌 直腸給藥制準腸埃希菌 菌落單位 : 個劑 : 刪除大腸埃希菌檢查 菌落

單位 :cfu

第四篇：手部微生物監(jiān)測標準操作規(guī)程

手部微生物監(jiān)測標準操作規(guī)程（SOP）

一、適用范圍

1．評價醫(yī)務人員洗手、衛(wèi)生手消毒、外科手消毒的效果。

2．懷疑醫(yī)院感染暴發(fā)或流行與手的傳播有關時。

二、監(jiān)測時機

在接觸患者前或進行診療活動前采樣。

三、采集方法

i．被檢人洗手或手消毒后，在接觸患者前或進行診療活動前采樣。

2．被檢人將雙手伸出，五指并攏。

3。檢查者取2支無菌棉拭子，并浸于含相應中和劑的無菌洗脫液中。

4．取_支棉拭子在一只手手指曲面，從指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面積約30cm2)，并隨之轉動采樣棉拭予；按同樣方法用另一支棉拭予涂擦另一只手。

5．剪去操作者手接觸部位，將2支棉拭子投入10ral含相應中和劑的無菌洗脫液試管內，立 即送檢。

四、標本檢測

(一)帶菌量檢測(平皿傾注法)

1．將采樣管在混勻器上震蕩20s或用力振打80次左右。

2．將無菌吸管分別吸取lmJ待檢樣品接種于2個直徑為90mm無菌平皿中。

3．再加入已熔化的45-48℃的營養(yǎng)瓊脂15．18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固。

4．將平皿置于(36±1)℃溫箱培養(yǎng)48h，計數菌落數。

5．計算公式：

細菌總數(cfu／cm2)=平板上菌落數×稀釋倍數／60(cm2)

(二)細菌種類鑒定

1．將無菌增菌肉湯培養(yǎng)液試管置于(36±1)℃溫箱培養(yǎng)24-48h。

2．若無菌增菌肉湯培養(yǎng)液試管渾濁，應根據實際情況選擇血平板、中國藍平板、雙S平板、麥康凱平板或各種商用快速篩選平板進行細菌接種。

3．接種后將平板置于(36±1)℃溫箱培養(yǎng)24-48h，挑取可疑菌落進行微生物學鑒定，必要

時做藥敏。

六、注意事項

1．結果判定：衛(wèi)生手消毒后細菌總數應≤10cfu／cm2；外科手消毒細菌總數應≤5cfu／cm2。

2．應根據所用方法，選擇含相應中和劑的無菌洗脫液。

3．傾注時溫度必須控制在45-48℃，溫度過高可致細菌死亡，過低則影響傾注效果。

4，當懷疑醫(yī)院感染暴發(fā)或流行與手的傳播有關時，監(jiān)測目的在于考察實際工作中醫(yī)務人員手衛(wèi)生狀況，雖然同樣在接觸患者前或進行診療活動前采樣，但醫(yī)務人員不一定進行了手衛(wèi)生。

5．當懷疑醫(yī)院感染暴發(fā)或流行與手傳播有關時目標微生物的監(jiān)測只能定性不能定量。主要參考文獻：

中華人民共和國消毒技術規(guī)范(2002年版)

醫(yī)院感染管理辦法(2006年)環(huán)境微生物監(jiān)測標準操作規(guī)程（SOP）

一、適用范圍

監(jiān)測消毒液(含氯消毒液和戊二醛等)細菌學情況。

二、監(jiān)測時機

使用中的消毒液。

三、基本方法

瓊脂傾注法(細菌學)。

四、基本試劑

1．PBS緩沖液(無水磷酸氫二鈉2．85g，磷酸二氫鉀1．36g，蒸餾水1000m1)。

2．緩沖液A(PBS緩沖液+甘氨酸2g)：用于醛類、碘類消毒劑。

3．緩沖液B(PBS緩沖液謊代硫酸鈉趣)：用于過氧乙酸、含氯制劑。

五、操作步驟

(一)細菌學監(jiān)測

1．用無菌移液管吸收使用中消毒液1m1，加入9ml含相應中和劑的緩沖液中，充分混勻，作

用約10min。

2．再用無菌吸管分別吸取上述lml的待檢樣本，置于2個直徑為90mm的滅菌平皿內。

3．加入已熔化的45-48℃的營養(yǎng)瓊脂16一18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固。

4．其中一個平板置于(25±1)℃溫箱培養(yǎng)7日，觀察霉菌生長情況；另一個平板置于(36 ±1)℃溫箱培養(yǎng)72h，記數菌落數，必要時做致病菌(金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌等)的檢測。

5．計算公式：消毒液染菌量(cfu／m1)=每個平板上的菌落數×10(二)細菌種類鑒定

1．從營養(yǎng)瓊脂中挑取可疑菌落，根據實際情況可選擇血平板、中國藍平板、雙S平板、麥康

凱平板或各種商用快速篩選平板進行細菌接種。

2．接種后將平板置于(36±1)℃溫箱培養(yǎng)24-48h，挑取可疑菌落進行微生物學鑒定，必要

時做藥敏與分子生物學分型。

六、注意事項

1消毒液染菌量結果應≤100cfu／ml，不得檢出致病菌。

2必須選擇含相應中和劑的稀釋液進行采樣，稀釋液與消毒液作用時間不少于10min。

3傾注時瓊脂溫度保持在45-48℃，溫度過高可致細菌死亡，過低則影響傾注效果。

中華人民共和國消毒技術規(guī)范(2002年版)

醫(yī)院感染管理辦法(2006年)

新生兒保溫箱清洗消毒標準操作規(guī)程（SOP）

一、新生兒暖箱類型

保溫箱、藍光箱

二、基本要求

1、應有1～2個備用暖箱用以周轉清潔消毒。

2、暖箱和藍光箱應當每日大晚班濕式清潔恒溫罩內外表面，特殊感染患兒(包括多重耐藥菌)還應消毒，一人用后一消毒。同一患兒長期連續(xù)使用暖箱和藍光箱時，應當每周消毒一次，用后終末消毒。

3、暖箱和藍光箱濕化液應用滅菌水，每日更換。

4、清潔消毒后備用的暖箱應放在輔助區(qū)，注明清潔消毒日期、失效日期、清潔消毒人員姓名及檢查人員姓名。推薦有效期為2周，2周內使用，可僅擦拭恒溫罩內外表面。

5、使用中的暖箱應注明啟用日期。

三、暖箱、藍光箱清潔消毒流程

1、先拔掉暖箱電源，推至清潔消毒間(輔助區(qū))，濕式擦拭電線后將電線盤起掛好。

2、先放掉水箱內殘水后再清洗、浸泡消毒。

3、取下恒溫罩上輸氧孔的塑料套、輸液軟墊，清洗、擦拭消毒。

4、取出嬰兒床，清洗、消毒。

5、取出床擱板上密封條，清洗、浸泡消毒。

6、取出床擱板，清洗、消毒。

7、暖箱若為箱外加水式，則逆時針擰下箱體外面的加水杯或用螺絲刀卸掉，用棉簽刷洗加水

杯內壁，然后清洗、消毒后沖凈，晾干備用。

8、取下空氣過濾器蓋板，取出空氣過濾網，用清潔劑漂洗沖、冼晾干．齲能揉搓濾網。

9、擦拭空氣過濾器蓋板里面表面及空氣輸入管內外部。

10、擦拭恒溫罩內、外表面、機身內、外表面和機架。

11、更換手套，將所有浸泡消毒的物品取出、沖洗、擦干。

12、按拆卸的反順序逐個裝回。安裝時注意部件放置的位置、方向，旋鈕應鎖緊，密封條四

周應確保密封。

13、安裝完畢，插上電源，測試性能是否良好。

14、消毒用500mg／L含氯消毒液。

主要參考文獻：

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部．新生兒病室建設與管理指南(試行)[S]．2010 [2] 中華人民共和國衛(wèi)生部．消毒技術規(guī)范【S]．2002．

新生兒病房醫(yī)院感染管理標準操作規(guī)程（SOP）

一、建筑布局

1、新生兒室相對獨立，嬰兒有單獨的床位。每張床位占地面積不少于3平方米，床間距不少 于1米。

2、設置普通病室、隔離室、配奶問、沐浴問。

3、病室和病室入口處設置手衛(wèi)生設施，每個新生兒床單元放置快速手消毒劑。

二、工作人員管理

1、新生兒病室嚴格限制非工作人員進入，患感染性疾病者嚴禁入室。

2、工作人員入室前應著清潔的工作服、工作鞋、洗手。

3、手衛(wèi)生：執(zhí)行《洗手、衛(wèi)生手消毒SOP》。

4、醫(yī)護人員在進行診治過程中應當實施標準預防，并嚴格執(zhí)行手衛(wèi)生規(guī)范和無菌操作技術。接觸患兒前后洗手或手消毒。接觸血液、體液、分泌物、排泄物等操作時應當戴手套，操作結束后應當立即脫掉手套并洗手。

三、患兒管理

1、診療和護理操作應當以先早產兒后足月兒、先非感染性患兒后感染性患兒的原則進行。

2、對有感染高危因素的新生兒進行相關病原學檢測，采取針對性措施，避免造成醫(yī)院感染。

3、對患具有傳播可能的感染性疾病、有多重耐藥菌感染的新生兒，應當及時隔離或轉院，執(zhí)

行《新生兒病房隔離制度》。對隔離患兒執(zhí)行《新生兒隔離病房SOP》。

4、新生兒病室存在嚴重醫(yī)院感染隱患時，應當立即停止接收新患兒，并將在院患兒轉出。

四、監(jiān)測

1、新生兒室按醫(yī)院規(guī)定進行醫(yī)院感染監(jiān)控和報告，開展新生兒醫(yī)院感染目標性監(jiān)測。

2、開展必要的環(huán)境衛(wèi)生學監(jiān)測。

3、針對監(jiān)測結果中存在的問題進行分析整改。

五、環(huán)境管理

1、病室內應定時通風換氣至少2～3次／曰，每次不少于30分鐘。

2、臺面、地酶曰濕式擦拭、清掃，遇感染物質時即刻用500mg／1。含氯消毒劑消毒。

六、物品管理

l、一次性使用的醫(yī)療器械、器具由醫(yī)院統(tǒng)一采購，不得重復使用。

2、氧氣濕化瓶、吸痰瓶應當每曰更換清洗消毒。

3、藍光箱和暖箱應當每日清潔并更換濕化液，～人用后一消毒。清洗消毒方法執(zhí)行《新生兒

保溫箱清洗消毒SO[，》。

4、接觸患兒皮膚、粘膜的器械、器具及物品應當一人一用一消毒。如霧化吸入器、面罩、氧

氣管、體溫表、吸痰管、浴巾、浴墊等。

5、患兒使用的奶具執(zhí)行《新生兒奶具清洗消毒SOP》。保存奶制品的冰箱要定期清潔與消毒。

6、新生兒淋浴用具一人一用～消毒。

7、新生兒使用的被服、衣物等應當保持清潔，每日至少更換一次，污染后及時更換。患兒出

院后床單元要進行終末消毒。

七、醫(yī)療廢物管理

新生兒病室的醫(yī)療廢棄物管理執(zhí)行我院醫(yī)療廢物管理制度。主要參考文獻：

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部．新生兒病室建設與管理指南(試行)[s]．2010 [2] 中華人民共和國衛(wèi)生部．消毒技術規(guī)范[S]．2002． 洗手、衛(wèi)生手消毒標準操作規(guī)程（SOP）

一、術語和定義

1、洗手：醫(yī)務人員用肥皂(皂液)和流動水游毛去除手部皮膚污矚、碎『新口部分致病菌的過程。

2、衛(wèi)生手消毒：醫(yī)務人員用速干手消毒劑揉搓雙手，以減少手部暫居菌的過程

二、配備洗手與衛(wèi)生手消毒設施

1、流動水。

2、非手觸式水龍頭。

3、清潔劑：肥皂應保持清潔與干燥。盛放皂液的容器宜為一次性使用，重復使用的容器應每

周清潔與消毒。

4、于手紙或烘手機，避免二次污染。

5、速干手消毒劑。

6、洗手揉搓六步驟圖。

’

三、洗手與衛(wèi)生手消毒、1洗手與衛(wèi)生手消毒應遵循以下原則：

a)當手部有血液或其他體液等肉眼可見的污染時，應用肥皂(皂液)和流動水洗手。

b)手部沒有肉眼可見污染時，宜使用速干手消毒劑消毒雙手代替洗手。

2在下列情況下，醫(yī)務人員應根據l的原則選擇洗手或使用速干手消毒劑：

a)直接接觸每個患者前后，從同一患者身體的污染部位移動到清潔部位時。

b)接觸患者粘膜、破損皮膚或傷口前后，接觸患者的血液、體液、分泌物、排泄物、傷口

敷料等之后。

c)穿脫隔離衣前后，摘手套后。

d)進行無菌操作、接觸清潔、無菌物品之前

e)接觸患者周圍環(huán)境及物品后。

f)處理藥物或配餐前。

3醫(yī)務人員在下列情況時應洗手，然后進行衛(wèi)生手消毒：

aL)接魅患者的血液、體液和分泌物以及被傳染性致病微生物污染的物品后。

b)直接為傳染病患者進行檢查、治療、護理或處理傳染患者污物之后。

’

4醫(yī)務人員洗手方法，見洗手揉搓六步驟圖。

5醫(yī)務人員衛(wèi)生手消毒應遵循以下方法：

a)取適量的速干手消毒劑于掌心。

b)嚴格按照附錄A醫(yī)務人員洗手方法A．3揉搓的步驟進行揉搓。

c)揉搓時保證手消毒劑完全覆蓋手部皮膚，直至手部干燥。主要參考文獻：

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部．醫(yī)務人員手衛(wèi)生規(guī)范[S]．2009

導尿管相關尿路感染預防與控制標準操作規(guī)程（SOP）

一、插管前

l、嚴格掌握留置導尿管的適應證，盡量避免不必要的留置導尿。

2、仔細檢查無菌導尿包，如過期、外包裝破損、潮濕，不應使用。

3、根據年齡、性別、尿道情況選擇合適的導尿管口徑、類型。通常成年男性選16F，女性選14F；

4、規(guī)范手衛(wèi)生和戴手套。

二、插管時

1、消毒2次：用0.5％的碘伏棉球消毒尿道口及其周圍皮膚粘膜，每只棉球限用一次，程序如 下：

男性：自尿道口、龜頭向外旋轉擦拭消毒，注意擦凈包皮及冠狀溝。

女性：首次消毒順序由外向內，自上而下：陰阜、大陰唇、兩側小陰唇、尿道口；再次消毒順

序由內向外，自上而下：尿道口、兩側小陰唇、尿道口；最后會陰、肛門。

2、插管過程嚴格執(zhí)行無菌操作，動作要輕柔，避免尿道粘膜損傷。

3、對留置導尿患者，采用密閉式引流系統(tǒng)。

二、插管后

1、保持尿液引流系統(tǒng)通暢和完整，不要輕易打開導尿管與集尿袋的接口。

2、懸垂集尿袋，不可高于膀胱水平，并及時清空袋中尿液。

3、如要留取尿標本，可從集尿袋采集，但此標本不得用于普通細菌和真菌學檢查。

4、導尿管不慎脫落或導尿管密閉系統(tǒng)被破壞，應更換導尿管。

5、疑似導尿管阻塞應更換導管，不得沖洗。

6、保持尿道口清潔日常用溫水保持清潔即可但大便失禁的患者清潔以后還需消毒。

7、患者洗澡或擦身時要注意對導管的保護，不要把導管浸入水中。

8、不主張使用膀胱沖洗或灌注來預防泌尿道感染。

9、長期留置導尿管病人，定期更換導尿管(1次／2周)和集尿袋(2次／周)。

10、疑似出現尿路感染而需要抗菌藥物治療前，應先更換導尿管。

11、每天評價留置導管的必要性，盡早拔除導管。

三、其他預防措施

定期對醫(yī)務人員進行宣教。

主要參考文獻：

李曉松．基礎護理技術[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：146—150．

胡必杰，郭燕紅，高光明，等.醫(yī)院感染預防與控制[M].上海：上海科學技術出版社，2010：6—7

醫(yī)院內肺炎預防與控制標準操作規(guī)程（SOP）

醫(yī)院獲得性肺炎(HAP)，是我國最常見的醫(yī)院感染類型，呼吸機相關肺炎(VAP)是其中的重要類型，預后較差。

1、如無禁忌證，將床頭抬高30-45°。

2、對存在HAP高危因素的患者，用O．2％洗必泰漱口，每日2次；對氣管插管病人用0：2％

洗必泰口腔沖洗，每曰2次。

3、鼓勵手術后患者(尤其胸部和上腹部手術)早期下床活動。

4、指導患者正確咳嗽，予以翻身、拍，背，以利于痰液引流。

5、對于使用呼吸機的患者，建立預防VAP集體治療措施。

(1)嚴格掌握氣管插管或切開適應證，使用呼吸機輔助呼吸的患者應優(yōu)先考慮無創(chuàng)通氣。

(2)對氣管插管或切開患者，吸痰時應嚴格執(zhí)行無菌操作。吸痰前、后，醫(yī)務人員必須遵循手衛(wèi)生規(guī)則。

(3)呼吸機螺紋管使用一次性，有明顯污染物時則及時更換；每周更換萬向延長管；濕化罐添加滅菌注射用水，每天更換；螺紋管冷凝水使用500g/L做菌消毒劑處理后傾倒污水池，不可直接傾倒在室內地面，不可使冷凝水流向患者氣道。

(4)消毒呼吸機外殼、按鈕、面板，使用75％酒精擦拭，每天1次。

(5)正確進行呼吸機及相關配件的消毒：濕化罐用500mg／[。含氯消毒劑浸泡消毒，流動水沖洗、晾干密閉保存。

(6)不宜常規(guī)采用選擇性消化道脫污染(SDD)來預防HAP／VAP。

(7)盡量減少使用或盡早停用預防應激性潰瘍的藥物，包括H2受體阻滯劑如西米替丁和／

或制酸劑。防治誤吸。

(8)對于人工道/機械通氣患者，每天評估是否可以撤機和拔管，減少插管天數。（9）加強營養(yǎng)，檢測血脂。

6、每年不少于2次對醫(yī)務人員進行有關預防措施的教育培訓。

主要參考文獻：

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部．消毒技術規(guī)范[S]．-200~．’

[2]胡必杰，郭燕紅，高光明，等．醫(yī)院感染預防與控制[M]．上海：上?？茖W技術出版社，2010：3

第五篇：微生物限度檢驗人員考試試題

2012年微生物限度檢查基礎知識考試試題 姓名： 分數：

一、填空題（1×35=35分）

1．微生物限度檢查和無菌檢查應在環(huán)境潔凈度 級的局部潔凈度 級的單向流空氣區(qū)域內進行。

2.除另有規(guī)定外，微生物限度檢查法中，細菌培養(yǎng)溫度為，培養(yǎng)時間為 ；霉菌、酵母菌培養(yǎng)溫度為，培養(yǎng)時間為 ；控制菌培養(yǎng)溫度為，培養(yǎng)時間為。

3.除另有規(guī)定外，一般供試品檢驗量為 或 ；膜劑為 ；、的檢驗量可以酌減。其中沙門菌的檢驗量為 或。

4.檢驗時應從 個以上最小包裝單位中抽取供試品，膜劑不得少于 片；一般應 抽取不少于檢驗用量 倍量的供試品。

5.試驗用菌株的傳代次數不得超過 代。從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為 代。菌液制備后若在室溫下放置，應在 小時內使用，若保存在，可在24小時內使用。

6.消除供試品抑菌活性的方法有、、、。

7.薄膜過濾法所用濾膜孔徑應不大于 um，直徑一般為50mm。若需要沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為?？倹_洗量不得超過。8.培養(yǎng)基配制的分裝量不得超過容器的，以免滅菌時溢出；配制后應在 內滅菌，避免細菌繁殖。

9.供試液制備若需水浴加溫時，溫度不應超過 ℃，供試液自制備至加入培養(yǎng)基不得超過 小時。

10.潔凈區(qū)測定沉降菌時，注入培養(yǎng)基的平皿應放置 分鐘。

二、單項選擇題（2×10=20分）

1.熱力滅菌法分干熱和濕熱滅菌兩類，并在同一溫度下濕熱滅菌效力較干熱滅菌效力要強這是因為（）

A、可迅速提高溫度 B、濕熱有一定潛熱、穿透力大，促進菌體蛋白凝固

C、迅速破壞細菌的酶系統(tǒng) D、使細菌迅速失活 2.生物安全柜主要原理（）

A、干燥 B、空氣經濾膜除菌后定向流動 C、空氣定向流動 D、通風

3.培養(yǎng)基加入有供試品的平皿時的溫度不宜超過（）A、45℃ B、50℃ C、48℃ D、60℃

4.藥品微生物實驗室所檢測微生物的生物危害等級大部分為生物安全（）A、一級 B、二級 C、三級 D、四級

5.潔凈實驗室內的溫度應控制在（），相對濕度最好控制在（）A、20～25℃，40～60% B、10～30℃，50～70% C、15～25℃，50～70% D、18～26℃，40～60% 6.操作間或凈化工作臺的潔凈空氣對環(huán)境的相對正壓為（），操作間與緩沖間的相對正壓為（）

A、不低于10帕，不高于5帕 B、不高于10帕，不低于5帕 C、不低于10帕，不低于5帕 D、不低于5帕，不低于10帕

7．檢查結果如各稀釋級的平板均無菌落生長或僅最低稀釋級的平板有菌落生長，但平均菌落數小于1時，應報告（）A、0個 B、＜1 cfu C、0cfu D、＜1乘以最低稀釋倍數的值

8.微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法，檢查項目包括（）檢查

A、細菌數和霉菌數 B、細菌數、霉菌數及酵母菌數 C、細菌數、霉菌數、酵母菌數及控制菌 D、細菌數、霉菌數、控制菌數 9.微生物限度檢查驗證試驗至少應進行（）次獨立的平行試驗，各試驗菌每次試驗的回收率應不低于（）

A、3，70% B、2，80% C、3，80% D、2，70% 10.細菌、霉菌及酵母菌計數方法驗證時試驗菌加入量規(guī)定為（）cfu，控制

菌計數方法驗證時試驗菌加入量規(guī)定為（）cfu。A、50～100,50～100 B、10～100,10～100 C、10～100,50～100 D、50～100,10～100

三、多項選擇題（3×5=15分）

1.常用的清毒劑的種類有：（）A.75%乙醇 B.甲醛 C.碘酊 D.0.1%新潔爾滅 E.乳酸

2.下列（）不是無菌操作法的特點

A.無菌操作法是一個殺菌的過程 B無菌操作法是一個抑菌的過程 C.無菌操作法是一個消毒的過程 D.無菌操作法只能保持原有的無菌度 E.無菌操作的目的僅是為了防止待檢品被環(huán)境中的微生物污染

3.2010版藥典附錄微生物限度檢查法中，可選用的稀釋液有（）A.pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液 B.pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液 C.pH7.6無菌磷酸鹽緩沖液 D.0.9%無菌氯化鈉溶液 E.pH7.0無菌磷酸鹽緩沖液 4.供試液的制備方法有（）A、勻漿法 B、研缽法 C、保溫振搖法 D、振搖法

5.以下哪些是影響集菌培養(yǎng)效果的因素（）

A.溫度和培養(yǎng)基 B.氧氣和光 C.抗生素 D.滲透壓 E、PH值和氧化還原電位

二、判斷題（2×10=20分）

1．融化培養(yǎng)基可以選擇用水浴或電爐直接加熱，一次未用完的封存好可以再次使用。（）

2．培養(yǎng)時每垛最多堆放6個平板，以保證各個平板的受熱均勻。（）3.配制培養(yǎng)基時若出現沉淀屬正?，F象，無需過濾，可以直接使用。（）

4.濕熱滅菌條件就是指121℃15分鐘。（）

5.從事藥品微生物試驗工作的人員只要具備微生物學或相近專業(yè)知識的教育背景就可以直接上崗。（）

6.若同一稀釋級的兩個平板的菌落數小于15，則兩個平板的菌落數不能相差1倍或以上。（）

7.若營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長有霉菌、酵母菌，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長有細菌，則應分別點計菌落數，合并計算后報告菌數。（）

8.對供試品進行微生物限度檢查時，如果使用了表面活性劑、中和劑或滅活劑，應證明其有效性及對微生物生長的存活無影響。（）9.平皿法操作時應先注入培養(yǎng)基，再加入1ml供試液。（）10.MUG陽性，靛基質陰性，判斷未檢出大腸埃希菌。（）

三、簡答題（2×5=10分）

1.簡述藥品染菌的可能原因。

2.列舉不少于五種的滅菌消毒方式。

一

1.1000、100

2.30～35℃，3天∕72h；23～28℃，5天∕120h；30～35℃，2天∕48h 3．10g，10ml，100cm；貴重藥品、微量包裝藥品；20g、20ml 4.2，4；隨機，3 5.5；0；2；2～8℃

6.培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法、薄膜過濾法、中和法 7.0.45；100ml；1000ml 8.2／3，2h 9.45℃；1 10．30min

2二

BBABD

CDCAD 三

3.ABCDE;2.ABCE;3.ABCD;4.ABCD;5.ABCDE 四

×√×××

××√×× 五

1.一、二、三、四、2.水系統(tǒng)的內外部污染；

無菌室密封性差；環(huán)境衛(wèi)生、個人衛(wèi)生達不到要求； 設備和配件消毒不符合要求、物料物品消毒不徹底 生產中操作不當

1.濕熱滅菌 2.干熱滅菌 3.輻射滅菌 4.氣體滅菌 5.消毒劑滅菌 6.紫外照射滅菌

7.過濾滅菌