第一篇：關(guān)于植物組織培養(yǎng)技術(shù)感想

關(guān)于植物組織培養(yǎng)技術(shù)的感想

植物組織培養(yǎng)俗稱植物克隆，是當今國際農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的一項高新植物育苗技術(shù)，是在無菌條件下，將植物器官、組織、花藥、體細胞甚至原生質(zhì)體等外植體接種到人工配制的培養(yǎng)基上培育成植株的技術(shù)。研究人員可以通過研究外植體其在不受植物體其他部分干擾的條件下的生長和分化規(guī)律，另一方面，研究植物體的器官、組織和細胞在改變培養(yǎng)條件，包括培養(yǎng)基的配方、光照和培養(yǎng)溫度等的生長、分化和發(fā)育規(guī)律，從而解決植物形態(tài)建成中的實際問題，為農(nóng)林、醫(yī)學(xué)等生產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)及實踐指導(dǎo)。

一、植物組織培養(yǎng)的原理

植物細胞的全能性是指植物體的任何一個細胞都具有生長分化成為一個完整植株的能力，整個過程包括細胞的脫分化和再分化過程。植物組織培養(yǎng)是利用植物細胞全能性，將其從植物體中分離出來，這一過程稱細胞脫分化，然后在一定的培養(yǎng)條件下經(jīng)再分化，最后形成完整的植株的過程。

二、植物組織培養(yǎng)的基礎(chǔ)條件

植物組織培養(yǎng)的技術(shù)條件主要包括培養(yǎng)基的配制、無菌條件和培養(yǎng)條件等。

（一）培養(yǎng)基的配制

植物組織培養(yǎng)中一個關(guān)鍵的步驟。對組織培養(yǎng)的外植體生長而言，培養(yǎng)基的組分是一個決定性的因素，不同的植物材料要求不同的培養(yǎng)基，適于誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基不一定適于器官分化，適于固體培養(yǎng)的培養(yǎng)基不一定適于液體培養(yǎng)，因此要想獲得成功，必須精心選擇適宜的培養(yǎng)基。根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)，可將植物組織培養(yǎng)分為固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)。不同的外植體、不同的培養(yǎng)方法、不同的培養(yǎng)目的等，都要求采用不同的培養(yǎng)基。

一般來說植物體對土壤的pH值有一定的要求，所以外植體培養(yǎng)基也不例外。目前，在植物組織培養(yǎng)上常用的培養(yǎng)基有十幾種，其主要成分是大致如下：首先，培養(yǎng)基中含有大量的水分，可以滿足外植體生長對水分的需要。

其次，培養(yǎng)基中的礦質(zhì)元素包括植物必需的大量礦質(zhì)元素N、P、K、Ca、Mg、S和微量元素Fe、Mn、B、Cu、Zn、Mo、Cl以及非必需的Na等。糖除了給外植體提供碳源外，還可調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的滲透勢。碳源一般采用蔗糖，少量采用葡萄糖，濃度各有不同。

植物生長素和細胞分裂素要根據(jù)培養(yǎng)的目的適當選用?？刹捎肐AA、IBA和NAA、KT、6-BA、ZT等。在誘導(dǎo)根和芽的等不同分化時段，還需根據(jù)要求調(diào)整培養(yǎng)基養(yǎng)分的比值。維生素B(硫胺素)是必需的，而煙酸、B16雖屬于不必需，但對生長有促進作用，所以一般也添加到培養(yǎng)基中。有些培養(yǎng)基中還包括氨基酸、水解酪蛋白、酵母汁、椰子乳等有機附加物，以促進細胞的分化。

（二）無菌條件

根據(jù)前面的配制可知，由于營養(yǎng)基的營養(yǎng)十分豐富，微生物極易滋生而造成污染，因此，在植物組織培養(yǎng)的整個過程中都必須保持嚴格的無菌條件。所以消毒顯得重要。外植體的消毒通常采用氯化汞、過氧化氫、次氯酸鈣、次氯酸鈉或70%的酒精等，消毒后需用無菌水充分沖洗。用具必須進行高溫高壓滅菌。培養(yǎng)室要盡量保持無菌狀態(tài)，定期用紫外燈照射和用殺菌劑熏蒸殺菌。

(三)培養(yǎng)條件

自然界中的植物體所需的光、溫、水、氣，植物組織培養(yǎng)時也同樣所需要。水分和氧氣條件一般容易得到滿足，而植物組織培養(yǎng)條件可通過人為控制光照和溫度，溫度一般控制在25~28℃之間，有的還要求有晝夜溫差，主要通過控制光強和光周期進行調(diào)節(jié)。人工光照一般采用日光燈，也可以透光的玻璃培養(yǎng)室利用自然光照。

三、植物組織培養(yǎng)的優(yōu)缺點

（一）植物組織培養(yǎng)技術(shù)優(yōu)點

植物可以不受生長季節(jié)限制地繁殖；不攜帶病毒，防止植物病毒的危害，極大的提高了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)效率；培養(yǎng)周期短，短時間內(nèi)大批量的培育出所需要的植物新個體；可用組培中的愈傷組織制取特殊的生化制品；可短時間大量繁殖，用于拯救瀕危植物；可誘導(dǎo)之分化成需要的器官，如根和芽；解決有些植物產(chǎn)種子少或無的難題，如將香蕉進行組培得到人工種以方便移種。

（二）植物組織培養(yǎng)的缺點

為了滿足人們生活需要，吃飯問題已經(jīng)與組培快繁密不可分了。由于培養(yǎng)基幾乎完全屬于人為調(diào)配獲得的，這就導(dǎo)致一個問題，調(diào)控的人是否理解植物的特性、是否熟悉培養(yǎng)基的理論和植物生理、是否有足夠的經(jīng)驗來駕馭組織培養(yǎng)技術(shù)，這幾點都決定了組培育苗的品質(zhì)。如果嚴格把關(guān)組培過程的話，那么組織培養(yǎng)或快速繁殖所獲得的苗，跟葉插、砍頭苗完全一樣，能最大程度的保留了植物的完整基因組。這是組培快繁的最大優(yōu)勢，這也就決定了目前重要的作物、名貴花卉的繁殖和保存也都是組培快繁的途徑實現(xiàn)的。

轉(zhuǎn)基因植物食品對我們來說已經(jīng)是一個公開的話題，也是借助組培快繁平臺來完成，我們生活中至少接觸30種轉(zhuǎn)基因植物的衍生產(chǎn)品。資料顯示這些衍生產(chǎn)品的缺點也比較明顯：1）表現(xiàn)為“硬化”不足，即從實驗室進入溫室后進行馴化栽培時間不夠，行內(nèi)稱作“硬化”。2）激素殘留明顯，或者對激素的敏感性變化，少部分苗會在后期發(fā)根后呈現(xiàn)出一些殘留激素效應(yīng)，這種效應(yīng)不會超過一年，表現(xiàn)為容易出側(cè)芽、大量畸形根、生長周期紊亂、開花增多等。但是這種情況并不是組培快繁苗所特有，用激素誘導(dǎo)的葉插和砍頭苗也會出現(xiàn)這種癥狀，甚至更夸張！因此這一點并不是鑒別組培苗的根本。3）對有性繁殖的影響，由于組培快繁獲得的苗都是小苗，需要經(jīng)過硬化和長期的溫室栽培才可能開花，所以一般存在對有性繁殖無影響。4）根原基異常，由于激素環(huán)境下會對導(dǎo)致根原基維管束的排列紊亂，這就導(dǎo)致了出根可能會受到抑制，正常的根無法順利萌發(fā)。

四、植物組織培養(yǎng)在生產(chǎn)實踐上的應(yīng)用

（一）植物體的無性快速繁殖及脫毒

用組織培養(yǎng)技術(shù)進行植物的無性快速繁殖，已廣泛應(yīng)用于一些花卉、果樹等園藝作物、農(nóng)作物以及林木的育苗。如廣東、廣西和海南島香蕉的種植已大多采用試管苗，甘蔗和蘭花試管苗也已大量應(yīng)用于生產(chǎn)，柑橘、菠蘿、草莓、桉樹以及其他許多花卉等也利用試管苗進行栽培。

受病毒感染的馬鈴薯植株，除了莖尖生長錐外，其他部位往往都帶有病毒。因此，繼續(xù)用塊莖作繁殖材料，必將導(dǎo)致后代植株染病。若利用莖尖生長錐作外植體進行無性快速繁殖，所生產(chǎn)出的幼苗將不帶病毒，從而達到脫毒的目的，可解決馬鈴薯品種的退化問題。利用組織培養(yǎng)技術(shù)進行無性快速繁殖具有許多優(yōu)缺點，在實際生產(chǎn)中應(yīng)該注意揚長避短，本著良心去做事，最好是建立相應(yīng)的法規(guī)并嚴格執(zhí)行。

（二）花粉培養(yǎng)和單倍體育種

利用花粉進行組織培養(yǎng)可以獲得單倍體植株。進行單倍體育種，可以加速育種的進程并可獲得純系。我國已培育出10多種花粉植株，如水稻、小麥、大黑麥、小黑麥、玉米、甜菜、茄子、煙草、辣椒、楊樹和橡膠樹等，其中小麥“花培一號”、煙草“單育一號”等優(yōu)良品種已廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)。

（三）人工種子

將植物組織培養(yǎng)中產(chǎn)生的體細胞胚包裹在含有養(yǎng)分的膠囊內(nèi)，可像種子一樣直接播種到大田用于生產(chǎn)，即所謂的人工種子。天然種子中的胚是合子胚，而人工種子中的胚是體胚，胚乳和種皮也是人工的。目前，已有胡蘿卜、芹菜、苜蓿、棉花、玉米、水稻、橡膠樹等幾十種植物的人工種子試種成功，但成本相對較高，美國己大規(guī)模生產(chǎn)樹木的人工種子。

（四）原生質(zhì)體培養(yǎng)和體細胞雜交

采用酶法去除細胞壁的原生質(zhì)體培養(yǎng)，不僅是研究細胞生命活動機理的良好體系之一，還可以通過原生質(zhì)體培養(yǎng)開展原生質(zhì)體融合與體細胞雜交，獲得新品系、新品種。從理論上講，細胞雜交比有性雜交可得到更多的不同類型。

五、總結(jié)

目前，植物組培方式以固體培養(yǎng)基培養(yǎng)為主，液體培養(yǎng)基培養(yǎng)由于具有物質(zhì)交換快，生長速度快，產(chǎn)生的代謝物質(zhì)不會在組織周圍積累等優(yōu)點，值得大力研究與推廣。同時要有計劃、有步驟地引進先進的植物組培苗生產(chǎn)配套設(shè)施，建立健全培養(yǎng)室組培快繁與溫室栽培相配套的組培苗生產(chǎn)體系，確保培育出高質(zhì)量的商品化組培苗。

總之，植物組織培養(yǎng)技術(shù)仍處于發(fā)展階段，還存在許多問題，其潛力也沒有得到充分發(fā)揮，許多機理有待深入探索，相信但隨著科技的進步和社會的發(fā)展，問題可以逐步得以解決。希望在不久的將來，植物組織培養(yǎng)技術(shù)能夠我國開發(fā)西部、建設(shè)森林城市、綠化山川、防風(fēng)固沙、退耕還林、以及調(diào)整農(nóng)村產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)中發(fā)揮巨大作用，該項技術(shù)將會在我國甚至全世界將發(fā)揮舉足輕重的作用。

第二篇：植物組織培養(yǎng)論文

植物組織培養(yǎng)的發(fā)展及其應(yīng)用

劉兆書、王夢瑤、王瑞雄、尹樹明、左通通

（石河子大學(xué)，生命科學(xué)學(xué)院，新疆石河子，832000）

摘要:植物組織培養(yǎng)作為一種有效的技術(shù)手段已被廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)實踐的各個領(lǐng)域。本文從植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展，總結(jié)了植物組織培養(yǎng)的發(fā)展歷史及發(fā)展現(xiàn)狀，重點介紹了組織培養(yǎng)技術(shù)在育種和脫毒快繁方面的應(yīng)用，為今后植物組織培養(yǎng)的進一步發(fā)展和應(yīng)用打下基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：植物組織培養(yǎng)；發(fā)展；快繁；脫毒；育種

德國的植物生理學(xué)家Haberlandt提出細胞全能性理論以后，在無數(shù)科學(xué)家的努力下，植物組織培養(yǎng)經(jīng)過近百年的發(fā)展歷程后，該技術(shù)日趨完善和成熟，得到了廣泛的應(yīng)用。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，研究領(lǐng)域的不斷拓展與深入，植物組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用也越發(fā)的廣泛。育種方面的應(yīng)用非常廣泛，已經(jīng)形成了一門理論和技術(shù)；在工廠化育苗方面，產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟及社會價值;同時植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展也促進設(shè)施農(nóng)業(yè)、食品、工業(yè)、醫(yī)藥業(yè)等領(lǐng)域發(fā)展，現(xiàn)就植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用作簡單總結(jié)。

1、植物組織培養(yǎng)的發(fā)展

1.1植物組織培養(yǎng)的發(fā)展歷史

1838-1839年，德國的植物學(xué)家T.Schleidon和動物學(xué)家T.Schwann提出細胞學(xué)說。1902年德國的植物學(xué)家Haberlandt提出:高等植物的器官和組織，具有植物細胞全能性。1904年Harming在無機鹽和蔗糖溶液中對蘿卜和辣根菜的胚進行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)離體胚可以發(fā)育成熟，并提前萌發(fā)成小苗。1937年White發(fā)現(xiàn)了B族維生素，建立了第一個由已知化合物組成的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基被定名為White培養(yǎng)基。同時法國的Gautherer和Nobecourt也發(fā)現(xiàn)了B族維生素的重要性，三個人被譽為植物組織培養(yǎng)學(xué)科的奠基人。1952年Morel和Martin通過莖尖分生組織的離體培養(yǎng)，從已受病毒侵染的大麗花中首次獲得脫毒植株。1953-1954年Muir利用震蕩培養(yǎng)和機械方法獲得了萬壽菊和煙草的單細胞，實施了看護培養(yǎng)，使單細胞培養(yǎng)獲得了成功。1957年Skoog和Miller提出生長素和細胞分裂素控制器官形成。1958年英國學(xué)者Steward通過體細胞胚胎發(fā)生途徑獲得了人工體細胞胚，這一實驗證實了Haberlandt的細胞全能性理論。到20世紀60年代組織培養(yǎng)進入快速發(fā)展階段，在基礎(chǔ)理論、實際操作方面不斷取得進展，比如在植物體細胞雜交、單倍體育種、種質(zhì)資源保存、快速育苗、人工種子制造、次生代謝物生產(chǎn)等方面取得了可喜的成果。

1.2植物組織培養(yǎng)發(fā)展現(xiàn)狀

1.2.1國內(nèi)的研究發(fā)展現(xiàn)狀 我國的組織培養(yǎng)與國外相比起步相對較晚，但發(fā)展卻比較快。20世紀70年代我國掀起了單倍體育種的高潮，在作物育種上取得了一些實用性的成果。據(jù)不完全統(tǒng)計，目前我國用花藥或花粉育出的植物已超過22科52屬160種。目前我國組培已經(jīng)進入了生產(chǎn)階段，實現(xiàn)了花卉、果樹、蔬菜等100多個品種的工廠化生產(chǎn)?；ɑ艹隹谀陝?chuàng)匯達800多萬美元。

1.2.2國外植物組織培養(yǎng)的研究發(fā)展現(xiàn)狀 國外的組培發(fā)展的比較快，20世紀70年代在美國形成了蘭花產(chǎn)業(yè)。80年代后，以商品為目的的組培苗生產(chǎn)量以20%-30%的速度遞增，年產(chǎn)組培苗在10萬株以上的植物微繁殖公司約占50%，年產(chǎn)量大于50萬株的公司約占25%，整個西歐年產(chǎn)組培苗達2億多株。

2、工廠化植物快繁及脫毒方面的應(yīng)用

組織培養(yǎng)技術(shù)有幾乎不受地理環(huán)境和季節(jié)的限制、遺傳背景一致、生長周期短、成本低等諸多優(yōu)點。同時，結(jié)合莖尖培養(yǎng)方法可以去除植物病毒、使植物復(fù)壯、提高質(zhì)量和產(chǎn)量，所以，離體快繁和植物脫毒是目前植物組織培養(yǎng)應(yīng)用最廣泛的一個方面，尤其在蘭花、名貴樹種、馬鈴薯、草毒等無性繁殖為主的植物顯的更是尤為重要。據(jù)估計，目前全球有關(guān)生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的年交易額約為1 500億美元，其中50%一60%與農(nóng)業(yè)有關(guān)。植物組培苗的貿(mào)易額約占總額的10%，即150億美元，并以每年15%速度遞增。

在我國，離體快繁育苗技術(shù)的開發(fā)應(yīng)用起步于20世紀80年代初。如華樂種苗有限公司，年生產(chǎn)能力在500萬株以上蘭花克隆苗，主要出口日本、美國、荷蘭、德國等，北京杉友蘭業(yè)生物科技有限公司，年生產(chǎn)能力為350萬株蘭花克隆苗，連云港振興恒巨生物科技有限公司，年生產(chǎn)蝴蝶蘭克隆苗3 000萬株，產(chǎn)品遠銷歐洲、美洲、亞洲等十多個國家和地區(qū)。據(jù)不完全統(tǒng)計植物快繁涉及觀賞植物、蔬菜、果樹、藥材等300種以上，其中觀賞園藝植物約200種，約占60%。在脫毒方面，如通過脫毒的馬鈴薯、甘蔗、甘薯、大蒜、草毒、香蕉平均可以增產(chǎn)30%以上，蘭花、水仙、康乃馨、大麗花通過脫毒后植株生長勢強、花色艷麗、花朵大、產(chǎn)量高。

3、在植物育種上的應(yīng)用

植物組織培養(yǎng)技術(shù)對培育優(yōu)良作物品種開辟了全新的途徑。目前，國內(nèi)外已把植物組織培養(yǎng)普遍應(yīng)用于作物育種，并在單倍體育種、胚胎育種、細胞融合育種、細胞突變育種、基因工程育種等方面取得了較大進展。3.1單倍體培養(yǎng)育種

通過對植物的花藥、花粉、未受精的子房或胚珠進行組織培養(yǎng)獲得單倍體(其中以花藥和花粉培養(yǎng)應(yīng)用最為廣泛)，單倍體在培養(yǎng)過程中利用秋水仙素處理，可使染色體加倍，成為純合二倍體植株，這種培養(yǎng)技術(shù)在育種上的應(yīng)用稱為單倍體育種。研究表明，常規(guī)育種一般需要8-10 天或更長的時間，而通過單倍體進行育種一般僅需要4-5 天的時間，單倍體育種具有程序簡單、育種周期短、基因型一次純合等優(yōu)點，單倍體育種是常規(guī)育種程序和方法的重大改革，尤其在林業(yè)等生長周期長的物種中效果更為顯著。因此，單倍體育種在國際上引起了很大的重視，各國紛紛開展單倍體育種方面的研究工作。3.2胚胎培養(yǎng)育種

植物的胚(包括成熟胚和幼胚)、胚珠、子房和胚乳的離體培養(yǎng)技術(shù)統(tǒng)稱為胚胎培養(yǎng)，其應(yīng)用領(lǐng)域主要包括胚胎發(fā)育機理、克服雜交不親合、胚胎拯救、克服自交不親和、克服珠心胚的干擾、打破種子體眠、獲得體細胞胚和人工種子等方面，因此在農(nóng)作物、園藝作物、林木和藥用植物上有著廣泛應(yīng)用。

在克服雜交不親合、克服自交不親和方面主要通過植物離體受精來實現(xiàn)，在廣義上通過離體柱頭授粉、離體子房授粉、離體胚珠授粉、離體精細胞和卵細胞融合等均稱做植物離體受精。但嚴格意義上的離體受精或試管受精是20世紀90年代精、卵離體融合成功。該技術(shù)不僅可以克服植物授粉不親和問題，還可以進行胚胎、種子和果實發(fā)育機理等基礎(chǔ)研究。人工分離的精細胞和卵細胞融合后進行合子胚培養(yǎng)，已在玉米、藥用牡丹、嬰粟、煙草等植物上獲得成功。植物離體受精技術(shù)是植物細胞工程中的重要實驗技術(shù)，為研究植物胚胎發(fā)育機理提供了新的實驗系統(tǒng)，為開發(fā)新的植物轉(zhuǎn)基因途徑提供了可能。

胚培養(yǎng)在打破種子體眠應(yīng)用較為廣泛，種子體眠的原因很多，利用組織培養(yǎng)方式打破種子體眠一般有種胚發(fā)育不全或種子含抑制物抑制種胚發(fā)芽2種情況，如胚乳發(fā)育尚不完全的蘭科種子可以通過組織培養(yǎng)的方式獲得再生植棵，而鶯尾屬、薔薇科、野麥等植物可以通過組織培養(yǎng)的方式打破抑制物對種子發(fā)芽的影響。另外，胚培養(yǎng)還可以應(yīng)用于胚胎拯救。

胚乳培養(yǎng)的主要目的是獲得具有利用價值的三倍體植株，再經(jīng)過染色體加倍獲得六倍體，從而育出多倍體新品種。目前有40多種植物的胚乳培養(yǎng)達到了不同程度的細胞分化或器官分化，不少植物已獲得了再生植株。我國在馬鈴薯、小麥、水稻、蘋果、桃、稱猴桃等多種植物上得到了胚乳再生植株。同時，胚乳培養(yǎng)產(chǎn)生的混倍體，可用于染色體工程方面的研究。3.3細胞融合培養(yǎng)育種

細胞融合所使用的材料一般是指利用除去植物細胞壁的裸露細胞即原生質(zhì)體，通過原生質(zhì)體融合，可克服種、屬以上植物有性雜交不親和性障礙，為廣泛重組遺傳物質(zhì)開辟了新途徑。同時，因去壁后的原生質(zhì)體消除了核酶等對外源DN A的破壞，為攜帶外源遺傳物質(zhì)的大分子滲入細胞創(chuàng)造條伴。另外，在有些沒有有性生殖能力或其有性生殖能力很低(如香蕉、木薯、馬鈴薯、甘蔗等)的植物作物改良中，體細胞雜交具有不可取代的重要性。通過大量的研究認為葉肉組織分離的原生質(zhì)體較好，遺傳性較為一致。在原生質(zhì)體融合方面主要有物理(如電融合)、化學(xué)(如高PIE高鈣、聚乙二醇)、生物(如仙臺病毒)等融合方式。3.4細胞突變體育種

在研究中發(fā)現(xiàn)，通過愈傷組織獲得的再生植株中常常出現(xiàn)基因型變異。這是因為無論是愈傷組織還是細胞培養(yǎng)，培養(yǎng)細胞均處在不斷分生狀態(tài)，容易受培養(yǎng)條件和外界環(huán)境(如物理因素、化學(xué)物質(zhì)等)的影響而產(chǎn)生誘變。利用這一特點結(jié)合人工誘變方法包括物理誘變(Y射線、X射線、電子束、離子束、激光、紫外線等)、化學(xué)誘變(甲基磺酸乙醋、秋水仙素、疊氮化鈉、平陽霉素、52BU ,EB等)和生物誘變(轉(zhuǎn)座子插入突變、跳躍基因等)獲得了一大批植物新品種和新材料。目前，這種方法已篩選出抗病、抗鹽、高賴氨酸、高蛋白、矮稈高產(chǎn)的植物突變體。

3.5基因工程育種

通過基因槍或農(nóng)桿菌進行植物基因工程育種的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一是建立一個高效的組織培養(yǎng)再生體系。植物遺傳轉(zhuǎn)化的理想受體系統(tǒng)應(yīng)具有高效穩(wěn)定的再生能力，研究認為用于基因轉(zhuǎn)化的受體系統(tǒng)，應(yīng)具有80%-90%的再生頻率，且每個外植體必須具有能再生的叢生芽，其芽數(shù)量越多越好。目前，用于遺傳轉(zhuǎn)化的受體主要有二種途徑，一是外植體在激素的誘導(dǎo)下產(chǎn)生愈傷組織后再培養(yǎng)成體細胞胚即體細胞胚發(fā)生途徑，二是誘導(dǎo)外植體產(chǎn)生單極性不定芽后再培養(yǎng)生成完整的再生植株即器官發(fā)生途徑。目前，與組培技術(shù)結(jié)合的轉(zhuǎn)基因的方法主要有農(nóng)桿菌介導(dǎo)和基因槍兩種方法。

參考文獻：

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第三篇：植物組織培養(yǎng)問題釋疑

植物組織培養(yǎng)問題釋疑

問題一、在選修3的現(xiàn)代生物技術(shù)專題中，經(jīng)常會出現(xiàn)許多影響操作的因素，如植物組織培養(yǎng)脫分化和再分化的影響因素。

植物組織培養(yǎng)的影響因素有哪些？

植物組培的影響因素

試題：（2018年4月浙江選考試題）取田間不同品種水稻的幼胚，先進行，然后接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，幼胚發(fā)生

形成愈傷組織，并進行繼代培養(yǎng)。用含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染愈傷組織，再培養(yǎng)愈傷組織，以便獲得抗蟲的轉(zhuǎn)基因水稻。影響愈傷組織能否成功再生出植株的因素有：培養(yǎng)條件如光溫、培養(yǎng)基配方如植物激素配比、以及

（答

2點即可）。

答案：消毒；脫分化；水稻的基因型、愈傷組織繼代的次數(shù)

解析：進行組織培養(yǎng)前，要先對外植體（題中幼胚）進行消毒，幼胚先發(fā)生脫分化形成愈傷組織。影響愈傷組織能夠成功再生出植株的因素有：培養(yǎng)條件如光溫、培養(yǎng)基配方如植物激素配比、以及水稻的基因型、愈傷組織繼代的次數(shù)等。

植物組織培養(yǎng)影響的因素有內(nèi)因和外因。

內(nèi)因

主要是遺傳特性和生理特性，不同的器官組織類型產(chǎn)生的愈傷組織器官分化明顯不同，這是由基因型決定的；個體發(fā)育的年齡，如發(fā)育細嫩的組織容易脫分化為愈傷組織，也容易誘導(dǎo)器官分化；愈傷組織生理狀態(tài)，如繼代的次數(shù)越多，器官分化能力越差。

外因

主要有營養(yǎng)條件（無機鹽、有機物、植物激素和天然復(fù)合物等）和環(huán)境條件（滲透壓、光照、溫度、濕度和pH等）。

[資料1]在快速繁殖顫楊時，如果我們將一個枝條平均分成三段，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，靠近頂端的那一段枝條的側(cè)芽離體培養(yǎng)時繁殖系數(shù)最高，中間的次之，基部的最低。

結(jié)論：外植體在植株上的著生位置對其脫分化及再分化有一定的影響。

[資料2]在MS培養(yǎng)基中加入質(zhì)量分數(shù)為0.5mg/L的6-BA和質(zhì)量分數(shù)為0.5mg/L的NAA，可誘導(dǎo)胡蘿卜形成愈傷組織；在MS培養(yǎng)基中加入質(zhì)量分數(shù)為2mg/L的KT（激動素）和質(zhì)量分數(shù)為0.2mg/L的NAA，可誘導(dǎo)胡蘿卜生出叢芽；在MS培養(yǎng)基中加入質(zhì)量分數(shù)為0.1mg/L的NAA，可誘導(dǎo)胡蘿卜生根。

結(jié)論：生長素及細胞分裂素的比例可影響細胞的脫分化及再分化。

[資料3]將外植體培養(yǎng)在黑暗條件下，10天左右即可形成高度液泡化的愈傷組織，但是若將外植體培養(yǎng)在光照條件下，發(fā)現(xiàn)細胞分化產(chǎn)生維管束等組織，而不形成愈傷組織。

結(jié)論：愈傷組織的形成需要避光。

[資料4]研究煙草組織培養(yǎng)時發(fā)現(xiàn)，煙草芽的形成以28度為好，在12度以下，33度以上形成率均很低。

結(jié)論：脫分化及再分化都需要在適宜的溫度條件下進行。

問題二

大家都知道植物的全能性比動物細胞容易得多，但植物組織培養(yǎng)也會受到許多因素的影響。浙科版選修3教材第23頁有一較大篇幅專門講了植物組織培養(yǎng)的影響因素（如下所示）。

選修3教材第23頁

影響植物組織培養(yǎng)全能性表現(xiàn)的因素有哪些？

典型試題解析

試題：（2018年4月浙江省選考試題）回答與基因工程和植物克隆有關(guān)的問題。

（1）將含某抗蟲基因的載體和含卡那霉素抗性基因的載體pBI121均用限制性核酸內(nèi)切酶EcoR

I酶切，在切口處形成。選取含抗蟲基因的DNA片段與切割后的pBI121用DNA連接酶連接。在兩個片段相鄰處形成，獲得重組質(zhì)粒。

（2）已知用CaCl2處理細菌，會改變其某些生理狀態(tài)。取CaCl2處理過的農(nóng)桿菌與重組質(zhì)粒在離心管內(nèi)進行混合等操作，使重組質(zhì)粒進入農(nóng)桿菌，完成實驗。在離心管中加入液體培養(yǎng)基，置于搖床慢速培養(yǎng)一段時間，其目的是，從而表達卡那霉素抗性基因，并大量增殖。

（3）取田間不同品種水稻的幼胚，先進行，然后接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，幼胚發(fā)生

形成愈傷組織，并進行繼代培養(yǎng)。用含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染愈傷組織，再培養(yǎng)愈傷組織，以便獲得抗蟲的轉(zhuǎn)基因水稻。影響愈傷組織能否成功再生出植株的因素有：培養(yǎng)條件如光溫、培養(yǎng)基配方如植物激素配比、以及

（答2點即可）。

答案：

（1）粘性末端；磷酸二酯鍵

（2）轉(zhuǎn)化；使CaCl2處理過的農(nóng)桿菌恢復(fù)細胞的正常狀態(tài)

（3）消毒；脫分化；水稻的基因型、愈傷組織繼代的次數(shù)

解析：

（1）用限制性核酸內(nèi)切酶EcoR

I酶切含某抗蟲基因的載體和含卡那霉素抗性基因的載體pBI121，可在切口處形成黏性末端。用DNA連接酶連接含抗蟲基因的DNA片段與切割后的pBI121，可在兩個片段相鄰處形成磷酸二酯鍵，獲得重組質(zhì)粒。

（2）取CaCl2處理過的農(nóng)桿菌與重組質(zhì)粒在離心管內(nèi)進行混合等操作，使重組質(zhì)粒進入農(nóng)桿菌，完成轉(zhuǎn)化實驗。在離心管中加入液體培養(yǎng)基，置于搖床慢速培養(yǎng)一段時間，其目的是：使CaCl2處理過的農(nóng)桿菌恢復(fù)細胞的正常狀態(tài)。

（3）在進行植物組織培養(yǎng)時，取田間不同品種水稻的幼胚，先進行消毒，以清除其表面附著的微生物；然后接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，幼胚發(fā)生脫分化形成愈傷組織，并進行繼代培養(yǎng)。影響愈傷組織能否成功再生出植株的因素有:培養(yǎng)條件如光溫、培養(yǎng)基配方如植物激素配比、以及水稻的基因型、愈傷組織繼代的次數(shù)等。

植物組織培養(yǎng)影響因素

在植物離體培養(yǎng)過程中，影響植物細胞形態(tài)發(fā)生的因素有外因和內(nèi)因。外因是培養(yǎng)植物細胞的培養(yǎng)基和環(huán)境條件。內(nèi)因是植物細胞遺傳性和生理狀態(tài)。

1.培養(yǎng)基與環(huán)境條件

（1）培養(yǎng)基

培養(yǎng)基中的生長調(diào)節(jié)類物質(zhì)對植物細胞形態(tài)的發(fā)生有較大的影響。在對根和芽分化的研究中發(fā)現(xiàn)，根或芽分化取決于生長素和細胞分裂素的配比，這就是著名的控制器官分化的激素模式（如圖）。

一般情況下，對器官的發(fā)生不僅取決于兩種激素的配比，還與濃度有關(guān)。當然，其他激素也有一定的作用。

培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分對器官分化和胚狀體的形成也有重要的作用。例如，生根培養(yǎng)對無機鹽離子的要求要低一些，常用減半的MS培養(yǎng)基。糖的種類和濃度也影響器官分化和胚狀體的發(fā)生。

培養(yǎng)基的物理性質(zhì)，如pH、滲透壓、固態(tài)或液態(tài)對細胞形態(tài)的發(fā)生也有影響。培養(yǎng)基滲透壓是影響植物形態(tài)發(fā)生的重要因素，而糖對培養(yǎng)基滲透壓起決定作用。

（2）環(huán)境條件

光照和溫度對器官分化和胚狀體形成有重要影響。不同的組織培養(yǎng)對光的要求不同，影響器官分化和胚狀體形成的光包括光強、光周期和光質(zhì)。通常許多培養(yǎng)物需要1000－1500lx光強。光照長度對正常光周期反應(yīng)的植物器官分化有影響。不同光質(zhì)中，紅光有利于光生長。

一般培養(yǎng)的溫度25度左右，溫度在適當范圍內(nèi)高低變化對器官發(fā)生的數(shù)量和質(zhì)量有影響。

2.培養(yǎng)材料的生理條件

（1）器官的組織類型

不同植物的器官組織產(chǎn)生的愈傷組織器官分化明顯不同，且差異很大。這是有材料的基因型決定的，如胡蘿卜、煙草等培養(yǎng)物容易誘導(dǎo)器官形成，而棉花、豆類等較難。同種植物不同器官組織形成的愈傷組織，一般在器官發(fā)生上差異不顯著。

（2）個體發(fā)育的年齡

外植體幼嫩比較容易形成愈傷組織，也容易誘導(dǎo)器官分化。

（3）愈傷組織生理狀態(tài)

愈傷組織年齡對器官分化也有影響，一般愈傷組織繼代次數(shù)越多，器官的分化能力越低。

第四篇：論植物組織培養(yǎng)學(xué)習(xí)心得

論植物組織培養(yǎng)學(xué)習(xí)心得

摘要：經(jīng)過大三一個學(xué)期，我有幸選修了一門有關(guān)于植物組織培養(yǎng)的課程，作為一個人文院法學(xué)學(xué)生，我對于理科，尤其是農(nóng)學(xué)方面了解甚淺。我懷著無比激動和忐忑的心情上了這門課，畢竟對我來說這就像是開啟了一個新世界的大門，所有一些知識都對我來說是新鮮的。經(jīng)過一個學(xué)期的學(xué)習(xí)，我也掌握了一些植物組織培養(yǎng)方面的知識，雖然說并不是太多，但是我覺得這都對我以后的發(fā)展和開闊視野都提供了很大的幫助。

關(guān)鍵詞：植物培養(yǎng)；植物組織與法學(xué)的關(guān)系；對自己的幫助

一、植物組織培養(yǎng)的學(xué)習(xí)內(nèi)容

1、組織培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)，主要的原因有兩個，第一個是為了基因轉(zhuǎn)化做基礎(chǔ)，還有一點是為了開發(fā)藥用植物。

植物組織培養(yǎng)概念又叫離體培養(yǎng)，指從植物體分離出符合需要的組織。器官或細胞，原生質(zhì)體等，通過無菌操作，在人工控制條件下進行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟價值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。植物組織培養(yǎng)概念（狹義）指用植物各部分組織，如形成層、薄壁組織、葉肉組織、胚乳等進行培養(yǎng)獲得再生植株，也指在培養(yǎng)過程中從各器官上產(chǎn)生愈傷組織的培養(yǎng)，愈傷組織再經(jīng)過再分化形成再生植物。

它的作用大致分為三點：①組織培養(yǎng)是研究植物生長和分化規(guī)律的重要手段 組織培養(yǎng)是在人工控制條件下培養(yǎng)外植體再生器官或植株的技術(shù)，可以在不受植株體其它部分干攏下研究被培養(yǎng)部分生長和分化的規(guī)律，并可以利用各種培養(yǎng)條件影響它們的發(fā)育進程。②組織培養(yǎng)是開展生物工程的基本技術(shù) 各種基因轉(zhuǎn)移和基因重組技術(shù)是組織培養(yǎng)基礎(chǔ)上建應(yīng)的。③組織培養(yǎng)可快速繁殖植物種苗 目前組織培養(yǎng)在無性系的快速繁殖、無病毒種苗培育、新品種的選育、人工種子和種質(zhì)保存、藥用植物和次生物質(zhì)的工業(yè)化生產(chǎn)等方面的應(yīng)用已十分廣泛。

2，馬鈴薯的脫毒

脫毒種薯是指馬鈴薯種薯經(jīng)過一系列技術(shù)措施清除薯塊體內(nèi)的病毒后，獲得的無病毒或極少有病毒侵染的種薯，它具有早熟、產(chǎn)量高、品質(zhì)好等優(yōu)點。馬鈴薯的產(chǎn)量和質(zhì)量與種薯密切相關(guān)。種薯不行，產(chǎn)量和質(zhì)量就會大打折扣，病毒一旦侵入馬鈴薯植株和塊莖，就會引起馬鈴薯嚴重退化，并產(chǎn)生各種病癥，導(dǎo)致馬鈴薯產(chǎn)量大幅下降。因此，要經(jīng)過一系列物理、化學(xué)、生物等技術(shù)清除薯塊體內(nèi)病毒的種薯。這項技術(shù)我國早在6年前就在馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)推行，通過這項技術(shù)可以實現(xiàn)大田平均增產(chǎn)30%—50%。

那么到底是怎么脫毒的呢？首先，應(yīng)該做的是取材與消毒。將欲脫毒的品種塊莖催芽,芽長4～5cm時,剪芽并剝?nèi)ネ馊~,自來水下沖洗40min,于無菌室內(nèi)用漂白粉溶液消毒后,無菌水沖洗2～3次。其次第二個就是應(yīng)該剝離和接種：在無菌室內(nèi),于40倍的解剖鏡下,剝?nèi)?個葉原基的莖尖,接種于MS莖尖培養(yǎng)基的試管中。試管中的MS莖尖培養(yǎng)基包括大量元素、微量元素、有機成分和生長素、細胞分裂素、蔗糖和瓊脂,pH值為5.8,經(jīng)高壓滅菌后使用,每試管接種1個莖尖。再次是有一個合適的培養(yǎng)條件，接種的莖尖培養(yǎng)于25℃、1500～3000lx光照條件下培養(yǎng)室內(nèi),3個月則長成3～4片葉的小植株。在無菌條件下,進行切段擴繁1次,取部分苗進行病毒檢測。最后是病毒檢測，病毒檢測是莖尖脫毒不可缺少的步驟,常用鑒別寄主即指示植物或血清學(xué)方法進行檢測。經(jīng)多次檢測,及時淘汰血清學(xué)陽性反應(yīng)或在指示植物上有癥狀的莖尖苗,無任何反應(yīng)的莖尖苗即脫毒苗用作繁殖。

3，植物組織培養(yǎng)應(yīng)用在哪幾個方面？第一點是植物組織培養(yǎng)是轉(zhuǎn)基因技術(shù)不可或缺的技術(shù)。在我們現(xiàn)代科技，轉(zhuǎn)基因技術(shù)是現(xiàn)代科技必不可缺的一項技術(shù)，它應(yīng)用于現(xiàn)代生活的各個領(lǐng)域。尤其在植物組織培養(yǎng)方面很需要轉(zhuǎn)基因技術(shù)。第二點，染色體不同倍性的多倍體植物產(chǎn)生。第三點是雜交離體培養(yǎng)可以克服受精前的障礙，比如說對于幼胚的培養(yǎng)，體細胞的融合。第四點是對植物進行的脫毒。對植物進行一系列的清除措施來使植物能大幅度的提高產(chǎn)量和植物的等級，讓植物長得更加健康。例如馬鈴薯，草莓，蘋果，橘子都可以進行脫毒。第五點是節(jié)約地面積，并不受季節(jié)的限制。在我們學(xué)習(xí)過植物組織培養(yǎng)之后，我們通過技術(shù)的學(xué)習(xí)，可以對植物的種植面積進行更好的分配，而且也可以種植一些耐寒植物等都可以脫離季節(jié)的限制，讓我們可以一年四季吃到新鮮的蔬菜與水果。第六點對人工種子的生產(chǎn)。人工種子是細胞工程技術(shù)，將植物組織培養(yǎng)發(fā)育到胚狀體的狀態(tài)，包埋于含有營養(yǎng)的人工種皮中。人工種子有繁殖速度快，結(jié)構(gòu)完整；體細胞胚是由無性繁殖體系產(chǎn)生的，因而可以固定雜種；生產(chǎn)人工種子不受季節(jié)限制，可能更快地培養(yǎng)出新品種來還可以在凝膠包裹物里加入天然種子可能沒有的有利成分，使人工種子具有更加好的營養(yǎng)供應(yīng)和抵抗疾病的能力，從而獲得更加茁壯生長的可能性等特點。還有一些例如開發(fā)植物種植資源，開發(fā)植物的藥用價值，有利于基因研究等這些應(yīng)用。所以說我們需要認真學(xué)習(xí)植物組織培養(yǎng)。

4，有關(guān)于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)條件

首先最基本的條件是做實驗的植物培養(yǎng)外植體細胞必須具有全能性，然后就是培養(yǎng)室內(nèi)的溫度要求一般要控制在25度，最高不要高于27度，最低也不要低于23度的室內(nèi)條件，這樣分化生長才能表現(xiàn)良好。光照也是組織培養(yǎng)的一個重要條件，一般如果光照比較強，那么植物會表現(xiàn)的粗壯，但是如果光照條件較弱的話植物會變得細長。然后就是植物的濕度也需要保持在一個合理的濕度，濕度太高或者太低都會影響作物的積極生長。

5，植物組織培養(yǎng)時的污染和預(yù)防

(1)改善環(huán)境條件。接種室與培養(yǎng)室要定期做好消毒與凈化，接種前工作臺或接種箱要開紫外燈30min以上。培養(yǎng)室的相對濕度應(yīng)控制在70％左右，相對濕度太高時可以用抽濕機抽濕。（2）接種人員的培訓(xùn)很關(guān)鍵，應(yīng)嚴格執(zhí)行無菌操作，對接種中所需的工具，必須經(jīng)嚴格滅菌后才能使用。在超凈工作臺的操作區(qū)內(nèi)，不要放入過多的待用材料，避免氣流被擋住。還要定期檢查超凈工作臺的工作質(zhì)量。(3)嚴查接種材料。淘汰被真菌與細菌污染的接種材料。（4）經(jīng)常檢查消毒鍋的滅菌質(zhì)量，若發(fā)現(xiàn)問題要立即檢修。消毒鍋的壓力表降到零后不能馬上出鍋，因冷熱空氣作用產(chǎn)生的負壓效應(yīng)，使外界環(huán)境的冷空氣倒吸入已滅菌的培養(yǎng)瓶內(nèi)引起真菌污染，為避免該現(xiàn)象的發(fā)生，消毒后培養(yǎng)瓶應(yīng)待鍋內(nèi)稍冷卻后才出鍋。（5）檢查培養(yǎng)容器是否存在問題。培養(yǎng)容器封口多用塑料蓋、膠塞、棉塞、薄膜等，塑料蓋用久了易老化，密封性差，也會造成污染。林盛等配制了一種“4號消毒液”對培養(yǎng)瓶瓶口進行消毒處理，可以把培養(yǎng)基污染率控制在0.3％以下。

二、植物組織培養(yǎng)與法學(xué)內(nèi)容的聯(lián)系與幫助 通過一個學(xué)期的植物組織培養(yǎng)課程的學(xué)習(xí)，我也學(xué)到了許多知識，也開闊了我的眼界。我覺得任何專業(yè)的學(xué)習(xí)都是對我們有幫助的，而且總是能結(jié)合起來。就像是植物組織培養(yǎng)和我們法學(xué)一樣。

比如，在人們進行農(nóng)作物大面積的種植時，總會有飛機進行大面積的農(nóng)藥的噴灑，這在噴灑的時候有時候會對一些河流，樹木等進行了污染，也許也會對一些人的健康有影響。因此國家就會出臺一系列的法律法規(guī)和強制性的規(guī)定來對農(nóng)藥進行一些規(guī)范。例如我國的環(huán)境保護法就做出了一些相應(yīng)的規(guī)定來保護環(huán)境。還有就是一些作物進行的脫毒也是我國國家對我國公民的人權(quán)進行保護的體現(xiàn)。這樣才能保持我國GDP的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展，促進我國的法律事業(yè)的進步。

三、總結(jié)

說實在話，對于植物組織培養(yǎng)與法學(xué)的聯(lián)系在我看來是非常有限的，并不像是其他動科院，農(nóng)學(xué)院，林學(xué)院那些專業(yè)一樣有著千絲萬縷的聯(lián)系。但是我覺得在一個學(xué)期的學(xué)習(xí)之后，我想我也學(xué)到了很多有意思的東西，例如脫毒繁殖。這也屬于我對植物的一個興趣愛好，讓我以后能了解到植物是怎樣培育出來的，在培育的時候需要注意那些東西，我覺得這就是好事。從另一方面，我也了解到了對于植物培養(yǎng)的科研人員的辛苦。有時候需要冒著那么大的風(fēng)險去采一些稀奇的植物，去走遍祖國的山山水水，為我們國家的植物培養(yǎng)做出那么大的犧牲。所以我要為我們默默付出，為祖國揮灑汗水的科研人員致敬！

第五篇：植物組織培養(yǎng)教學(xué)設(shè)計

植物組織培養(yǎng)教學(xué)設(shè)計

植物組織培養(yǎng)教學(xué)設(shè)計

一、滅菌

滅菌是組織培養(yǎng)重要的工作之一。初學(xué)者首先要清楚有菌和無菌的范疇。有菌的范疇是：凡是暴露在空氣中的物體，接觸自然水源的物體，至少它的表面都是有菌的。依此觀點，無菌室等未經(jīng)處理的地方、超凈臺表面、簡單煮沸的培養(yǎng)基、我們使用的刀、剪在未處理之前、我們身體的整個外表及與外界相連的內(nèi)表，如整個消化道、呼吸道，即我們呼出的氣體、培養(yǎng)容器無論洗得多干凈等等都是有菌的。

常用的滅菌方法可分為物理的和化學(xué)的兩類，物理方法如干熱（烘燒和灼燒）、濕熱（常壓或高壓蒸煮）、射線處理（超聲波、微波）、過濾、清洗和大量無菌水沖洗等措施。化學(xué)方法是使用升汞、甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、來蘇兒、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學(xué)藥品處理。這些方法和藥劑要根據(jù)工作中的不同材料不同目的適當選用。1．培養(yǎng)基用濕熱滅菌? 培養(yǎng)基在制備后的24小時內(nèi)完成滅菌工序。高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。

注意完全排除鍋內(nèi)空氣，使鍋內(nèi)全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排凈空氣，使鍋內(nèi)均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是：關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到0.05MPa時，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。

關(guān)閥再通電后，壓力表上升達到0.1MPa時,開始計時，維持壓力0.1～0.15MPa 20分鐘。2.用于無菌操作的器械采用灼燒滅菌 3．植物材料表面用消毒劑滅菌

從外界或室內(nèi)選取的植物材料，都不同程度地帶有各種微生物。這些污染源一旦帶入培養(yǎng)基，便會造成培養(yǎng)基污染。因此植物材料必須經(jīng)嚴格的表面滅菌處理，再經(jīng)無菌操作手續(xù)接到培養(yǎng)基上，這一過程叫做接種。接種的植物材料叫做外植體。

首先，將采來的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細洗干凈，如用適當?shù)乃⒆拥人⑾矗驳牟牧嫌霉蔚豆?。把材料切割成適當大小，即滅菌容器能放入為宜。置自來水龍頭下流水沖洗幾分鐘至數(shù)小時，沖洗時間視材料清潔程度而宜。易漂浮或細小的材料，可裝入紗布袋內(nèi)沖洗。流水沖洗在污染嚴重時特別有用。

洗時可加入洗衣粉清洗，濃度可按100ml 水加半角匙洗衣粉為宜，大約浸洗5分鐘，然后再用自來水沖凈洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著在植物表面的污物，除去脂質(zhì)性的物質(zhì)，便于滅菌液的直接接觸。當然，最理想的清洗物質(zhì)是表面活性物質(zhì)－吐溫。

第二步是對材料的表面浸潤滅菌。要在超凈臺或接種箱內(nèi)完成，準備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無菌水、手表等。用70%酒精浸10-30秒。它具有使植物材料表面被浸濕的作用。70%酒精穿透力強，也很易殺傷植物細胞，所以浸潤時間不能過長。有一些特殊的材料，如果實、花蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗，多層鱗片的休眠芽等等，以及主要取用內(nèi)部的材料，也可只用70%酒精處理稍長的時間。處理完的材料在無菌條件下，待酒精蒸發(fā)后再剝除外層，取用內(nèi)部材料。

第三步是用滅菌劑處理。表面滅菌劑的種類較多，可根據(jù)情況選取1～2 種使用。

表4－2 常用滅菌劑使用濃度及效果比較表滅菌劑

使用濃度

持續(xù)時間(min)

去除的難易

效果次氯酸鈣

9～10%

5～30

易

很好次氯酸鈉

2% 5～30

易

很好氯化汞

0．1～1%

5～8

較難

最好抗菌素

4～50mg/L

30～60

中

較好