附件12

白酒中甲醇的快速檢測

（KJ201912）

范圍

本方法規(guī)定了白酒中甲醇的快速檢測方法。

本方法第一法適用于白酒（酒精度18%

vol～68%

vol）中甲醇的快速檢測，第二法適用于白酒（酒精度34%

vol～68%

vol）中甲醇的快速檢測。

第一法

變色酸法

原理

樣品中的甲醇在磷酸溶液中，被高錳酸鉀氧化為甲醛，用偏重亞硫酸鈉除去過量的高錳酸鉀。甲醛在硫酸條件下與變色酸反應(yīng)生成藍(lán)紫色化合物。通過與甲醇對照液比較，對樣品中甲醇含量進(jìn)行判定。

試劑和材料

方法中所用試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純，水為GB

/T

6682規(guī)定的三級水。

3.1

試劑

3.1.1

高錳酸鉀（KMnO4）。

3.1.2

磷酸（H3PO4）。

3.1.3

偏重亞硫酸鈉（Na2S2O5）。

3.1.4

硫酸（H2SO4）。

3.1.5

變色酸鈉（C10H6Na2O8S2）。

3.1.6

乙醇（C2H6O）。

3.1.7

5%乙醇（體積分?jǐn)?shù)）：吸取乙醇5

mL，置于100

mL容量瓶，加水稀釋至刻度。

3.1.8

高錳酸鉀-磷酸溶液（30

g/L）：稱取3.0

g高錳酸鉀，溶于100

mL磷酸-水（15+85）溶液。

3.1.9

偏重亞硫酸鈉溶液（100

g/L）：稱取10.0

g偏重亞硫酸鈉，溶于100

mL水。

3.1.10

變色酸顯色劑：稱取0.1

g變色酸鈉溶于25

mL水中，緩慢加入75

mL

硫酸，并用玻璃棒不斷攪拌，放冷至室溫。

3.2

參考物質(zhì)

甲醇參考物質(zhì)中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1，純度≥99%。

表1

甲醇中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量

中文名稱

英文名稱

CAS登錄號

分子式

相對分子質(zhì)量

甲醇

Methanol

67-56-1

CH3OH

32.04

3.3

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（1

g/L）：稱取0.1

g（精確至0.001

g）甲醇參考物質(zhì)于100

mL容量瓶中，用5%乙醇稀釋至刻度，混勻。

3.4

材料

甲醇快速檢測試劑盒：適用基質(zhì)為白酒（酒精度18～68%

vol），需在陰涼、干燥、避光條件下保存。

儀器和設(shè)備

4.1

電子天平：感量0.001

g。

4.2

量筒：50

mL，100

mL。

4.3

移液器：1

mL，5

mL。

4.4

酒精計(jì)：分度值為1%

vol。

4.5

渦旋振蕩器。

4.6

水浴鍋。

4.7

環(huán)境溫度：10℃～30℃。

分析步驟

5.1

待測液制備

5.1.1

酒精度的測定：取潔凈、干燥的100

mL量筒，注入100

mL樣品，靜置數(shù)分鐘，待酒中氣泡消失后，放入潔凈、擦干的酒精計(jì)，輕輕按一下，不應(yīng)接觸量筒，平衡約5

min，水平觀測，讀取與彎月面相切處的刻度示值。

5.1.2

樣品稀釋：根據(jù)酒精計(jì)示值吸取對應(yīng)體積的樣品，置于10

mL比色管中，補(bǔ)水至10

mL（參見表2），混勻。

表2

不同酒精度樣品吸取體積表

酒精計(jì)示值

(%

vol)

樣品吸取體積

(mL)

補(bǔ)水體積

(mL)

18～22

2.5

7.5

23～27

2.0

8.0

28～32

1.7

8.3

33～36

1.5

8.5

37～41

1.3

8.7

42～45

1.2

8.8

46～53

1.0

9.0

54～60

0.9

9.1

61～68

0.8

9.2

5.1.3

顯色：吸取稀釋后的樣品溶液（5.1.2）1.0

mL，置于10

mL比色管中，加入高錳酸鉀-磷酸溶液0.5

mL，混勻，密塞，靜置15

min。加入0.3

mL偏重亞硫酸鈉溶液，混勻，使試液完全褪色。沿比色管壁緩慢加入5

mL變色酸顯色劑，密塞，混勻，置于70℃水浴中，顯色20

min后取出，迅速冷卻至室溫，即得待測液。每批測試應(yīng)吸取1

mL

5%乙醇同5.1.3“加入高錳酸鉀-磷酸溶液0.5

mL”起操作，隨行全試劑空白試驗(yàn)。

5.2

甲醇對照液制備

根據(jù)待測樣品的分類（糧谷類或其他類），吸取對應(yīng)體積（參見表3）的甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.3），置于10

mL比色管中，補(bǔ)5%乙醇至10

mL，混勻。吸取上述溶液1.0

mL，置于10

mL比色管中，同5.1.3“加入高錳酸鉀-磷酸溶液0.5

mL”起操作，制得甲醇對照液。

表3

標(biāo)準(zhǔn)溶液吸取體積表

待測樣品分類

標(biāo)準(zhǔn)溶液吸取體積(mL)

糧谷類

0.3

其他類

1.0

5.3

判讀

將待測液（5.1）與甲醇對照液（5.2）進(jìn)行目視比色，10

min內(nèi)判讀結(jié)果。應(yīng)進(jìn)行平行試驗(yàn)，且兩次判讀結(jié)果應(yīng)一致。

結(jié)果判定要求

觀察待測液顏色，與甲醇對照液比較判讀樣品中甲醇的含量。顏色深于對照液者為陽性，淺于對照液者為陰性。為盡量避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果，判讀時(shí)遵循就高不就低的原則。

性能指標(biāo)

7.1

檢測限

0.4

g/L

（以100%酒精度計(jì)）。

7.2

判定限

糧谷類：0.6

g/L

（以100%酒精度計(jì)）；其他類：2.0

g/L

（以100%酒精度計(jì)）。

7.3

靈敏度

≥95%。

7.4

特異性

≥85%。

7.5

假陰性率

≤5%。

7.6

假陽性率

≤15%。

注：性能指標(biāo)計(jì)算方法見附錄A。

其他

本方法所述試劑及操作步驟等是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時(shí)不作限定。方法使用者在使用替代試劑或操作步驟前，須對其進(jìn)行考察，應(yīng)滿足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)。

本方法的參比方法為GB

5009.266《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)

食品中甲醇的測定》。

為減少乙醇量對顯色的干擾，本方法中待測液和對照液的乙醇量為5%。

本方法中采用的高錳酸鉀-磷酸溶液（3.1.8）、變色酸顯色劑（3.1.10）久置會變色失效，建議方法使用者考察穩(wěn)定性或臨用新配。

采用本方法，酒精度為非整數(shù)的樣品，為避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果，建議參照表2吸取酒精度整數(shù)部分對應(yīng)體積。

當(dāng)目視不能判定顏色深淺時(shí)，可采用分光光度計(jì)測定待測液與甲醇對照液570

nm處的吸光度進(jìn)行比較判定。

第二法

乙酰丙酮法

原理

樣品中的甲醇在磷酸溶液中，被高錳酸鉀氧化為甲醛，用草酸除去過量的高錳酸鉀。甲醛在過量銨鹽條件下與乙酰丙酮反應(yīng)生成黃色化合物。通過與甲醇對照液比較，對樣品中甲醇含量進(jìn)行判定。

試劑和材料

方法中所用試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純，水為GB

/T

6682規(guī)定的三級水。

10.1

試劑

10.1.1

高錳酸鉀-磷酸溶液：同3.1.8。

10.1.2

草酸：無水草酸（H2C2O4）或含2分子結(jié)晶水的草酸（H2C2O4·2H2O）。

10.1.3

乙酰丙酮（C5H8O2）。

10.1.4

乙酸銨（C2H7O2N）。

10.1.5

冰乙酸（C2H4O2）。

10.1.6

50%乙醇（體積分?jǐn)?shù)）：量取乙醇（3.1.6）50

mL，置于100

mL容量瓶，加水稀釋至刻度。

10.1.7

草酸溶液（50

g/L）：稱取5.0

g無水草酸或7.0

g含2分子結(jié)晶水的草酸，溶于100

mL水。

10.1.8

乙酰丙酮溶液：稱取乙酸銨25.0

g，加水70

mL使溶解，加冰乙酸3

mL及乙酰丙酮0.25

mL，加水稀釋至100

mL，用力搖勻。臨用現(xiàn)配。

10.2

參考物質(zhì)

同3.2。

10.3

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（1

g/L）：稱取0.1

g（精確至0.001g）甲醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于100

mL容量瓶中，用50%乙醇稀釋至刻度，混勻。

10.4

材料

甲醇快速檢測試劑盒：適用基質(zhì)為白酒（酒精度34%

vol～68%

vol），需在陰涼、干燥、避光條件下保存。

儀器和設(shè)備

同4。

分析步驟

12.1

待測液制備

12.1.1

酒精度的測定：同5.1.1。

12.1.2

顯色：根據(jù)酒精計(jì)示值吸取對應(yīng)體積的樣品，置于10

mL比色管中，補(bǔ)乙醇和水至2.0

mL（參見表4），混勻。加入高錳酸鉀-磷酸溶液1.0

mL，混勻，密塞，靜置30

min。加入草酸溶液1.0

mL，混勻，密塞，置沸水浴中使其褪色，取出冷卻至室溫。加入乙酰丙酮溶液2.0

mL，混勻，密塞，置沸水浴中，顯色30

min后取出，迅速冷卻至室溫，即得待測液。每批測試應(yīng)吸取2

mL

50%乙醇同12.1.2“加入高錳酸鉀-磷酸溶液1.0

mL”起操作，隨行全試劑空白試驗(yàn)。

表4

不同酒精度樣品吸取體積表

酒精計(jì)示值

(%

vol)

樣品吸取體積(mL)

補(bǔ)乙醇體積

(mL)

補(bǔ)水體積

(mL)

34～35

1.5

0.5

0.0

36～40

1.3

0.5

0.2

41～44

1.2

0.5

0.3

45～52

1.0

0.5

0.5

53～58

0.9

0.5

0.6

59～65

0.8

0.5

0.7

66～68

0.7

0.5

0.8

12.2

甲醇對照液制備

根據(jù)待測樣品的分類（糧谷類或其他類），吸取對應(yīng)體積（參見表5）的甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（10.3），補(bǔ)50%乙醇至2.0

mL，混勻后同12.1.2“加入高錳酸鉀-磷酸溶液1.0

mL”起操作，制得甲醇對照液。

表5

標(biāo)準(zhǔn)溶液吸取體積表

待測樣品分類

標(biāo)準(zhǔn)溶液吸取體積(mL)

糧谷類

0.6

其他類

2.0

12.3

判讀

將待測液（12.1）與甲醇對照液（12.2）進(jìn)行目視比色，10

min內(nèi)判讀結(jié)果。應(yīng)進(jìn)行平行試驗(yàn)，且兩次判讀結(jié)果應(yīng)一致。

結(jié)果判定要求

同6。

性能指標(biāo)

14.1

檢測限

0.6

g/L

（以100%酒精度計(jì)）

14.2

判定限

糧谷類：0.6

g/L

（以100%酒精度計(jì)）；其他類：2.0

g/L

（以100%酒精度計(jì)）

14.3

靈敏度

≥95%。

14.4

特異性

≥85%。

14.5

假陰性率

≤5%。

14.6

假陽性率

≤15%。

注：性能指標(biāo)計(jì)算方法見附錄A。

其他

本方法所述試劑及操作步驟等是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時(shí)不作限定。方法使用者在使用替代試劑或操作步驟前，須對其進(jìn)行考察，應(yīng)滿足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)。

本方法的參比方法為GB

5009.266《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)

食品中甲醇的測定》。

為減少乙醇量對顯色的干擾，本方法中待測液和對照液的乙醇量為50%。

采用本方法，酒精度為非整數(shù)的樣品，為避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果，建議參照表4吸取酒精度整數(shù)部分對應(yīng)體積。

當(dāng)目視不能判定顏色深淺時(shí)，可采用分光光度計(jì)測定待測液與甲醇對照液415

nm處的吸光度進(jìn)行比較判定。

附錄A

性能指標(biāo)計(jì)算表

樣品情況a

檢測結(jié)果b

總數(shù)

陽性

陰性

陽性

N11

N12

N1.=N11+N12

陰性

N21

N22

N2.=N21+N22

總數(shù)

N.1=N11+N21

N.2=N12+N22

N=N1.+N2.或N.1+N.2

顯著性差異（c2）

c2=（|N12-N21|-1）2/（N12+N21），自由度（df）=1

靈敏度（p+，%）

p+=N11/N1.特異性（p-，%）

p-=N22/N2.假陰性率（pf-，%）

pf-=N12/N1.=100-靈敏度

假陽性率（pf+，%）

pf+=N21/N2.=100-特異性

相對準(zhǔn)確度，%c

（N11+N22）/(N1.+N2.)

注：

a由參比方法檢驗(yàn)得到的結(jié)果或者樣品中實(shí)際的公議值結(jié)果；

b由待確認(rèn)方法檢驗(yàn)得到的結(jié)果。靈敏度的計(jì)算使用確認(rèn)后的結(jié)果。

N：任何特定單元的結(jié)果數(shù)，第一個(gè)下標(biāo)指行，第二個(gè)下標(biāo)指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。

C為方法的檢測結(jié)果相對準(zhǔn)確性的結(jié)果，與一致性分析和濃度檢測趨勢情況綜合評價(jià)。

本方法負(fù)責(zé)起草單位：四川省食品藥品檢驗(yàn)檢測院

驗(yàn)證單位：陜西省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、湖北省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、南昌市食品藥品檢驗(yàn)所

主要起草人：余曉琴、劉美、姚歡、李澍才、陳小泉、杜鋼