第一篇：驗證溶血對血清檢測NSE的影響

驗證溶血對血清檢測NSE的影響

彭靜

合肥市第八人民醫(yī)院 檢驗科

[摘要]目的：探討溶血程度對血清檢測NSE的影響程度。方法：采用Elecsys 2010電化學發(fā)光儀，檢測正常人血清標本及不同溶血程度的標本NSE含量。結果：當血清中Hb含量≥0.685g/L時，就會使血清NSE出現(xiàn)假陽性，每增加1g/L的血紅蛋白，就會使NSE含量增加23.764 ug/l。結論：溶血對血清檢測NSE存在嚴重影響，NSE含量隨溶血程度的增加而增加，臨床檢測NSE要杜絕溶血標本。

[關鍵詞]溶血

NSE

Hb含量

神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)為糖酵解關鍵酶,在臨床上應用非常廣泛,可作為神經(jīng)元損傷的標志物[ 1 ] ,也可作為腫瘤標志物用于神經(jīng)母細胞瘤、小細胞肺癌、垂體腺瘤等疾病的診斷[2 ]。由于血小板和紅細胞中存在其同工酶，因而標本溶血，紅細胞中可釋放大量的NSE ,因此溶血可導致結果偏高[3]，嚴重影響檢測結果的真實性和可靠性。本文重點驗證不同溶血標本對NSE檢測的影響程度，從而給臨床醫(yī)生很好的判斷和依據(jù)。1 資料與方法 1.1 儀器與試劑

①瑞士羅氏公司生產(chǎn)的Elecsys 2010全自動電化學發(fā)光分析儀及配套NSE原裝試劑，質控液。

②瑞典博爾醫(yī)療有限公司生產(chǎn)的MEDONIC CA620 全自動血細胞分析儀及配套試劑。

1.2 檢測對象及方法

①抽取正常人（體檢各項指標均正常）全血7ml,其中5 ml置于促凝膠管 ml置于EDTA-K2抗凝管，將促凝膠管于離心機3000r/m離心5分鐘，立即分離血清，將血清標本分成10等份，每份200ul,進行編號。

②將抗凝全血混勻，用CA620血細胞分析儀，檢測其血紅蛋白（Hb）含量。

③用微量加樣器，分別吸取0.1 ul，0.2 ul，0.5 ul，0.8 ul，1.0 ul, 1.5 ul，2 ul,5 ul，10 ul抗凝全血，置于2-10號管，混勻。將10個樣本置于-20℃冷凍2小時，使其充分溶血。

④用Elecsys 2010分析儀檢測NSE原裝質控，確定其儀器狀態(tài)是否穩(wěn)定。將1-10號樣本分別置于Elecsys 2010檢測NSE含量。

1.3 結果判斷

NSE原裝質控范圍9.58-15.60 ug/l ,正常人群參考范圍為0.00-16.30 ug/l。2 結果

全血HB含量為145 g/l，NSE原裝質控測定值為11.61 ug/l，在控，儀器處于穩(wěn)定狀態(tài)。

1-10號血清管HB含量及其測得NSE值見下表

加入全血量 0

0.1

0.2

0.5

0.8

1.0

1.5

2.0

5.0

10.0（ul）

Hb含量

0 0.076 0.145 0.363 0.580 0.725 1.087 1.450 3.625

7.250（g/l）

NSE值

9.81 11.88 13.96 20.60

24.25

29.86 37.06 50.89 92.55 182.10（ug/l）討論

烯醇化酶是催化糖原酵途徑中甘油分解的最后的酶。由3個獨立的基因片段編碼3種免疫學性質不同的亞基α、β、γ，組成5種形式的同工酶αα、ββ、γγ、αγ、βγ。二聚體是該酶分子的活性形式，γ亞基同工酶存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內分泌組織，稱為神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）。因為NSE參與了糖酵解，使癌腫組織糖酵解作用增強，細胞增殖周期加快，細胞內的NSE釋放進入血液增多，導致此酶在血清內含量增多，小細胞肺癌也是一種分泌NSE的神經(jīng)內分泌性質的腫瘤。所以，NSE是小細胞肺癌，神經(jīng)母細胞瘤最敏感、最特異的腫瘤標志物[4 ].其中，NSE水平升高以小細胞肺癌(SCLC)最為顯著(86 72± 98 2 μg L),靈敏度為 82 4 % ,特異性為 95 5 % [5]。另外，NSE在Whims瘤、乳腺癌、胃癌、淋巴瘤中也可有表達，68.7%的轉移性精原細胞瘤患者在行睪丸切除術前血清NSE水平可見升高。所以NSE檢測的準確性對臨床診斷非常重要。而在紅細胞、漿細胞和血小板中也有NSE存在，若靜脈穿刺抽血后的60分鐘內未進行紅細胞分離，那么NSE便會釋放到血清中，或由于抽血不順利等其他原因造成標本溶血都會對檢測結果影響非常大，本試驗結果顯示，當正常血清NSE為9.81 ug/l，Hb濃度為0.363 g/l時，NSE濃度就會出現(xiàn)假陽性（20.60 ug/l），每增加1g/L的血紅蛋白，就會使NSE含量增加23.764 ug/l。按照這個比例，即使正常血清檢測值為0，當Hb濃度≥0.685 g/l，NSE就會出現(xiàn)假陽性（≥16.3 ug/l）。而含有0.685 g/l的Hb，血清肉眼可見微紅色。所以當臨床采集標本困難，尤其是采集兒童患者，造成標本溶血，而又必須檢測時，臨床醫(yī)生和檢驗人員可以根據(jù)溶血程度來大致判斷NSE的真實水平。當然，規(guī)范采血、及時分離血清，避免溶血，才能得出準確而可靠的腫瘤指標含量。

[1] De Giorgio CM.Neurom-specific enolase,marker of acute neuronal injury,is increased in complex partial-status epilepticus [J].Epilepsia,1996,37(7):606-609 [2] 晏勇，王學峰，陳陽美，等.癲癇患者血清神經(jīng)元特異性烯醇酶的測定 [J]；中華神經(jīng)科雜志；1999，32（1）：34-36.[3] 張亞松;肖登巖;麥富巨.溫度、時間及溶血對全血標本中NSE測定的影響[J];醫(yī)學臨床研究；2008，25（7）：1193-1194

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陳社安,陳斌鴻,胡維維,龐丹梅.血清NSE、CYFRA21-1檢測對肺癌診斷的臨床應用 《廣西醫(yī)學》2004年07期

第二篇：血清標本溶血對血液生化指標的影響

血清標本溶血對血液生化指標的影響45

血清標本溶血對血液生化指標的影響；李大磊1，史文華1，劉志峰1,2；1山東省天然藥物工程技術研究中心；2煙臺大學藥學院山東省煙臺市264005；摘要：目的探討血清標本溶血對血液生化檢驗結果的影；關鍵詞：溶血；生化檢驗；；Theinfluenceofhemolysiso；LIDa-lei1，SHIWen-hua1，LI；1．ShandongEngineerin

血清標本溶血對血液生化指標的影響 李大磊1，史文華1，劉志峰1,2 1山東省天然藥物工程技術研究中心 2煙臺大學藥學院 山東省煙臺市 264005 摘要：目的 探討血清標本溶血對血液生化檢驗結果的影響，為藥物安全性評價的長期毒性試驗數(shù)據(jù)的分析提供一定的依據(jù)。方法 采用全自動生化分析儀檢測10份正常大鼠血液標本在溶血前和溶血后血清葡萄糖(GLU)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐（Cre）、尿素氮(BUN)、膽固醇(CHO)、堿性磷酸酶(ALP)、總膽紅素(TBIL)、鈣（Ca++）、鎂（Mg++）、鈉（Na+）、鉀（K+）、氯（Cl-）的值，并進行了比較和統(tǒng)計分析。結果 溶血后AST、TBIL、ALT、K+的值比溶血前的值高，具有統(tǒng)計學意義；Cre的值比溶血前的值低，統(tǒng)計差異顯著；GLU、TP、ALB、BUN、CHO、ALP、Ca++、Mg++、Na+、Cl-的值溶血前后未見明顯統(tǒng)計學意義的改變。結論 溶血對血清AST、TBIL、ALTK+、Cre有明顯的干擾影響，提請在分析測定結果時注意溶血情況。

關鍵詞：溶血；生化檢驗；

The influence of hemolysis on sericem biochemical tests LI Da-lei1，SHI Wen-hua1，LIU Zhi-feng1,2 1．Shandong Engineering Research Center for Natural Drugs, Yantai, Shandong 264003 2．School of Pharmacy, Yantai University, Yantai, Shandong 264005 Abstraet：Aim To observe the influence of hemolysis on the results of biochemical tests.Methods The blood collected from the rat divided into 2 samples, one of which is to process hemolysis serum, the other is to process normal serum.The serum biochemical data were detected respectively, which include glucose(GLU), alanine aminotransferase(ALT), aspartate aminotransferase(AST), total protein(TP), albumin(ALB), creatinine(Cre), Blood uric nitrogen(BUN), cholesterol(CHO), alkaline phosphal ase(ALP), total bilinibin(TBIL), calcium(Ca++), magnesium(Mg++), natrium(Na+), kalium(K+), chlorin(Cl-).The data were treated with paired-test.Resluts The level of serum AST, TBIL, ALT and K+ increased in hemolysis samples than normal.The level of serum Cre in hemolysis samples is lower than normal.There is no significant difference in serum GLU, TP, ALB, BUN, CHO, Ca++, Mg++, Na+ and Cl-.These results indicate that hemolysis could interfere the results of serum AST, TBIL, ALT, K+ and Cre.The significance of hemolysis on serum biochemical analysis should be regarded in drug safety evaluation.Key words ：Hemolysis；Biochemical analysis 在新藥安全性評價的長期毒性試驗中，血液生化指標的分析對藥物毒性作用的了解和毒作用靶器官的判斷具有重要的意義，是評價藥物毒性的重要依據(jù)之一。

長期毒性試驗的血液生化分析具有其特殊性，例如動物尤其是小動物的采血是不可重復的；血液生化測定結果的統(tǒng)計分析受數(shù)據(jù)資料數(shù)的限制等。在工作中往往因各種原因導致標本溶血，溶血樣本不參與結果分析往往使統(tǒng)計資料數(shù)偏少，因此血清標本溶血時主要影響哪些指標，測定結果是否可以參與統(tǒng)計數(shù)據(jù)的分析，是所有藥物安全性評價工作者需要了解的問題。為了能及時客觀地分析生化指標的變化是否具有臨床意義，應當詳細了解標本溶血對各項血液生化指標的影響。目前國內尚未見標本溶血對藥物安全評價所要求的十幾項血清生化指標影響的報道，本文觀察了藥物安全評價長期毒性試驗中需要測定的生化指標在標本溶血前后檢測結果的變化，旨在為標本溶血時血液生化結果分析提供一定的參考依據(jù)，盡量增加生化測定數(shù)據(jù)的可利用性。材料與方法 1.1 動物來源 SD大鼠，清潔級。由山東綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，動物合格證號為：魯動質字D20021133。

1.2 儀器與試劑

AUTOLAB全自動生化分析儀（AMS，意大利）。血清電解質分析儀(MEDICA，美國，EASYLYTE PLUS)，試劑原裝。血糖（GLU）、谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、肌酐（Cre）、尿素氮（BUN）、膽固醇（CHO）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽紅素（TBIL）、鎂、鈣血液生化分析試劑盒，均購自中生北控生物科技股份有限公司。

1.3 溶血的血清標本的制備

取SD大鼠10只，雌雄各半。禁食不禁水12小時，用水合氯醛麻醉后腹主動脈取血6ml，分別注入兩支干燥試管各3ml。其中一支讓其自然凝固，另一支在血液凝固前用金屬棒攪拌

使其溶血，然后以3 000 r*min-1離心10min，取上清液分別為未溶血和溶血的血清標本。

1.4 生化指標的測定

用葡萄糖氧化酶法測定血清葡萄糖(GLU)、連續(xù)監(jiān)測法測定谷丙轉氨酶(ALT)和谷草轉氨酶(AST)、雙縮脲法測定總蛋白(TP)、溴甲酚綠法測定白蛋白(ALB)、苦味酸法測定肌酐（Cre）、兩點動力法測定尿素氮(BUN)、酶比色法測定膽固醇(CHO)、連續(xù)監(jiān)測法測定堿性磷酸酶(ALP)、重氮法測定總膽紅素(TBIL)、鄰甲酚酞絡合酮比色法測定Ca++、二甲苯胺藍法測定Mg++的值，以上指標均用AUTOLAB全自動生化分析儀測定。用EASYLYTE PLUS測定血清電解質Na+、K+、Cl-的值。結果

溶血后AST、TBIL、ALT、K+的值比溶血前的值高；Cre的值比溶血前的值低，GLU、TP、ALB、BUN、CHO、Ca++、Mg++、Na+、Cl-的值在溶血前后未見明顯改變（表1）。

Table 1 The influence of sample hemolysis on biochemical tests（X±SD）biochemical datum AST(IU/L)ALT(IU/L)T-BIL(mg/dl)K+(mmol/l)ALP(IU/L)Cre(mg/dl)GLU(mg/dl)Cl-(mmol/l)TP(g/L)ALB(g/L)BUN(mg/dL)CHO(mg/dl)Ca++(mg/dl)Mg++(mg/dl)Na+(mmol/l)3 討論

3.1.谷草轉氨酶(AST)人紅細胞中AST活性約為血漿中的40倍[1]。當標本溶血時，勢必引起血清中AST活性的升高，從而使溶血標本的結果明顯高于未溶血標本。AST主要是作為肝損傷的敏感指標，Normal Serum 131.5±19.5 42.8±8.5 0.13±0.05 4.6±0.3 255.5±112.4 0.83±0.18 105.5±22.4 107.4±3.7 60.2±4.6 17.2±1.8 20.5±3.8 48.7±6.9 18.8±7.2 1.5±0.8 133.8±1.9 Hemolysis serum 247.7±27.4** 49.9±6.3** 0.49±0.18** 5.9±0.5** 243.1±108.9** 0.61±0.19** 98.7±21.5* 109.0±2.6* 61.2±2.9 17.2±1.3 21.6±4.9 50.7±6.0 20.9±7.8 1.7±0.7 134.9±4.4 % 91.7 18.9 315.0 27.2-5.1-27.7-5.1 1.5 2.1 0.8 4.9 4.6 27.0 42.1 0.8 Compared with normal serum *P<0.05;**P<0.01.測定結果的偏高會導致假陽性的產(chǎn)生，嚴重影響了藥物毒性的判斷。故溶血標本AST的測定結果不能用于統(tǒng)計結果分析，若出現(xiàn)溶血標本，應當在報告中注明。

3.2 谷丙轉氨酶(ALT)細胞內ALT含量比血漿中高約7倍，因此溶血后ALT含量測定的增高主要來源于細胞內ALT的大量釋放?？梢娕cAST相比，ALT受溶血影響輕些，故對樣品的要求低一些，如果標本溶血不很嚴重，可以參與統(tǒng)計資料的處理，但在分析結果時要注意考慮溶血的影響。

3.3 總膽紅素(TBIL)中生北控生物科技股份有限公司的測定試劑盒是用重氮法測定總膽紅素的，最后生成紅紫色的偶氮膽紅素，主要在波長為540nm～560nm處有光吸收。而血紅蛋白在波長540nm～550nm處有光吸收[2]，恰與偶氮膽紅素的比色波長相近。因此溶血后紅細胞破裂時大量血紅蛋白進入血清，勢必造成總膽紅素測定值的升高，是總膽紅素測定的正向干擾因素。此外，由于血紅蛋白與重氮試劑反應形成的產(chǎn)物可破壞偶氮膽紅素，溶血對重氮法測定膽紅素同時存在負向干擾，使測定結果偏低，但該作用較輕微[3]，因此溶血后由于血紅蛋白對測定結果的干擾，膽紅素的測定結果往往偏高。

3.4 鉀（K+）

鉀是細胞內液的主要陽離子，約98％的鉀存于細胞內，紅細胞內鉀濃度約為105mmol/L，而血清中僅有3.5 mmol/L～5.4 mmol/L[4]。因此溶血造成血清鉀測定的增高主要來源于紅細胞內中鉀的大量釋放。有報道表明血清游離血紅蛋白在 2.5～2.8g / L時血清鉀增高14%～16%，血清游離血紅蛋白達 6.6g / L時血清鉀增高可達41%[5]，因此在分析血清鉀的結果時引起注意。

3.5 肌酐（Cre）

中生北控生物科技股份有限公司的測定試劑盒是采用苦味酸法測定Cre的。而苦味酸特異性較差，易受其它還原性物質影響，主要是維生素C、酮體、丙酮酸等假肌酐干擾[4]。假肌酐物質亦可與苦味酸形成顏色反應，導致測定值發(fā)生偏差。這種假肌酐物質紅細胞中最多，血清中較少，故溶血后紅細胞中假肌酐物質的釋放是造成測定值發(fā)生偏差的主要原因。

3.6 血清葡萄糖(GLU)中生北控生物科技股份有限公司的測定試劑盒是采用葡萄糖氧化酶法測定GLU，葡萄糖氧化酶法的特異性較強，干擾物較少，而過氧化氫酶易受到其它物的影響，如維生素C、谷胱苷肽均因能競爭H2O2而導致負偏差[4]。3.7堿性磷酸酶(ALP)中生北控生物科技股份有限公司的測定試劑盒是采用連續(xù)監(jiān)測法測定ALP的。連續(xù)監(jiān)測法測定ALP是通過在405nm處連續(xù)監(jiān)測生成的黃色對硝基酚氧離子，根據(jù)單位時間內吸光度的增加來算出ALP的活力，因此排除了血紅蛋白在波長540nm～550nm處光吸收的影響。故溶血樣本ALP測定結果降低的原因可能是紅細胞破裂逸出了抑制ALP或底物反應的物質。

3.8 氯（Cl-）

血漿中氯約為103mmol/L，紅細胞中氯約為49~54mmol/L。溶血會導致細胞內的氯離子轉移到血清中，從而引起了血清氯離子測定值得升高。[4] 3.9溶血后對測定結果無明顯影響的項目主要包括總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、膽固醇(CHO)、Ca++、Mg++和Na+。溶血后測定結果與未溶血時比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）?？赡茉蚴沁@些項目的測定方法受溶血影響不大，因此在新藥的安全評價時可以列入統(tǒng)計資料中進行統(tǒng)計分析和結果判定。

3.10 溶血原因及其防止

高亞英[6]等認為溶血的原因主要是操作不當和抽血器具不合格造成的。結合我們日常工作分析造成溶血的可能原因主要包括：（1）由于抽血困難，采血時定位進針不準、針尖在血管中探來探去造成血腫等而發(fā)生溶血。（2）注射器和針頭連接不緊，采血時空氣進入，在抽取的血標本中混有泡沫，這種混有泡沫的血標本，放置一定時間后泡沫破裂或迅速干燥，造成血細胞破壞而發(fā)生溶血。（3）血標本在運輸過程中過度振蕩或貯存不當。（4）不合格的塑料制品會因聚合不完全而具有毒性，這種毒性可造成溶血；（5）試管質量粗糙。

因此，在采血、檢驗過程中必須注意細心操作，并注意注射器、針頭和試管的質量。樣本發(fā)生溶血后血清谷草轉氨酶(AST)不能參與統(tǒng)計結果的處理，其他指標在參與統(tǒng)計結果處理時，注意分析溶血的影響，并在數(shù)據(jù)中加以標注。

參考文獻

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第三篇：溶血會影響哪些檢測結果（最終版）

溶血會影響哪些檢驗結果

檢驗人都知道，在標本采集、處理過程中，紅細胞破壞造成溶血。原因有很多，包括采血不順、壓脈帶過緊、抗凝血混勻用力過猛、離心破管等等。溶血會影響部分檢驗結果。在此，我查閱文獻，匯總一下，與大家分享。

一、生化項目

（1）結果偏高的項目

溶血對乳酸脫氫酶（LDH）的影響最大，可使測定值升高達100-180；其次是肌酸激酶（CK），高達 約69倍；；再次，是血清磷（P）和鉀（K），前者為50倍，后者為20-30倍。還有谷草轉氨酶（AST），10-30倍；肌酸激酶同工酶（CK-MB）15倍；谷丙轉氨酶（ALT），7倍。其他受到影響但影響程度尚不明確的有鈉（Na），鎂（Mg），鐵（Fe），氯化物（CL），總蛋白（TP），α-羥丁酸脫氫酶（HBDH），低密度脂蛋白（LDH）等。

（2）結果偏低的項目

溶血導致某些項目的測定結果偏高外，還可導致有的項目值偏低。如γ-谷氨酰轉肽酶（γ-GT）。

（3）影響不大的項目

多種文獻報道顯示，白蛋白（Alb）和高密度脂蛋白（HDL）受溶血的影響不大。

二、凝血項目

溶血標本檢測的凝血酶原時間（PT），凝血酶時間（TT）要比不溶血的標本測定值分別升高約7.22%和26.26%；血漿纖維蛋白原（Fg）則降低約9.88%。溶血后結果的改變與溶血程度無明顯比例關系。促凝血檢測 結果受溶血因素影響,但不隨溶血程度的增加而成簡單的線性改變。活化部分凝血活酶時間（APTT）升高約8.48%，但也有人認為溶血對此項目影響不大。

三、免疫項目

在免疫項目檢測中，溶血對化學發(fā)光法或時間分辨免疫熒光法所檢測的項目的影響報道較多。其中，神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）的影響最大，可使結果升高達到20倍。其次，對前列腺特異抗原（PSA）、游離T3（FT3）、游離T4（FT4）、心肌肌鈣蛋白I（cTn）、肌紅蛋白（MYO）也有一定影響。再者，有研究顯示，溶血本身對胰島素水平影響不大，但由于紅細胞內含有胰島素降解酶，溶血后該酶釋放，隨著溶血時間的延長，胰島素不斷降解，從而導致濃度降低。對于ELISA方法的影響，有研究認為HIV抗體檢測實驗中，溶血可造成約3.75%的標本出現(xiàn)假陽性。

溶血對有些項目的影響仍然存在爭議，例如血鈣（Ca）、尿素氮（BUN）、肌酐（CR）、堿性磷酸酶（ALP）、尿酸（UA）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHO）、葡萄糖（Glu）、總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）。這可能與檢測方法不容有關，也可能與試驗標本的溶血程度有關。

總之，作為檢驗人，我們要明確受溶血影響的檢驗項目，在實際工作中注意觀察標本質量，以避免給臨床提供不可靠的的實驗室數(shù)據(jù)。同時，溶血對部分項目的影響尚不明確，我們不妨繼續(xù)研究，提供數(shù)據(jù)以供同仁參考。

第四篇：標本溶血對ELISA檢測乙肝表面抗原的影響

標本溶血對ELISA檢測乙肝表面抗原的影響

在臨床檢測中，常常遇到溶血的標本。溶血對ELISA檢測乙肝表面抗原（HBsAg）究竟是否有影響，各文獻報道很不一致，本文對標本溶血的原因及其對ELISA檢測乙肝表面抗原的影響進行簡要的討論。1 標本溶血的原因

溶血是臨床檢驗中最常見的一種干擾和影響因素。溶血可分為體內溶血和體外溶血［1］。體內溶血可由物理因素（如人工心臟瓣膜或大血管手術后）、化學因素（如惡性瘧）和藥物毒性反應等因素引起。體外溶血可由物理因素（抽血時負壓過大、水浴溫度過高、冰凍、振蕩等機械性破壞）、化學因素（血樣接觸表面活性劑）和代謝因素（如遺傳病引起紅細胞脆性增加）引起。

在臨床上常見的引起標本溶血的原因包括 ［2］ :由于病人嚴重脫水、低血容量休克等原因導致穿刺困難造成的溶血;由于抽血器具質量不合格如真空管負壓不夠或塑料試管質量較差導致的溶血;用干燥管采血為了盡快分離血清用竹簽攪拌不當引起的溶血等。2 標本溶血對乙肝表面抗原檢測的影響

一些研究沒有發(fā)現(xiàn)標本溶血對HBsAg檢測的影響。李穗芬 ［3］ 對20例HBsAg陰性和10例HBsAg陽性病人的溶血和非溶血標本包括10例OD值在臨界值附近的標本進行了對照，結果非溶血和溶血標本的陰、陽性結果完全一致。20例HBsAg陰性和10例OD值在臨界值附近的樣本，溶血與對應非溶血標本OD值間差異沒有顯著性;10例HBsAg陽性樣品，溶血標本OD值明顯大于對應非溶血標本OD值。因此得出結論，標本溶血不影響HBsAg結果的判定，只是使HBsAg陽性標本的OD值提高。許斌等［4］ 對HBˉsAg強陽性樣品的非溶血與溶血（Hb濃度為241g/L）標本的A值作了對照后未發(fā)現(xiàn)兩者有統(tǒng)計學差異，得出結論:溶血對HBsAg的檢測沒有影響（嚴格意義上應表述為:溶血對HBsAg強陽性標本的檢測沒有影響）。單桂秋等［5］ 的研究也顯示，HBsAg陽性樣品的非溶血與溶血標本的A值間經(jīng)t檢驗差異無顯著性。

其他的一些研究則發(fā)現(xiàn)，溶血對HBsAg的檢測有影響。錢厚明等 ［6］發(fā)現(xiàn)，在17例溶血標本中，初檢的5例HBsAg陽性標本，經(jīng)重新抽血復檢后有2例仍為陽性，另3例轉陰。認為是溶血導致了假陽性的出現(xiàn)。劉玉振等 ［7］ 研究發(fā)現(xiàn)，溶血對HBsAg的檢測有影響，當紅細胞濃度>25%造成的溶血可導致假陽性。龍憲和等［8］ 研究發(fā)現(xiàn)，無論在健康人還是乙肝病毒感染者中，溶血均導致了ELISA一步法檢測HBsAg假陽性結果的出現(xiàn)，而采用二步法則可以保證結果判讀無誤。標本溶血對乙肝表面抗原檢測影響的可能機制

溶血是由于各種原因造成紅細胞破壞，胞內血紅蛋白（Hb）等物質和細胞內液進入血清。溶血對ELISA的影響主要是反應孔對溶血血清中Hb的非特異性吸附和溶血時細胞內液對血清的稀釋作用。單桂秋等［5］ 的實驗也證明了溶 血對血清具有稀釋作用。

在ELISA試驗中，酶標反應板孔包被物的濃度是一個相對定值，抗原抗體反應存在最適比例和后帶現(xiàn)象，因此，HBsAg濃度與A值只是在一定的范圍內呈一定的線性關系;當HBsAg達到一定濃度時A值的變化進入平臺期;當HBsAg濃度太高時，A值反而會降低。因此，溶血可以使HBsAg濃度很高的樣品的A值升高（在一定程度上解決了后帶現(xiàn)象）;當HBsAg濃度與A值呈線性關系時才會因溶血的稀釋作用使A值下降;當HBsAg濃度近臨界值時，可能造成假陰性。

Hb具有類過氧化物酶活性，其作用與辣根過氧化物酶類似，如果反應孔非特異吸附Hb而殘留，則可催化底物顯色，使本底A值升高甚至造成假陽性。如果洗滌質量好，則可能大大減少或排除非特異性吸附的干擾。單桂秋等［5］ 的實驗未體現(xiàn)血中Hb非特異性吸附的影響。龍憲和等 ［8］ 采用二步法操作可以排除溶血釋出的Hb對HBsAg檢測的影響也說明洗板質量在ELISA檢測中的重要性。

總之，溶血對ELISA檢測HBsAg有一定的影響，影響的性質及其大小因所使用的試劑、測定方法、標本HBsAg的有無及濃度高低、洗板的質量好壞而異。參考文獻 靳敏.溶血對臨床生化檢驗影響的探討.廣西醫(yī)學，2002，24（9）:1363-1364.2 張小潔，劉建芝.真空采血標本溶血原因分析及預防措施.護士進修雜志，2001，16（3）:180.3 李穗芬.標本溶血對乙肝表面抗原檢測的影響.廣州醫(yī)藥，2001，32（5）:65.4 許斌，朱虎定.ELISA檢測HBsAg影響因素的探討.臨床檢驗雜志，2000，18（4）:232.5 單桂秋，蘇建婷.溶血及脂濁樣品對ELISA檢測乙肝表面抗原的影響.臨床檢驗雜志，1999，17（2）:102-103.6 錢厚明，趙江燕，張燕.應重視ELISA檢測HBsAg灰區(qū)范圍內樣品的復檢.上海醫(yī)學檢驗雜志，2002，17（3）:156.7 劉玉振，張淑琴，馬宏偉.溶血對抗-HCV、HBsAg等測定結果的影響.中國輸血雜志，1999，12（1）:32-33.8 龍憲和，童華誠.溶血對乙型肝炎五項血清標志物檢測結果的影響.中華醫(yī)學檢驗雜志，1996，19（1）:47-48.作者單位:430061武警湖北總隊醫(yī)院檢驗科

第五篇：4.28標本溶血對乙肝表面抗原檢測的影響

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溶血對乙型肝炎表面抗原檢測的影響

乙型肝炎表面抗原的檢測是診斷乙肝的主要指標，隨著檢驗技術的不斷發(fā)展酶聯(lián)免疫法因其簡便，靈敏度高，特異性強，不需要特殊設備的特點，而被廣泛應用[1]。溶血是臨床檢驗中最常見的一種干擾和影響因素[2]。除常見的紅細胞破壞外，血小板、白細胞等血細胞破壞釋放的某些胞內成分也可干擾或影響臨床檢驗結果的判定。由于各種原因造成的溶血，非特異性物質對試驗造成影響，致使檢驗結果出現(xiàn)假陽性，現(xiàn)分析如下 1資料與方法

1．1 一般資料

14例乙肝患者檢查，86例健康人體檢。

1．2試 劑

乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法 ELISA)，上?？迫A生物技術有限公司生產(chǎn)。

1．3方法

1．3．1 溶血血清制備，將待測血清放置于低溫冰箱(-40℃)內凍20min后,取出融化,以3000r/min離心10mi n，分離溶血血清。溶血和不溶血各1份。

從冰箱取出試劑盒室溫放置30min，微孔反應條中每孔加入待測標本50μL，設陰陽性對照各2孔，每孔加入陰性對照(或陽性對照)各1滴,并設空白對照 1孔。然后每孔加入酶結合物1滴(空白對照除外)，充分混勻，封板，置37℃避光孵育30min，棄孔內液體，洗板5次后拍干。每孔加顯色劑A和B各1滴，充分混勻，封板，置37℃避光孵育15min,目測比色，肉眼判斷結果：顯藍色為陽㈩，無色為陰性㈠。

1．3．2 最后結果應用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進行分析。2結果

2．1 14 例溶血和不溶血乙型肝炎陽性結果完全一致。

2．2 68 例溶血和不溶血乙型肝炎表面抗原陰性結果完全一致。

2．3 18 例溶血雨不溶血乙型肝炎表面抗原結果不一致，出現(xiàn)假陽性。經(jīng)二步法：從冰箱取出試劑盒室溫放置30min。微孔的反映條件中各加入50μL待測液，并分陰陽性對照各2孔，每孔加入陰性對照或陽性對照，各一滴，并設空白對照1孔，37℃避光孵育30min，棄空內液體、洗版5次拍干，每孔加酶結合物1滴（空白組除外），充分混勻，封板，然后在 37℃避光孵育30min，棄空內液體，本文檔由004km.cn云軒亭論文網(wǎng)整理提供！

洗版5次，拍干，加顯色劑A和B各一滴，充分混勻，封板，然后在37℃避光孵育15min,目測比色并判斷結果：HbsAg顯藍色為陽性，無色為陰性，結果均為陰性。結果經(jīng)SPSS13.0分析，見表1：

表1 血液標本ELISA檢測結果分析 乙肝患者（人）

檢測結果 陽性（﹢）陰性（﹣）

F P 3討論

3．1 引起溶血的常見原因及對策：

采血時發(fā)生的溶血：1注射器和容器不干燥，不清潔；2注射器與針頭連接不好；3壓脈帶捆扎時間過長，淤血過久[3]；4抽血消毒時酒精未干就進行抽血；5穿刺不順利損傷組織過多；6抽血速度過快針尖在靜脈中探來探去；7血液注入容器中時未取下針頭，或用力推出產(chǎn)生大量氣泡；8在有血腫的地方采集血樣；9滲透壓的改變；10為了盡快分離血清，用竹簽攪拌不當引起的溶血等；11用干燥管采血等。病人自身的因素；1病人自身有溶血性疾??；2由于病人嚴重脫水、低血容量休克等原因導致穿刺困難造成的溶血。

弄清楚了溶血的常見原因，在臨床上，我們就要積極的避免這些因素的發(fā)生，定位準確因素，對癥下藥，規(guī)范要求，熟練操作，避免人為因素導致溶血的發(fā)生，從而使檢測更加的準確。

3．2 溶血標本采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測

乙型肝炎表面抗原易出現(xiàn)假陽性分析原因．可能是溶血血清中含有過氧化酶物質（紅細胞或血紅蛋 白中的亞鐵血紅素），能與聚 乙烯孔內預包被的抗原或抗體結合，在洗滌過程難以完全洗脫；也可能是谷胱甘肽等過氧化物酶的作用，谷胱甘肽廣泛存在于人體組 織和細胞中，當溶血時，細胞內的過氧化物酶進入血漿，并大量吸附于細胞碎片及纖維蛋白原上，從而增加加樣后微孔板洗滌的難度[4]，同辣根過氧化物酶作用相似，其可使過氧化氫釋放出原生態(tài)氧，從而催化底物甲聯(lián)苯胺生成可溶性物質顯色，使乙型肝炎表面抗原易出現(xiàn)假陽性。由于一步法洗滌步驟往往難以完全洗脫，殘留的過氧化物酶催化底物四甲基聯(lián)苯胺顯藍色，使

Ag產(chǎn)生假陽性。二步法首先將血清洗掉，殘留的過氧化物酶含量極微。溫

健康人（人）溶血 18 68

1284.44 0．000

不溶血 0 86 溶血 14 0-2．4 溶血對陰性標本檢測易出現(xiàn)假陽性，陽性標本無影響。本文檔由004km.cn云軒亭論文網(wǎng)整理提供！

育過程中不會與酶結合物所含抗原與抗體結合，再經(jīng)第二次洗滌，大大降低了殘留的可能性，保證了結果的準確無誤。

3．3 對待結果要嚴謹

經(jīng)過統(tǒng)計分析，見表1，我們可以看出，對于HbsAg陽性的標本檢測溶血與不溶血的檢測沒有差別；對于健康者的檢測，溶血與不溶血的檢測，P<0.001,結果有統(tǒng)計學意義，說明兩者間存在差異，這就要求我們的檢驗醫(yī)師在對“健康者”的檢測時，要慎重，出現(xiàn)假陽性后，建議采用二步法進一步檢測，而對于新兵體檢等要求嚴格的體檢來說，直接采用 二步法檢測；對于乙肝表面抗原陽性的溶血標本，其結果一定要慎重，務必做到準確無誤，否則，會給患者帶來極大的痛苦，造成極大的經(jīng)濟損失和精神壓力。

參考文獻：